大鼠胰岛细胞分离纯化的改良方法

摘要

本发明涉及细胞生物学技术领域，是包括涉及用新型Liberase RI酶灌注消化大鼠胰腺，和利用聚蔗糖Ficoll密度梯度离心分离大鼠胰岛细胞的方法。本发明将Liberase RI酶原位灌注大鼠胰腺使之完全膨胀，钝性分离胰腺并置于37℃水浴静止消化。消化物经两层不锈钢筛过滤后，用Ficoll密度梯度(25％，23％，21％和11％)离心纯化胰岛细胞。初步纯化的胰岛细胞培养过夜后，用连有橡皮管的玻璃针经操作者口腔及舌头的控制逐一挑出，从而得到完全纯净的大鼠胰岛细胞，得率1351+23个/胰腺，胰岛细胞进一步用二苯基硫巴腙染色证实。本发明极大地提高了传统分离方法的得率和效率，为降低大规模分离纯化人胰岛的成本奠定了基础，这对晚期糖尿病人的胰岛细胞移植具有重要的实践开拓意义。