一种治疗慢性肾功能衰竭的肾可舒胶囊及其制备工艺

摘要

本发明涉及一种治疗慢性肾功能衰竭的肾可舒胶囊及其制备工艺。它是将发酵虫草菌粉等药，加乙醇回流提取，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩，真空干燥，粉碎成细粉，加入β－环糊精及硬脂酸镁，混匀，干压制成颗粒，制成胶囊即得。本发明的优点在于制备工艺简单，成本低、易于操作，使用方便，具有益肾补虚，解毒泄浊之功效，适用于长期用药的慢性肾功能衰竭患者，可能显著改善肾功能，纠正肾性贫血，调节电解质平衡紊乱，减轻肾脏病理损害，增强细胞免疫功能，从而延缓CRF进程。

说明书

本发明涉及一种治疗慢性肾功能衰竭的的肾可舒胶囊及其制备工艺。

慢性肾功能不全(简称CRF)是各种慢性肾脏疾患进展的共同结局，是内科危重症之一，发病率高而治疗困难，在早、中期常有一个相对漫长时间，目前没有特效药物。晚期尿毒症阶段，虽可接受维持性透析和肾移植，但费用昂贵，并存在透析并发症、肾移植排异反应等问题。目前临床用中药治疗慢性肾功能衰竭多是采用辨证论治的汤剂治疗，缺乏成方制剂，其不足之处在于现有的中药成方制剂疗效较差，而中药汤剂使用不变，且胃肠反应较大，不宜长期应用。

本发明的目的在于提供一种治疗慢性肾功能衰竭的肾可舒胶囊及其制备工艺，它使用方便，疗效确切，无明显毒副作用，适用于长期用药的慢性肾功能衰竭患者。

本发明由发酵虫草菌粉、大黄提取制成的胶囊，其配方用量是：发酵虫草菌粉8～2份、大黄2～8份。制备时，将以上两味，加3-8倍量40～80％乙醇回流提取三次，每次2小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩至60℃相对密度为1.25-1.30的稠膏，真空干燥，粉碎成细粉，加入10～25％β-环糊精，再加入硬脂酸镁0.003-0.009份，混匀，干压制成颗粒，制成胶囊，即得。

本发明的优点在于制备工艺简单，成本低、易于操作，使用方便，具有益肾补虚，解毒泄浊之功效，适用于长期用药的慢性肾功能衰竭患者。主要研究结果如下：(1)急性毒性试验：根据动物的急性毒性试验方法，找不出肾可舒胶囊一次灌胃引起小鼠死亡剂量，故无法测出LD₅₀。用最大耐受量测定方法，测出本品一日最大耐受量相当于临床用量的376.0倍。由此估计临床应用本品有较大的安全性。(2)长期毒性试验：观察大鼠长期口服肾可舒胶囊所产生的毒性反应及其程度，为临床用药的安全性提供依据。肾可舒胶囊按3.25、6.5、13.0g/kg/d(相当于人最大日用量的15、30、60倍)给大鼠口服给药，连续六个月。除雄性大鼠中、高剂量给药组体重增长比对照组缓慢外，未发现其他与药物相关的异常情况。给药三个月时，各项血液学和生化指标检查均正常。心电图检查结果亦正常。病理镜检结果表明，各脏器无器质性改变。给药六个月后，血液学和血清生化指标少数组间有差异，但变化均在正常值范围内。心电图检查结果正常。脏器系数也在正常值范围。病理检查结果表明，各脏器无器质性异常改变。停药一个月后，以上各项检查仍属正常。总之，肾可舒胶囊连续给药六个月对大鼠无明显毒性反应。(3)主要药效学究：根据肾可舒胶囊的功能主治，选用大鼠腺嘌呤慢性肾功能衰竭(CRF)、5/6肾切除CRF及环磷酰胺所致小鼠免疫功能低下模型，观察肾可舒胶囊的治疗作用。结果表明肾可舒胶囊对大鼠腺嘌呤CRF及5/6肾切除CRF两种模型都有明显的治疗作用，表现为显著降低尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)及24h尿蛋白量；明显提升红细胞数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)水平；明显升高血Ca、降低血P、K、Na；明显保护肾小球、减少腺嘌呤代谢物结晶在肾小管的沉积、减轻肾小球代偿性肥大及肾间质病变程度。还明显提高免疫功能低下小鼠脾淋巴细胞转化刺激指数、增强腺嘌呤CRF大鼠淋巴细胞转化cpm数。总之，肾可舒胶囊能显著改善肾功能，纠正肾性贫血，调节电解质平衡紊乱，减轻肾脏病理损害，增强细胞免疫功能，从而延缓CRF进程。具体实验数据见以下表1-15。

       表1肾可舒胶囊对腺嘌呤大鼠24h尿蛋白的影响(Mean±SD)

组别  动物数(只)    剂量(g生药/kg)    24h尿蛋白(mg/dl)    正常对照模型对照肾可舒肾可舒肾可舒尿毒清    1010101099    ----4.362.181.094.17    7.50±7.90^***106.0±74.144.0±29.5^*51.0±33.8^*68.9±36.953.3±35.0

注：与模型对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001(以下同)

从表1可见，0.5％腺嘌呤饲料造模后，大鼠24h尿蛋白明显高于正常对照组(P＜0.01)。肾可舒胶囊治疗后，高、中剂量组的24h尿蛋白明显低于模型对照组(P＜0.05)，低剂量及阳性对照药尿毒清组的24h尿蛋白有下降趋势，但与模型组比较无显著性差异。

表2肾可舒胶囊对腺嘌呤CRF大鼠血清BUN、Crea的影响(Mean±SD)

组别动物数(只)剂量(g生药/kg)    BUN(mmol/L)    Crea(umol/L)    给药前    给药后  给药前    给药后正常对照模型对照肾可舒肾可舒肾可舒尿毒清    1010101099    ----4.362.181.094.17 8.65±0.42^***21.46±4.4321.93±3.5622.49±4.1422.14±4.6321.61±4.276.9±1.0^***51.4±3.135.4±5.7^***36.7±6.6^***39.0±6.3^***37.6±7.1^*** 147.6±11.5^***227.2±46.0227.2±49.5227.2±46.9226.3±47.7228.1±52.2 95.7±8.6^***659.4±90.4412.9±62.1^***437.0±53.6^***465.2±86.9^***472.5±77.1^***

从表2可见，大鼠进食两周0.5％腺嘌呤饲料后(即给药前)，血清BUN、Crea明显升高，各组与正常对照组比较差异非常显著(P＜0.001)。在给予肾可舒高、中、低剂量治疗四周后，三个剂量的血清BUN、Crea水平均明显低于模型组并有非常显著差异(P＜0.001)。阳性对照药尿毒清的治疗作用亦很明显(P＜0.001)。

表3肾可舒胶囊对腺嘌呤CRF大鼠血Ca、P、K、Na的影响(Mean±SD)

组别动物数(只)   剂  量(g生药/kg)    Ca(mmol/L)    P(mmol/L)    K(mmol/L)    Na(mmol/L)正常对照模型对照肾可舒肾可舒肾可舒尿毒清    1010101099    ----4.362.181.094.17 2.45±0.12^***1.99±0.252.23±0.13^*2.17±0.152.31±0.11^**2.29±0.25^*2.65±0.16^***8.19±1.677.43±1.676.47±0.41^**6.23±0.71^**6.31±1.34^** 3.93±1.28^*6.06±2.107.21±2.575.38±2.293.82±0.98^**4.39±1.26^* 127.6±15.5^**144.0±10.9142.5±11.0145.9±15.5147.0±23.2142.5±17.5

从表3可见，腺嘌呤造模型后，大鼠出现低Ca、高P、高K、高Na的电解质平衡紊乱症状，给予肾可舒胶囊治疗后，使血Ca升高、血P、血K下降具有纠正电解质紊乱的作用。与对照组比较，其中高、低剂量明显升高血Ca(P＜0.05、P＜0.01)，中剂量有升高血Ca的趋势，但无统计学意义。中、低剂量明显降低血P(均P＜0.01)。低剂量明显降低血K(P＜0.01)。尿毒清也显示出升高血Ca、降低血K和血P的作用(均为P＜0.05)。

表4肾可舒胶囊对腺嘌呤CRF大鼠RBC、HGB、HCT的影响(Mean±SD)

组别动物数(只)  剂  量(g生药/kg)    RBC(×10¹²/L)    HGB(g/L)    HCT(％)  正常对照模型对照肾可舒肾可舒肾可舒尿毒清    1010101099    ----4.362.181.094.17 8.81±0.54^***6.11±0.957.20±0.79^*7.40±0.84^**6.66±0.796.69±0.76  166.1±9.50^***115.6±12.9132.5±13.4^*134.3±14.6^**119.9±15.4126.6±15.0 43.34±2.71^***27.99±3.3934.54±3.86^**35.40±3.92^**31.81±4.04^*31.38±3.51^*

从表4可见，0.5％腺嘌呤饲料造模后，CRF大鼠的RBC、HGB、HCT均非常明显的低于正常对照组，即出现非常明显的贫血症状。肾可舒胶囊治疗四周后，高、中剂量组的RBC、HGB、HCT明显上升，与模型对照组比较有显著性差异(P＜0.05、P＜0.01)，低剂量及尿毒清颗粒组的HCT高于模型组，有显著差异(P＜0.05)。

表5肾可舒胶囊对腺嘌呤CRF大鼠肾脏系数及正常肾小球数的影响(Mean±SD)

组别  动物数(只)    剂量(g生药/kg)    肾脏系数(g/kg)    正常肾小球数    正常对照模型对照肾可舒肾可舒肾可舒尿毒清    1010101099    ----4.362.181.094.17    0.86±0.31^***3.28±0.522.10±0.48^***2.78±0.49^*2.80±0.39^*2.71±0.38^*    25.10±1.91^***8.10±2.0814.80±3.85^**12.20±1.81^**11.56±2.60^**13.56±2.30^**

表6肾可舒胶囊对腺嘌呤CRF大鼠肾内结晶沉积程度的影响(Mean±SD)

组别动物数(只)  剂量(g生药/kg)    结晶沉积程度  Ridit分析    -  +  ++  +++    可信限正常对照模型对照肾可舒肾可舒肾可舒尿毒清    1010101099    ----4.362.181.094.17    3000000    0010744    01313141312    017791011  0.895～1.105^*0.50.633～0.844^*0.578～0.789^*0.519～0.741^*0.501～0.723^*

注：Ridit分析，可信限下限＞0.5时，P＜0.05，与模型组比较^*P＜0.05。

从表5、6研究结果，肾脏系数与模型组比较有显著性差异(P＜0.05、P＜0.001)，模型对照组肾组织正常肾小球数目明显减少，肾组织呈萎缩倾向，肾小球囊腔扩大，肾间质增生，肾小管腔扩大，可见大量棕黑色腺嘌呤代谢物结晶沉积，大部分肾小管破坏，有淋巴细胞浸润，肾间质结缔组织增生。肾可舒给药各组肾组织病变较模型对照组轻，正常肾小球数目较模型组多，并有显著性差异(P＜0.05、P＜0.01)；结晶沉积有不同程度地减轻，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)；尿毒清颗粒作用相似。

表7肾可舒胶囊对5/6肾切除CRF大鼠24h尿蛋白的影响(Mean±SD)

组别  动物数(只)    剂量(g生药/kg)  24h尿蛋白(mg/dl)    正常对照模型对照肾可舒肾可舒肾可舒尿毒清    10101010109    ----4.362.181.094.17    6.0±7.7^***120.0±63.251.0±33.8^**58.0±36.1^*65.0±36.9^*61.1±36.9^*

注：与模型对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

从表7可见，模型对照组大鼠24h尿蛋白量明显高于正常对照组(P＜0.001)。给予肾可舒胶囊治疗后，三个剂量组的24h尿蛋白量都明显低于模型对照组(P＜0.05、P＜0.01)，阳性对照药尿毒清的作用相似。

表8肾可舒胶囊对5/6肾切除CRF大鼠血BUN、Crea的影响(Mean±SD)

组别动物数(只)  剂量(g生药/kg)    BUN(mmol/L)  Crea(umol/L)    给药前    给药后  给药前  给药后正常对照模型对照肾可舒肾可舒肾可舒尿毒清    10101010109    ----4.362.181.094.17 8.81±0.51^***20.02±2.7820.85±4.3420.14±3.5319.69±3.8519.57±4.14  6.70±0.96^***22.18±6.0514.96±4.59^**16.68±3.43^*17.59±4.7116.26±2.73^* 91.1±38.0^**149.4±43.3148.5±54.8150.3±46.0147.6±41.6152.1±49.5 82.2±9.72^***213.0±61.9159.1±50.4^*160.0±38.0^*162.7±34.8^*183.0±26.5

从表8可见，大鼠切除5/6肾脏后，模型组血BUN、Crea明显升高，与正常对照组比较差异非常显著(P＜0.01、P＜0.001)。治疗四周后，肾可舒高、中剂量能使血BUN、Crea明显降低，与模型对照组比较差异非常显著(P＜0.05、P＜0.01)，肾可舒胶囊低剂量也能明显降低血Crea(P＜0.05)。阳性对照药尿毒清对血BUN有明显作用(P＜0.05)，对血Crea有作用趋势。

表9肾可舒胶囊对5/6肾切除CRF大鼠血Ca、P、K、Na的影响(Mean±SD)

组别动物数(只)  剂量(g生药/kg)    Ca(mmol/L)    P(mmol/L)    K(mmol/L)    Na(mmol/L)正常对照模型对照肾可舒肾可舒肾可舒尿毒清    10101010109    ----4.362.181.094.17 2.38±0.20^***U1.92±0.242.21±0.17^**2.08±0.192.24±0.21^**2.14±0.20^*1.89±0.17^***6.75±1.465.58±1.275.22±0.45^**4.82±0.72^**5.25±1.18^*  3.80±1.21^**6.22±1.824.01±1.42^**3.08±0.71^***3.3 8±0.60^***3.47±1.23^***  186.7±7.5^***203.4±9.3175.0±9.6^**173.0±9.2^**164.4±9.6^***162.2±8.1^***

从表9可见，造模型后，模型组血Ca明显低于正常组(P＜0.001)，血P、K、Na明显高于正常对照组(P＜0.01、P＜0.001)，肾可舒胶囊治疗后，血Ca明显恢复，而血P、K、Na明显降低，其中高、低剂量组的血Ca与模型组比较差别非常显著(均为P＜0.01)，中剂量有升高血Ca的趋势，但无统计学意义。中、低剂量组的血P与模型组比较差别非常显著(均P＜0.01)。高、中、低三个剂量组的血K、Na都明显低于模型组(均为P＜0.001)。尿毒清也有明显升高血Ca，降低血P、K、Na的作用。

表10肾可舒胶囊对5/6肾切除CRF大鼠RBC、HGB、HCT的影响(Mean±SD)

组别动物数(只)  剂量(g生药/kg)    RBC(×10¹²/L)    HGB(g/L)    HCT(％)  正常对照模型对照肾可舒肾可舒肾可舒尿毒清    10101010109    ----4.362.181.094.17 8.81±0.54^***7.17±0.788.02±0.83^*7.67±0.897.49±0.937.42±0.94 166.1±9.50^***134.4±15.1152.4±16.9^*150.3±17.3^*148.5±13.0^*145.0±14.0 43.34±2.71^***34.85±3.8438.43±4.5838.58±4.5337.50±3.2436.79±3.63

从表10可见，造模后，模型大鼠随着慢性肾功能衰竭进程，出现贫血症状，RBC、HGB、HCT与正常对照组比较有非常明显差异(均为P＜0.001)。肾可舒胶囊高、中、低三剂量组与模型组比较都有明显提高HGB的作用(均为P＜0.05)，高剂量RBC明显高于模型组(P＜0.05)，三个剂量组对HCT都有升高的趋势，但无统计学意义。尿毒清对RBC、HGB、HCT有升高的趋势但都无统计学意义。

表11肾可舒胶囊对5/6肾切除CRF大鼠肾小球直径的影响(Mean±SD)

组别  动物数(只)    剂量(g生药/kg)    肾小球直径(μm)  正常对照模型对照肾可舒肾可舒肾可舒尿毒清  10101010109    ----4.362.181.094.17    115.6±4.53^***166.0±6.13150.0±4.92^***151.7±5.87^***156.7±3.91^**150.5±4.40^***

表12肾可舒胶囊对5/6肾切除CRF大鼠肾间质病变程度的影响(Mear±SD)

组别动物数(只)  剂量(g生药/kg)    肾间质病变程度  Ridit分析    -  +  ++  +++    可信限  正常对照模型对照肾可舒肾可舒肾可舒尿毒清    10101010109    ----4.362.181.094.17    1000000  005342    044655    061112 0.817～1.183^*0.50.667～1.033^*0.627～0.993^*0.647～1.013^*0.541～0.926^*

注：Ridit分析，可信限下限＞0.5时，P＜0.05，与模型组比较^*P＜0.05。

表13肾可舒胶囊对5/6肾切除CRF大鼠PAS染色反应程度的影响(Mean±SD)

组别动物数(只)  剂量(g生药/kg)    PAS染色反应程度    Ridit分析-++++++可信限正常对照模型对照肾可舒肾可舒肾可舒尿毒清    10101010109    ----4.362.181.094.17    1000000    008776    042333    060000  0.817～1.183^*0.50.777～1.143^*0.757～1.123^*0.757～1.123^*0.741～1.126^*

注：Ridit分析，可信限下限＞0.5时，P＜0.05，与模型组比较^*P＜0.05。

从表11、12、13及病理报告可见。大鼠5/6肾切除后，模型组残留肾脏明显代偿性肥大，肾小球面积显著增大，肾小球包氏囊内有不同程度粘连，系膜细胞及系膜基质增生，肾小球间质有炎症细胞浸润，近、远曲管明显扩张，小管内皮细胞肿胀，上皮呈裸核，部分动物曲管内有蛋白管型。治疗四周后，给药各组的残留肾脏病理改变较模型组轻，肾可舒胶囊高、中、低三个剂量都能使残留肾代偿性肥大缩小，肾小球直径与模型组比较均有非常显著性差异(均为P＜0.001)。尿毒清亦能使残留代偿性肥大及其肾小球直径小于模型组(P＜0.001)。

模型组肾间质病变程度及PAS染色反应程度与正常对照组比较，经Ridit分析有显著性差异(P＜0.05)。肾可舒高、中、低三个剂量治疗后，均明显改善肾间质病变及PAS染色反应程度，与模型组比较都有显著性差异(均为P＜0.05)，阳性对照药尿毒清的作用相似。

        表14  肾可舒胶囊对小鼠脾淋巴细胞转化的影响

组  别  动物数(只)    剂量(g生药/kg)    刺激指数(Mean±SD)    正常对照模型对照肾可舒肾可舒肾可舒珍奥核酸    101010101010    ----4.362.181.090.70    33.86±19.46^*16.27±8.5816.73±11.4922.36±16.9826.61±10.18^*33.02±18.61^*

从表14可见，小鼠ip.cy后，模型对照组脾淋巴细胞转化刺激指数明显低于正常对照组(P＜0.05)，肾可舒胶囊低剂量可明显拮抗cy的免疫抑制作用，其刺激指数明显高于模型对照组(P＜0.05)；肾可舒中剂量有拮抗cy免疫抑制作用趋势，但与模型对照组比较无显著性差异。阳性对照药珍奥核酸亦可明显拮抗cy免疫抑制作用(与模型组比较P＜0.05)。

    表15肾可舒胶囊对腺嘌呤CRF大鼠脾淋巴细胞转化的影响

组别  动物数(只)    剂量(g生药/kg)    CPM数(Mean±SD)    正常对照模型对照肾可舒肾可舒肾可舒尿毒清    101211111111    ----4.362.181.094.17  1162.4±727.0^*636.4±125.2912.8±412.3^*1036.2±502.2^*729.4±288.1407.6±148.0^***

从表15可见，0.5％腺嘌呤饲料造模后，大鼠脾淋巴细胞转化cpm数明显低于正常对照组(P＜0.05)同时给予肾可舒胶囊服用四周后，高、中剂量组cpm数明显高于模型对照组(均为P＜0.05)，低剂量组cpm数有上升趋势，但无统计学意义。而尿毒清组cpm数却明显低于模型组(P＜0.001)。

下面以具体实施例对本发明作详细说明：

实施方案1：

发酵虫草菌粉4份、大黄2份。制备时，将以上两味，加5倍量50％乙醇回流提取三次，每次2小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩至60℃相对密度为1.25-1.30的稠膏，真空干燥，粉碎成细粉；加入15％β-环糊精，再加入硬脂酸镁0.006份，混匀，干压制成颗粒，制成粒胶囊，即得。

实施方案2：

发酵虫草菌粉5份、大黄5份。制备时，将以上两味，加7倍量60％乙醇回流提取三次，每次2小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩至60℃相对密度为1.25-1.30的稠膏，真空干燥，粉碎成细粉；加入20％β-环糊精，再加入硬脂酸镁0.006份，混匀，干压制成颗粒，制成胶囊，即得。

实施方案3：

发酵虫草菌粉2份、大黄4份。制备时，将以上两味，加4倍量70％乙醇回流提取三次，每次2小时，滤过，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩至60℃相对密度为1.25-1.30的稠膏，真空干燥，粉碎成细粉；加入10％β-环糊精，再加入硬脂酸镁0.006份，混匀，干压制成颗粒，制成胶囊，即得。