公开/公告号CN1761476A
专利类型发明专利
公开/公告日2006-04-19
原文格式PDF
申请/专利权人 戴尔莫实验室股份有限公司;
申请/专利号CN200480007188.7
发明设计人 阿比利奥·梅尔基亚德斯·拉古那·格兰雅;爱德华多·安东尼奥·罗德里基兹;罗萨·玛莉亚·马斯·费雷罗;戴西·卡巴亚尔·魁恩塔那;玛莉亚·德劳德斯·阿鲁萨萨巴拉·沃尔玛那;维维安·莫利那·库维斯;维克多·鲁斯·冈萨雷斯·凯那维西奥罗;
申请日2004-03-15
分类号A61K36/889(20060101);A61P13/08(20060101);A61K131/00(20060101);
代理机构11234 中国商标专利事务所有限公司;
代理人桑丽茹
地址 古巴哈班纳
入库时间 2023-12-17 17:08:02
法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2018-07-27
专利权的转移 IPC(主分类):A61K31/215 登记生效日:20180709 变更前: 变更后: 申请日:20040315
专利申请权、专利权的转移
2008-02-06
授权
授权
2006-06-07
实质审查的生效
实质审查的生效
2006-04-19
公开
公开
技术领域
本发明涉及制药工业,特别涉及来源于王棕(Roystonea regia)果实的用于预防和/或治疗良性前列腺增生(BPH)和前列腺炎的新的药物组合物和方法。本发明组合物包含游离脂肪酸和/或其酯的混合物。脂肪酸和/或酯在8和28个碳原子之间,特别是在8和18个碳原子之间的范围。更具体地,混合物含有8,10,12,14,16和18个碳原子的饱和直链脂肪酸及16∶1和18∶1碳原子的单不饱和脂肪酸。由酯水解富集游离的脂肪酸。
从王棕(Roystonea regia)果实获得这种组合物,首先干燥和研磨该果实,对该植物性材料进行中度碱性水解直至获得皂化产物,用有机溶剂进行选择性提取,或者对脂肪酸混合物进行选择性提取。两种方法都产生了具有药理学特性的组合物,该组合物与没有先进行皂化获得的提取物相似。
因此,所获得的混合物与用于治疗BPH和前列腺炎及其它疾病诸如脱发症和多毛症的药物不同制剂中含有的活性组分相似。
本发明涉及制药工业,因为可以使用或者在药物制剂中使用所获得的药物组合物,用做治疗BPH,前列腺炎,脱发症和多毛症的药物。
背景技术
前列腺是位于紧邻膀胱下面的腺体,并且BHP是在50%以上50岁以上男性中存在的一种疾病。BPH包括腺体的肌肉纤维和上皮结构的增大,这可以引起尿路梗阻,而尿路梗阻通常需要手术以改进尿滞留症状,诸如(Madsen和Bruskewitz,CurrOpinion Nephrol Hipert 4:455-459,1995)中所包括的排尿紊乱,夜尿症症状。同时手术,特别是经尿道切除术已经成为患有这种病状患者的普通治疗手段,最近已经出现了许多其它可选择的治疗手段(Oesterling,New Engl.J.Med 332:99-109,1995;Geller等,J.Clin.Endocrinol Metab.80,745-756,1995),这些手段包括非侵入性手术方法和不同的药物治疗,象5α-还原酶抑制剂(Boyle等.Urology;48:398-405,1996),α-肾上腺素能受体拮抗剂和植物药疗法提取物。
男性性激素,主要是睾酮在这种疾病的病理病原学中起到非常重要的作用,睾酮通过5α-还原酶转化为其更具活性的衍生物,双氢睾酮(DHT),其结合肾上腺素能受体,因此促进蛋白质合成和随后的细胞生长。因此,增加活性的5α-还原酶可以产生BPH,因为患有这种病状的患者显示了4到6倍增加水平的DHT。
BPH的精确的病因未知,但是明显依赖于睾丸的存在,并且随着年龄增长其频率增加。参与前列腺生长的雄激素是DHT,其在前列腺中形成,来源于睾酮,通过5α-还原酶催化反应。已经进行的研究证明前列腺生长直接与DHT水平增加有关。另一方面,在试验模型中,在50岁以上的男性中,雌二醇的产生比雄激素增加了,发现雌激素与DHT协同作用以诱导前列腺增生。
BPH症状与烦扰患者的尿道梗阻或疼痛发炎有关。在这些症状中,包括下面的症状:夜尿症、排尿困难、减少量和浓度的尿流、不完全排尽的感觉和尿滞留。这些症状的大多数症状是逐渐开始的,但是当疾病发展时,症状恶化,必需施用药物治疗。
因此,已经广泛地使用了α-肾上腺素能受体拮抗剂,象阿夫唑嗪(alfuzosin),多沙唑嗪,特拉唑嗪(Chapple,Eur.Urol 29,129-144,1996)和几种植物提取物用于治疗BPH。目前,植物药疗法产品通常在欧洲和美国,占开处方用于BPH治疗的所有药物的80%。
特别地,来源于锯榈(Sabal serrulata,syn.Serenoa repens)果实和来源于荨麻属(Urtica dioica)根的提取物是普遍的。进行了双盲对照临床试验以比较锯榈提取物和5α-还原酶潜在抑制剂的非那甾胺(finasteride)的作用,表明治疗6个月后两种治疗方法之间相似的效力(Carraro等,Prostate 29,231-240,1996;Marks等Journal ofUrology 163:1451-1456,2000)。另一方面,来源于荨麻属(Urtica dioica)根的提取物临床上已经用于治疗BPH。一些组织学和生物学数据证明根提取物对依赖于雄激素的前列腺细胞生长的作用。
没有完全阐明锯榈的作用机理,并且看起来包括一个以上的机理。因此,研究证明它可以对α-肾上腺素能受体施加非竞争性抑制作用,表明与坦索罗辛(tamsulosin)相似的机理。其它的作者认为锯榈允许上皮收缩,可能是由于腺体破裂,表明与非那甾胺(finasteride)相似的机理,包括5α-还原酶的抑制,这看似是基本的机理(Niederprum等1,Annals N.Y.Acad Sci,768,227-30,1995)。
雄激素脱发症在男性和女性中是常见的,是雄激素依赖型的,因为无发直接与5α-还原酶的水平有关,无发相关的雄激素是DHT,通过该酶作用从睾酮产生该DHT。因此,在无发男性的前部检测到了增加水平的5α-还原酶(Bingham KD等,J.Endocrinology 57,111,1973),而具有5α-还原酶缺陷综合症的男性没有患头发损失疾病(Ebling FJ,Clin Endocrinol Metab 319,1986)。
证明了头发损失是青春期后可以很快开始的广泛分布的特征,这是为什么必须开发用于预防男性和女性中无发的产品。
如所知道的,来源于锯榈的脂质提取物抑制DHT激素产生,阻断50%DHT与受体的结合位点和其进入前列腺细胞的核,强烈地抑制5α-还原酶活性。因此,在脱发症的治疗中使用了这种物种的果实提取物(WO9702041,USA 6,019,976和WO9833472)。
根据不同报道的方法(EPO541853,EPO492305,EPO250953,USA专利6,039,950,Cristoni,Fitoterapia 68,355,1997;DeSwaef Nat Prod Letters 7,223,1996),商业上用于治疗BPH的来源于锯榈的提取物是脂肪酸混合物,含有从植物果实获得的固醇和高分子量醇类。几乎没有作者报道过如本发明权利要求书中获得棕榈科(Acecacee)果实,在本发明中是王棕(Roystonea regia)果实的这样简单和经济的方法。
发明内容
用于制备本发明目的组合物的方法是基于干燥王棕(Roystonea regia)成熟果实。研磨干的果实直至获得细粉,颗粒大小<5000μm。随后用碱,碱土和有机氢氧化物,特别是用低分子量氢氧化物,更特别是用氢氧化钠、钾、钙或铵对该粉末进行碱性水解,或者不对该粉末进行碱性水解;接着在有机溶剂或具有CO2的超临界下进行选择性提取。
在常规固液抽提器中提取水解或没有水解的植物性材料,其中通过在适当的溶剂,象1到3个碳原子的醇类和5到8个碳原子的碳氢化合物中进行选择性提取,分离脂肪酸和/或酯与果实中存在的其它成分。在这些溶剂中,包括甲醇、乙醇、2-丙醇、己烷、戊烷、异戊烷、庚烷和辛烷。
获得的产量在5和20%之间。获得的酸混合物的组分包含12,14,16和18个碳原子的饱和酸及具有16∶1和18∶1碳原子的不饱和酸,在表1中报道了它们的定性和定量组分。
表1王棕(Roystonea regia)脂质提取物中存在的脂肪酸组分
*定量为层析峰总量,其中油酸洗脱物(60-70%的峰),亚麻酸(25-40%的峰)和亚麻酸(<10%的层析峰)。
按照本发明,从王棕(Roystonea regia)果实获得的物质的全面估测表明这种组合物是非常安全的,并且具有良好的耐受性,通过在啮齿动物中进行的毒性实验结果支持了有关的优点,该实验表明没有物质相关的毒性。
参考但不限于下面的实施例,将详细地描述本发明的目的。
具体实施方式
实施例1
摘取5kg王棕(Roystonea regia)的新鲜果实,并且放置在可控温度45℃下的烤箱中7天。在研磨机中,将干燥的果实研磨成1500和2000μm之间的颗粒大小,并且从这种粉末中取样1000g,放在搅拌反应器中,进行碱水解。后来,用10L己烷提取产物,加热到55℃,并且连续搅拌36小时。然后,利用真空,在50℃过滤产物,并且蒸发到干燥。获得的提取物重量是98.5g,表2表示通过气相层析测定的它的组分。
表2王棕(Roystonea regia)脂质提取物中存在的脂肪酸组分
实施例2
10kg王棕(Roystonea regia)的新鲜果实放置在可控温度45℃下的烤箱中7天。在研磨机中,将干燥的果实研磨成<1500μm颗粒大小,并且从这种粉末中取样1500g,进行碱水解。后来,在60℃,在含有10L乙醇的Sxhlet抽提器中提取产物48小时。然后,利用真空,在50℃移除有机溶液,过滤并且蒸发到干燥。称重所获得的提取物,并且通过气相层析分析该提取物,表3中列出了它的组分。
表3王棕(Roystonea regia)脂质提取物中存在的脂肪酸组分
实施例3
摘取5kg王棕(Roystonea regia)的新鲜果实,并且放置在可控温度45℃下的烤箱中7天。在研磨机中,将干燥的果实研磨成1500和2000μm之间的颗粒大小,并且从这种粉末中取样100kg,进行碱水解。后来,在60℃,在含有10L己烷的搅拌反应器中提取产物,同时连续搅拌50小时。然后,利用真空,在65℃移除溶剂,并且蒸发到干燥。称重所获得的提取物,并且通过气相层析分析该提取物,表4中表示所概述的组分。
表4王棕(Roystonea regia)脂质提取物中存在的脂肪酸组分
实施例4
摘取5kg王棕(Roystonea regia)的新鲜果实,并且放置在可控温度45℃下的烤箱中7天。在研磨机中,将干燥的果实研磨成1000和1800μm之间的颗粒大小,并且从这种粉末中取样1000g,用氢氧化铵处理直到弄湿所有的粉末。后来,在55℃,在含有10L己烷的搅拌反应器中提取产物,同时连续搅拌36小时。然后,利用真空,在50℃移除溶剂,并且蒸发到干燥。称重所获得的提取物,并且通过气相层析分析该提取物,表5中表示所概述的组分。
表5王棕(Roystonea regia)脂质提取物中存在的脂肪酸组分
实施例5
为了评估来源于王棕(Roystonea regia)果实的脂质提取物的作用,使重量在30和40g之间的OF1雄性鱼眼石(albine)小鼠适应具有可控温度(25±2℃)和湿度的实验室条件7天。在适应期间后,随机将动物分配在不同试验组中。在Tween-20/H2O载体中悬浮来源于王棕(Roystonea regia)的提取物,并且口服施用治疗(5mL/kg),用载体处理对照动物。在植物油中溶解贮藏的睾酮,并且以100mg/kg,单次给药通过肌内(i.m)途径注射它。动物被随机分配在下面的组中:1)阴性对照组;2)阳性对照组(用睾酮注射和用载体口服施用的动物);3,4和5)通过肌内(i.m)途径用睾酮注射和分别以200,400和800mg/kg王棕(Roystonea regia)果实提取物口服治疗的动物和6)用睾酮注射和以400mg/kg的锯榈果实提取物口服给药的动物。
一旦试验结束,就处死给药期间(14天)的小鼠,通过在腹部中线开口剖开它们的腹部,分离前列腺并且称重。通过Mann Whitney U检验完成处理和对照组之间的比较。表6表示该结果。
如所观察到的,与阴性对照组比较,肌内注射的贮藏睾酮(100mg/kg)产生了显著增加的前列腺重量及前列腺重量与体重的比率。
表6来源于王棕(Roystonea regia)果实的脂质提取物对患有诱导型前列腺增
生(PH)小鼠的作用
BW体重(g),PW前列腺重量(mg),%I抑制百分比,+++p<0.001 Sham vs对照,Mann Whitney U检验,*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001比较vs对照。
用本发明组合物口服治疗2周(200-800mg/kg)显著地和依赖于剂量地抑制了睾酮诱导的前列腺大小的增加,最高剂量(800mg/kg)获得了92.7%的抑制,也显著地和依赖于剂量地抑制了前列腺重量/体重比率的增加,用800mg/kg达到了96.6%的抑制。另一方面,重复剂量的锯榈(400mg/kg)治疗抑制了前列腺增大62%,并且减少了PW/BW比率59%,没有王棕(Roystonea regia)果实提取物有效,王棕(Roystonea regia)果实提取物在相似的剂量分别产生了77和72%的抑制。
该试验中获得的结果证明了在小鼠BPH中王棕(Roystonea regia)果实脂质提取物的效力,表明依赖于剂量的前列腺大小的减小,在400mg/kg达到了96.6%的抑制百分比,获得了比用相似剂量锯榈诱导的抑制百分比更高的抑制百分比。
实施例6
为了评估来源于王棕(Roystonea regia)果实的脂质提取物的作用,使重量在250和270g之间的Sprague Dawley雄性大鼠适应具有可控温度(25±2℃)和湿度的实验室条件7天。适应期间后,随机将动物分配在不同试验组中。
在Tween-20/H2O载体中悬浮来源于王棕(Roystonea regia)果实的提取物,并且口服施用治疗(5mL/kg),给对照动物施用载体。在植物油中溶解贮藏的睾酮丙酸酯,并且以4mg/kg,通过皮下(sc)途径注射它14天。
动物被随机分配在6个试验组中:1)阴性对照组+(植物油);2)对照组(载体)+睾酮;3,4和5)以50,200和400mg/kg的王棕(Roystonea regia)果实提取物+睾酮。一旦试验结束,就处死给药期间(2周)的大鼠,并且使其流更多的血,通过在腹部中线开口剖开它们的腹部,分离前列腺并且称重。通过Mann Whitney U检验完成处理和对照组之间的比较。表7表示该结果。
表7来源于王棕(Roystonea regia)果实的脂质提取物对患有诱导型前列腺增
生(PH)大鼠的作用
BW体重(g),PW前列腺重量(mg),%I抑制百分比,++++p<0.0001 Sham vs对照,*p<0.05,**p<0.01,***比较vs对照,Mann Whitney U检验。
如所观察到的,与阴性对照比较,用睾酮4mg/kg皮下注射14天显著增加了前列腺重量和前列腺量/体重的比率。用王棕(Roystonea regia)和锯榈(400mg/kg)果实提取物口服给药2周显著地抑制了睾酮注射诱导的前列腺大小的增加,分别获得了41和58%的抑制百分比。在400mg/kg,王棕(Roystonea regia)提取物也显著地降低了前列腺重量/体重的比率,获得了45%的抑制。
在该研究中所获得的结果表明用王棕(Roystonea regia)果实提取物以400mg/kg治疗睾酮处理的大鼠14天引起了两个处理组相似的相对于体重的前列腺大小增加的抑制(45%),有利于王棕果实提取物的潜在的治疗用途。
实施例7
为了评估来源于王棕(Roystonea regia)果实的提取物的作用,使重量在250和270g之间的Sprague Dawley雄性大鼠适应具有可控温度(25±2℃)和湿度的实验室条件7天。适应期间后,随机将动物分配在不同试验组中。在植物油中溶解睾酮丙酸酯,并且通过皮下途径,每日3和4mg/kg给药14天。
在Tween-20/H2O载体中悬浮来源于王棕(Roystonea regia)果实的提取物,并且口服施用治疗(5mL/kg),给对照动物施用载体。
用3mh/kg睾酮处理的大鼠被分配在5个试验组中:1)阴性对照组+(植物油);2)阳性对照组(载体)+睾酮;3,4)D-004 50和200mg/kg+睾酮;5)锯榈200mg/kg+睾酮。接着,用4mg/kg睾酮处理的动物被分配在6个试验组中:1)阴性对照组+(植物油);2)对照组(载体)+睾酮;3,4,5)以50,200和400mg/kg的王棕(Roystonea regia)果实提取物+睾酮;5)锯榈400mg/kg+睾酮。给药所有的口服治疗14天。表8和表9表示结果。
表8来源于王棕(Roystonea regia)果实的脂质提取物对患有诱导型前列腺增
生(PH)大鼠的作用
剂量处理
BW体重(g),PW前列腺重量(mg),++p<0.01;+++p<0.001比较vs Sham,*p<0.05,a:p=0.05比较vs对照(Mann Whitney U检验)。
表9来源于王棕(Roystonea regia)果实的脂质提取物对患有诱导型前列腺增生
(PH)大鼠的作用
BW体重(g),PW前列腺重量(mg),%I抑制百分比,++p<0.01;+++p<0.001比较vs Sham;*p<0.05;t:p=0.06比较vs对照(Mann Whitney U检验)。
实施例8
在研究中使用4和5kg之间体重的兔子。在用王棕(Roystonea regia)果实提取物治疗的基线和治疗后测定每只兔子的毛发生长。在用王棕(Roystonea regia)果实提取物口服治疗前,期间和后进行毛发测定,每次测量之间有4周间隔。每只动物镇静后,剪切背部大约1平方英寸的面积,称重该面积的毛发。
剪毛的兔子被分配在5只兔子一组的4个小组中,第1组的兔子接受每天一次400mg的王棕(Roystonea regia)提取物日常给药,而第2组的兔子接受每天一次载体的日常给药。接着,第3组的兔子接受分两次200mg剂量,每天400mg的王棕(Roystonea regia)提取物日常给药,第4组的兔子接受分2次给药的载体,如第3组一样。
利用方差分析比较比较组之间在所标记的区域出现的毛发生长重量的变化,和利用Wilcoxon检验比较组内成对样品的变化。
p<0.05,认为该变化是显著性差异。
该研究的结果证明第1组和3组兔子的毛发生长显著优于第2和4组兔子的毛发生长,也优于最初的毛发生长,证明王棕(Roystonea regia)提取物可以用于治疗脱发症。
机译: 用于治疗和预防来自皇家猪(Roystonea regia)(皇家棕榈)果实的前列腺增生和前列腺炎的药物组合物和方法
机译: 使用皇家猪(Roystonea regia)(皇家棕榈)果实治疗和预防前列腺增生和前列腺炎的药物组合物和方法
机译: 使用皇家猪(Roystonea regia)(皇家棕榈)果实治疗和预防前列腺增生和前列腺炎的药物组合物和方法