一种药物组合物及其在心脑血管疾病方面的应用

摘要

本发明提供了一种由羟基红花黄色素A和丹参素组成的药物组合物，还提供了该药物组合物在制备治疗心脑血管疾病方面的应用，具体地在心绞痛、冠心病、缺血性脑中风、脑缺血/再灌注损伤、脑外伤方面的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其制备方法和用途，具体地涉及由丹参素和羟基红花黄色素A组成的药物组合物及其在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的应用。

背景技术

长期以来，随着人口老龄化进程的加速以及生活方式的改变，心脑血管疾病一直是发达国家的主要死因，其中心脏疾患引起的死亡位于第二位，脑血管意外的死亡率在世界范围居于第3位，在我国因动脉硬化而死的比率高达1/3，可见心脑血管疾病已成为一个全球性的健康问题，极大的危害人民的健康。新型有效的防治脑血管病药物的开发已是临床急需。

羟基红花黄色素A是从红花中提取获得的，为红花的有效成分，羟基红花黄色素A具有抗局部脑缺血损伤，增加脑血流量，可抑制血小板激活因子诱发的血小板聚集，清除自由基、抑制脂质过氧化反应，保护细胞膜【臧宝霞，金鸣，司南，等，羟基红花黄色素A对血小板活化因子的拮抗作用，药学学报，2002，37(9)，696-699；金鸣，李金荣，吴伟，羟基红花黄色素A抗氧化作用的研究，中草药，2004，35(6)：665-666】。

丹参素(化学名为β-3，4-二羟苯乳酸)是从丹参中提取获得的，为丹参的有效成分。文献报道丹参素在心脑血管疾病方面具有一定的保护作用，见【江文德，陈玉华，王迎平，等.上海第一医学院学报，1982，9(1)：13-94.】；【唐立辉，王孝铭，梁殿权，等.中国病理生理杂志，1989，6(2)：65-9.】；【张力，王孝铭，梁殿权，等.中国病理生理杂志，1990，6(6)：420-423.】；【常英姿，梁殿权，王孝铭，等.中国病理生理杂志，1991，7(5)：449-452.】；【苏晓华，梁殿权，王孝铭.病理生理杂志，1992，8(2)：122-124.】；【顾杨洪，张彩英，黄桂秋，等.上海第二医科大学学报，1990，10(3)：208-211.】；【李承珠，杨诗春，赵凤娣，等.中西医结合杂志，1983，3(5)：297-299.】。

本发明人通过大量的实验研究，提供了一种由丹参素和羟基红花黄色素A组成的药物组合物及其在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的应用，该药物组合物在用于心脑血管疾病时具有协同作用。

发明内容

本发明提供了一种由羟基红花黄色素A和丹参素组成的药物组合物，其重量比为1∶9～9∶1，优选为1∶5～5∶1，丹参素还可以以金属盐的形式存在，优选为钠盐。

本发明提供了由羟基红花黄色素A和丹参素组成的药物组合物的制备方法。

本发明提供了上述组合物在制备治疗或预防心脑血管疾病的药物中的应用。

本发明提供了上述组合物在制备治疗或预防冠心病、心绞痛的药物中的应用。

本发明提供了上述组合物在制备治疗或预防缺血性脑中风的药物中的应用。

本发明提供了上述组合物在制备治疗或预防脑缺血/再灌注损伤的药物中的应用。

本发明提供了上述组合物在制备治疗或预防脑外伤的药物中的应用。

本发明提供的药物组合物可以通过口服、舌下、经皮、经肌肉或皮下、皮肤粘膜、静脉途径给药。药物组合物可以以粉针剂、注射液、片剂、胶囊、软胶囊、滴丸或口服液的形式存在，优选为冻干粉针。本发明所提供的各种药物剂型均可以以药学常规方法制备而成。

本发明提供的药物组合物在用于上述用途时，其使用剂量范围是60mg-2000mg，优选60mg-1000mg。

本发明提供的药物组合物，其活性成分的含量为60-2000mg。

本发明所述的羟基红花黄色素A从红花中提取分离获得，采用水提取，上弱极性大孔吸附树脂，再上聚酰胺柱，其含量(重量)≥90％。

本发明所述的丹参素是从丹参中提取分离获得，采用水提取，上大孔吸附树脂，丹参素含量(重量)≥90％。

本发明人进行了下列药理试验来证实由丹参素和羟基红花黄色素A组成的药物组合物在制备治疗或预防心脑血管疾病的用途时具有协同作用。

具体实施方式：

制备例1：羟基红花黄色素A、丹参素的制备

取干燥红花药材10kg，水提取3次，每次1小时，合并提取液；过滤，滤液减压浓缩至密度为1.05(80℃)，加乙醇至醇浓度为80％，于4℃下沉淀24小时，滤过；滤液于60℃减压回收乙醇至无醇味，加至10倍水稀释后上处理好的DM-130大孔吸附树脂，上样量(相当于生药量)与树脂用量的比例为1∶1(w/v)，用去离子水洗脱3个柱体积，弃去；继续用去离子水洗脱5个柱体积，收集洗脱液。洗脱液上样于处理好的聚酰胺柱，上样量相当于生药量与树脂用量的比例为3∶1(w/v)，先用去离子水洗脱3个柱体积，弃去；继续用95％乙醇溶液洗脱8个柱体积，收集洗脱液于60℃减压回收乙醇，减压干燥即得羟基红花黄色素A9.563g，纯度为90.8％。

取丹参10kg生药粉碎，加12倍量0.5％的NaOH煎煮两次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，用弱碱性大孔吸附树脂进行吸附(提取液与树脂的体积比3∶1)，用去离子水洗脱3-5柱体积，再用0.4％的NaOH洗脱2个柱体积，收集洗脱液，调节pH值为2-5，用弱极性或非极性大孔吸附树脂进行吸附(提取液与树脂的体积比3∶1)，用去离子水洗脱1-2个柱体积后再洗5个柱体积，收集洗脱液，浓缩，结晶，得丹参素钠9.626g，纯度为91.3％。

制备例2：羟基红花黄色素A、丹参素的制备

取干燥红花药材10kg，水提取3次，每次1小时，合并提取液；过滤，滤液减压浓缩至密度为1.15(80℃)，加乙醇至醇浓度为80％，于4℃下沉淀24小时，滤过；滤液于60℃减压回收乙醇至无醇味，加至10倍水稀释后上处理好的AB-8大孔吸附树脂，上样量(相当于生药量)与树脂用量的比例为1∶1(w/v)，用去离子水洗脱3个柱体积，弃去；继续去离子水洗脱5个柱体积，收集洗脱液。洗脱液上样于处理好的聚酰胺柱，上样量相当于生药量与树脂用量的比例为3∶1(w/v)，先用去离子水洗脱3个柱体积，弃去；继续用95％乙醇溶液洗脱8个柱体积，收集洗脱液于60℃减压回收乙醇，减压干燥即得羟基红花黄色素A9.321g，纯度为92.1％。

取丹参10kg生药粉碎，加12倍量0.5％的NaOH煎煮两次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，用弱碱性大孔吸附树脂进行吸附(提取液与树脂的体积比3∶1)，用去离子水洗脱3-5柱体积，再用0.4％的NaOH洗脱2个柱体积，收集洗脱液，调节pH值为2-5，用弱极性或非极性大孔吸附树脂进行吸附(提取液与树脂的体积比3∶1)，用去离子水洗脱1-2个柱体积后再洗5个柱体积，收集洗脱液，浓缩，加入适量HCl调pH至酸性，结晶，得丹参素钠9.356g，纯度为91.5％。

制备例3：制备由羟基红花黄色素A和丹参素组成的冻干粉针

在洁净条件下，取羟基红花黄色素A 54g、丹参素6g，溶于1000mL注射用水，加入100g甘露醇，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，灌入10mL西林瓶中，1.0mL/只，按冻干粉针工艺冻干，制成含羟基红花黄色素A 54mg、丹参素6mg的冻干粉针。

制备例4：制备由羟基红花黄色素A和丹参素组成的冻干粉针

在洁净条件下，取羟基红花黄色素A 6g、丹参素54g，溶于1000mL注射用水，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，灌入10mL西林瓶中，1.0mL/只，按冻干粉针工艺冻干，制成含羟基红花黄色素A 6mg、丹参素54mg的冻干粉针。

制备例5：制备由羟基红花黄色素A和丹参素组成的冻干粉针

在洁净条件下，取羟基红花黄色素A 10g、丹参素50g，溶于1000mL注射用水，加入100g低分子右旋糖苷，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，灌入10mL西林瓶中，1.0mL/只，按冻干粉针工艺冻干，制成含羟基红花黄色素A 10mg、丹参素50mg的粉针。

制备例6：制备由羟基红花黄色素A和丹参素组成的冻干粉针

在洁净条件下，取羟基红花黄色素A 40g、丹参素20g，溶于1000mL注射用水，加入100g低分子右旋糖苷，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，灌入10mL西林瓶中，1.0mL/只，按冻干粉针工艺冻干，制成含羟基红花黄色素A 40mg、丹参素20mg的冻干粉针。

制备例7：制备由羟基红花黄色素A和丹参素组成的冻干粉针

在洁净条件下，取羟基红花黄色素A 20g、丹参素40g，溶于1000mL注射用水，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，灌入10mL西林瓶中，1.0mL/只，按冻干粉针工艺冻干，制成含羟基红花黄色素A 20mg、丹参素40mg的冻干粉针。

制备例8：制备由羟基红花黄色素A和丹参素组成的冻干粉针

在洁净条件下，取羟基红花黄色素A 50g、丹参素10g，溶于1000mL注射用水，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，灌入10mL西林瓶中，1.0mL/只，按冻干粉针工艺冻干，制成含羟基红花黄色素A 50mg、丹参素10mg的冻干粉针。

制备例9：制备由羟基红花黄色素A和丹参素组成的冻干粉针

在洁净条件下，取羟基红花黄色素A 75g、丹参素75g，溶于1000mL注射用水，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，灌入10mL西林瓶中，1.0mL/只，按冻干粉针工艺冻干，制成含羟基红花黄色素A 75mg、丹参素75mg的冻干粉针。

制备例10：制备由羟基红花黄色素A和丹参素组成的冻干粉针

在洁净条件下，取羟基红花黄色素A 100g、丹参素20g，溶于1000mL注射用水，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，灌入10mL西林瓶中，1.0mL/只，按冻干粉针工艺冻干，制成含羟基红花黄色素A 100mg、丹参素20mg的冻干粉针。

制备例11：制备由羟基红花黄色素A和丹参素组成的冻干粉针

在洁净条件下，取羟基红花黄色素A 20g、丹参素100g，溶于1000mL注射用水，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，灌入10mL西林瓶中，1.0mL/只，按冻干粉针工艺冻干，制成含羟基红花黄色素A 20mg、丹参素100mg的冻干粉针。

制备例12：制备由羟基红花黄色素A和丹参素组成的冻干粉针

在洁净条件下，取羟基红花黄色素A 90g、丹参素10g，溶于1000mL注射用水，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，灌入10mL西林瓶中，1.0mL/只，按冻干粉针工艺冻干，制成含羟基红花黄色素A 90mg、丹参素10mg的冻干粉针。

制备例13：制备由羟基红花黄色素A和丹参素组成的冻干粉针

在洁净条件下，取羟基红花黄色素A 10g、丹参素90g，溶于1000mL注射用水，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，灌入10mL西林瓶中，1.0mL/只，按冻干粉针工艺冻于，制成含羟基红花黄色素A 10mg、丹参素90mg的冻干粉针。

试验例1：不同配比药物组合物对大鼠局部脑缺血损伤的影响

(1)材料：羟基红花黄色素A、丹参素，按制备例1制备，组合物：根据需要按比例配制。红四氮唑：美国Sigma公司产品，临用前用生理盐水配成4％溶液。

Nim：山东新华制药股份有限公司，040705，1.0mg/100ml。

实验动物：SD大鼠，山东绿叶天然药物研究开发公司实验动物中心提供，合格证号：SYXK(鲁)20030020。

(2)方法与结果：

动物随机分为假手术组(生理盐水)，模型对照组(生理盐水)，Nim(1.0mg/kg)组，羟基红花黄色素A小剂量(2mg/kg)组，羟基红花黄色素A中剂量(6mg/kg)组，丹参素小剂量(2mg/kg)组，丹参素中剂量(6mg/kg)组，组合物1【羟基红花黄色素A(5.4mg/kg)+丹参素(0.6mg/kg)】，组合物2【羟基红花黄色素A(5mg/kg)+丹参素(1mg/kg)】，组合物3【羟基红花黄色素A(0.6mg/kg)+丹参素(5.4mg/kg)】，组合物4【羟基红花黄色素A(1mg/kg)+丹参素(5mg/kg)】，组合物5【羟基红花黄色素A(3mg/kg)+丹参素(3mg/kg)】，组合物6【羟基红花黄色素A(4mg/kg)+丹参素(2mg/kg)】，组合物7【羟基红花黄色素A(2mg/kg)+丹参素(4mg/kg)】，组合物8【羟基红花黄色素A(30mg/kg)+丹参素(30mg/kg)】，组合物9【羟基红花黄色素A(50mg/kg)+丹参素(50mg/kg)】，组合物10【羟基红花黄色素A(100mg/kg)+丹参素(100mg/kg)】，组合物口服组【羟基红花黄色素A(15mg/kg)+丹参素(15mg/kg)】，每组10只。禁食12小时后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分离右侧颈总动脉，夹闭颈内、颈总动脉，颈外动脉近心端及远心端结扎，中间剪断。将颈外动脉游离端拉至与颈内动脉成一条直线，将栓线(选用直径0.24mm尼龙线，长度5.0cm)由颈外动脉插入至颅内，遇轻微阻力时停止，插入深度约为2cm。结扎颈外动脉开口，并打开颈总动脉动脉夹，消毒缝合伤口，造成右侧大脑中动脉缺血模型；sham组仅进行右侧颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉的分离(以上实验均在23℃～25℃进行)。组合物口服剂量组连续给药3天，于第2天给药后禁食16小时后，第3天给药30分钟后手术，其余各组术后静脉注射相应药物。24小时后按文献【刘小光，徐理纳，一种能评价溶栓和抗溶栓的大鼠脑中动脉模型，药学学报，1995，30：662】所述方法及标准观察并记录大鼠的行为障碍：(A)提鼠尾观察前肢屈曲情况，如双前肢对称伸向地面，计为0分，如手术对侧前肢出现腕屈曲计为1分，肘屈曲计为2分，肩内旋计为3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩内旋者，计为4分。(B)将动物置于平地面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力，计为0分，如向手术对侧推动时阻力下降者，根据下降程度不同分为轻、中、重三度，分别计为1，2和3分。(C)将动物双前肢置一金属网上，观察双前肢的肌张力。双前肢肌张力对等且有力者计为0分。同样根据手术对侧肌张力下降程度不同计为1，2和3分。(D)动物有不停地向一侧转圈者，计为1分。根据标准评分，满分为11分，分数越高，表示动物行为障碍越严重。

行为评分后处死大鼠，取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，冠状切成5片，脑片用红四氮唑(TTC)染色，正常组织经染色后呈红色，梗塞组织呈白色，染色后照相，用中国航空航天大学病理图像分析软件求梗塞面积比。

数据用x±SD表示，脑缺血面积以组间t检验进行统计学处理，行为障碍分数以组间秩和检验进行统计学处理。

结果如表1所示，缺血24小时后，模型组大鼠表现出明显的行为障碍，大鼠脑组织也出现明显的灶状缺血区，达到全脑的24％左右。羟基红花黄色素A小剂量(2mg/kg)组、丹参素小剂量(2mg/kg)组未能改善大鼠行为障碍、减少缺血面积；羟基红花黄色素A中剂量(6mg/kg)组，丹参素中剂量(6mg/kg)组、组合物口服组【羟基红花黄色素A(15mg/kg)+丹参素(15mg/kg)】改善大鼠行为障碍、减少缺血面积(P＜0.05；组合物1【羟基红花黄色素A(5.4mg/kg)+丹参素(0.6mg/kg)】，组合物2【羟基红花黄色素A(5mg/kg)+丹参素(1mg/kg)】，组合物3【羟基红花黄色素A(0.6mg/kg)+丹参素(5.4mg/kg)】，组合物4【羟基红花黄色素A(1mg/kg)+丹参素(5mg/kg)】，组合物5【羟基红花黄色素A(3mg/kg)+丹参素(3mg/kg)】，组合物6【羟基红花黄色素A(4mg/kg)+丹参素(2mg/kg)】，组合物7【羟基红花黄色素A(2mg/kg)+丹参素(4mg/kg)】显著改善大鼠行为障碍、减少缺血面积(与模型组比较，p＜0.01)，对改善大鼠行为障碍、减少缺血面积与6mg/kg丹参素组、6mg/kg羟基红花黄色素A组比较，亦有显著性差异(p＜0.05)；组合物8【羟基红花黄色素A(30mg/kg)+丹参素(30mg/kg)】，组合物9【羟基红花黄色素A(50mg/kg)+丹参素(50mg/kg)】，组合物10【羟基红花黄色素A(100mg/kg)+丹参素(100mg/kg)】极其显著地改善大鼠行为障碍、减少缺血面积(与模型组比较p＜0.001)，组合物9【羟基红花黄色素A(50mg/kg)+丹参素(50mg/kg)】与组合物10【羟基红花黄色素A(100mg/kg)+丹参素(100mg/kg)】比较，对改善大鼠行为障碍、减少缺血面积无明显差异(p＞0.05)。由羟基红花黄色素A和丹参素组成的药物组合物抗脑缺血作用明显优于单用同剂量羟基红花黄色素A或丹参素(P＜0.05)，提示组合物中羟基红花黄色素A和丹参素具有协同作用。

             表1  不同配比药物组合物对大鼠局部脑缺血损伤的影响

  组别  剂量(mg/kg)  行为障碍  缺血面积(％)  sham组模型对照组Nim组丹参素小剂量组丹参素中剂量组羟基红花黄色素A小剂量组羟基红花黄色素A中剂量组组合物剂量组1组合物剂量组2组合物剂量组3组合物剂量组4组合物剂量组5组合物剂量组6组合物剂量组7组合物剂量组8组合物口服组组合物剂量组9组合物剂量组10  生理盐水生理盐水1.026265.4+0.65+10.6+5.41+53+34+22+430+3015+1550+50100+100  ---9.80±0.926.60±2.21^**9.30±1.168.80±1.03^*9.10±1.208.78±0.99^*7.90±0.74^**#M7.80±0.75^**#M7.70±0.74^**#M7.60±0.74^**#M7.50±0.72^**#M7.50±0.71^**#M7.50±0.70^**#M6.60±1.58^***8.71±0.95^*5.95±1.60^***5.80±1.48^***  ---23.90±5.0315.61±3.57^**22.32±5.2119.65±3.61^*21.83±3.1619.60±3.57^*16.36±2.90^**#M16.20±2.80^**#M16.16±2.90^**#M16.26±2.90^**#M16.10±2.90^**#M16.05±2.90^**#M16.09±2.90^**#M15.1±2.80^***19.40±3.47^*14.0±2.55^***13.9±2.39^***

与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

与丹参素中剂量组比较，^#P＜0.05；与羟基红花黄色素A中剂量组比较，^MP＜0.05

试验例2：不同配比药物组合物对大鼠局部脑缺血/再灌注损伤的影响

(1)材料：羟基红花黄色素A、丹参素，按制备例1制备，组合物：根据需要按比例配制。

实验动物：SD大鼠，山东绿叶天然药物研究开发公司实验动物中心提供，合格证号：SYXK(鲁)20030020。

Nim：山东新华制药股份有限公司，040705，1.0mg/100ml。

(2)方法与结果：

动物随机分为假手术组(生理盐水)，模型对照组(生理盐水)，Nim(1.0mg/kg)组，羟基红花黄色素A小剂量(2mg/kg)组，羟基红花黄色素A中剂量(6mg/kg)组，丹参素小剂量(2mg/kg)组，丹参素中剂量(6mg/kg)组，组合物1【羟基红花黄色素A(5.4mg/kg)+丹参素(0.6mg/kg)】，组合物2【羟基红花黄色素A(5mg/kg)+丹参素(1mg/kg)】，组合物3【羟基红花黄色素A(0.6mg/kg)+丹参素(5.4mg/kg)】，组合物4【羟基红花黄色素A(1mg/kg)+丹参素(5mg/kg)】，组合物5【羟基红花黄色素A(3mg/kg)+丹参素(3mg/kg)】，组合物6【羟基红花黄色素A(4mg/kg)+丹参素(2mg/kg)】，组合物7【羟基红花黄色素A(2mg/kg)+丹参素(4mg/kg)】，组合物8【羟基红花黄色素A(30mg/kg)+丹参素(30mg/kg)】，组合物9【羟基红花黄色素A(50mg/kg)+丹参素(50mg/kg)】，组合物10【羟基红花黄色素A(100mg/kg)+丹参素(100mg/kg)】，组合物口服组【羟基红花黄色素A(15mg/kg)+丹参素(15mg/kg)】，每组10只。禁食12小时后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分离两侧颈总动脉，动脉夹夹闭两侧颈总动脉60min后，松开两侧颈总动脉的动脉夹，随即各组舌下静脉给药，给药体积0.4mL/200g，模型对照组给予同体积的NS，24小时后处死大鼠，取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干。sham组分离两侧颈总动脉但不夹闭两侧颈总动脉，其余操作同上述。用滤纸轻吸脑表面的水分，称重，100℃烘10小时，取出，冷却，称重，计算脑含水量。脑含水百分率(％)＝(脑湿重-脑干重)/脑湿重*100％，数据用X±s表示，以组间t检验进行统计学处理。

结果如表2所示，缺血再灌24小时后，模型组大鼠脑含水量达79.5％，羟基红花黄色素A小剂量(2mg/kg)组、丹参素小剂量(2mg/kg)组未能降低脑含水量；羟基红花黄色素A中剂量(6mg/kg)组，丹参素中剂量(6mg/kg)组、组合物口服组【羟基红花黄色素A(15mg/kg)+丹参素(15mg/kg)】降低脑含水量(P＜0.05)；组合物1【羟基红花黄色素A(5.4mg/kg)+丹参素(0.6mg/kg)】，组合物2【羟基红花黄色素A(5mg/kg)+丹参素(1mg/kg)】，组合物3【羟基红花黄色素A(0.6mg/kg)+丹参素(5.4mg/kg)】，组合物4【羟基红花黄色素A(1mg/kg)+丹参素(5mg/kg)】，组合物5【羟基红花黄色素A(3mg/kg)+丹参素(3mg/kg)】，组合物6【羟基红花黄色素A(4mg/kg)+丹参素(2mg/kg)】，组合物7【羟基红花黄色素A(2mg/kg)+丹参素(4mg/kg)】显著降低脑含水量(与模型组比较，p＜0.01)，降低脑含水量与6mg/kg丹参素组、6mg/kg羟基红花黄色素A组比较，亦有显著性差异(p＜0.05)；组合物8【羟基红花黄色素A(30mg/kg)+丹参素(30mg/kg)】，组合物9【羟基红花黄色素A(50mg/kg)+丹参素(50mg/kg)】，组合物10【羟基红花黄色素A(100mg/kg)+丹参素(100mg/kg)】极其显著地降低脑含水量(与模型组比较，p＜0.001)，组合物9【羟基红花黄色素A(50mg/kg)+丹参素(50mg/kg)】与组合物10【羟基红花黄色素A(100mg/kg)+丹参素(100mg/kg)】比较，对降低脑含水量无明显差异(p＞0.05)。羟基红花黄色素A和丹参素组成的药物组合物抗脑缺血再灌作用明显优于单用同剂量羟基红花黄色素A或丹参素(P＜0.05)，提示组合物中羟基红花黄色素A和丹参素具有协同作用。

表2  不同配比药物组合物对大鼠局部脑缺血/再灌注损伤损伤的影响

  组别  剂量(mg/kg)  脑含水量(％)  sham组模型对照组Nim组丹参素小剂量组丹参素中剂量组羟基红花黄色素A小剂量组羟基红花黄色素A中剂量组组合物剂量组1组合物剂量组2组合物剂量组3组合物剂量组4组合物剂量组5组合物剂量组6组合物剂量组7组合物剂量组8组合物口服组组合物剂量组9组合物剂量组10  生理盐水生理盐水1.026265.4+0.65+10.6+5.41+53+34+22+430+3015+1550+50100+100  77.0±0.479.5±0.478.0±0.8^**79.3±0.679.1±0.5^*79.2±0.779.1±0.4^*78.0±0.8^**#M78.4±0.9^**#M78.5±0.7^**#M78.4±0.7^**#M78.5±0.6^**#M78.4±0.8^**#M78.3±0.8^**#M78.0±0.6^***79.0±0.5^*77.9±0.6^***77.8±0.5^***

与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

与丹参素中剂量组比较，^#P＜0.05；与羟基红花黄色素A中剂量组比较，^MP＜0.05

试验例3：不同配比药物组合物对大鼠心肌缺血损伤的影响

(1)材料：羟基红花黄色素A、丹参素：按制备例1制备，组合物：按比例配制。氯化硝基四氮唑蓝(N-BT)，由军事医学科学院药材供应站提供。

硝本地平：山西大同制药厂，100mg，040515。

实验动物：SD大鼠，山东绿叶天然药物研究开发公司实验动物中心提供，合格证号：SYXK(鲁)20030020。

(2)方法与结果：

动物随机分为假手术组(生理盐水)，模型对照组(生理盐水)，硝本地平(6mg/kg)组，羟基红花黄色素A小剂量(2mg/kg)组，羟基红花黄色素A中剂量(6mg/kg)组，丹参素小剂量(2mg/kg)组，丹参素中剂量(6mg/kg)组，组合物1【羟基红花黄色素A(5.4mg/kg)+丹参素(0.6mg/kg)】，组合物2【羟基红花黄色素A(5mg/kg)+丹参素(1mg/kg)】，组合物3【羟基红花黄色素A(0.6mg/kg)+丹参素(5.4mg/kg)】，组合物4【羟基红花黄色素A(1mg/kg)+丹参素(5mg/kg)】，组合物5【羟基红花黄色素A(3mg/kg)+丹参素(3mg/kg)】，组合物6【羟基红花黄色素A(4mg/kg)+丹参素(2mg/kg)】，组合物7【羟基红花黄色素A(2mg/kg)+丹参素(4mg/kg)】，组合物8【羟基红花黄色素A(30mg/kg)+丹参素(30mg/kg)】，组合物9【羟基红花黄色素A(50mg/kg)+丹参素(50mg/kg)】，组合物10【羟基红花黄色素A(100mg/kg)+丹参素(100mg/kg)】，组合物口服组【羟基红花黄色素A(15mg/kg)+丹参素(15mg/kg)】，每组10只。禁食12小时后，ip乌拉坦(1.2g/kg)麻醉，测肢体II导联心电图。剪去左胸前皮毛，碘酒及酒精消毒，沿胸骨左缘1cm处，剪开胸壁肌肉及二条肋骨，迅速打开胸腔，暴露心脏，在动脉圆锥与左心耳之间结扎左冠状动脉，立即将心脏放回，排挤出胸腔空气，用止血钳闭合胸腔，造成大鼠急性心肌缺血模型，sham组不结扎左冠状动脉，其余操作同上述。硝苯地平组在麻醉前灌胃给药，组合物口服剂量组连续给药3天，于第2天给药后禁食16小时后，第3天给药30分钟后手术，其余各组术后随既静脉注射相应药物。记录给药前及给药后1.5h、3h心电图，6h后取出心脏，以冷生理盐水洗净后，-20℃冰箱冷冻过夜。次日，将冷冻的心脏由结扎处至心尖部等厚切成5片，浸入新鲜配制的0.5％ NBT磷酸缓冲液(pH7.4)中。37℃水浴振摇10～15min。用滤纸吸干切片表面的染色液，分离染色部分和未染色部分，称重，记算梗死面积。梗死面积(％)＝梗死部分重量/(非梗死部分重量+梗死部分重量)×100％数据用x±SD表示，以组间F检验进行统计学处理。

结果如表3所示，心肌缺血6小时后，模型组大鼠心肌出现明显的灶状缺血区，达到26％左右。羟基红花黄色素A小剂量(2mg/kg)组、丹参素小剂量(2mg/kg)组未能降低肢体导联心电图J点的升高、减少缺血面积；羟基红花黄色素A中剂量(6mg/kg)组，丹参素中剂量(6mg/kg)组、组合物口服组【羟基红花黄色素A(15mg/kg)+丹参素(15mg/kg)】均在一定程度上降低肢体导联心电图J点的升高、减少缺血面积(与模型组比较，p＜0.05)；组合物1【羟基红花黄色素A(5.4mg/kg)+丹参素(0.6mg/kg)】，组合物2【羟基红花黄色素A(5mg/kg)+丹参素(1mg/kg)】，组合物3【羟基红花黄色素A(0.6mg/kg)+丹参素(5.4mg/kg)】，组合物4【羟基红花黄色素A(1mg/kg)+丹参素(5mg/kg)】，组合物5【羟基红花黄色素A(3mg/kg)+丹参素(3mg/kg)】，组合物6【羟基红花黄色素A(4mg/kg)+丹参素(2mg/kg)】，组合物7【羟基红花黄色素A(2mg/kg)+丹参素(4mg/kg)】对肢体导联心电图J点的升高、减少缺血面积与6mg/kg丹参素组、6mg/kg羟基红花黄色素A组比较亦有显著性差异(p＜0.05)；组合物8【羟基红花黄色素A(30mg/kg)+丹参素(30mg/kg)】，组合物9【羟基红花黄色素A(50mg/kg)+丹参素(50mg/kg)】，组合物10【羟基红花黄色素A(100mg/kg)+丹参素(100mg/kg)】极其显著地降低肢体导联心电图J点的升高、减少缺血面积(与模型组比较，p＜0.001)；组合物剂量组9【羟基红花黄色素A(50mg/kg)+丹参素(50mg/kg)】与组合物剂量组10【羟基红花黄色素A(100mg/kg)+丹参素(100mg/kg)】比较，对肢体导联心电图J点的升高及缺血面积无明显差异(p＞0.05)。提示组合物中羟基红花黄色素A和丹参素具有协同作用。

                表3  不同配比药物组合物对大鼠心肌缺血损伤的影响

  组别  剂量(mg/kg)  梗死面积(％)J点抬高(mv)  1.5h3h  sham组模型对照组硝苯地平组丹参素小剂量组丹参素中剂量组羟A小剂量组羟A中剂量组组合物剂量组1组合物剂量组2组合物剂量组3组合物剂量组4组合物剂量组5组合物剂量组6组合物剂量组7组合物口服组组合物剂量组8组合物剂量组9组合物剂量组10  生理盐水生理盐水626265.4+0.65+10.6+5.41+53+34+22+415+1530+3050+50100+100  ---26.2±5.518.4±4.6^**24.7±4.921.8±3.5^*24.3±4.521.9±3.3^*18.9±2.8^**#M18.9±2.7^**#M18.6±2.7^**#M18.0±2.5^**#M17.8±2.5^**#M18.0±2.4^**#M18.1±2.8^**#M21.5±3.3^*14.8±3.7^***13.1±3.6^***12.8±3.5^***  ---0.446±0.1800258±0.070^**0.398±0.0800.278±0.100^*0.408±0.0830.275±0.100^*0.202±0.056^**#M0.201±0.055^**#M0.199±0.055^**#M0.201±0.056^**#M0.195±0.056^**#M0.193±0.054^**#M0.199±0.056^**#M0.265±0.100^*0.175±0.049^***0.158±0.047^***0.155±0.045^***S  ---0.433±0.1330.276±0.082^**0.411±0.1080.291±0.123^*0.401±0.1180.293±0.113^*0.235±0.086^**#M0.233±0.084^**#M0.235±0.085^**#M0.234±0.086^**#M0.230±0.086^**#M0.225±0.084^**#M0.215±0.086^**#M0.290±0.113^*0.210±0.046^***0.185±0.042^***0.183±0.043^***

与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

与丹参素中剂量组比较，^#P＜0.05；与羟基红花黄色素A中剂量组比较，^MP＜0.05