一种基于移动切割内切酶的DNA结合蛋白检测方法

摘要

一种基于移动切割内切酶的DNA结合蛋白检测方法针对被测的DNA结合蛋白的识别序列设计一段双链核酸探针，其中一条单链5’端标记一个连接基团1并固定到固相载体表面2，另一条单链5’端标记一个信号分子6；在含有待测蛋白的识别位点3的3’端设计一个IIS型内切酶识别位点5，调节两识别位点的间距，使酶切位点4位于待测蛋白结合位点3之中。操作过程为：I.将可能含有待测DNA结合蛋白的溶液与固定化的双链探针一起孵育，然后在内切酶体系中进行酶切反应；II.当待测蛋白存在时，信号分子保留在载体表面，而无待测蛋白时，探针便被内切酶在空闲的蛋白结合位点中切断；III.根据信号强度实现对待测蛋白的非标记检测。