9－(2－羟乙氧甲基)鸟嘌呤在制备蚕药中的应用

摘要

本发明9－(2－羟乙氧甲基)鸟嘌呤的用途，尤其涉及9－(2－羟乙氧甲基)鸟嘌呤在制备蚕药中的用途；本发明的优点在于：(1)本发明对已有药物9－(2－羟乙氧甲基)鸟嘌呤用于治疗蚕病，发掘了该药新用途，开拓了一个新的应用领域；(2)本发明的蚕药9－(2－羟乙氧甲基)鸟嘌呤的药剂在适当的浓度的下，对家蚕的核型多角体(NPV)病(血液性脓病)具有显著的预防和治疗效果，(3)本发明的蚕药9－(2－羟乙氧甲基)鸟嘌呤在蚕体内的药效持续时间较长，从而表明对蚕病的治疗具有显著的效果；(4)本发明的蚕药9－(2－羟乙氧甲基)鸟嘌呤制成的药剂稳定性好，安全无毒，对家蚕的各项经济指标、蚕丝以及下一代无影响；(5)本发明的制备容易，生产成本低，制成品使用方便。

说明书

技术领域

本发明9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤的用途，尤其涉及9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤在制备蚕药中的用途；属于生物和医药领域。

背景技术

家蚕病毒病的危害一直困扰着养蚕业，往往造成重大损失，是当前养蚕业影响产量和茧质的主要原因。多年来，人们通过加强蚕窒蚕具消毒、蚕体蚕座消毒、桑叶叶面消毒、改善饲养管理等综合措施预防，虽有成效，但总不满意。医药和兽药领域开发的药物为我们提供了基础条件，筛选现有的药物，寻找能防治家蚕病毒病的药物，十分重要，且必须满足下列条件：

1、溶于水，才能喷洒桑叶给蚕添食，满足家蚕给药途径单一的要求。

2、无异味、蚕不拒食，食下才能产生药效，满足蚕药只能靠其自主食下的特性。

3、疗效确切，通过人工发病模型对蚕病有确切的预防和治疗效果，且效果优于已在国内上市销售的同类蚕药，满足防治蚕病的要求。

4、对家蚕安全无毒副作用，不影响其生理发育，不影响蚕茧产量。

5、对家蚕的茧质、丝质无不良影响。

6、对家蚕的种卵无不良影响。

9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤通用名为阿昔洛韦，分子式：C₈H₁₁N₅O₃，它能选择性抑制DNA多聚酶，阻止DNA合成。抗病毒谱较窄，对I型和II型单纯疱疹作用最强，对带状疱疹病毒及乙型肝炎病毒也有抑制作用；虽然阿昔洛韦在医药上是一个成熟产品，但是应用于蚕药尚未报道过。

发明内容

本发明的目的在于提供9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤的新用途，即在防治家蚕病毒病中的新应用。

实际上，本发明涉及9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤在制备蚕药中的应用。

尤其涉及9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤在制备防治家蚕病毒病药物中的应用，更具体的说所述的蚕病毒性病为核型多角体病。

在上述用9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤制备的药剂可以是任何一种药剂学中所述的剂型。作为优选，所述的药剂为胶囊剂。

在上述的应用过程中，9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤的浓度为25ppm～100ppm。

作为优选，9-(羟基乙氧甲基)鸟嘌呤的浓度为50ppm。

为了更好的理解本发明的实质，下面将用9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤(阿昔洛韦)的药理试验结果来说明其在制备蚕药中的新用途。同样用以来说明在本发明的应用过程中9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤使用剂量的不同对蚕病的的治疗效果也有所区别。

1、9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤对家蚕核型多角体(NPV)病的预防效果试验样品：

9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤(白色粉末)使用时分别配成100ppm、75ppm、50ppm、25ppm四种浓度。

大青叶合剂：市售，按使用说明，每支加水500ml

强力碘溶液：市售，按使用说明5支加水1000ml

试验动物：

家蚕：箐松×皓月(由江苏省蚕种公司提供)；

病毒：家蚕核型多角体病毒(NPB)(苏州大学蚕桑研究所生理病理室保存)，-20℃保存，使用前复壮后多次离心纯化，血球计数板计数，配成2×10⁸母液。

试验方法：

分别给5龄起蚕添食9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤、大青叶、强力碘溶液8小时，再以2×10⁶、2×10⁷、2×10⁸NPB添食攻毒8小时，正常饲养一周调查发病率；结果见下表1：

表1：9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤对家蚕NPV病的预防试验结果

药物种类用药浓度  NPB浓  度  试验蚕  头数  发病头  数    发病率9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤100ppm  2×10⁸    50    3    6％  2×10⁷    50    0    0  2×10⁶    50    0    075ppm  2×10⁸    50    4    8％  2×10⁷    50    0    0  2×10⁶    50    0    050ppm  2×10⁸    50    3    6％  2×10⁷    50    0    0  2×10⁶    50    0    025ppm  2×10⁸    50    8    16％  2×10⁷    50    3    6％  2×10⁶    50    0    0大青叶水剂一支500ml水  2×10⁸    50    16    32％  2×10⁷    50    12    24％  2×10⁶    50    9    18％强力碘5支加1000ml水  2×10⁸    50    16    32％  2×10⁷    50    9    18％  2×10⁶    50    5    10％(清水)  2×10⁸    50    16    32％  2×10⁷    50    9    18％  2×10⁶    50    5    10％

结果表明：9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤100ppm、75ppm、50ppm、25ppm浓度相对于已上市蚕药和清水对照区，对家蚕NPV病有显著的预防效果。

2、9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤对家蚕NPV病的治疗效果

试验样品：

9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤(白色粉末)使用时分别配成100ppm、75ppm、50ppm、25ppm四种浓度。

大青叶合剂：市售，按使用说明，每支加水500ml

强力碘溶液：市售，按使用说明5支加水1000ml

试验动物：

家蚕：箐松×皓月(由江苏省蚕种公司提供)；

病毒：家蚕核型多角体病毒(NPB)(苏州大学蚕桑研究所生理病理室保存)，-20℃保存，使用前复壮后多次离心纯化，血球计数板计数，配成2×10⁸母液。

试验方法：

分别给5龄起蚕添食攻毒2×10⁸、2×10⁷、2×10⁶NPB8小时，再给家蚕连续不同浓度添食药物，正常饲养一周，对照：大青叶、强力碘和清水，调查发病率，结果见表2。

表2：9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤对家蚕NPV病的治疗试验结果

  药物种  类用药浓度  NPB浓度试验蚕头数发病头数  发病率    9    -    (    2    -    羟    乙    氧    甲    基    )    鸟    嘌    呤  100ppm  2×10⁸    50    25    50％  2×10⁷    50    10    20％  2×10⁶    50    0    0  75ppm  2×10⁸    50    26    52％  2×10⁷    50    10    20％  2×10⁶    50    0    0  50ppm  2×10⁸    50    26    52％  2×10⁷    50    9    18％  2×10⁶    50    0    0  25ppm  2×10⁸    50    28    56％  2×10⁷    50    10    20％  2×10⁶    50    0    0    大青叶  一支水剂  加500ml  水  2×10⁸    50    38    76％  2×10⁷    50    14    28％  2×10⁶    50    4    8％    强力碘  5支水剂  1000ml水  2×10⁸    50    40    80％  2×10⁷    50    15    30％  2×10⁶    50    5    10％    清水  对照  2×10⁸    50    40    80％  2×10⁷    50    15    30％  2×10⁶    50    5    10％

 结论：9-(羟基乙氧甲基)鸟嘌呤100ppm、75ppm、50ppm、25ppm浓度相对于已上市蚕药和清水对照区，对家蚕NPV病有一定的治疗效果。

3、9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤对家蚕的安全性试验

试验样品：

9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤(白色粉末)使用时分别配成500ppm浓度

试验动物：

家蚕：原蚕苏菊、明虎(由江苏省蚕种公司提供)；

试验方法：

a)材料：9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤用双蒸水配成500ppm浓度

b)家蚕饲养：设二区，一区为添药区，一区为添水对照区，每区饲养家蚕100头，3龄起蚕开始，每天连续添食9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤500ppm8小时，对照区添食清水，饲养至上山，制种，调查各项指标。

c)对经济指标的影响

试验方法：将收获的蚕茧，剥去茧衣，充分混匀，一分为二，调查50粒蚕茧的参数，试验结果见表3。

表3：9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤对家蚕的各项经济指标的影响

  经济指标  9-(2-羟乙氧甲  基)鸟嘌呤    对照组  死笼率(％)    0    0  全茧量(克/粒)    1.619    1.6075  茧层量(克/粒)    0.362    0.38  茧层率(％)    22.36    23.64

结果用Excel软件进行方差分析和假设检验，9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤500ppm添食对家蚕的各项经济指标无显著性影响。

d)、对丝质影响

试验方法：将剥好的另一半蚕茧，随机分成五份，抽取一份，进行一粒缫丝，缫丝工艺如下：高温置换：100℃1min浸没蚕茧；低温吸水：65℃2min；煮熟调整：97～80℃9min；保护：70℃2min。

强伸力鉴定：每百回茧丝作一个检测样品。检测结果如表4所示

表4：9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤对家蚕丝质的影响

  经济指标  9-(2-羟乙氧甲  基)鸟嘌呤    对照组  断绪次数    0.4    0.3  解舒丝长(回)    1052    1071  断裂强力(N)    10.911    10.51  断裂伸长(mm)    70.829    71.0536

结果用Excel软件进行方差分析和假设检验，9-(羟基乙氧甲基)鸟嘌呤500ppm添食对家蚕的丝质无显著性影响。

e)对下一代的影响

对试验蚕进行正常制种，即时浸酸，选取三个产卵最好的卵圈，调查对下一代的影响参数，结果见表5：

表5：9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤对家蚕继代的影响

  调查项目  9-(2-羟乙氧甲基)鸟  嘌呤  对照组  卵圈1  卵圈  2  卵圈3  卵圈1  卵圈  2  卵圈3  黄卵数  1  2  2  1  3  1  产出卵数(粒)  490  495  497  491  486  502  未孵化头数  26  28  27  23  20  33  孵化蚁头数  464  467  470  468  466  469  孵化率  94.69  94.34  94.57  95.32  95.89  93.43  克卵粒数  1770  1709

结果用Excel软件进行方差分析和假设检验，9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤500ppm添食对家蚕的下一代无显著性影响

4、发明所用的9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤稳定性试验

试验目的：9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤进行温加速稳定性试验，

方法：参考江苏省农林厅苏农牧函[1999]9号文“关于转发农业兽药稳定性试验技术规范(试行)的通知”，将9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤制成胶囊剂，置于40℃恒温箱六个月，每个月取出一粒，精密称取0.05g，用超纯水定溶100ml，紫外分光光度计在254nm处测OD值，以0个月9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤作标准对照，确定其具体含量。

结果如表6所示：

表6：9-(羟基乙氧甲基)鸟嘌呤的稳定性试验结果

时间性状内容物色泽OD值含量(％)降解产物0粉状白色4.0628 100无一月粉状白色4.0625 100无二月粉状白色4.0618 99.97无三月粉状白色4.0353 99.32无四月粉状白色4.0343 99.3无五月粉状白色4.0153 98.83无六月粉状白色4.0124 98.76无

结果表明：对9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤进行温加速试验，结果用Excel软件进行分析，9-(羟基乙氧甲基)鸟嘌呤的含量未见显著性下降。

5、9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤在蚕体内的药物动力学试验

试验动物：

家蚕：苏菊×明虎(由江苏省蚕种公司提供)

试验方法：

 1、一次性大量口服试验：给5龄第3天家蚕口腔一次性注射100μl500ppm9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤，按0、10min、20min、40min、80min、120min、240min、480min、720min、960min、1440min，2400min、3600min、分别取蚕血，稀释25倍，用高效液相色谱分析仪(岛津LC-6A)进行含量分析，结果见表7。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，甲醇∶水(10∶90)为流动相，检测波长为254nm，理论板数按供试9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤计算，应不低于1500。

表7：一次性口腔注射50μl 500ppm9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤在蚕体内的含量变化

  取血时间  (min)  0 10 20 40 80 120 240 480 720 960 1440 2400 3600  标  准  品  9-(2-羟乙氧  甲基)鸟嘌呤  含量(ppm)  0  28.  4  23.  9  18.  4  21  .7  30.  3  17.  2  20.  3  22.  2    17.    8  6.6  6.3  5  10

2、桑叶添食试验：9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤经口食下后的变化规律：5龄起蚕添食500ppm9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤3小时后改喂正常叶，继续按一定时间取蚕血，用高效液相色谱分析仪进行含量分析，结果见表8。

表8：500ppm9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤桑叶添食家蚕，在蚕体内的含量变化

    取血时间    峰高    峰面积   9-(2-羟乙氧甲基)鸟   嘌呤(ppm)    0    0    0    0    10min    30210.4    477202.3    15.47    20min    33662.8    533754.2    17.68    40min    33836.3    549519.1    18.2    60min    46017.9    715719.6    23.7    160min    41904.3    644240.2    21.35    300min    30960.0    498121.9    16.5    600min    31199.5    522639.0    17.31    1200min    27570.9    478724.6    15.87    2400min    15434    181383.8    6.3    标准样品    23579.2    301854.2    10

3、9-(羟基乙氧甲基)鸟嘌呤在蚕体内残留试验：

从家蚕5龄起蚕开始每天连续添食500ppm9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤8小时，正常饲养，结茧，至化蛹后分不同时期取蛹血，用高效液相色谱分析仪(岛津LC-6A)进行含量分析，结果见表9：

表9、9-(羟基乙氧甲基)鸟嘌呤在蚕体内残留试验结果

取血时间  标准样品  化蛹第2天  化蛹第5天 化蛹第8天峰高  23579.2  24435.3  15421 0峰面积  301854.2  298126.7  17123.5 09-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤含量(ppm)  10  9.9  0.57 0

结果表明：9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤口腔注射给家蚕，10分钟后血液中9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤含量达到高峰，高峰持续时间12小时左右，24小时后处于半衰期以下；添食家蚕，停止给药，20小时后药物在血液中含量开始下降，至40小时处于微量期；9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤在蚕蛹体内到化蛹两天有一定含量，至5天后处于微量期。

从以上结果，可以得出本发明的优点在于：

(1)本发明对已有药物9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤用于治疗蚕病，发掘了该药的新用途，开拓了一个新的应用领域。

(2)本发明的蚕药9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤制成的药剂稳定性好，安全无毒，对家蚕的各项经济指标、蚕丝以及下一代无影响，。

(3)本发明的蚕药9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤的药剂在不同的浓度的情况下，对蚕的核型多角体(NPV)病具有显著的预防和治疗效果。

(4)本发明的蚕药9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤在蚕体内的药效持续时间较长，从而表明对蚕病的治疗具有显著的效果。

附图说明

图1是本发明制备9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤胶囊剂的工艺流程图

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步说明本发明，但本发明的内容完全不限于此。在下述实施例中9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤(阿昔洛韦)购自具于合法生产权的制药厂，其质量符合药典的标准，含C₈H₁₁N₅O₃不得少于98.0％。

实施例1：9-(羟乙氧甲基)鸟嘌呤胶囊剂的制备

9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤原药     510.20g

水溶性淀粉                     1489.80g

                                                       

分成10000粒(每粒200mg)

采用常规制备胶囊药剂的方法来制备，制备的工艺流程图如图1所示。处方及依据：经反复试验证实，9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤(阿昔洛韦)对家蚕血液型脓病的预防和治疗的最佳浓度为50ppm。经测算，2^#胶囊可装200mg药粉，如果装51.02mg9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤原药，使用时正好每粒胶囊兑1000ml的水，所以增加148.98mg的水溶性淀粉将胶囊填满。这样也便于蚕农使用。

实施例2：9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤片剂的制备

称取9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤原药1020.41g，乳糖320g，羧甲基纤维素钠80g，混匀，用10％淀粉浆制成软材，过筛制粒，60℃干燥，整粒，加入硬脂酸镁60g，与颗粒混匀，压片，制得成品10000片。处方及依据：经反复试验证实，9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤(阿昔洛韦)对家蚕血液型脓病的预防和治疗的有效浓度为100ppm。经测算，每片剂中的9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤(阿昔洛韦)为102.04mg，使用时正好每片兑1000ml的水。

实施例3：9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤溶液的制备

称取9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤原药255.10g，采用常规方法溶于蒸馏水，制成产品10000支溶液剂。处方及依据：经反复试验证实，9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤(阿昔洛韦)对家蚕血液型脓病的预防和治疗的有效浓度为25ppm。经测算，每支溶液剂中的9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤(阿昔洛韦)为25.51mg，使用时预防每支溶液剂兑1000ml的水、治疗2支溶液剂兑1000ml的水喷洒桑叶添食。

实施例4：：9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤胶囊剂的制备

9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤原药       765.31g

水溶性淀粉                       1234.69g

                                                                   

分成10000粒(每粒200mg)

采用现有制备胶囊药剂的方法来制备；制备的工艺流程图如图1所示。处方及依据：经反复试验证实，9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤(阿昔洛韦)对家蚕血液型脓病的预防和治疗浓度为75ppm。经测算，2^#胶囊可装200mg药粉，如果装76.53mg9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤(阿昔洛韦)，使用时正好每粒胶囊兑1000ml的水，所以增加123.47mg的水溶性淀粉将胶囊填满。这样也便于蚕农使用。

本发明中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。

尽管对本发明已作出了详细的说明并引证了一些具体实例，但是对本领域熟练技术人员来说，只要不离开本发明的精神和范围可作各种变化或修正是显然的。