公开/公告号CN1794907A
专利类型发明专利
公开/公告日2006-06-28
原文格式PDF
申请/专利权人 株式会社鹿児岛TLO;
申请/专利号CN200480014132.4
申请日2004-01-16
分类号A01H1/02;
代理机构北京三友知识产权代理有限公司;
代理人丁香兰
地址 日本鹿児岛
入库时间 2023-12-17 17:25:12
法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2016-03-16
未缴年费专利权终止 IPC(主分类):A01H1/02 授权公告日:20090520 终止日期:20150116 申请日:20040116
专利权的终止
2009-05-20
授权
授权
2006-08-23
实质审查的生效
实质审查的生效
2006-06-28
公开
公开
技术领域
本发明涉及培育具有新花色的开花植物的方法,该方法应用了开花植物的色素基因型。更具体地,本发明涉及新植物和获得包括开花植物花卉(即被子植物花卉)在内的新植物的方法以及改变它们的基因型的杂交方法。此外,本发明还涉及利用通过育种获得的植物或植物的一部分的方法,其中所述育种包括有性杂交阶段。此外,本发明还涉及新植物及其获得方法,即涉及新的开花植物,所述新的开花植物例如被子植物,尤其是花卉。
背景技术
花青素苷类化合物是广泛存在于植物的花、果实和叶等中的一类类黄酮,是涉及红色、紫色和蓝色等的着色的色素配糖体。当花青素苷类化合物被盐酸水解时,它们将分解为糖和花青素,所述花青素是糖苷配基(非专利文献1:村上孝夫:天然物的构造和化学,广川书店,1994年9月:170~172)。
黄酮醇配糖体是广泛存在于植物的花、果实和叶等中的一类类黄酮,是涉及黄色着色的色素配糖体。当黄酮醇配糖体被盐酸水解时,其分解成糖和类黄酮,所述类黄酮是糖苷配基(非专利文献2:村上孝夫,天然物的构造和化学,广川书店,1994年9月:155~185)。
在植物的花中,花青素类化合物是由柚苷配基经生物合成而产生的,作为起始物质的柚苷配基是一种黄烷酮。具体地,已知首先在类黄酮3′-羟化酶(即F3′,5′H或F3′H)的作用下,柚苷配基中额外的一个羟基基团结合到黄烷酮骨架的B环上,被酶转化成圣草酚,并进一步将额外的2个羟基结合到黄烷酮骨架的B环上,从而转化成五羟基黄烷酮。还已知道,作为起始物质的柚苷配基在类黄酮3′-羟化酶(即F3H)的作用下酶转化为作为底物的二氢山奈酚,然后被酶转化二氢槲皮素,并在花青素合成酶(AS)的作用下进一步转化成二氢杨梅黄酮,其中分别有额外的1个羟基和额外的2个羟基结合到B环上。已知在二氢黄酮醇还原酶(DER)和花青素合成酶(AS)的作用下,二氢山奈酚、二氢槲皮素和二氢杨梅黄酮这3种物质分别被酶转化为花葵素(pelargonidin,Pgn)、矢车菊素(cyanidin,Cyn)和花翠素(delphinidin,Dpn)(非专利文献2)。
在花青素类化合物中,颜色的展现因B环上被取代的一个或多个羟基的位置的不同而不同。例如,在花色素的化学结构中,在B环4′-位置上具有一个羟基的花青素是花葵素(Pgn),其呈现出橙色至朱红色,在B环3′-和4′-位置均具有羟基的花青素是矢车菊素(Cyn),其呈现出红色至深红色,在B环的3′-、4′-及5′-位置均具有羟基的花青素是花翠素(Dpn),其呈现出红紫色至紫色。当这3种花青素同时存在时则呈现出各种花色(非专利文献3:本多利雄他,现代化学,1998年5月,25~32等)。
此外,报道了许多花青素类化合物结合有各种酰化基团,并已认识到花色的确定归因于以下现象:它们在分子内相互堆叠而调节花色的现象(分子间堆叠)、它们与其它的类黄酮糖配体形成夹层状态而调节(蓝化(blue))花色(蓝变(bluing))的现象(分子间共着色)、它们结合金属原子而调节(蓝化)花色(蓝变)的现象(金属络合)、分子内的酰化基团在分子内的堆叠而调节(蓝化)花色(蓝变)的现象(分子内共着色)、细胞液泡中pH值的改变的现象以及其它现象(非专利文献4:Goto T等,Angew.Chem.Int.Ed.Engl.,30:17~33,1991)。
在将花色(红色、蓝色、黄色和紫色等)本身作为基因型方面,已报道了许多花色素(非专利文献5:安田斋,花色的生理学和生物化学,内田老鹤圃,1993年3月,219~272)。近年来,根据Beale于1945年提出“一基因一酶”理论,已进行了类黄酮色素有关的花色素分析。可以提及的一种方法的例子是,在天竺葵(Pelargonium×hortorum)花瓣的花青素的生物合成过程中,根据表达酶体系即二氢黄酮醇还原酶(DFR)和花青素合成酶(AS)而将基因型分别推想为E1/e1和E2/e2(非专利文献6:小林加奈,育种学杂志;48:169~176,1998)。此外,在杜鹃花(azalea)中,公开了一种方法,其中,在花瓣类黄酮生物合成的前体中,将酶体系推想为基因型,但该方法不适用于杜鹃花之外的花卉(非专利文献7:Heursel J和Horn W:Z.Pflanzenzuditg,79:238~249,1977)。
已报道在矮牵牛的花朵中有两个基因(Ht1和Ht2)控制着类黄酮3′-羟化酶(F3′H),两个基因(Hf1和Hf2)控制着类黄酮3′,5′-羟化酶(F3′,5′H)(非专利文献8:Holton,T.A.等:The Plant Cell,7:1071~1083,1995)。
已公开在矮牵牛的花朵中,类黄酮3′-羟化酶(F3′H)和类黄酮3′,5′-羟化酶(F3′,5′H)的B环的羟化作用由双基因控制(非专利文献9:Holton,T.A.等:Nature,366:276~279,1993)。本发明的基于花色素基因型的杂交方法的特征在于花色由5个多重等位基因所控制,其中所述5个多重等位基因由一个基因所控制,并且鉴定出花的花色素遗传并非为双基因控制。
而且,已经阐明以下事实:两个基因位点在基因水平上影响矮牵牛花朵中的羟基化(Ht1和Ht2影响类黄酮B环3′-位置的羟基化,而Hf1和Hf2影响类黄酮B环的5′-位置的羟基化),但是由于色素基因型在色素基因型与花色遗传之间并不具有必然的关联,所以何种花色类型遗传给子代仍是个问题(非专利文献10:Griesbach,R.J.:J.Heredit.,87:241~245,1996)。
通过将光线射入花瓣表面,并反射没有被存在于花瓣表皮细胞的色素所吸收的光线,使人眼感受到花色。然而,不同个体对光线或色度的敏感性存在差别,因此需要明确表示花色的方法(非专利文献11:Voss,D.H.:HortSci.,27:1256~1260,1992)。
采用CIELab颜色坐标系通过色度计来测定花色的方法已成为主流。在该方法中,颜色的3个基本属性即色相、明度和彩度(或亮度)被作为三维立体空间坐标系,即三维颜色,而色相在空间上的差异准确地反映肉眼(naked eye)所见的颜色的差异(非专利文献12:Gonnet,J.F.:FoodChem.,63:409~415,1998)。因此,已有报道,当为获得花色与诸如花瓣等的表皮细胞的色素之间的关联而对花色进行测定时,可以获得准确得多的花色关系(非专利文献13:Hashimoto,F.等:J.Jpn.Soc.Hort.Sci.,69:428~434,2000;和非专利文献14:Hashimoto,F.等:Biosci.Biotechnol.Biochem.,66:1652~1659,2002)。
特开平No.5-184370(下文称专利文献1)公开了一种类黄酮羟化酶基因(专利文献1的段落[0001]至段落[0002])。其中还公开了“提供编码具有类黄酮3′,5′-羟化酶活性的蛋白的DNA链或DNA链的特定片段。将该DNA链导入到目标植物中,可提供具有新颜色的新栽培品种。本发明还涉及含有上述DNA链或DNA特定片段的重组载体”(参见专利文献1的段落[0004])。
特开平No.10-113184(下文称专利文献2)公开了一种类黄酮糖苷酶基因(参见段落[0001]至[0008])。专利文献2中记载了下述内容:从龙胆属植物(gentian)的花瓣中分离到尿苷二磷酸葡萄糖:类黄酮3′,5′-O-糖苷转移酶基因,并成功地确定了该基因的序列,提供了糖基转移酶的基因,所述糖基转移酶可以在龙胆花翠素(gentiodelphin)的生物合成基因中的两个位置(3-和5-位置)上进行糖基化(专利文献2段落[0005])。
特开平No.11-509733(下文称专利文献3)在权利要求1至权利要求15中披露了调节植物基因表达的组合物和方法。
根据第26届国际园艺学大会(多伦多,加拿大)上的演讲概要,洋桔梗(Eustoma grandiflorum)的花瓣中存在3个主要花青素基因(非专利文献15:Uddin,A.F.M.J.等,第XXVI届国际园艺学大会和展览会,8月11日17:475~476,2002)。本发明人已将其中所公开的内容作为日本专利申请No.2003-026598(下文称专利文献4)提交申请,其名称为“基于花色素基因型的洋桔梗的杂交方法”(专利文献4的段落[0001]至[0019])。专利文献4公开了下述内容:“考虑到花葵素(Pgn)、矢车菊素(Cyn)及花翠素(Dpn)3个花青素(为洋桔梗的主要花色素)的遗传特征,进行了自花授粉和异花授粉试验,结果从F1代到F3代的色素基因表型的分离中发现了新的遗传规律”,以及“四重等位基因即HT、HF、HD和HO存在于影响色素前体的B环的羟基化的类黄酮3′-羟化酶(F3′H)和类黄酮3′,5′-羟化酶(F3′,5′H)的酶反应体系中,它们控制着3′-位置、5′-位置、3′,5′-位置以及3′-和5′-位置的羟基化”。
美国专利No.6080920(下文称专利文献5)公开了使花色改变的植物及提供所述植物的方法。更具体地,专利文献5公开了下述内容:“本发明涉及提供转基因植物的新方法,所述植物发生花色的改变。更具体地,该发明涉及提供转基因康乃馨植物的方法,所述植物可呈现出不同于天然康乃馨的花色”。
DE19918365(下文称专利文献6)公开了一种利用编码黄酮合成酶II(FNSII)的核酸来提供花色改变了的转基因植物的方法。专利文献6公开了下述内容:“编码黄酮合成酶II(FNSII)的核酸,该核酸为(i)具有1697个碱基(bp)的序列(1)或其片段的核酸;为(ii)其序列可与(1)杂交或与(1)具有至少40%的同源性的核酸,并且该核酸编码具有FNSII活性的蛋白或多肽,或为(iii)在遗传上与(i)或(ii)等同的核酸”,该文献还公开了下述内容:“(5)该发明涉及包含(I)或(Ia)的转基因植物,进一步涉及提供花色发生改变的转基因植物的方法”。
总而言之就是应该进一步明确多重等位基因。此外,虽然已清楚四重等位基因的存在,但是没有有关花色遗传的关联的描述。因此,应当确定所有存在的多重等位基因与花色的关联。
然而,基于花色本身的基因型的育种方法在有关子代花色分离方面还有许多不明之处,因而这些育种方法在实际应用中还存在许多问题。同时,如非专利文献6所公开的那样,用E1/e1和E2/e2来表示的天竺葵(Pelargonium×hortorum)的花色素的遗传,在子代分离比率方面还存在疑问,因而还没有应用到实践中。至于专利文献中的方法,还存在下述问题:为产生新的花色,需要进行基因重组、突变(例如辐射突变)等。
难以预料遗传个体具有何种类型的花色,而且通过肉眼对其花色所进行的确定也是不清楚的,这就是问题之所在。还有,适用于洋桔梗的方法能否适用于所有开花植物,并且还具有使用CIELab颜色坐标系不足以准确测定和评价花色、以及所述开花植物不能遗传的问题。
本发明的目的是阐明花色素生物合成的遗传,采用CIELab颜色坐标系等来准确地对花色进行数字化测定,据此阐明花色素基因型与花色遗传之间的关联,并提供基于花色素基因型的植物杂交的实用方法,以培育具有新花色的新的开花植物。
本发明通过参考的方式引入上述的所有非专利文献和专利文献(即非专利文献1~15和专利文献1~6)。
发明内容
为了解决上述问题,本发明人着眼于类黄酮3′-羟化酶(F3′H)和类黄酮3′,5′-羟化酶(F3′,5′,H)等的遗传特征,对其遗传分离进行研究,结果,本发明人发现了新的遗传规律:参与花葵素(Pgn),矢车菊素(Cyn)和花翠素(Dpn)的生物合成的二氢黄酮醇还原酶(DFR)和花青素合成酶(AS)的酶体系的遗传分别受到Pg/pg、Cy/cy、Dp/dp的基因的控制,而类黄酮3′-羟化酶(F3′H)和类黄酮3′,5′-羟化酶(F3′,5′H)则受到5个多重等位基因的控制。作为结果,从开花植物的色素基因型可以自由地创造花色而无需采用基因重组、放射线辐射等手段。
具体地,本发明从F1至F4代主要花色素基因表型的分离中发现了新遗传规律,该规律是按下述方法发现的:通过研究3个主要花色素即花葵素(Pgn),矢车菊素(Cyn)和花翠素(Dpn)的遗传特征来对自花授粉和异花授粉进行检测。另外,对于Pgn表型和Dpn表型,己发现Pgn和Dpn色素虽然没有共存,但是它们以单独的形式存在,或与Cyn色素一起遗传。作为子代分离和卡方检测的结果,发现在类黄酮生物合成中的花青素苷生物合成的水平上,存在Pgn、Cyn和Dpn色素遗传中由Pg/pg、Cy/cy、Dp/dp表示的基因位点。
而且,已经发现,在参与色素前体B环羟基化的类黄酮3′-羟化酶(F3′H)和类黄酮3′,5′-羟化酶(F3′,5′H)的酶反应中,存在5个多重等位基因HT、HF、HD、HZ和HO,它们分别控制3′-位置的羟基化、5′-位置的羟基化、3′,5′-位置的羟基化、3′-和5′-位置的羟基化、3′-位置和3′,5′-位置的羟基化,它们的组合决定了色素表型和花色的表型,由此实现了本发明。
本发明的基于开花植物色素基因型的杂交方法利用新的基因型HXHX·Pg/pg·Cy/cy·Dp/dp创造出了新的花色,所述基因型表示花葵素(Pgn),矢车菊素(Cyn)和花翠素(Dpn)的遗传特征(heredity),这些色素是与花颜色表达相关的主要花色素。
本发明的基于色素基因型的开花植物的杂交方法可应用于其花色、果色和叶色在类黄酮生物合成过程中遗传的开花植物。具体地,本发明涉及基于色素基因型的开花植物的杂交方法,该方法利用D/d·E/e·HXHX·g/pg·Cy/cy·Dp/dp基因型创造新的花色,这些基因是与花色表达相关的花葵素(Pgn)、矢车菊素(Pgn)和花翠素(Dpn)3种主要色素的遗传(inheritance),并且是重瓣花类型或花边(edge colored)类型的遗传。关于与花色表达有关的主要花色素花葵素(Pgn)、矢车菊素(Cyn)和花翠素(Dpn)的遗传,Pgn、Cyn和Dpn的基因位点分别表示为Pg/pg、Cy/cy、Dp/dp,参与色素前体B环羟基化的类黄酮3′-羟化酶(F3′H)和类黄酮3′,5′-羟化酶(F3′,5′H)的基因型表示为5个多重等位基因HT、HF、HD、HZ和HO,两个在符号Pg/pg中选择(一个选自PgPg、Pgpg和pgpg的组合),两个在Cy/cy符号中选择(一个选自Cycy、Cycy和cycy的组合),两个在Dp/dp符号中选择(一个选自DpDp、Dpdp和dpdp的组合),两个在HT、HF、HD、HZ和HO符号中选择(一个选自HTHT、HTHF、HTHD、HTHZ、HTHO、HFHF、HDHF、HZHF、HOHF、HDHD、HDHZ、HDHO、HZHZ、HZHO,以及HOHO的组合)。具体地,本发明涉及基于色素基因型的开花植物的杂交方法,该方法利用D/d·E/e·HXHX·Pg/pg·Cy/cy·Dp/dp基因型来创造新的颜色。
本发明的基于色素基因型的开花植物杂交方法,所述花色素基因型参与类黄酮的生物合成并进行遗传,所述合成途径如式(I):
其中HT、HF、HD、HZ和HO是参与类黄酮生物合成前体B环的羟基化的多重等位基因,所述前体参与了(Pgn)、矢车菊素(Cyn)和花翠素(Dpn)的生物合成。这5个多重等位基因HT、HF、HD、HZ和HO分别控制着类黄酮3′-羟化酶(F3′H)和类黄酮3′,5′-羟化酶(F3′,5′H)的3′-位置的羟基化、5′-位置的羟基化、3′,5′-位置的羟基化、3′-和5′-位置的羟基化以及3′-和3′,5′-位置的羟基化,这5个多重等位基因也可用其它表达方式来表示,例如T、F、D、Z、O;Pg/pg、Cy/cy和Dp/dp表示与参与Pgn、Cyn和Dpn的生物合成的二氢黄酮醇还原酶(DFR)或花青素合成酶(AS)表达相对应的基因位点的存在;D/d是重瓣花类型的花冠特征,而E/e是花边类型的花冠特征。
在本发明的基于色素基因型的开花植物杂交方法中,花色是由母本遗传的。更具体地,在本发明的基于色素基因型的开花植物杂交方法中,所述开花植物的花色是由母本遗传的,该方法利用D/d·E/e·HXHX·Pg/pg·Cy/cy·Dp/dp基因型来创造新的花色,该基因型涉及与开花植物的花色表达相关的花色素花葵素(Pgn)、矢车菊素(Cyn)和花翠素(Dpn)的遗传和与花形相关的重瓣花类型和边色类型的遗传。
本发明的速查索引指南(quick reference cap guide)用于确定基于花色素基因型的杂交植物的组合以创造新的花色,该指南展示了以花粉亲本的配子作为行、以种子亲本的配子作为列的上述多重等位基因的组合。
本发明的速查索引指南还展示了与多重等位基因的组合相对应的色素表型。
本发明的速查索引指南是用于根据基于花色素基因型的杂交植物的组合来确定花色的指南,该指南以花粉亲本的配子作为行、以种子亲本的配子作为列,根据上述多重等位基因的组合来显示花色。
此处提及的术语开花植物是指包含类黄酮的花、果实、种子、叶,即包含类黄酮的具有花瓣、萼片、苞叶、花被、果皮、种皮、叶柄等属于显花植物门(Anthophyta)的被子植物,并涉及单子叶植物和双子叶植物。
属于双子叶植物的合瓣花亚纲(Sympetalae)的开花植物的例子包括但不限于桔梗目(Campanulatae)(菊科(Compositae))、花柱草科(Stylidiaceae)、草海桐科(Goodeniaceae)、桔梗科(Campanulacae)、葫芦目(Cucurbitales)、葫芦科(Cucurbitaceae)、茜草目(Rubiales)、川续断科(Dipsacaceae)、败酱科(Valerianaceae)、忍冬科(Caprifoliaceae)、茜草科(Rubiaceae)、管花目(Tubiflorae)、爵床科(Acanthaceae)、狸藻科(Lentibulariaceae)、苦苣苔科(Gesneriaceae)、角胡麻科(Martyniaceae)、胡麻科(Pedaliaceae)、紫葳科(Bignoniaceae)、玄参科(Scrophularaceae)、茄科(Solanaceae)、唇形科(Labiatae)、马鞭草科(Verbenaceae)、紫草科(Boraginaceae)、田基麻科(Hydrophyllaceae)、花忍科(Polemoniaceae)、旋花科(Convolvulaceae)、泪花目(Contortae)、萝藦科(Asclepiadaceae)、夹竹桃科(Apocynaceae)、龙胆科(Gentianaceae)、马钱科(Loganiaceae)、木犀科(Oleaceae)、蓝雪目(Plumbaginales)、蓝雪科(Plumbaginaceae)、报春花目(Primulales)、报春花科(Primulaceae)、紫金牛科(Myrsinaceae)、杜鹃花目(Ericales)((杜鹃花科(Ericaceae)、鹿蹄草科(Pyrolaceae))、岩梅目(Diapensiales)(岩梅科(Diapensiaceae))等。
属于双子叶植物的离瓣花亚纲(Archichlamydeae)的开花植物的例子包括但不限于桃金娘目(Myrtiflorae):柳叶菜科(Onagraceae)、野牡丹科(Melastomataceae)、Myrtacear、使君子科(Combretaceae)、石榴科(Punicaceae)、千屈菜科(Lythraceae)、胡颓子科(Elaegnaceae)、瑞香科(Thymelaeaceae);侧膜胎座目(Parietales):秋海棠科(Begoniaceae)、西番莲科(Passifloraceae)、半日花科(Cistaceae)、堇菜科(Violaceae)、山茶科(Camelliaceae)、锦葵目(Malvales)(锦葵科(Malvacaeae)、杜英科(Elaeocarpaceae));鼠李目(Rhamnales):葡萄科(Vitaceae)、鼠李科(Rhamnaceae);无患子目(Sapindales):凤仙花科(Balsaminaceae)、七叶树科(Hippocastanaceae)、槭树科(Aceraceae)、卫矛科(Celastraceae)、冬青科(Aquifoliaceae)、漆树科(Anacardiaceae);牻牛儿苗目(Geraniales):大戟科(Euphorbiaceae)、远志科(Polygalaceae)、芸香科(Rutaceae)、亚麻科(Linaceae)、牻牛儿苗科(Geraniaceae)、酢浆草科(Oxalidaceae);蔷薇目(Rosales):豆科(Leguminosae)、蔷薇科(Rosaceae)、金缕梅科(Hamamelidaceae)、海桐科(Pittosporaceae)、虎耳草科(Saxifragaceae)、景天科(Crassulaceae);瓶子草目(Sarraceniales):瓶子草科(Sarraceniaceae)、猪笼草科(Nepenthaceae)、茅膏菜科(Droseraceae);罂粟目(Papaverales)、十字花科(Brassicaseae)、山柑科(Capparidaceae)、罂粟科(Papaveraceae);毛茛目(Ranunculales):樟科(Lauraceae)、小檗科(Berberidaceae)、毛茛科(Ranunculaceae)、木通科(Lardizabalaceae)、睡莲科(Nymphaeaceae)、番荔枝科(Annonaceae)、木兰科(Magnoliaceae);中央种子目(Centrospermae):石竹科(Caryophyllaceae)、紫茉莉科(Nyctaginaceae);蓼目(Polygonales):蓼科(Polygonaceae);荨麻目(Urticales):桑科(Moraceae);杨梅目(Myricales):杨梅科(Myricaceae)等。
属于单子叶植物的开花植物的例子包括但不限于兰目(Orchidales):兰科(Orchidaceae);Scitaminea:美人蕉科(Cannaceae)、姜科(Zingiberaceae)、芭蕉科(Musaceae);百合目(Liliiflorae):鸢尾科(Iridaceae)、石蒜科(Amaryllidaceae)、百合科(Liliaceae);鸭跖草目(Commelinales):雨久花科(Pontederiaceae)、鸭跖草科(Commelinaceae)、凤梨科(Bromeliaceae);天南星目(Arales):天南星科(Araceae)等。
在基于花色本身的基因型的植物的杂交方法中,子代花色的分离还存在许多不明之处,在将该方法应用于实践中还存在诸多问题。而且,如在非专利文献6所公开的那样,由于以E1/e1和E2/e2表示的天竺葵(Pelargonium×Hortorum)的色素遗传存在子代分离比率方面的问题,因此还不能用于实践。而至于专利文献中的方法,还存在新花色的创造需要基因重组、突变(例如辐射突变)的问题。难以预料遗传个体中具有何种类型的花色,而且通过肉眼对其花色所进行的确定也是不清楚的,这就是问题之所在。还有,适用于洋桔梗的方法能否适用于所有开花植物,以及为遗传所述开花植物而使用的CIELab颜色坐标系也不足以准确测定和评价花色,以及花色不能充分遗传等,这些事实都是个问题。本发明的目的是阐明花色素生物合成的遗传,采用CIELab颜色坐标系等来准确地对花色进行数字化测定,据此阐明花色素基因型与花色的关联,并提供基于花色素基因型的植物杂交的实用方法,以培育具有新花色的新的开花植物。
本发明使色素基因型的阐明成为可能。例如,使用基于色素基因型的开花植物的杂交方法,并用开花植物的CIELab颜色坐标系来准确测定和评价花色,据此创造出新的优良花色,其中所述杂交方法的特点是基因型D/d·E/e·HXHX·Pg/pg·Cy/cy·Dp/dp和色素表型Pgn、Cyn和Dpn 。
具体实施方式
以下将对本发明进行详细描述。
本发明的基于色素基因型的开花植物的杂交方法是一种育种方法,该方法基于与花青素有关的基因型,该基因型表示为与类黄酮的生物合成前体化合物B环上的羟基化有关的5个多重等基因。
在本发明中,关于花青素生物合成的前体化合物的产生,当多重等位基因的组合为HTHF、HTHD、HTHZ与HO-时,则产生在B环上具有1至3个羟基的6种类型的前体(柚苷配基、圣草酚、五羟基黄烷酮、二氢山奈酚、二氢槲皮素和二氢杨梅黄酮)。当该组合为HTHT时,则产生在B环上具有1或2个羟基的4种类型的前体(柚苷配基、圣草酚、二氢山奈酚和二氢槲皮素)。当该组合为HFHF时,则产生在B环上具有1个羟基的2种类型的前体(柚苷配基和二氢山奈酚)。当该组合为HDHF和HDHD时,则产生在B环上具有3个羟基的2种类型的前体(五羟基黄烷酮和二氢杨梅黄酮)。当该组合物为HDHZ、HZHZ时,则产生在B环上具有3个羟基的2种类型的前体(五羟基黄烷酮和二氢杨梅黄酮)。此外,由于花青素合成酶水平上的Pg/pg这一基因位点的缘故,当产生隐性纯合子(pgpg)时,即使产生了柚苷配基和二氢山奈酚作为前体化合物,也绝不会生物合成Pgn。当该组合为HZHF时,则产生在B环上具有2个或3个羟基的4种类型的前体(圣草酚、五羟基黄烷酮、二氢槲皮素及二氢杨梅黄酮)。
具体地,HT等位基因控制从柚苷配基到圣草酚和从二氢山奈酚到二氢槲皮素的生物合成转化,而HF等位基因则控制从圣草酚到五羟基黄烷酮和从二氢槲皮素到二氢杨梅黄酮的生物合成转化。因而,除非存在前体化合物圣草酚和二氢槲皮素,否则HF等位基因不进行生物合成转化。另一方面,HD等位基因控制从柚苷配基到五羟基黄烷酮和从二氢山奈酚到二氢杨梅黄酮的生物合成转化,其特点在于该等位基因将底物完全转化为五羟基黄烷酮或二氢杨梅黄酮。HZ等位基因控制从柚苷配基到五羟基黄烷酮的生物合成转化和从二氢山奈酚到二氢杨梅黄酮的生物合成转化,其特点在于该等位基因一旦将底物完全转化为圣草酚和二氢槲皮素,那么它们将被进一步转化为五羟基黄烷酮和二氢杨梅黄酮。因此,当其与HF配对时,圣草酚和二氢槲皮素这两种中间体将被用作底物,在HZHF基因型中,则产生在B环上具有2个或3个羟基的4种类型的前体(圣草酚、五羟基黄烷酮、二氢槲皮素和二氢杨梅黄酮)。
因而,在HDHD、HDHF、HDHZ、HZHF和HZHZ基因型的情况中,即使Pg/pg为显性基因型(PgPg或Pgpg),也绝不产生Pgn。HO等位基因控制从柚苷配基到圣草酚和五羟基黄烷酮以及从二氢山奈酚到二氢槲皮素和二氢杨梅黄酮的所有生物合成转化。
在本发明中,例如,对于洋桔梗花瓣的色素基因型,PgnCynDpn表型可由HTHFPg-CyCyDpDp、HTHDPg-CyCyDpDp、HTHZPg-CyCyDpDp和HO-Pg-CyCyDpDp获得。同样,PgnCyn表型可由HTHTPg-CyCyDpDp获得。并且,CynDpn表型可由HTHFpgpgCyCyDpDp、HTHDpgpgCyCyDpDp、HTHZpgpgCyCyDpDp和HO-pgpgCyCyDpDp获得。另外,Pgn表型可由HFHFPg-CyCyDpDp获得。Cyn表型可由HTHTpgpgCyCyDpDp获得。Dpn表型可由HDHF--CyCyDpDp、HDHZ--CyCyDpDp和HDHD--CyCyDpDp获得。白色花可由HFHFpgpgCyCyDpDp获得。此外,二甲花翠素(Mv)和矮牵牛苷配基(Pt)这两种甲基化的花青素包含在Dpn色素表型中。而芍药花青素(Pn)(为甲基化的花青素)包含在Cyn色素表型中。此处提及的术语“白色花”是指根本不含花色素的花。在本发明中,没有获得PgnDpn表型。标记“-”是指受到前面基因(former gene)和/或等位基因的显性控制,并意为可用任何基因和/或等位基因。同时,标记“--”是指任何基因和/或等位基因均可使用。
在本发明中,例如,对于洋桔梗花瓣的色素表型,由PgnCynDpn表型可获得呈现红紫色、红色、紫红色、浅红色和粉红色的花。同时,由PgnCyn表型可获得呈现红色、深红色、浅红色和粉红色的花。由CynDpn表型可获得呈现浅紫色、紫红色、紫色和蓝色的花。同时,由Pgn表型可获得红色、浅红色、粉红色、白红色(whitish red)、奶油色和白色花。由Cyn表型可获得红色、浅红色、粉红色和白红色的花。由Dpn表型可以获得紫色花。由空白类型(None type)(HFHFpgpgCyCyDpDp基因型)可获得白色花。
在本发明中,例如,对于香豌豆(Lathyrus odoratus)的花瓣的色素基因型,PgnCyn表型可以由HTHTPg-CyCyDpDp获得。CynDpn表型可以由HTHFpgpgCyCyDpDp、HTHDpgpgCyCyDpDp和HO-pgpgCyCyDpDp获得。Cyn表型可以由HTHTpgpgCyCyDpDp获得。Dpn表型可以由HDHF--CyCyDpDp和HDHD--CyCyDpDp获得。白色花可以由HFHFpgpgCyCyDpDp获得。此处提及的术语“白色花”是指根本不含有花青素的花。在本发明中,没有获得PgnDpn表型。标记“-”是指受到前面基因和/或等位基因的显性控制,并意为可以利用任何基因和/或等位基因。同样,标记“--”意为可以利用任何基因和/或等位基因。
而且,二甲花翠素(Mv)和矮牵牛苷配基(Pt)是甲基化的花青素,包含在Dpn色素表型中,并且它们也包含在Dpn表型的任意色素表型中。而且,芍药花青素(Pn)也是甲基化的花青素,包含在Cyn色素表型中,并且它也包含在Cyn表型的任意表型中。
在本发明中,对于杜鹃花花瓣和北美杜鹃(Rhododendron)花瓣的色素基因型,Cyn表型可以由HTHTpgpgCyCyDpDp获得。CynDpn表型可以由HTHFpgpgCyCyDpDp、HTHOpgpgCyCyDpDp和HOHOpgpgCyCyDpDp获得。白色花可以由HFHFpgpgCyCyDpDp获得。此处提及的术语“白色花”是指根本不含有花青素的花。在本发明中,没有获得PgnDpn表型。由于杜鹃花色素基因的特点,参与Pgn表型的生物合成的二氢黄酮醇还原酶(DFR)和花青素合成酶(AS)的表达的基因位点是隐性纯合子(pgpg),因而不产生Pgn色素。
同时,二甲花翠素(Mv)和矮牵牛苷配基(Pt)是甲基化的花青素,包含在Dpn色素表型中,并且它们也包含在Dpn表型的任意色素表型中。而且,芍药花青素(Pn)也是甲基化的花青素,它包含在Cyn色素表型中,并且它也包含在Cyn表型的任意色素表型中。
在本发明的基于花色基因型的开花植物杂交方法中,用50%水溶性乙酸溶液或50%甲醇-乙酸溶液(乙酸浓度可以为10%至50%,可选择地,用0.5N至2N的盐酸溶液来代替乙酸),从诸如花瓣、萼片、苞叶、花被、果皮、种皮和叶柄等着色部分中提取花青素,并用盐酸将其水解,通过HPLC(高压液相色谱)分析获得的含有花色素的水解产物,以确定各种花青素类化合物。对于通过反复自花授粉和异花授粉获得的子代的基因型,可以确定显性纯合子、显性杂合子或隐性纯合子,以自由地创造基于色素基因型的各种花色。
实施例
下面将通过工作实施例来对本发明进行描述。但是,应该注意的是,本发明并不局限于这些实施例。
实施例1
收集花瓣、果皮和叶,而对于花瓣和萼片等而言,切出全色类型或花边类型(包括重瓣花)的着色部分、具有相同颜色的部分以及白色部分,并准确称量它们的重量。此后,加入酸性溶剂,所述酸性溶剂如0.5N至2N的盐酸(0.5N~2N的HCl),然后提取花青素类化合物。所述提取是根据文献(Uddin等:J.Jpn.Soc.Hort.Sci.,71:40~47,2002;Wang等:J.Plant Res.,114:213~221,2001;Naotaka Matsuzoe和其它5人:Engakuzatsu,68:138~145,1999)来进行的。用棉花过滤该提取物,然后在95℃~100℃加热滤液以进行水解,获得含有1至6种类型的花青素的溶液。所述水解是根据文献(Uddin等:J.Jpn.Soc.Hort.Sci.,71:40~47,2002)来进行的。在反应结束后,用膜过滤器过滤该反应混合物,然后利用HPLC仪器进行分析。根据文献(Uddin等:J.Jpn.Soc.Hort.Sci.,71:40~47,2002)描述的方法来确定HPLC分析的条件。根据HPLC色谱图,假设全峰面积为100%,计算3种类型的花色素花葵素(Pgn)、矢车菊素(Cyn)和花翠素(Dpn)以及3种类型的甲基化的花青素芍药花青素(Pn)、矮牵牛苷配基(Pt)和二甲花翠素(Mv)所占的面积。根据获得的特征峰(inherent peak)来确定被测花的色素基因型。
收集花瓣、果皮和叶,对于花瓣和萼片等而言,切出全色类型或花边类型(包括重瓣花)的着色部分、具有相同颜色的部分以及白色部分,并用色度计来测定它们的花色。以CIELab颜色坐标系作为颜色坐标系,按照文献(Wang等:J.Plant Res.,114:33~43,2001)所公开的方法确定测定的条件和测定的仪器。
用F1代的洋桔梗的3个栽培品种(龙胆科(Gentianaceae)),龙胆科,草原龙胆属,即Royal Violet(CynDpn表型)、Micky Rose(PgnCynDpn表型)和飞鸟红(あすかの紅)(PgnCyn表型)通过自花授粉测定S1代的分离。结果显示在表1中。类似地,用F1代的3个品种(龙胆科)即Royal Violet(CynDpn表型)、Micky Rose(PgnCynDpn表型)和飞鸟红(PgnCyn表型)通过异花授粉来测定F1代的分离。结果显示在表2中。通过该结果来确定Royal Violet(CynDpn表型)、Micky Rose(PgnCynDpn表型)和飞鸟红(PgnCyn表型)。
表1
表2
表1和表2证明了Royal Violet具有ddeeHOHDpgpgCyCyDpDp的色素基因型,Micky Rose具有ddeeHTHFPgpgCyCyDpDp的色素基因型,而飞鸟红具有ddeeHTHTPgPgCyCyDpDp的色素基因型。Royal Violet为紫色花色,Micky Rose为红紫色花色,而飞鸟红为红色花色。在表1中,空白色素表型意指白色花色。
实施例3
用表3中显示的洋桔梗的S1代作为亲本,它们经过自花授粉并分离获得S2代,检测所述S2代以确定不同品系的色素基因型。结果显示在如表3中。
表3
如表3清楚显示的那样,只具有Pgn色素的G2D3B25F品系(白色、红白色、奶油色或粉红色的花)获自ddeeHFHFPgPgCyCyDpDp色素基因型。只具有Cyn色素的G2D3B27Y品系(红白色或粉红色的花)获自ddeeHTHTpgpgCyCyDpDp色素基因型。作为空白表型的不具有色素的G2D3B26B品系(白色花)获自ddeeHFHFpgpgCyCyDpDp色素基因型。具有CynDpn色素表型的J5A2H16B品系(红紫色花)获自ddeeHOHOpgpgCyCyDpDp色素基因型。具有Dpn色素表型的J5A2H110C1A品系(紫色花)获自ddeeHDHDpgpgCyCyDpDp色素基因型。具有PgnCyn色素表型的W1C3B111Y品系(红花)获自ddeeHTHTPgPgCyCyDpDp色素基因型。已知所有的这些品系都是纯合品系(显性的或隐性的纯合子)。
实施例4
当对具有Pgn表型的红白色花(G2D3B25F品系,ddeeHFHFPgPgCyCyDpDp色素基因型)和具有Cyn表型的红白色花(G2D3B27Y品系,ddeeHTHTpgpgCyCyDpDp色素基因型)进行异花授粉时,获得具有PgnCynDpn表型(ddeeHTHFPgpgCyCyDpDp色素基因型)的红紫色花。非专利文献6(小林加奈,育种学杂志,48:169~176,1998)(其中提出色素表型的猜想)虽然公开了具有PgnCyn表型的花的获得,但是不能解释具有PgnCynDpn表型的红紫色花的分离。
实施例5
当对具有PgnCyn表型(W1C3B111Y品系,ddeeHTHTPgPgCyCyDpDp色素基因型)的红色花和白色花(空白表型,ddeeHFHFpgpgCyCyDpDp色素基因型)进行异花授粉时,获得了具有PgnCynDpn表型的红紫色的花。非专利文献6(小林加奈,育种学杂志,48:169-176,1998)(其中提出色素表型的猜想)虽然公开了具有PgnCyn表型的花的获得,但是不能解释具有PgnCynDpn表型的红紫色花的分离。
实施例6
Bridal Violet(花边花,F1系)是洋桔梗的栽培品种,在其经受自花授粉后,检查其花色的分离。结果如表4所示,获得的所有子代都是花边,所述花边是显性的,并且色素基因型和花朵着色都是确定的。品系F3I1A2D1D是具有显性纯合子的带有花边的白色花。
表4
实施例5A
对洋桔梗的7个品系进行自花授粉,所述7个品系为:G4I5A3I1F4(CynDpn表型,红紫色花)、A13B1B3I4(PgnCyn表型,红色花)、G2D3B2I5C33(PgnCyn表型,红色花)、G2D3B2I5C3A(Cyn表型,红色花)、I5A21I3F12(Dpn表型,紫红色花)、G2D3B2I5C36(Pgn表型,白黄色花)和G2D3B2I5C37(空白表型,白色花),并检测180个子代的分离。结果显示在表5中。
表5
如表5所示,这些品系分别与该亲本具有相同的色素组成、色素基因型和花色。除各品系的个体数目外,其它数值都是相对于各品系的个体的平均值。所有色素基因型都是纯合子。具有不同的色素组成和不同的基因型两个品系G4I5A3I1F4和I5A21I3F12具有类似的色相角(h),分别是-31.0和-28.8度,并且花色为红紫色。品系不同的两个品系A1C3B1B3I4和G2D3B2I5C33具有相似的色相角(h)(分别是-4.7和-4.3度),并且花色偏向红色。但是,A1C3B1B3I4品系的C*值显示为56.4的彩度,该值约为G2D3B2I5C33品系的两倍,呈现深红色。
另一方面,G2D3B2I5C33品系具有浅红色花。G2D3B2I5C36(Pgn色素表型)的色相角(h)显示为88.3度,颜色偏黄。其C*值低至6.5,表明其具有低彩度的花。因此,尽管花瓣中含有花青素,但是在肉眼看来花色仍被确认为奶油色。白色的G2D3B2I5C37品系的色相角是114.2度,花色偏向绿黄色。其C*值低至10.7,因而花色接近白色。但是,在肉眼看来却被确认为浅黄色。
实施例6A
对洋桔梗的12个品系:G2D3B2I5C31(PgnCynDpn表型,红紫色花)、G2D3B2I5C32(PgnCynDpn表型,红色花)、G2D3B2I5C34(PgnCyn表型,红橙色花)、G2D3B2I5C35(Pgn表型,白色花)、G2D3B2I5C38(CynDpn表型,白色花)、G2D3B2I5C39(CynDpn表型,红紫色花)、I5A21I3F11(CynDpn表型,紫红色花)、A1C3B1B3IMA(PgnCynDpn表型,红紫色花)、A1C3B1B3IMB(PgnCyn表型,红色花)、I5A21I3FMA(PgnCynDpn表型,紫色花)、I5A21I3FMB(CynDpn表型,紫色花)和I5A21I3FMC(Dpn表型,紫色花)的298个体的色素组成、色素基因型以及花色进行检测。结果如表6所示。
表6
如表6所示,所有品系的色素表型均为杂色类型。除各品系的个体数外,其它数值均为相对于各品系个体的平均值。G2D3B2I5C31(PgnCynDp色素表型,红紫色花)和A1C3B1B3IMA(PgnCynDpn色素表型,红紫色花)这两个品系的花青素色素组成和色素基因型具有相似的值。另一方面,G2D3B2I5C32品系(PgnCynDpn色素表型,红色花)与2D3B2I5C31和A1C3B1B3IMA具有相似的色素基因型和色素组成,但它的色相角为28.6度,表明其颜色偏向红橙色。但是,根据其C*值低至6.5的事实,通过肉眼判断其颜色被确认为带浅红的白色花。具有相同的色素基因型的G2D3B2I5C34和A1C3B1B3IMB两个品系,其色素组成和花朵着色截然不同。具体地,G2D3B2I5C34的色相角为55.8度,且其颜色偏向橙色(橙色花在肉眼看则接近白色花),但是A1C3B1B3IMB的色相角为-8.0度,其颜色偏红(肉眼看为红色花)。具有相同的色素基因型的两个品系G2D3B2I5C38和G2D3B2I5C39的色素组成和花朵着色却截然不同。具体地,G2D3B2I5C38的色相角为97.5度,其颜色偏黄(黄色花在肉眼看则为接近白色花),但G2D3B2I5C39的色相角为-22.1度,其颜色偏红(肉眼看为红色花)。具有多重等位基因HO或HD的四个品系I5A2H1I3F11、I5A2H1I3FMA、I5A2H1I3FMB和I5A2H1I3FMC,其色相角低于-20度,它们的颜色偏向紫红色,肉眼看为紫色花。
实施例7
下面将对洋桔梗的F1种子的制种方法进行详细描述。
对具有Cyn色素表型(ddeeHTHTpgpgCyCyDpDp色素基因型,纯合子)的一重粉红全色花与具有Pgn色素表型(ddeeHFHFPgPgCyCyDpDp色素基因型,纯合子)的一重全白花进行杂交,以获得具有PgnCynDpn色素表型(ddeeHTHFPgpgCyCyDpDp色素基因型,杂合子)的一重红紫全色花。
对具有CynDpn色素表型(ddeeHOHOpgpgCyCyDpDp色素基因型,纯合子)的一重红紫全色花与具有Pgn色素表型(ddeeHFHFPgPgCyCyDpDp色素基因型,纯合子)的一重白色全色花进行杂交,以获得具有PgnCynDpn色素表型(ddeeHOHFPgpgCyCyDpDp色素基因型,杂合子)的一重红紫中间带有杂色的花。对具有PgnCyn色素表型(ddeeHTHTPgPgCyCyDpDp色素基因型,纯合子)的一重全红花和具有Pgn色素表型(ddeeHFHFPgPgCyCyDpDp色素基因型,纯合子)的一重白色全色花进行杂交,以获得具有PgnCynDpn色素表型(ddeeHTHFPgpgCyCyDpDp色素基因型,hetero)的一重的粉红全色中间带有杂色的花。
根据设计,对洋桔梗的G2D3B2I5C36(Pgn色素表型,ddeeHFHFPgPgCyCyDpDp色素基因型,白黄色花)和洋桔梗的G4I5A3I1F4(CynDpn色素表型,ddeeHOHOpgpgCyCyDpDp色素基因型,红紫色花)(参见表5)进行异花授粉,并进行交叉,以获得红色花。该杂交得到的G2D3G4I5品系(16个体)用以获得F1种子的花。所有的表型均为PgnCynDpn(Pg:24.7%、Cy:72.4%、Dp:2.9%),并具有ddeeHOHFPgpgCyCyDpDp色素基因型。通过肉眼判断的花色为红紫色。对于花朵着色,其色相角(h)为-18.5度,并且其颜色偏向红紫色。明度L*值为61.9,与G4I5A3I1F4品系的亮度相似,其彩度C*值为40.7,为稍浅的亮红紫色花。因而,可以利用G2D3B2I5C36品系来来渗入G4I5A3I1F4没有的Pgn色素表型,使得创造比G4I5A3I1F4品系更红的花成为可能。
实施例8
用具有PgnCyn色素基因型(色素基因型:ddeeHTHTPgPgCyCyDpDp)的洋桔梗A1C3B1B3I品系和具有CynDpn色素基因型(色素基因型:ddeeHOHDpgpgCyCyDpDp)的I5A2H1I3F通过异花授粉来检测子代的分离。结果显示在表7中。当用A1C3B1B3I品系作为种子亲本而I5A2H1I3F作花粉亲本进行杂交时,获得比率为1∶1的A1C3B1B3IRA品系和A1C3B1B3IRB品系而确定它们的色素基因型和花朵着色。A1C3B1B3IRA品系主要含有Pgn色素,其色相角为-8.0度,花色偏红色。该C*值表明亮度为33.3,且为颜色淡化了的淡红色的花。A1C3B1B3IRB品系主要含有Cyn色素,其色相角为-18.9度,花色偏向于略带紫的红色。该C*值表明彩度为47.1,为红色花。
另一方面,当用I5A2H1I3F作为种子亲本而A1C3B1B3I作为花粉亲本进行杂交时,获得79个I5A2H1I3FAS个体,并确定其色素基因型和花朵着色。其色相角为-30.2度,并且花朵着色偏向于紫红色。
表7
表7中的结果已证明,在A1C3B1B3I品系和I5A2H1I3F品系之间的色素生物合成是核遗传的,并且其中存在的花色遗传是由于它们之间的细胞质(尤其是母本遗传)的缘故。利用这种遗传,可以产生接近母本的花朵着色而不丧失色素核基因型。
实施例9
对洋桔梗的A4B3F2K2品系(F2,重瓣花)、G2D3B2I59A品系(F3)和G4H5G2D39A品系(F2)进行自花授粉。结果显示在表8中。在A4B3F2K2品系(F2)中,色素基因型为纯合子,且花朵着色以3∶1的比率进行分离。G2D3B2I59A(F3)品系和G4H5G2D39A(F2)品系的花朵着色是根据色素基因型进行分离的。结果可以证明,如在A4B3F2K2(F2)的自花授粉品系中所看到的那样,不同的花朵着色分离自相同的基因型。
表8
实施例10
重瓣花(多重花瓣)的洋桔梗经过自花授粉,分离出84个体的重瓣花和30个一重花,其比率为3∶1。结果表明,重瓣花的基因型可以表示为D/d。D/d是指重瓣花的第一个字母,分别代表显性/隐性。即使使用另外的第一个字母,表示的意思也是相同的。因此,由DD和Dd基因型可以获得重瓣花,从dd基因型可以获得一重花。在重瓣花中,存在玫瑰型重瓣花和褶边型重瓣花,它们可以分别获自于基因型Dr/d和Df/d。
实施例11
花边(只有花瓣的边缘着色)洋桔梗经过自花授粉,分离到229个体的花边花和77个全色花,分离比率为3∶1。结果表明,花边的基因型可以表示为E/e。E/e是指花边的第一个字母,分别代表显性/隐性。即使使用另外的第一个字母,表示的意思也是相同的。因此,由EE和Ee基因型,可以获得花边花,而由ee基因型,可以获得全色花。
实施例12
对香豌豆((豆科)Leguminosae)的花瓣色素进行分析,以检测不同品系花瓣的色素基因型。结果如表9所示,阐明了不同品系花瓣的色素基因型。二甲花翠素(Mv)和矮牵牛苷配基(Pt)(两者均为甲基化的花青素类化合物)包含在Dpn色素表型中,并且它们也包括在产生Dpn的色素基因型中。而且,在Cyn色素表型中,包含有芍药花青素(Pn)(为甲基化花青素),并且它包含在产生Cyn的色素基因型中。
表9
实施例13
对北美杜鹃(杜鹃花科(Ericaceae))的花瓣色素进行分析,以检测各种品系花瓣的色素基因型。结果如表10所示,阐明了各品系的花瓣的色素基因型。二甲花翠素(Mv)和矮牵牛苷配基(Pt)(两者均为甲基化的花色素类化合物)包含在Dpn色素表型中,并且它们也包括于产生Dpn的色素基因型中。而且,在Cyn色素表型中,包含了芍药花青素(Pn)(为甲基化的花青素),并且它包括在产生Cyn的色素基因型中。
表10
实施例14
对杜鹃花(杜鹃花科(Ericaceae))花瓣的色素进行分析,以检测不同品系的花瓣的色素基因型。结果如表11所示,阐明了各品系的花瓣的色素基因型。二甲花翠素(Mv)和矮牵牛苷配基(Pt)(两者为甲基化的花青素类化合物)包含在Dpn色素表型,而且它们也包括在产生Dpn的色素基因型中。此外,在Cyn色素表型中,包含了芍药花青素(Pn)(为甲基化的花青素),并且它也包含在产生Cyn的色素基因型中。
表11
实施例15
以金毛杜鹃作为种子亲本而平户杜鹃作为花粉亲本进行杂交,以获得F1杜鹃花。分析所得到的杜鹃花的花瓣的色素,以检测种子亲本和花粉亲本及它们的杂种的色素基因型和花色遗传。结果如表12所示,阐明了杂交个体的色素基因型和花朵着色。二甲花翠素(Mv)和矮牵牛苷配基(Pt)(两者为甲基化的花青素类化合物)包含在Dpn色素表型,而且它们也包括在产生Dpn的色素基因型中。此外,在Cyn色素表型中,包含了的芍药花青素(Pn)(为甲基化的花青素),并且它也包含在产生Cyn的色素基因型中。
表12
实施例16
对双筒(hose-in-hose)花的久留米(Kurume)杜鹃花和一重花杜鹃的Satsuki(サツキ)进行杂交,分离得到144个双筒花杂交个体和123个一重花杂交体,分离比率为1∶1。结果阐明了双筒花的久留米杜鹃花和双筒花杂交体的基因型为Dhd(杂合子),一重花杜鹃的Satsuki和一重花杂交体的基因型为dd(隐性纯合子)。
实施例17
检测了山茶(山茶科(Camelliaceae))的花瓣的色素基因型。结果如表13所示,可以理解不同栽培品种花瓣的色素基因型和花朵着色。
表13
实施例18
检测了玫瑰(蔷薇科(Rosaceae))栽培品种Frensham花瓣的色素基因型。结果证明花青素为Cyn色素表型和D-eeHTHTpgpgCyCyDpDp色素基因型。
实施例19
检测了飞燕草(毛莨科(Ranunculaceae))的栽培品种“Blue Mirror”萼片的色素基因型。结果证明花青素为Dpn色素表型和ddeeHDHDpgpgCyCyDpDp色素基因型。
实施例20
对康乃馨(石竹科(Caryophyllaceae))的栽培品种:“Claret Elegance”、“Saris Royalet”、“Solbic Sydney”“Miss小仓”和”福冈78号”的花瓣的色素基因型进行检测。结果证明,所有这些栽培品种的花青素均为PgnCyn色素表型和D-eeHTHTpg-CyCyDpDp色素基因型。
实施例21
对唐菖蒲(鸢尾科(Iridaceae))栽培品种“红雀(Beni Kujaku)”、“EarlyRed”、“Red Radiance”、“美园(Misono)”和“Band Wagon”的花瓣的色素基因型进行检测。结果证明,所有这些栽培品种的花青素都是Pgn色素表型和ddeeHFHFPg-CyCyDpDp色素基因型。
实施例22
对菊花红色类型栽培品种(菊科(Compositae))的花瓣的色素基因型进行检测。结果证明了该栽培品种的花青素为Cyn色素表型和ddeeHTHTpgpgCyCyDpDp色素基因型。
实施例23
在表14和表15中显示的多重等位基因的速查索引指南,其中行显示亲本花粉的配子,列显示种子亲本的配子。表14显示的速查索引指南是这样的组合:其中显示为Pg/pg、Cy/cy和Dp/dp的基因位点表示为PgPgCyCyDpDp或PgpgCyCyDpDp,而表15显示的速查索引指南是这样的组合:其中显示为Pg/pg、Cy/cy和Dp/dp的基因位点表示为pgpgCyCyDpDp。例如,当基因位点为PgPgCyCyDpDp且当一个多重等位基因HO和另一个多重等位基因HO进行授精时,其组合为HOHO,由表14可以速查到其色素表型指示为PgnCynDpn。
表14
表15
实施例24
表16显示的速查索引指南说明色素表型与色素基因型之间的对应关系。例如当对具有PgnCyn色素表型的色素基因型HTHTPgPgCyCyDpDp和白色花的色素基因型HFHFpgpgCyCyDpDp(空白色素表型)进行杂交时,可以产生具有HTHFPgpgCyCyDpDp色素基因型的F1杂交品种,通过速查速查索引指南发现该色素表型为PgnCynDpn。
表16
实施例25
表17和表18显示的多重等位基因的速查索引指南,该指南可以根据多重等位基因来指示花朵着色。行显示亲本花粉的配子,而列显示种子亲本的配子。
表17显示的速查索引指南是这样的组合:其中显示为Pg/pg、Cy/cy和Dp/dp的基因位点表示为PgPgCyCyDpDp或PgpgCyCyDpDp的所示基因位点的组合,而表18显示的速查索引指南是这样的组合:其中显示为Pg/pg、Cy/cy和Dp/dp的基因位点表示为pgpgCyCyDpDp。例如,当基因位点为PgPgCyCyDpDp且当一个多重等位基因HO和另一个多重等位基因HO进行授精时,其组合为HOHO,通过速查表17可以发现其色素表型为PgnCynDpn,进而发现其花色为红紫色。
表17
表18
这些实施例明确了一种育种方法,其中将花色和/或花型转换成色素基因型HXHX·Pg/pg·Cy/cy·Dp/dp或基因型D/d·E/e·HXHX·Pg/pg·Cy/cy·Dp/dp的色素表型和Pgn·Cyn·Dpn的色素表型,该方法是基于花色素基因型的优秀的育种方法。
工业实用性
本发明可以使阐明色素基因型成为可能。例如,利用基于色素基因型的开花植物的杂交方法,该方法具有D/d·E/e·HXHX·Pg/pg·Cy/cy·Dp/dp基因型和Pgn、Cyn、Dpn色素表型的特点,并利用CIELab颜色坐标系来正确测定和评价花色,据此创造出新的优异花色。
机译: 通过调节植物色素c的表达来控制植物开花时间
机译: 通过调节植物色素c的表达来控制植物开花时间
机译: 通过控制植物色素C的暴露来调节植物的开花时间