一种长春碱和长春新碱的纯化方法

摘要

一种长春碱和长春新碱的纯化方法，它是将长春花粗提物经酰化反应后调pH＝6－10，再经波长为210－390nm，照射剂量为5－20w/m2的紫外光照射10－45分钟，然后用连续重结晶法分离，得到纯度≥98％的长春碱，再将重结晶所用的母液减压浓缩，将浓缩品经柱层析纯化，并分段收集，得到长春碱、长春新碱；或是将长春花粗提物经酰化反应后，用柱层析法分离，得到长春碱、长春新碱。本操作工艺实用、方便，能耗少，安全可靠，生产成本低，得率高，适合于较大规模的工业化生产。

说明书

所属技术领域：

本发明涉及天然产物化学领域，特别是一种抗癌植物长春花的粗提物中的有效成分——长春碱、长春新碱的分离和精制工艺。

背景技术：

长春碱(Vinblastine，VLB)、长春新碱(Vincristine，VCR)是夹竹桃科植物长春花中的有效成分。硫酸长春碱(Vinblastine Sulfate)为国家基本药物，主要适用于治疗霍其金病及恶性淋巴瘤，亦可用于治疗绒毛膜上皮癌与乳腺癌等症。硫酸长春新碱(Vincristine Sulfate)，为国家基本药物，主要适用于治疗急性白血病及霍其金病、恶性淋巴瘤、小细胞肺癌及乳腺癌等，也可用于乳腺癌、支气管肺癌、软组织肉瘤，睾丸肿瘤、卵巢癌、消化道癌及恶性循环性黑色素瘤及神经母细胞瘤等。硫酸长春碱、硫酸长春新碱等已广泛应用于临床，是目前国际上应用最广泛的天然植物抗癌药物之一。

迄今为止，我国只有报道长春碱提取的专利，而对于长春碱分离精制的专利未见专门报道。目前我国只有少数长春花提取物生产厂家生产的长春碱的纯度能够达到国际标准，但其生产成本相当高昂，耗费大量的原料，降低了企业的利润；而多数厂家则生产纯度要求不高的长春碱原料药或长春碱粗品，产品纯度不足95％，不能满足国际市场对高纯度长春碱(≥98％)的需求，长春碱得率也低于30％，降低了其工业化生产的价值，造成了很大的浪费，在客观上加大了生产成本，同时也降低了产品的国际竞争力。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种长春碱、长春新碱的分离方法，来生产高纯度、高得率的长春碱和长春新碱。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案包括：将长春花粗提物经酰化反应后调pH＝6-10，再经紫外光照射，然后用连续重结晶法分离，得到纯度≥98％的硫酸长春碱，再将重结晶所用的母液减压浓缩，将浓缩品经柱层析纯化，并分段收集，得到长春碱、长春新碱。所述的酰化反应是用酸和酸酐的组合溶液来完成的。所述紫外照射是用波长为210-390nm，照射剂量为5-20w/m²，照射时间为10-45分钟。所述的酰化反应与紫外照射的步骤可互换，即亦可先进行紫外辐射，再进行酰化反应。所述的重结晶的溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮等溶剂的一种或其中几种的混合。所述的重结晶的溶液的浓度为75-100％。所述的柱层析的填料为硅胶或氧化铝，柱层析的洗脱方式采用梯度洗脱，柱层析的洗脱剂为氯仿、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、石油醚、正己烷、甲醇、乙醇中的一种或其中几种的梯度配比溶液。还可以将经酰化反应的长春花粗提物直接用柱层析法分离，分段收集，减压蒸干洗脱剂后，得到长春碱、长春新碱，再经过重结晶得到纯度≥98％的长春碱和长春新碱。

本发明的优点是：

1.本发明改变了传统的生产工艺，通过酰化反应和紫外光照反应将长春新碱的含量由原来的不足2％提高到8-10％，长春碱的含量由60％提高到65-75％，同时也提高了长春碱和长春新碱的纯度，采用本工艺所得到的各种长春花碱的纯度≥98％，符合国际标准。

2.本发明具有方法流程简单，操作简便易行，工艺实用、方便，能耗少，安全可靠，生产成本低，适合于较大规模的工业化生产。

具体实施方式：

下面对本发明实施作进一步详细描述：

将长春花粗提物经酰化反应后调pH＝6-10，再经紫外光照射，然后用连续重结晶法分离，得到纯度≥98％的硫酸长春碱，再将重结晶所用的母液减压浓缩，将浓缩品经柱层析纯化，并分段收集，得到长春碱、长春新碱。所述的酰化反应是用酸和酸酐的组合溶液来完成的。所述紫外照射是用波长为210-390nm，照射剂量为5-20w/m²，照射时间为10-45分钟。所述的酰化反应与紫外照射的步骤可互换，即亦可先进行紫外辐射，再进行酰化反应。所述的重结晶的溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮等溶剂的一种或其中几种的混合。所述的重结晶的溶液的浓度为75-100％。所述的柱层析的填料为硅胶或氧化铝，柱层析的洗脱方式采用梯度洗脱，柱层析的洗脱剂为氯仿、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、石油醚、正己烷、甲醇、乙醇中的一种或其中几种的梯度配比溶液。还可以将经酰化反应的长春花粗提物直接用柱层析法分离，分段收集，减压蒸干洗脱剂后，得到长春碱、长春新碱，再经过重结晶得到纯度≥98％的长春碱和长春新碱。

下面，本发明将用实施例进行进一步的说明，但是它并不限于这些实施例的任一个或类似实例。

实施例1：

长春花粗提物10g(约含硫酸长春碱60％，硫酸长春新碱1.2％)，加入25mL甲酸和乙酸酐(1.5∶1)的混合溶剂，反应1.5h后，氨水调pH＝8，用波长为366nm的紫外线照射，照射剂量为5w/m²，照射时间为15min，反应完毕后用三倍量的二氯甲烷萃取，浓缩至干，溶于20ml水中，用10％的硫酸乙醇溶液酸化后，倒入沸腾的无水乙醇600ml溶解，冷却析晶，过滤，滤饼真空干燥，再溶于60℃95％乙醇溶液中，冷却析晶，过滤，滤饼真空干燥，得硫酸长春碱2.43g(98.4％)。将重结晶母液浓缩后用硅胶柱层析分离，分别用石油醚∶二氯甲烷(10-1∶5-10)、二氯甲烷∶甲醇(99-80∶1-20)梯度洗脱，分段收集，得硫酸长春碱3.21g(98.21％)、硫酸长春新碱0.52g(98.33％)。

实施例2：

长春花粗提物10g(约含硫酸长春碱60％，硫酸长春新碱1.3％)，甲醇和80％的乙醇溶液溶解后，氨水调pH＝8，用波长为254nm的紫外线照射，照射剂量为10w/m²，照射时间为12min，加入30mL甲酸和乙酸酐(1∶1)的混合溶剂，反应0.5h后，氨水调pH＝9，300ml二氯甲烷萃取，浓缩至干，碱性氧化铝柱层析分离，分别用石油醚∶二氯甲烷(10-1∶5-10)、二氯甲烷∶甲醇(99-80∶1-20)梯度洗脱，分段收集，浓缩至干后，得到长春碱和长春新碱，再经重结晶得到长春碱5.73g(98.51％)、长春新碱0.58g(98.2％)。