治疗便秘的番泻总苷提取物及其提取方法

摘要

本发明公开治疗便秘的番泻总苷提取物，以及该提取物的提取方法。该方法不仅操作简便，而且降低了成本，所制备的总番泻苷的含量较高。其中提取物中活性成分番泻总苷的重量百分含量以干品计≥50％。上述提取物与可医用载体或/和赋形剂制成的任何一种制剂，包括胶囊、片剂、软胶囊、滴丸或口服液。本发明的番泻总苷的提取方法，其提取过程如下：取番泻叶药材，加入溶剂，采用加热回流或保温浸泡提取1－5次，每次10min－3h，过滤得滤液并调节pH至1－10，离心处理，上大孔吸附树脂柱，用水洗脱杂质，再用低醇(5％－20％)去杂，21－95％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，然后浓缩洗脱液、干燥，得棕黄色粉末提取物。

说明书

技术领域

本发明涉及中药番泻叶中治疗便秘的有效部位番泻苷的提取物，以该提取物的提取方法，属于医药领域。

背景技术

番泻叶为传统中药，为豆科植物狭叶番泻(Cassia angustifolia Vahl.)或尖叶番泻(C.acutifolia Lelile.)的干燥叶，收载于《中国药典》2000年版第一部，是临床上常用的泻下药之一，性味甘、苦、寒，有小毒，归肝、脾、胃及大肠经，可泻积热，通大便，清热解毒利胆，治热结便秘，积泻腹胀。用于热结积滞、便秘腹痛、水肿胀满的治疗。近年来，其被国内外主要用作腹部及肠道各种影像检查前或手术前肠道清洁准备，主治各种便秘，特别是老年性及顽固性便秘，对腹部术后肠功能恢复也有促进作用，是全世界应用最广泛的导泻剂。番泻叶的果实也被作为导泻剂开发应用。植物化学研究表明，番泻叶致泻的有效成分为蒽苷，其活性成分为番泻苷A、B、C、D等。其中番泻叶苷A，B的泻下作用最强。其致泻成分番泻苷经胃、小肠吸收，在肝中分解、产物经血运行而兴奋骨盆神经节以收缩大肠、刺激结肠，使其蠕动加快，达到泻下作用。用番泻叶2-6克，泡开水饮用，除治疗一般性便秘外，对损伤后腹胀、便秘疗效较好，症状明显改善。对开颅手术便秘，用番泻叶药效持续时间较长，推进人肠推进性运动，使大肠对水分的吸收减少，患者多感到腹中胃肠蠕动增强，轻松有力，一般只需用药1-2次.研究发现，小鼠静注番泻苷无泻下作用，而口服则100％有效果。将番泻叶的各种分解产物直接注入盲肠时，大黄酸蒽酮泻下活性最强，并且与番泻叶的作用部位一致，故番泻苷在体内的代谢产物之一大黄酸蒽酮是番泻苷真正的泻下活性成分。

目前，番泻叶活性成分的提取通常采用如下方法：

1.醇回流提取(或渗滤)法：取干燥番泻叶，加入适量乙醇溶液，加热回流提取2-3次(或渗滤提取)，过滤，滤液减压浓缩，干燥，得番泻叶提取物。

2.水煎煮(或冲泡)法：取干燥番泻叶，加入适量水，加热回流(或沸水浸泡)提取1-5次，过滤，滤液减压浓缩，干燥，得番泻叶提取物。

不管是采用醇提法还是水提法，由于没有做进一步的精制处理所得番泻叶提取物含大量杂质，因此番泻总苷含量很低，最高含量只能达到5％左右。提取物中杂质量过高会对人体产生一定的毒副作用，同时也给制剂制备带来一定难度，使制剂的剂量不容易控制，有效成分的含量也不稳定。

另外，由于目前番泻叶提取物中有效成分含量较低，为达到治疗便秘所需要的疗效，病人必须服用较大剂量的药物，十分不方便。此外，至今尚未见到大孔吸附树脂在番泻叶提取中的应用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是研制含番泻叶有效部位番泻总苷的药物及其各种口服制剂，本发明研制的口服药物，有效成分的含量高，杂质含量少，疗效好。

本发明的另一目的提供该番泻总苷的提取方法，该方法不仅操作简便，而且降低了成本，所制备的总番泻苷的含量较高。

本发明的目的是通过以下措施来实现的：

一种治疗便秘的番泻总苷提取物，其特征在于该提取物中活性成分番泻总苷的重量百分含量以干品计≥50％。

该提取物中番泻苷A的重量百分含量以干品计≥17％、番泻苷B重量百分含量以干品计≥33％。

上述提取物与可医用载体或/和赋形剂制成的任何一种制剂，包括胶囊、片剂、软胶囊、滴丸或口服液。

本发明的番泻总苷的提取方法，其提取过程如下：

取番泻叶药材，加入溶剂，采用加热回流或保温浸泡提取1-5次，每次10min-3h，过滤得滤液并调节pH至1-10，离心处理，上大孔吸附树脂柱，用水洗脱杂质，再用低醇(5％-20％)去杂，21-95％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，然后浓缩洗脱液、干燥，得棕黄色粉末提取物。

本发明提取方法中所用溶剂为：水、乙醇、甲醇或丙酮；加热温度为40-100℃。离心处理的转速为200-20000转/分钟。大孔吸附树脂柱型号可以为D101、DA201、D301或D401型。该提取方法所得棕黄色粉末提取物中活性成分番泻总苷的重量百分含量≥50％。

本发明相比现有技术具有如优点：

上述番泻总苷制剂，其制成的制剂符合《药品注册管理办法》中药、天然药物注册分类5的要求，即未在国内上市销售的从植物、动物、矿物等物质中提取的有效部位及其制剂。

1、本发明中番泻总苷提取物，与药学上可接受的载体和/或赋形剂混合，制成含有上述番泻总苷为主要活性成分的口服制剂，如胶囊、片剂、软胶囊、滴丸、口服液等。

由于番泻总苷主要在胃肠道内起效，因此将番泻总苷制成口服制剂，每粒(片)含有番泻总苷5～150mg的胶囊、片剂、软胶囊、滴丸、口服液等。通常成人日用量为每天5～150mg的番泻总苷，优选每粒(片)含有上述番泻总苷30mg的番泻总苷的胶囊、片剂、软胶囊、滴丸、口服液等。

2、本发明番泻总苷的提取方法，运用大孔吸附树脂分离技术，此方法不但操作简便，而且降低了成本，提取的番泻苷的含量不得低于50％，而且非常适合工业化生产。大量研究表明，D101、DA201、D301、D401等大孔树脂对番泻苷的吸附分离效果非常好，大大提高了提取物的纯度。

为了克服现有技术中番泻叶提取物含大量杂质，番泻总苷含量很低，本发明在以水溶液和其它溶剂为提取溶剂提取的基础上，引入了大孔树脂吸附技术，大大提高了干浸膏中番泻总苷的含量。不仅降低了毒副作用，方便制剂的制备，使制剂的剂量更可控，有效成分含量更稳定，而且病人服用药物的剂量也大大减少，方便了患者服用，增加了患者对药物的依从性。可以制成胶囊、片剂、泡腾片、缓释剂或脂质体等剂型，用于治疗便秘。而且至今尚未见到大孔吸附树脂在番泻叶提取中的应用。

本发明提取的番泻总苷含量至少为50％，其主要成分为番泻总苷，通过高效液相色谱法，主要成分为番泻叶苷A和番泻叶苷B。

色谱条件与系统适用性试验

ZORBEX SB-C18柱，以四氢呋喃∶1.75％醋酸(15∶85)进行梯度洗脱；检测波长为270nm。

  时间min  A(四氢呋喃)％ B(醋酸)％  0  15 85  4.9  15 85  5.0  13 87  40  13 87

对照品溶液的制备

分别精密称取番泻苷A、B对照品1.0mg，分别置于10ml量瓶中，以50％乙醇超声溶解，得番泻苷A对照品液相色谱图，得番泻苷B对照品液相色谱图。通过FXY液相方法分析如下：番泻苷A对照品液相色谱图如图1所示。番泻苷B对照品液相色谱图，如图2所示。

供试品溶液的制备

精密称取本发明番泻总苷提取物粉末0.2g，精密加入50％乙醇25ml，超声30分钟，放冷，用50％乙醇补足重量，过滤，即得。通过FXY液相方法分析得图3。

附图说明

图1为番泻苷A对照品液相色谱图。

图2为番泻苷B对照品液相色谱图。

图3为本发明供试品番泻总苷中间体的液相色谱图。

具体实施方式

下列实施例旨在进一步举例描述本发明，但不是以任何方式限制本发明。

本发明提供的番泻叶提取物的制备方法，包括以下步骤：

取番泻叶药材，粉碎或整叶，加入溶剂，加热回流或保温浸泡提取，调节pH至1-10，离心处理，浓缩(水溶液提取可不浓缩)，上大孔吸附树脂柱，先用水洗脱杂质，再用低醇去杂，21-95％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩洗脱液，干燥，得棕黄色粉末。

实施例一

取番泻叶药材(印度产)10kg，粉碎，分别以100L、80L、80L沸水溶液浸泡提取三次，每次30min，合并三次滤液，调节pH至3-4，离心，上D301大孔吸附树脂柱，先用水洗脱至Molish反应呈阴性，再用20％低醇去杂，40％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩洗脱液，干燥，得棕黄色粉末。HPLC法测定，番泻苷含量为52％。

实施例二

取番泻叶药材(印度产)50kg，分别以1000L、800L、800L70％的乙醇溶液回流浸提三次，每次60min，合并三次滤液，浓缩至无醇，调节pH至7-10，离心，上D401大孔吸附树脂柱，先用水洗脱至Molish反应呈阴性，再用20％低醇去杂，70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩洗脱液，干燥，得棕黄色粉末。HPLC法测定，番泻苷含量为85％。

实施例三

取番泻叶药材(印度产)100kg，粉碎，分别以1000L、800L、800L浓度为80％丙酮溶液回流提取三次，每次45min，合并三次滤液，浓缩至不含丙酮，调节pH至4，离心，上D201大孔吸附树脂柱，先用水洗脱至Molish反应呈阴性，再用20％低醇去杂，50％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩洗脱液，干燥，得棕黄色粉末。HPLC法测定，番泻苷含量为72％。

实施例四

取番泻叶药材(印度产)100kg，粉碎，分别以1000L、800L、800L1％浓度的碳酸钠沸水溶液浸泡提取三次，每次45min，合并三次滤液，调节pH至7，离心，上D201大孔吸附树脂柱，先用水洗脱至Molish反应呈阴性，再用15％低醇去杂，50％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩洗脱液，干燥，得棕黄色粉末。HPLC法测定，番泻苷含量为65％。

实施例五

取番泻叶药材(印度产)10kg，粉碎，分别以100L、80L、80L10％浓度的碳酸氢钠沸水溶液沸水溶液浸泡提取三次，每次30min，合并三次滤液，调节pH至1，离心，上D301大孔吸附树脂柱，先用水洗脱至Molish反应呈阴性，再用25％低醇去杂，35％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩洗脱液，干燥，得棕黄色粉末。HPLC法测定，番泻苷含量为60％。

实施例六

取番泻叶药材(印度产)50kg，分别以1000L、800L、800L硫酸氢钠沸水溶液浸泡提取三次，每次60min，合并三次滤液，调节pH至8，离心，上D401大孔吸附树脂柱，先用水洗脱至Molish反应呈阴性，再用20％低醇去杂，30％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩洗脱液，干燥，得棕黄色粉末。HPLC法测定，番泻苷含量为70％。

实施例七

取番泻叶药材50kg，加入1000L甲醇溶液，加热回流提取一次，再用同体积甲醇提取1-2次，过滤各次提取液，合并滤液浓缩至无醇，并加水稀释，调节pH至7-9，离心，上D301大孔吸附树脂柱，先用水洗脱至Molish反应呈阴性，再用15％低醇去杂，70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩洗脱液，干燥，得棕黄色粉末。HPLC法测定，番泻苷含量为91％。

实施例八

番泻总苷片的制备

取实施例一提取得到的番泻总苷原料35g，淀粉50g，糊精50g，混匀，制粒，过筛，干燥后加硬脂酸镁适量，压片得1000片(35mg/片)，即得。用法用量为：口服，每次1～2片，每日一次。

实施例九

取实施例一提取得到的番泻总苷原料33g，糊精102g，混匀，制粒，过筛，干燥后加硬脂酸镁适量，装1000粒胶囊(35mg/粒)，即得。用法用量为：口服，每次1～2粒，每日一次。

实施例十

取实施例二提取得到的番泻总苷原料35g，先将其粉碎过100目筛，再与50ml玉米油(或其他植物油、硅油、液体石蜡等)混合，研磨均匀，压制成软胶囊，共制得1000粒(35mg/粒)，即得。用法用量为：口服，每次1～2粒，每日一次。

实施例十一

取实施例四提取得到的番泻总苷原料39.2g，溶于547.8g的PEG6000中，用植物油为冷却剂，滴制法制得滴丸2000粒(18mg/粒)，即得。用法用量为：口服，每次2～4粒，每日一次。

实施例十二

取实施例六提取得到的番泻总苷原料28g，加入单糖浆或阿斯巴甜或其他矫味剂，至10L，分装成1000支，制得口服液(35mg/支)，即得。用法用量为：口服，每次1支，每日一次。

本发明番泻总苷的药效试验：

对本发明提取的番泻总苷提取物进行了下述药效学试验：

A：对小鼠小肠推进率的影响

取昆明种小鼠40只，体重22～26g，禁食18h(自由饮水)，随机分为4组，每组10只。给药组分为番泻叶原液组(100g番泻叶五次浸泡于沸水中，每次500ml，浓缩至100ml，番泻总苷含量约1％)、番泻总苷组(实施例1所得提取物，其中番泻总苷含量约52％，以下同)，按照每10g体重灌胃番泻叶和番泻总苷炭末混悬液0.2ml，对照组灌胃等量生理盐水炭末混悬液。在给药后30min，颈椎脱臼处死，打开腹部，截取幽门至盲肠段，分别量取自幽门括约肌至炭末最前端及盲肠距离，以二者之百分比为小肠推进比，求出各组均值。

结果番泻总苷组与对照组相比炭末推进率明显加快(p＜0.05)，番泻叶组与对照组之间无明显差别见表1。

表1 番泻叶苷对小鼠小肠推进功能的影响

  组别  动物数(只)  炭末推进率〔％)  生理盐水  番泻叶原液  10  10  51.11±11.1  63.56±±11.7  番泻总苷  10  84.23？±6.9^*

注：^*与生理盐水组比较，^*p＜0.05

B.对大鼠离体回肠自发运动的影响

取SD大鼠24只，禁食24h(自由饮水)，颈椎脱臼处死，取回肠段2.5cm，一端固定在Z型通气钩上，另一端与张力传感器连接，将肠管移至麦氏浴槽内，(槽内含台氏液40ml，37℃恒温)，待稳定后，通过生理记录仪先描记正常肠管运动作为对照，再分别加入生理盐水0.4ml，番泻总苷组0.4ml各1次，每次给药前，均用营养液冲洗肠管3次，待记录仪显示恢复正常后，再给药试验。观察给药前后，离体肠管蠕动幅度和频率的变化。

结果显示：番泻叶苷组给药前与给药后肠管蠕动幅度比较有显著性差异(p＜0.05)；对照组给药前与给药后比较无明显差别。两组回肠蠕动幅度和频率均未见明显变化见表2。

表2.番泻叶苷对大鼠离体回肠蠕动幅度和频率的影晌

  组别  标本数  幅度(mm)  频率(次/min)

  生理盐水  12  给药前  给药后  给药前  4.7±2.0  4.5±1.7  5.7±1.9  30.24±2.2  27.56±2.6  25.23±3.7  番泻总苷  12  给药后  10.2±1.3  20.6±1.4

注：^*与给药前相比，p＜0.05

C.大鼠大肠内容物传输时间

雌性Wistar大鼠，体重200～250g，乙醚麻醉，将一PVC导管埋植到盲肠中，导管远端固定在动物颈部。恢复后单笼饲养与带金属网格的饲养笼中，使粪便能够掉落在观察用纸上。给予番泻叶和番泻总苷10mg，每个剂量组10只动物，立即从导管注入胭脂红(Carmine red，每只动物10mg，溶于0.4ml蒸馏水中)，对照组灌胃等量生理盐水炭。记录首次出现有色粪便的时间见表3。

表3 番泻叶苷对大鼠大肠内容物传输时间

  组别  动物数(只)  出现时间h  生理盐水  番泻叶  10  10  9.2±2.7  5.2±1.5^*  番泻总苷  10  4.2±2.0^*

注：^*与给药前相比，p＜0.05

D：对尿量的影响

采用简式粪尿分离代谢笼法，取SD大鼠45只，218～223g，雌雄各半，禁食(自由饮水)12h，分为番泻叶浸剂原液组、25％番泻叶浸剂组和生理盐水组。试验前轻压动物腹部，排除余尿，再以每鼠1司生理盐水腹腔注射作为水负荷，给药组分别灌服番泻叶组、番泻叶总苷组，对照组用等量生理盐水代替药液，每笼3只。分别收集0.5，1，2，4h尿量。以对照组的尿量作为10％，计算给药组的比值。结果显示：番泻叶组在0.5，1，4h时尿量分别比对照组增加10.2％，11.3％和28.3％，6h时比对照组减少25.3％；番泻总苷组在0.5，1h，4h时分别比对照组增加16.9％、17.7％和21.5％，6h时比对照组减少41.7％，见表4。

                                    表4 番泻叶苷对大鼠尿量的影响(n＝15)

  组别  0.5h  1h  4h  6h  尿量(ml)  ％  尿量(ml)  ％  尿量(ml)  ％  尿量(ml)  ％  生理盐   水  番泻叶   1.71±0.21   1.98±0.32     10.2   1.95±0.22   1.88±0.17     11.3     3.11±0.45   1.17±0.19     28.3   2.21±0.38   1.11±0.25     -25.3  番泻总   苷   1.55±0.39    16.9    2.07±0.28    17.7      2.01±0.17    21.5       0.89±0.21    -41.7 

注：与生理盐水比较，(+)增加百分率，(-)减少百分率

本发明所使用的原料—番泻叶，符合《中国药典》2000年版一部番泻叶项下有关之规定。