对乙酰氨基酚和盐酸曲马多制剂中杂质的测定方法

摘要

本发明公开了一种对乙酰氨基酚和盐酸曲马多制剂中杂质的测定方法。采用本发明的方法，可以简便快速和准确的检测制剂中的对氨基酚的含量，其检测误差仅为0.4％，同时可检测出其它未知杂质的总量，能够满足有关方面的需要。

说明书

技术领域

本发明涉及一种对乙酰氨基酚和盐酸曲马多的复方制剂中的杂质的检测方法，具体涉及以HPLC法对含有对乙酰氨基酚和盐酸曲马多的复方制剂中有关物质的检测方法。

背景技术

盐酸曲马多(tramadol hydrochloride)和对乙酰氨基酚(paracetamol)的复方制剂，于2001年8月在美国经FDA批准上市，用于急性疼痛的短期治疗(5d)。临床研究表明，与单一成分相比，该复方制剂治疗疼痛更有效，且起效快，作用时间长。

这两种单方制剂中有关物质检查的HPLC方法已有较多报道，对复方制剂的含量测定也有一些研究，而关于有关物质的测定方法仅有一篇报道，“复方盐酸曲马多片及有关物质的HPLC测定”，该报道内容主要侧重于含量测定，却没有涉及对氨基酚的测定。而对氨基酚是对乙酰氨基酚的合成中间体及主要降解产物，毒性较大，严格控制其限量是化学分析工作中的重要环节。因此，提供一种对乙酰氨基酚和盐酸曲马多的复方制剂中对氨基酚的检测方法，是有关方面所十分需要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时测定对乙酰氨基酚和盐酸曲马多复方制剂中已知杂质和未知杂质的测定方法，以克服上述现有技术中的缺陷。

本发明的方法包括如下步骤：

取供试品细粉适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含盐酸曲马多0.15～0.75mg的溶液，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密将供试品溶液加溶剂稀释20～500倍，作为自身对照溶液；

另取对氨基酚对照品适量，精密称定，加溶剂制成浓度为1.3～6.5μg/ml的溶液，作为对氨基酚对照溶液；

对氨基酚对照溶液与自身对照溶液可分别配制，也可配在同一量瓶中。

所说的溶剂选自水、甲醇水溶液或流动相A；

甲醇水溶液中，水与甲醇的体积比为78∶22～86∶14；

所说的流动相A为pH4～5的醋酸-醋酸钠缓冲液与甲醇的混合物，醋酸-醋酸钠缓冲液与甲醇的体积比为78∶22～86∶14。

照高效液相色谱法，用十八烷基键合硅胶为填充剂；以pH为4～5的醋酸-醋酸钠缓冲液与甲醇的混合物为流动相A，甲醇为流动相B，按下表进行梯度洗脱，检测波长为260～280nm。理论板数按对乙酰氨基酚峰和盐酸曲马多峰计算均应不低于2000，对氨基酚、对乙酰氨基酚及盐酸曲马多峰与相邻峰的分离度均应符合要求。醋酸-醋酸钠缓冲液与甲醇的体积比为：醋酸-醋酸钠缓冲液∶甲醇＝78∶22～86∶14。

梯度洗脱表

时间(分钟)    A(％)    B(％)0    100    00～4    100    04～25    1060    0 4025～45    60    40

表中时间和A、B比例均可适当调节，使对氨基酚、对乙酰氨基酚和盐酸曲马多都有合适的保留时间及分离度。

精密量取相同体积的供试品溶液与对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液的色谱图中如有与对氨基酚保留时间一致的色谱峰，按外标法计算对氨基酚的含量，其他杂质峰面积的和与对照溶液色谱图中对乙酰氨基酚峰和盐酸曲马多峰面积之和相比，按自身对照法计算。

采用本发明的方法，可以简便快速和准确的检测制剂中的对氨基酚的含量，其检测误差仅为0.4％，同时可检测出其它未知杂质的总量，能够满足有关方面的需要。

附图说明

图1为氨酚曲马多口腔崩解片有关物质对照图谱。

图2为氨酚曲马多口腔崩解片有关物质图谱。

图3为氨酚曲马多口腔崩解片有关物质对氨基酚加样回收图谱。

图4为酸破坏图谱。

图5为碱破坏图谱。

图6为氧化破坏图谱。

图7为紫外破坏图谱。

图8为热破坏图谱。

具体实施方式

实施例1

本发明在氨酚曲马多口腔崩解片中的应用

制剂1

325mg/37.5mg氨酚曲马多口腔崩解片

组分加入量对乙酰氨基酚325mg盐酸曲马多37.5mg丙烯酸树脂8mgβ-环糊精110mg

乙基纤维素15mg阿斯巴甜5mg乙基麦芽酚4mg柠檬香精13mg交联聚维酮46mg十二烷基硫酸钠10mg甘露醇60mg二氧化硅6.1mg聚乙烯吡咯烷酮0.4mg

有关物质测定方法：

取氨酚曲马多口腔崩解片10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸曲马多37.5mg)，置100ml量瓶中，加流动相A(醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)-甲醇(82∶18))超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为氨酚曲马多口腔崩解片供试品溶液；

另取对氨基酚对照品适量，精密称定，加流动相A(醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)-甲醇(82∶18))制成每1ml中含325μg的溶液，作为对氨基酚对照品溶液；

精密量取氨酚曲马多口腔崩解片供试品溶液1ml，对氨基酚对照品溶液1ml，置同一100ml量瓶中，加流动相A(醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)-甲醇(82∶18))稀释至刻度，作为对照溶液。照高效液相色谱法，用BDS HYPERSIL C18色谱柱；以醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)-甲醇(82∶18)为流动相A，甲醇为流动相B，按下表进行梯度洗脱，检测波长为271nm；流速1.0ml/min。

梯度洗脱表

时间(分钟)    A(％)    B(％)0    100    00～4    100    04～25    100→60    0→4025～45    60    40

取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使对乙酰氨基酚的峰高为满量程的20％～25％；再精密量取氨酚曲马多口腔崩解片供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，氨酚曲马多口腔崩解片供试品溶液的色谱图中如有与对氨基酚保留时间一致的色谱峰，其面积不得大于对照溶液中相应峰的峰面积(0.1％)，其他杂质峰面积的和，不得大于对照溶液色谱图中对乙酰氨基酚与盐酸曲马多峰面积之和(1.0％)。

测定结果：

理论板数按对乙酰氨基酚峰计大于4000，按盐酸曲马多峰计大于70000，对氨基酚、对乙酰氨基酚及盐酸曲马多峰与相邻峰的分离度均符合规定。检测结果见图1和图2，图1为对照溶液色谱图，图中1为对乙酰氨基酚，2为盐酸曲马多，3为对氨基酚；图2为供试品溶液色谱图，图中4为对乙酰氨基酚，5为盐酸曲马多。

三批样品有关物质

批号    031001  031002  031003对氨基酚    0％  0％  0％其他杂质    0.31％  0.24％  0.25％

三批样品有关物质均符合规定。

实施例2

制剂2

325mg/37.5mg氨酚曲马多片

组分加入量对乙酰氨基酚325mg盐酸曲马多37.5mg丙烯酸树脂15mgβ-环糊精60mg乙基纤维素8mg阿斯巴甜10mg柠檬香精8mg交联聚维酮50mg羧甲基淀粉钠20mg甘露醇70mg预胶化淀粉30mg二氧化硅6.0mg聚乙烯吡咯烷酮0.5mg

有关物质测定方法：

取氨酚曲马多片10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸曲马多15mg)，置100ml量瓶中，加溶剂(水-甲醇(78∶22))超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为氨酚曲马多片供试品溶液；精密量取氨酚曲马多片供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加溶剂(水-甲醇(78∶22))稀释至刻度，作为对照溶液(1)；另取对氨基酚对照品适量，精密称定，加溶剂(水-甲醇(78∶22))制成每1ml中含1.3μg的溶液，作为对照溶液(2)。照高效液相色谱法，用BDS HYPERSIL C18色谱柱；以醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.0)-甲醇(78∶22)为流动相A，甲醇为流动相B，按下表进行梯度洗脱，检测波长为271nm；流速1.0ml/min。

梯度洗脱表

时间(分钟)  A(％)    B(％)0  100    00～4  100    04～25  100→65    0→3525～40  65    35

取对照溶液(1)100μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使对乙酰氨基酚的峰高为满量程的20％～25％；再精密量取氨酚曲马多片供试品溶液与对照溶液(1)、(2)各100μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，氨酚曲马多片供试品溶液的色谱图中如有与对氨基酚保留时间一致的色谱峰，其面积不得大于对照溶液(2)中相应峰的峰面积(0.1％)，其他杂质峰面积的和，不得大于对照溶液(1)主峰面积之和(1.0％)。

测定结果：

理论板数按对乙酰氨基酚峰计大于4000，按盐酸曲马多峰计大于50000，对氨基酚、对乙酰氨基酚及盐酸曲马多峰与相邻峰的分离度均符合规定。

三批样品有关物质

批号  051201    051202    051203对氨基酚  0％    0％    0％其他杂质  0.29％    0.26％    0.22％

三批样品有关物质均符合规定。

实施例3

制剂同实施例2

有关物质测定方法：

取氨酚曲马多片10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸曲马多75mg)，置100ml量瓶中，加溶剂(水)超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为氨酚曲马多片供试品溶液；精密量取氨酚曲马多片供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加溶剂(水)稀释至刻度，作为对照溶液(1)；另取对氨基酚对照品适量，精密称定，加溶剂(水)制成每1ml中含6.5μg的溶液，作为对照溶液(2)。照高效液相色谱法，用BDSHYPERSIL C18色谱柱；以醋酸-醋酸钠缓冲液(pH5.0)-甲醇(86∶14)为流动相A，甲醇为流动相B，按下表进行梯度洗脱，检测波长为271nm；流速1.0ml/min。

梯度洗脱表

时间(分钟)    A(％)    B(％)0    100    00～7    100    07～22    100→58    0→4222～45    58    42

取对照溶液(1)10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使对乙酰氨基酚的峰高为满量程的20％～25％；再精密量取氨酚曲马多片供试品溶液与对照溶液(1)、(2)各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，氨酚曲马多片供试品溶液的色谱图中如有与对氨基酚保留时间一致的色谱峰，其面积不得大于对照溶液(2)中相应峰的峰面积(0.1％)，其他杂质峰面积的和，不得大于对照溶液(1)主峰面积之和(1.0％)。

测定结果：

理论板数按对乙酰氨基酚峰计大于4000，按盐酸曲马多峰计大于50000，对氨基酚、对乙酰氨基酚及盐酸曲马多峰与相邻峰的分离度均符合规定。

三批样品有关物质

批号  051201  051202  051203对氨基酚  0％  0％  0％其他杂质  0.22％  0.26％  0.24％

三批样品有关物质均符合规定。

实施例4

对氨基酚加样回收试验

制剂同实施例1

精密称取对氨基酚适量，用流动相A(醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)-甲醇(82∶18))溶解，制成每1ml中约含对氨基酚32.5μg的溶液，作为对氨基酚母液(需临用现配)，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；另精密称取氨酚曲马多口腔崩解片研细粉末适量(约相当于对乙酰氨基酚325mg)置50ml量瓶中，加流动相A(醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)-甲醇(82∶18))超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过。平行两份。精密量取续滤液5ml置10ml量瓶，每份供试品均量取四份，其中三份分别精密移入新配制的对氨基酚母液0.5ml、1.0ml、1.5ml，另一份为空白，加流动相A(醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)-甲醇(82∶18))稀释至刻度，摇匀。分别量取上述八份溶液及对照溶液各20μl注入色谱仪(色谱条件同实施例1)，记录色谱图，计算加入对氨基酚的回收率。其结果见图3，图中6为对乙酰氨基酚，7为盐酸曲马多，8为对氨基酚。

对氨基酚加样回收试验

     空白         50％       100％        150％  No.  1    2  1    2121  2  投入(mg)  0    0  8.04    8.1916.2516.5324.07  24.12  测得(mg)  0    0  8.07    8.1716.1716.3524.07  23.89  回收率(％)  100.37    99.7699.5198.91100.00  99.05  回收率                               平均＝99.60％             RSD＝0.56％

对氨基酚的平均加样回收率为99.60％，RSD为0.56％，证明该方法测定对氨基酚含量准确度高。

实施例5

破坏性试验

制剂同实施例1

取本品10片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于对乙酰氨基酚162.5mg)置50ml量瓶中，平行6份，其中一份作为未破坏对照，另五份分别照下述方法进行热、紫外光照、强酸、强碱、强氧化破坏后，加流动相(A)超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，各取续滤液20μl注入色谱仪。色谱条件同实施例1。

(1)强酸破坏：加入1N盐酸使润湿，在60℃下放置6小时。见图4，9为对乙酰氨基酚，10为盐酸曲马多。

(2)强碱破坏：加入1N氢氧化钠使润湿，在60℃下放置4小时。见图5，11为对乙酰氨基酚，12为盐酸曲马多。

(3)强氧化破坏：加入10％过氧化氢溶液使润湿，在60℃下放置2小时。见图6，13为对乙酰氨基酚，14为盐酸曲马多。

(4)紫外光照破坏：置紫外灯下照射96小时。见图7，15为对乙酰氨基酚，16为盐酸曲马多。

(5)热破坏：100℃下加热4小时。见图8，17为对乙酰氨基酚，18为盐酸曲马多。

比较破坏前后的色谱图，结果表明：本品在强酸、强碱、强氧化、紫外光照以及热条件下破坏，均会产生降解产物，主峰与各降解产物峰均分离良好，说明该方法专属性强，可较好地分离并检测出盐酸曲马多/对乙酰氨基酚复方制剂的杂质。