一种盐酸黄连素纳米乳制剂及其制备方法

摘要

本发明公开了一种盐酸黄连素纳米乳制剂，该制剂是由0.1％－2％的盐酸黄连素、20％－40％的表面活性剂、10％－20％的助表面活性剂、1％－10％的溶剂、5％－30％的油相，1％－5％的甜味剂，27.5％－70％的蒸馏水组成。该纳米乳制剂提高了盐酸黄连素的溶解度，克服其在体内的生物利用度极低的缺点，降低其毒副作用，而且制备方法简单，生产成本低。

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种治疗消化系统、心血管系统及多种肿瘤疾病的药物——盐酸黄连素的新剂型，具体涉及一种盐酸黄连素纳米乳药物及其制备方法。

背景技术

黄连素(俗称为小檗碱Berberine)是从毛蓖科黄连等植物根茎中提取的一种季胺类异喹啉生物碱。它在我国作为消化系统疾病已经有三千多年的历史，主要治疗肠道炎症。现代研究证实，黄连素可以广泛应用于各种心血管系统，同时还对多种肿瘤有极好的疗效。由于黄连素的在水中不溶解，国内外市场上主要制剂是黄连素各种片剂和胶囊。这些传统制剂，由于肝脏对药物的首过效应，在水中溶解度低等原因，口服的生物利用度较低(一般在10％左右)，病人用药次数频繁，耐受性差。

发明内容

本发明的目的就是克服现有技术中的缺陷与不足，提出一种盐酸黄连素纳米乳制剂，该纳米乳制剂提高了盐酸黄连素的溶解度，克服其在体内的生物利用度极低的缺点，降低其毒副作用。

实现上述发明目的技术方案是一种盐酸黄连素纳米乳制剂，包括以下组分：0.1％-2％的盐酸黄连素、1％-10％的溶剂、20％-40％的表面活性剂、10％-20％的助表面活性剂、5％-30％的油相、1％-5％的甜味剂，27.5％-70％的蒸馏水组成。

所述的表面活性剂是吐温-60、甘油三酯、吐温-80、聚氧乙烯氢花蓖麻油中任一种；

所述的助表面活性剂是司盘-80和司盘60中的任一种；

所述的油为食用大豆油、药用液体石蜡、食用色拉油、蓖麻油、肉豆蔻酸异丙酯、油酸乙酯中的任一种；

所述的溶剂是无水乙醇、正丁醇、甘油、1，3-丁二醇中的任一种；

所述的甜味剂是蔗糖或甘露醇；

所述的表面活性剂有效量为吐温-60：20-30％、甘油三酯：25-35％、吐温-80：20-40％，RH-40：20-30％；

所述的种助表面活性剂有效量为司盘-80，10-20％和司盘60：10-15％

所述的油相有效量为食用大豆油：10-30％、药用液体石蜡：10-30％、食用色拉油：15-30％、蓖麻油：15-30％、肉豆蔻酸异丙酯(IPM)：10-30％、油酸乙酯：10-35％；

所述的溶剂有效量为：无水乙醇：1-10％、正丁醇：1-10％、甘油：1-10％、1，3-丁二醇：1-10％；

所述的甜味剂的有效量为：蔗糖：1-10％和甘露醇：1-10％。

本发明的另一目的是提供一种盐酸黄连素纳米乳制剂的制备方法，具体包括下列步骤：

1)按配方称取盐酸黄连素、溶剂、表面活性剂、助表面活性剂、油相、甜味剂、蒸馏水备用；

2)将所述量的表面活性剂与盐酸黄连素混匀，并在转速为100～300r/m恒温磁力搅拌器搅拌，温度在60～80℃下先让盐酸黄连素部分溶解；

3)再加入所述量的助表面活性剂和溶剂让盐酸黄连素完全溶解，得到澄清的溶液；

4)再加入所述量的油相，80℃恒温水浴，并在转速为100～300r/m恒温磁力搅拌器搅拌，在加入蒸馏水，得到澄清的溶液；

5)最后再加入所述量的甜味剂和蒸馏水，混匀，得到澄清透明的溶液，即得本发明产品。

本发明所述的一种含有盐酸黄连素的纳米乳制剂，可制成胶囊、软胶囊、口服液等剂型，也可进一步用任意比例的水分稀释成稳定的任意浓度的纳米乳，并制成各种相应剂型。

本发明采用的纳米乳由油、水、表面活性剂、助表面活性剂和溶剂5部分组成，是一种粒径在10～100nm之间的乳滴分散在另一种液体中形成的各向同性的热力学稳定的胶体分散系统。纳米乳液中同时存在水相和油相，具有良好的溶解性能，既能溶解非极性的疏水性药物，又能溶解极性的亲水性药物。

处方设计原则：作为药物载体，纳米乳首先应符合一般药物载体的要求，即无毒、无刺激、无不良药理作用、具有良好的生物相容性、不影响主药的药效和稳定性；另外由于纳米乳自身的特性，它对各处方组成还有特殊的要求，对药物有较强的增溶能力并能在较大范围内形成稳定的纳米乳区。本发明遵循此原则。

表面活性剂是微乳形成所必需的物质，其主要作用是降低界面张力形成界面膜，促使纳米乳形成。表面活性剂的选择决定于所形成的纳米乳的特性和使用目的。HLB值在4～7的表面活性剂可制备W/O型纳米乳，HLB值在8～18内的表面活性剂可制备O/W型纳米乳。本发明采用其中研究报道中最常用的高HLB值的表面活性剂吐温类、司盘类、甘油三酯，聚氧乙烯氢花蓖麻油(RH-40)。这些表面活性剂，无毒无刺激，生物相容性好，有一定的营养作用，是制备口服及注射用纳米乳的主要辅料。

由于大部分纳米乳的形成都需要助表面活性剂的参与，其作用主要是协助表面活性剂降低油水间界面张力；降低表面活性剂的相互排斥力及电荷斥力，促使界面膜具有很好的柔顺性和流动性，减少纳米乳生成时所需的界面弯曲能，使纳米乳易于形成；调节表面活性剂的HLB值。常用的助表面活性剂有，司盘80和60。本发明中采用的低链醇作为溶剂，具有增强助表面活性剂的作用。由于使用助表面活性剂，可以让纳米乳中所使用的油相应与界面膜上表面活性剂分子之间保持渗透和联系，并易于与表面活性剂形成界面膜，从而利于纳米乳的形成。

本发明采用常用的油相有色拉油、豆油、蓖麻油、肉豆蔻酸异丙酯、油酸乙酯、药用液体石蜡中等均可以食用，无毒无刺激，生物相容性好，有一定的营养作用，是制备口服及注射用纳米乳的主要辅料。

同时本发明还加入少量的甜味剂，可以让本发明具有良好的口感，便于服用。

本发明与其它现有技术相比，具有以下的有益效果：

1.本发明所制备的纳米乳药物一方面可以解决传统剂型有肝脏过的效应，增加药物在肌体内的吸收；

2.解决黄连素的溶解度低，增大药物在体内的浓度，增加药物的疗效，降低药物的毒副作用；

3.可增加黄连素分散性，提高药物的生物利用度；

4.纳米乳药物可以进一步加入任意比例的水分稀释，形成澄清透明的纳米乳，该纳米乳热力学稳定，可以过滤除菌，易于制备和储存；

5.本发明采用的配方和方法简单可行，可以便于大规模工业化生产。

附图说明

图1为空白纳米乳电镜图。

图2为本发明的盐酸黄连素纳米乳药物的透射电镜照片(10万倍)。

图3为本发明的盐酸黄连素纳米乳制剂的粒度分布图。

下面结合发明人给出的具体试验例和具体实施例来进一步说明本发明盐酸黄连素纳米乳制剂效果。

具体实施方式：

试验例1

本实验通过对本发明黄连素口纳米乳药物的形态、颜色、澄清度、粒径和粒度分布、理化性、安全性测定，进一步说明本发明药物效果。

1.试验材料

所用仪器均为西北农林科技大学实验室为现有仪器，昆明小白鼠体重18-22g，由第四军医大学动物中心提供。

2.实验方法与结果

2.1纳米乳的形态

取少量黄连素纳米乳适量，用水稀释1倍后，滴在覆有支持膜的铜网上，静止10min后用滤纸片吸干，再滴加2％磷钨酸(pH为7.4)溶液于铜网上负染3min，自然挥干，用透射电子显微镜观察并摄制照片，结果见图2。

结果表明，纳米乳在电镜下均呈圆球形，内部为油相，见图2从电镜下，随机选取不少于500个液滴测量粒径，得纳米乳液滴粒径范围在10-100nm，平均粒径在56.8nm左右。

2.2溶液颜色

制备得到的纳米乳液均为浅黄色澄清、均一、透明液体，根据《中国药典》(2005年版)II部附录IXA溶液颜色检查法，配制黄绿色调标准比色液。纳米乳液颜色与黄绿色调1号比色液相比，不得更深。

2.3澄清度

根据《中国药典》(2005年版)II部附录IXB澄清度检查法下检查，本品为澄清的溶液。经注射用水稀释后，即出现明显的淡蓝色的乳光。

2.4粒径和粒度分布

取黄连素纳米乳适量，用适量蒸馏水稀释后用激光粒度测定仪进行测定，纳米乳的粒径与粒度分布见图3。

测定结果图3表明，实验制备的黄连素纳米乳平均粒径56.8nm。小于60nm的粒子占75％；小于70nm的粒子占90％，可见制得的纳米乳制剂的粒径分布范围窄，粒径比较均匀。

2.5.纳米乳的理化性质

考察了空白纳米乳和黄连素纳米乳的黏度(旋转式黏度计)、折光率(20oC、阿贝折光仪)、电导率(电导率仪)、Zeta电位(电势显微电泳仪)。结果见表1。

                      表1纳米乳的理化性质测定n＝6

  样品  黏度/mm².s^-1  折光率  电导率/mS^-1  Zeta电位/mV  空白纳米乳  6.03±0.08  1.350±0.0041  328  -5.25±0.06  黄连素纳米乳  6.32±0.07  1.360±0.0042  345  -3.35±0.03

实验结果表明，药物的加入使纳米乳的电导率增加，Zeta电位显著减小，而黏度和折光率无明显变化(p＞0.05)。

2.6黄连素纳米乳的初步稳定性研究

将黄连素原料和黄连素纳米乳(熔封于安瓶中)分别于高温(40，60℃)、低温(4℃)及光照(4500±1500)lx环境下进行影响因素实验，于5，10d取样，对黄连素原料和黄连素素纳米乳的外观及含量进行了测定，结果见表3。表明黄连素在固体状态下较稳定，受温度、湿度、光照影响较小；黄连素纳米乳在上述各条件下均未出现分层、絮凝或药物析出的现象，可认为纳米乳性质较稳定；但在高温、光照条件下纳米乳中药物含量明显下降，说明黄连素在液体状态下受温度和光照影响较大，在室温或低温条件下较为稳定，因此可在室温避光条件下保存。

                                     表2稳定性实验结果n＝5

  样品  时间                                        含量  黄连素原料    黄连素纳米乳  /d  0  5  10  0  5  相对湿度92.5％  99.2±1.5  98.2±2.3  98.8±1.1  100.3±1.2  84.8±1.2  60℃    99.2±1.5  100.2±1.1  98.8±0.9  100.3±1.1  98.0±1.1  40℃    99.2±1.5  99.4±1.0  99.3±1.1  100.2±1.5  97.8±1.5  25℃    99.2±1.5  100.3±1.1  98.4±1.5  100.4±1.6  100.8±1.3  (4500±500)lx  99.2±1.5  100.0±1.7  100.2±1.2  98.7±1.1  100.2±1.1  10  96.8±1.4  95.7±1.2  97.3±1.1  99.0±1.7  99.2±1.3

2.6盐酸黄连素纳米乳的安全性评价

取小鼠40只，随机分成5组，每组8只，分别纳米乳药液0.2，0.25，0.3，0.35，0.4g/ml不同的药物浓度灌胃。剂量为0.2ml/10g，连续给药7d，给药后观察7d，自由饮水和进食，记录各组动物给药后的症状、体征及其死亡数目和时间，记录其死亡数，用Bliss法计算LD₅₀软件程序(华西医科大学编制)进行处理。结果其LD₅₀为3055mg/kg。属于无毒性药物。结果表明其很安全。

试验例2：体外抗菌活性比较

1实验材料和仪器

本实验下选择的菌种为大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌，痢疾杆菌和沙门氏菌，菌种来自与西北农林科技大学微生物教研室。实验药品有盐酸黄连素片、盐酸黄连素胶囊，同类抗菌的三黄片和双黄连口服液均可市购。黄连素水溶液和空白纳米乳及其黄连素纳米乳均自制。实验仪器均为西北农林科技大学实验室为现有仪器.

2实验方法

2.1实验的分组与配制培养基

实验分为：正常组，黄连素水溶液，盐酸黄连素片、盐酸黄连素胶囊，盐酸黄连素纳米乳，空白纳米乳，三黄片和双黄连口服液组.

精确称取营养琼脂100g溶于200ml无菌水中制得培养基。

2.2制备大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌，伤寒杆菌和沙门氏菌悬浮液

分别取大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌，痢疾杆菌和沙门氏菌原种溶于10ml无菌水中，振荡得悬浮液。

2.3接种培养

分别称取黄连素水溶液，盐酸黄连素片、盐酸黄连素胶囊，盐酸黄连素纳米乳，空白纳米乳，三黄片和双黄连口服液各0.01g溶于10ml无菌水中，先将105个直径为6mm的纸片分35份浸泡其中2min，浸泡后的纸片置于35个培养皿中。在60℃的干燥箱中烘干(20min左右).其中正常组的纸片不浸泡.在无菌操作下，先在培养皿中加入0.02ml大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌，痢疾杆菌和沙门氏菌的悬浮液和20ml的培养基，然后将含有上述烘干好的纸片为3份，分别置于含有大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌，伤寒杆菌和沙门氏菌的培养皿中，在温度为37℃的培养箱中培养48h后观察结果，量取抑菌环的直径(cm)，抑菌环的直径大，则抑菌效果好.并用SSPP11.0进行统计分析.

3.实验结果

实验结果，结果见表3.从表3说明黄连素纳米乳对上述细菌均具有较好的抗菌活性。

                      表3体外抑菌试验结果n＝3

  组名  反映时间  抑菌环的直径(cm)(x+s)  大肠杆菌         葡萄球菌         链球菌         痢疾杆菌         沙门氏菌  正常组  盐酸黄连素片  黄连素水溶液  盐酸黄连素胶囊  盐酸黄连素纳米乳，  空白纳米乳  三黄片片  双黄连口服液  正常组  盐酸黄连素片  黄连素水溶液  盐酸黄连素胶囊  盐酸黄连素纳米乳，  空白纳米乳  三黄片  双黄连口服液  正常组  盐酸黄连素片  黄连素水溶液  盐酸黄连素胶囊  盐酸黄连素纳米乳，  空白纳米乳  三黄片  双黄连口服液  正常组  盐酸黄连素片  黄连素水溶液  盐酸黄连素胶囊  盐酸黄连素纳米乳，  空白纳米乳  三黄片  双黄连口服液  正常组  盐酸黄连素片  黄连素水溶液  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  48h  0  1.12+0.02^a  1.10+0.03^a  1.15+0.02^a  1.45+0.01^b  0.02+0.02  1.25+0.01^b  1.30+0.02^b  0  0.95+0.03  0.88+0.05^a  1.02+0.02^b  1.35+0.06^b  0.03+0.02  1.15+0.03^b  1.20+0.01^b  0  1.05+0.03  1.0+0.02^a  1.05+0.02^a  1.55+0.01^b  0.02+0.02  1.25+0.01^b  1.30+0.02^b  0  1.42+0.03  1.35+0.03^a  1.48+0.02^a  1.67+0.01^b  0.05+0.03  1.35+0.05^b  1.40+0.04^b  0  0.72+0.08  0.65+0.03^a  盐酸黄连素胶囊  盐酸黄连素纳米乳，  空白纳米乳  三黄片  48h  48h  48h  48h  0.75+0.07^a  1.25+0.01^b  0.01+0.04  1.00+0.03^b  双黄连口服液  48h  1.05+0.02^b

备注：与正常组比较P＜0.05，差异显著，为a；与正常组比较P＜0.01，差异极显著，为b。x为平均值s为标准差。

试验例3：降血糖作用研究

1实验材料

实验药品有盐酸黄连素片、盐酸黄连素胶囊，同类的三黄制剂由黄连索、黄芩苷和黄芪多糖组成.临用时以阿拉伯胶溶液配制成混悬液体，四氧嘧啶，优降糖(格列本脲片)、葡萄糖测定试剂盒(GOD-PAP法)均可市购。空白纳米乳及其黄连素纳米乳均自制。ICR系小鼠.雌雄兼用，体重22-25g，由第四军医大学试验动物中心提供。

2实验方法

2.1实验分组：

实验分为正常组、模型组、空白纳米乳组、盐酸黄连素片组、盐酸黄连素胶囊组、盐酸黄连素纳米乳组、三黄制剂组、优降糖组。

2.2实验方法

取小鼠140只.禁食不禁水12h，尾静脉注射四氧嘧啶(95mg/kg)生理盐水溶液72h后眼眶静脉取血.用GOD-PAP法测定禁食12h小鼠血糖值，选取血糖值在200-500mg/dl者80只为造型成功。将动物随机分为8组.称量各小鼠体重，静脉给药.1次/d.共12d。另将30只小鼠尾静脉注射等体积生理盐水.取其中20只血糖值接近者为正常对照组给药后第6d及第12d.分别测定禁食12h后小鼠的血糖值。

3.实验结果

实验结果见表4。由表4可见，与正常组相比.四氧嘧啶模型组小鼠血糖值显著升高(P＜0.001)，表明模型成功。连续给药6d和12d后，治疗组血糖值均显著下降。盐酸黄连素纳米的效果最佳。

                                        表4对模型小鼠血糖的影响

    组别    剂量    (C/g.kg-1)    动物    数                        血糖值(C/mg.dl-1)    给药前(x±s)  给药后6d(x±s)    给药后12d(x±s)    正常组    模型组    空白纳米乳组    盐酸黄连素片组    盐酸黄连素胶囊组    盐酸黄连素纳米乳组    三黄制剂组    NS    NS    0.25    0.55    0.56    0.56    1.80    10    10    10    10    10    10    10    100.5+21.6    389.7+55.6^b    369.4+65.6^b    399.3+45.6^b    400.8+55.6^b    400.9+51.6^b    390.1+55.6^b  113.4+31.8  416.8+88.5  400.5+28.5  378.7+78.5^a*  369.9+88.5^b*  250.1+88.5^b**  358.4+88.5^b**    97.9+32.6    400.2+22.5    401.3+23.5    358.2+62.5^b*    348.1+28.5^b**    240.2+26.5^b**    325.4+22.5^b**    优降糖组    0.03    10    395.5+80.6^b  280.7+58.5^b**    264.2+21.5^b**

与正常组比较P＜0.05，差异显著，为a；与正常组比较P＜0.01，差异极显著，为b；与模型组比较，与正常组比较P＜0.05，差异显著，为*；与正常组比较P＜0.01，差异极显著，为**。x为平均值s为标准差。

实施例1：盐酸黄连素纳米乳口服软胶囊制剂

1)称取盐酸黄连素0.1g、正丁醇5g、吐温-80 20g、司盘-80 10g、药用IPM 24g、甘露醇2g、蒸馏水38.9g.

2)将所述重量的吐温-80、盐酸黄连素混匀，并在200rpm恒温磁力搅拌器搅拌，温度在80℃下让盐酸黄连素部分溶解；

3)再加入所述重量的RH-40和正丁醇让盐酸黄连素完全溶解，得到澄的溶液；

4)再加入所述重量药用的IPM，80℃恒温水浴中，加入所述重量一半的蒸馏水溶解澄清的溶液；

5)最后再加入所述重量的甜味剂和加入所述重量一半的蒸馏水，混匀，即得本发明的盐酸黄连素纳米乳药物；

6)装入软胶囊。

实施例2：盐酸黄连素纳米乳口服液制剂

1)称取盐酸黄连素0.2g、甘油5g、吐温-80 16g、司盘-80 8g、药用液体石蜡6g、蔗糖2g、蒸馏水62.8g，备用；步骤2)、3)、4)、5)同实施例1相同；

6)直接将口服液装入玻璃或塑料管(用现在已经具有玻璃或塑料管制备方法进行制备)中。

实施例3盐酸黄连素纳米乳口服液制剂

1)称取盐酸黄连素0.2g、无水乙醇5g、吐温-60 16g、司盘-80 8g、色拉油6g、甘露醇5g、蒸馏水59.8g，备用；步骤2)、3)、4)、5)、6)同

实施例2相同。

实施例4：盐酸黄连素纳米乳口服胶囊制剂

1)称取盐酸黄连素0.3g、无水乙醇5g、吐温-80 20g、司盘-80 10g药用IPM 30g、甘露醇5g、蒸馏水29.7g，备用；步骤2)、3)、4)、5)同

实施例1相同；

6)将上述5)所得的盐酸黄连素纳米乳药物冻干成粉，在将其装入胶囊中。

实施例5：盐酸黄连素纳米乳口服液制剂

1)称取盐酸黄连素0.5g、无水乙醇10g、油酸乙酯20g、司盘-80 10g、甘油三酯30g、蔗糖3g、蒸馏水27.5g，备用；步骤2)、3)、4)、5)6)同

实施例2相同。

实施例6：盐酸黄连素纳米乳口服软胶囊制剂

1)称取盐酸黄连素0.5g、1，3丁二醇5g、吐温-80 14g、司盘-60 7g药用液体石蜡9g、甘露醇5g、蒸馏水64.5g，备用；步骤2)、3)、4)、5)、6)同实施例1相同。

实施例7：盐酸黄连素纳米乳口服软胶囊制剂

1)称取盐酸黄连素1g、甘油10g、吐温-80 10g、司盘-80 5g、药用液体石蜡15g、甘露醇4g、蒸馏水55g，备用；步骤2)、3)、4)、5)、6)同实施例1相同。

实施例8：盐酸黄连素纳米乳口服液制剂

1)称取盐酸黄连素1.5g、甘油10g、吐温-80 14g、司盘-80 7g、豆油9g、甘露醇5g、蒸馏水63.5g，备用；步骤2)、3)、4)、5)、6)同实施例2相同。

实施例9：盐酸黄连素纳米乳口服软胶囊制剂

1)称取盐酸黄连素1.5g、甘油10g、RH-40 14g、司盘-80 7g、药用液体石蜡9g、甘露醇5g、蒸馏水63.5g，备用；步骤2)、3)、4)、5)、6)同实施例1相同。

实施例10：盐酸黄连素纳米乳口服胶囊制剂

1)称取盐酸黄连素2g、甘油10g、RH-40 14g、司盘-80 7g、蓖麻油9g、蔗糖5g、蒸馏水63g，备用；步骤2)、3)、4)、5)、6)同实施例4相同。