纯化10－脱乙酰基浆果赤霉素Ⅲ除去10－脱乙酰基－2－脱苯甲酰基－2－戊烯酰基浆果赤霉素Ⅲ的方法

摘要

通过纯化10－脱乙酰基－7，10－二－三氯乙酰基浆果赤霉素Ⅲ、随后碱水解7和10位的保护基团来制备HPLC纯度高于99％且不含有2－脱苯甲酰基－2－戊烯酰基浆果赤霉素Ⅲ的10－脱乙酰基－7，10－二－三氯乙酰基浆果赤霉素Ⅲ的方法。

说明书

本发明涉及不含有10-脱乙酰基-2-脱苯甲酰基-2-戊烯酰基浆果赤霉素 III的10-脱乙酰基浆果赤霉素III的制备。

该杂质的除去是通过将10-脱乙酰基浆果赤霉素III转化为相应的 7，10-二-三氯乙酸酯、然后进行色谱纯化和羟基解封闭来实现的。根据该方 法纯化的10-脱乙酰基浆果赤霉素III可以方便地用于半合成具有紫杉烷骨 架的抗肿瘤药物，避免了纯化除去相应的2-脱苯甲酰基-2-戊烯酰基类似物 的麻烦。

引言

10-脱乙酰基浆果赤霉素III(I)是用于半合成具有有效抗肿瘤活性的药 物如多西他赛和紫杉醇的起始物。10-脱乙酰基浆果赤霉素III由紫杉 (Taxus)属植物提取分离得到。提取产物还含有可变量的相关化合物(参见下 表)，这取决于植物材料的来源。一般而言，可商购获得的10-脱乙酰基浆 果赤霉素III中含有的杂质在14-或19-位具有另外的羟基或在7-和13-位具 有相反的构型。

其它杂质在13-位被苯基异丝氨酸残基取代，其胺官能团与丙酸、丁 酸、惕各酸或苯甲酸残基连接。而且，10-脱乙酰基浆果赤霉素III含有一 种另外的代谢物(II)，其在2-位不具有苯甲酰基官能团，而是携带有戊烯 酰基残基，其特别是被鉴定为惕各酸残基(B.Gabetta等，J.Nat.Prod.58， 1508，1995)。由于其具有与10-脱乙酰基浆果赤霉素III共结晶的倾向，通 常这种杂质不能通过结晶除去，其在商购的10-脱乙酰基浆果赤霉素III中 的含量为0.3-1％。而且，昂贵的色谱纯化仅能实现其含量的部分且不令人 满意的降低。

当由10-脱乙酰基浆果赤霉素III制备抗肿瘤药时，这种杂质经历与10- 脱乙酰基浆果赤霉素III相同的半合成过程，产生相应的2-脱苯甲酰基-2- 戊烯酰基衍生物，将其除去极为麻烦。

为此，例如，美国药典允许在半合成紫杉醇中存在相关量(至多0.7％) 的2-脱苯甲酰基-2-戊烯酰基紫杉醇。

表-商购的10-脱乙酰基浆果赤霉素中含有的主要杂质

      R₁     R₂       R₃      R₄    R₅               R₆

Ia    Bz    β-OH     OH     α-OH  H          Ia    EtCO

Ib    Bz    α-OH     OH     α-OH  H          Ib    PrCO

Ic    Bz    β-OH     H      β-OH  H          Ic    Tigl

                                               Id    Bz

Id    Bz    β-OH     H      α-OH  OH

Ie    Bz    α-OH     H      α-OH  H    

II    Tigl  β-OH     H      α-OH  H

发明内容

本发明涉及纯化10-脱乙酰基浆果赤霉素III除去10-脱乙酰基-2-脱苯 甲酰基-2-戊烯酰基浆果赤霉素III(II)的方法，其中戊烯酰基残基是惕各酸 残基。因此，根据本发明纯化的10-脱乙酰基浆果赤霉素III使得可获得不 含有在2-位具有戊烯酰基残基而非苯甲酰基残基的相应杂质的具有紫杉烷 骨架的抗肿瘤药物。

10-脱乙酰基浆果赤霉素III可容易地被转化为7，10-二-三氯乙酰基衍 生物(III)。该转化可根据已知的酯化方法通过用三氯乙酸活性衍生物处理 来进行。优选地，III通过在约0℃、优选-5至+5℃的温度下使用吡啶或吡 啶-二氯甲烷混合物作为溶剂与三氯乙酰氯反应来获得。HPLC分析显示 (III)含有约2％作为杂质的相应的10-和7-单乙酰化产物以及杂质(II)7，10- 二-三氯乙酸酯，其量与用作起始原料的10-脱乙酰基浆果赤霉素III中的(II)的量成比例。

已经令人惊奇地发现后一种杂质(II)的二-三氯乙酰基衍生物具有与二 -三氯乙酰基10-脱乙酰基浆果赤霉素III(III)显著不同的色谱行为。

事实上，当三氯乙酰化产物在少量硅胶、优选10-20重量份、更优选 15重量份的硅胶上进行柱色谱处理并使用二氯甲烷或二氯甲烷-乙酸乙酯 混合物洗脱时，7，10-二-三氯乙酰基10-脱乙酰基浆果赤霉素III(III)被洗 脱，而相应的2-苯甲酰基-2-戊烯酰基类似物与单乙酰化产物一起保留在固 定相上。使用比二氯甲烷极性更高的溶剂例如丙酮或甲醇能够回收这些杂 质。

所得的7，10-二-三氯乙酰基浆果赤霉素III(III)可这样被用于通过13- 位与适宜活化的侧链的酯化来半合成抗肿瘤药物。因此，所获得的色谱纯 度高于99％的衍生物III的用途是本发明的另一个实施方案。实际上，它 的优势在于在7-位和10-位均存在三氯乙酰基保护基团，而且不存在2-脱 苯甲酰基-2-戊烯酰基类似物。这就避免了与所选择的侧链在7-和/或10-位 发生另外的且不希望的酯化和形成不能容易地被除去的杂质。因此，13- 位与适宜侧链酯化后从7-和10-位上和从侧链上除去保护基团使得可获得 不含有二(苯基异丝氨酰基)-类似物的多西他赛或其前体(具有适宜的被保 护的侧链)。

另一方面，可通过碱处理、优选通过与氢氧化铵在适宜的溶剂如甲醇 或甲醇-二氯甲烷混合物或四氢呋喃中反应由产物(III)(如上所述纯化)来再 生不含有2-苯甲酰基-2-戊烯酰基类似物和其它杂质的10-脱乙酰基浆果赤 霉素III。通过用适宜的溶剂如乙腈、丙酮或甲醇结晶，获得色谱纯度高于 99％且不含有作为杂质的化合物(II)的10-脱乙酰基浆果赤霉素III。

因此，所获得的10-脱乙酰基浆果赤霉素III可方便地用于制备不含有 2-脱苯甲酰基-2-戊烯酰基-紫杉醇的半合成紫杉醇。紫杉醇可通过任何使得 可将10-脱乙酰基浆果赤霉素III转化为N-脱苯甲酰基紫杉醇的方法、然 后进行苯甲酰化来获得。例如在US 20050049297中公开了一种用于制备 N-脱苯甲酰基紫杉醇的便利方法。

因此，本发明的一个另外的目的是不含有2-脱苯甲酰基-2-戊烯酰基- 紫杉醇的半合成紫杉醇和含有其的药物组合物。

使用以下所述实施例对本发明进行更为详细的说明。

实施例1-10-脱乙酰基-7，10-二三氯乙酰基浆果赤霉素III(III)

在搅拌下，在0-5℃下用在60ml吡啶中的6.6ml三氯乙酰氯处理含有 0.4％2-脱苯甲酰基-2-戊烯酰基类似物作为杂质的10-脱乙酰基浆果赤霉素 III(15g)。使用100ml二氯甲烷和100ml 4N的盐酸稀释该混合物。分离各 相，用100ml 4N的盐酸、然后用500ml用氯化钠饱和的水洗涤有机相。 将有机相浓缩至干，用100ml甲苯吸收残余物。通过过滤回收固体(24.9g)， 重新溶解在125ml二氯甲烷中并通过在375g Kieselgel 60 Merck上用二氯 甲烷洗脱进行柱色谱处理来进行纯化。收集含有III的级分并加入甲苯； 将所得的沉淀物滤出并在50℃真空干燥，得到17.8g HPLC纯度高于99％ 的III。HPLC-MS分析显示没有(II)二-三氯乙酸酯存在。

实施例2-不含有2-脱苯甲酰基-2-戊烯酰基类似物的10-脱乙酰基桨果赤霉素III

在惰性气氛下，将如实施例1中所述获得的10-脱乙酰基-7，10-二-三氯 乙酰基浆果赤霉素III(17.8g)溶解在36ml四氢呋喃中并在搅拌下用3.9ml 浓氢氧化铵处理30分钟。用乙腈稀释该溶液，然后浓缩直到开始结晶，此 后将产物过滤并用丙酮重结晶，得到10g 10-脱乙酰基浆果赤霉素III，其 HPLC纯度高于99％且不含有2-脱苯甲酰基-2-戊烯酰基浆果赤霉素III。

实施例3-不含有2-脱苯甲酰基-2-戊烯酰基类似物的紫杉醇

如US 2005/0049297 A1的实施例V-VII中所述制备N-脱苯甲酰基紫杉 醇(700g)，用根据上文实施例2纯化的10-DAB III(因此不含有2-脱苯甲酰 基-2-戊烯酰基类似物)作为原料，此后将其溶解在14L乙腈中，加入120ml 三乙胺并用107ml苯甲酰氯处理。

将反应混合物在室温下搅拌半小时并用21L含有0.1％乙酸的水稀释。

过滤固体物质，用3L 3∶2的水-乙腈混合物洗涤并在50℃真空干燥。 获得约700g干燥的固体物质，将其用2∶1的环己烷-丙酮结晶并真空干燥， 获得600g不含有2-脱苯甲酰基-2-戊烯酰基紫杉醇的紫杉醇。