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视黄醇衍生物、它们在治疗癌症和增强其它细胞毒性剂功效中的应用

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一组新型化合物即N－(全反式－视黄酰基)－L－半胱磺酸、N－(13－顺式－视黄酰基)－L－半胱磺酸、N－(全反式－视黄酰基)－L－半胱亚磺酸、N－(13－顺式－视黄酰基)－L－半胱亚磺酸、N－(全反式－视黄酰基)－L－高半胱磺酸、N－(13－顺式－视黄酰基)－L－高半胱磺酸和这些化合物的钠盐、包括它们的酯和酰胺的钠盐，被证明本身具有治疗作用，并且当所述化合物与多西他赛、紫杉醇、多柔比星和米托蒽醌等细胞毒性化合物联用时，具有协同作用。这些化合物能够制备溶解性差的药用化合物的新型制剂，本发明以多西他赛和紫杉醇为例，公开了所述化合物的水溶性制剂的制备方法，所述制剂表现出增加的药理学活性；并且以多柔比星和米托蒽醌为例，公开了水溶性药物制剂的制备方法，所述制剂表现出改进的治疗功效。

著录项

公开/公告号CN1668583A

专利类型发明专利
公开/公告日2005-09-14

原文格式PDF
申请/专利权人阿登尼亚投资有限公司;
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申请/专利号CN02829608.7
发明设计人 O·斯特勒臣诺克;J·阿勒克索夫;
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申请日2002-11-15
分类号C07C403/22;A61K31/198;A61K31/223;A61P35/00;
代理机构中国专利代理(香港)有限公司;
代理人王景朝
地址英国伦敦
入库时间 2023-12-17 16:29:32

法律信息

法律状态公告日

法律状态信息

法律状态
2022-12-02

专利权有效期届满 IPC(主分类):C07C 403/22 专利号:ZL028296087 申请日:20021115 授权公告日:20080109

专利权的终止
2008-01-09

授权

授权
2005-11-16

实质审查的生效

实质审查的生效
2005-09-14

公开

公开

说明书

发明领域

本发明涉及本身具有治疗特性并能增强例如用于治疗癌症的细胞毒性化合物等其它治疗活性化合物功效的新型化合物。所述新型化合物本身已显示出具有细胞生长抑制特性。除此之外，令人惊奇的是，已发现这些化合物能够制备溶解性差的化合物的新型制剂，所述溶解性差的化合物在本文中以多西他赛和紫杉醇等溶解性差的细胞毒性化合物为例，所述制剂表现出改进的溶解性和治疗功效。也发现所述化合物能够制备多柔比星和米托蒽醌等其它细胞毒性化合物的新型制剂，所述制剂表现出改进的治疗功效。此外，已发现在盐水中在钙存在下，本发明的化合物、特别是本发明化合物相应的顺式异构体和反式异构体表现出治疗特性。

发明背景

多西他赛是紫杉类(taxoid)家族的代表之一。[(2R，3S)-N-羧基-3-苯基异丝氨酸N-叔丁酯与5β-20-环氧基-1，2α，4，7β，10β，13α-六羟基紫杉-11-烯-9-酮4-乙酸酯2-苯甲酸酯形成的13-酯三水合物，是Taxotere^_(Rhone-Poulenc Rorer，Collegeville，PA，USA)的活性成分]。所述化合物可从紫杉植物可再生松针中天然存在的它的化学前体经合成而制备。

多西他赛是治疗转移性乳腺癌的最有效药物。目前，实际使用已证实多西他赛对以下癌症也具有高活性：非小细胞肺癌和小细胞肺癌、卵巢癌、头颈部癌和胃癌；以及黑素瘤和软组织肉瘤。它促进微管的组装并稳定微管，因此抑制其解聚。多西他赛与蛋白高度结合，所述蛋白即α₁-酸性糖蛋白、白蛋白和脂蛋白。其药代动力学特征是起先多西他赛迅速分布到周边区室，而在后一阶段多西他赛从所述周边区室中缓慢排出。

多西他赛高度亲脂，水溶性差。Taxotere^_是含有20mg(0.5mL)或80mg(2.0mL)多西他赛(无水)的单剂量小瓶的制剂。该产品每毫升含有40mg多西他赛(无水)和1040mg聚山梨酯80。Taxotere^_的稀释剂含有溶于注射用水的13％乙醇。

Taxotere^_的安全模式包括治疗前用药方案。所有患者应在治疗前给予口服皮质类固醇，以降低液体潴留和超敏反应的严重程度。其它次要副作用包括神经毒性、皮肤反应、脱发和衰弱。

目前，多西他赛挑战了老药物在治疗癌症中的作用，目前在其它化学治疗失败后被批准。例如，已证明多西他赛是针对肝转移癌的最有效药物。在临床试验中，转移性乳腺癌患者表现出对剂量为100mg/m²的一线多西他赛治疗的响应率超过剂量＜250mg/m²的紫杉醇的响应率。

多柔比星和紫杉醇联用已进入治疗乳腺癌患者的临床试验。有理由假定紫杉醇和多柔比星之间的药代动力学相互作用能加强蒽环类心脏毒性。相比之下，多西他赛不影响多柔比星的药代动力学。因此，多西他赛是临床试验中与多柔比星联用的首选候选药(C.L.Vogel，J-M.Nabholtz，The Oncologist，1999，第4卷，第17-33页；J.E.Cortes，R.Pazdur，J.Clin.Oncology，1995，第13卷，第2643-2655页)。

多柔比星是蒽环类水溶性抗生素，一直都是治疗各种实体瘤和造血细胞肿瘤的一线化疗的重要药物。多柔比星是从波赛链霉菌青灰亚种(Streptomyces peucetius var.caesius)中分离的。多柔比星的化学名称为{(8S，10S)-10-[(3-氨基-2，3，6-三脱氧-α-L-来苏-吡喃己糖基)氧基]-8-乙醇酰基-7，8，9，10-四氢-6，8，11-三羟基-1-甲氧基-5，12-萘二酮盐酸盐，是Adriamycin^_(Pharmacia，Sweden)的活性成分}。Adriamycin^_干品含有50mg盐酸多柔比星、250mg乳糖一水合物、5mg对羟基苯甲酸甲酯。

多柔比星的功效因其剂量限制性毒性、慢性或急性心脏毒性以及自发性或获得性抗性而复杂化。需要强调的是，多柔比星对磷脂有一定亲和力，并且抗性的发展看来与某些膜改变相关。目前，认为多柔比星的抗增殖效应和细胞毒性效应与DNA合成抑制、自由基形成和脂质过氧化、DNA结合和DNA交联、直接膜效应相关。

将多柔比星用于乳腺癌治疗联合方案中的试验已表现出对患有转移癌疾病的妇女的适度存活率。

不管是内在还是获得性抗药性都是该化合物在乳腺癌治疗中临床失败的基本原因。然而，汇集了迄今为止的大量临床经验表明，对大多数蒽环类抗生素敏感性肿瘤来说，多柔比星仍为耐受良好的和有效的药物(D.A.Gewirtz，Biochem.Pharmacol.，1999，第57卷，第7期，第727-741页；Vogel和Nabholtz，参见上文)。

米托蒽醌是衍生自具有多柔比星结构相似性的蒽醌染料阿美蒽醌的合成蒽二酮类细胞毒性剂。其作用机制类似于蒽环类抗生素。米托蒽醌嵌入DNA中并抑制DNA合成。所述药物的抗肿瘤活性也是因为其与DNA拓扑异构酶II的相互作用。

米托蒽醌是Novantrone^_(Wyeth Lederle)中的活性成分。Novantrone^_用于输注的浓度为2mg/ml。每ml浓度含有2mg盐酸米托蒽醌、8mg氯化钠、0.05mg乙酸钠、0.46mg乙酸和0.15mg硫酸钠。米托蒽醌在治疗白血病、淋巴瘤和乳腺癌中表现出临床功效。它也对肝癌、晚期卵巢癌和激素抗性前列腺癌的姑息治疗有效。

米托蒽醌累积剂量可引起心脏毒性和免疫抑制。有过蒽环类治疗史的患者可罹患充血性心力衰竭(D.Faulds等，Drugs，1991，第41卷，第3期，第400-449页)。

抗击癌症的现代趋势正在挑战患者治疗中单一疗法的主要作用。临床经验提示联合疗法在辅助治疗中的巨大潜力。然而，对于辅助治疗，有效治疗选择的产生需要开发出水不溶性化合物的新制剂策略，以便最大发挥药物的潜力。

在过去几年中，已使用基于营养乳剂产品的药物制剂。所述制剂需要要用大量的载药量来调节并补充乳化剂。所述制剂必须严格限定液滴大小分布。这使制备复杂化，并且需要对液体乳剂进行高压匀浆。此外，需要解决若干技术难题，诸如长期稳定性和消除药物在稀释中沉淀的可能性(L.Collins-Gold等，Modern Drug Discovery，2000，第3页，第3期，第44-46，48页)。

在同时待审的申请(US 10/098,873和PCT/SE02/00380)中，本发明人已经公开了N-视黄酰基-L-半胱磺酸、N-视黄酰基-L-高半胱磺酸、N-视黄酰基-L-半胱亚磺酸以及这些化合物的钠盐。

在本专利申请中，本发明人公开了N-视黄酰基-L-半胱磺酸、N-视黄酰基-L-高半胱磺酸、N-视黄酰基-L-半胱亚磺酸的新型异构体、它们的酯和酰胺及其盐。这些新型化合物都表现出细胞生长抑制特性，除此之外，也使得制备紫杉醇和多西他赛等水溶性差的细胞毒性化合物的新型胶束制剂(所述制剂表现出改进的溶解性和治疗功效)和多柔比星和米托蒽醌的新型胶束制剂(所述制剂证明改进的治疗功效)成为可能。

发明概述

本发明提供了一组如本文所附权利要求书中定义的以下新型化合物：N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱磺酸(I-1)、N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱磺酸(II-1)、N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱亚磺酸(I-2)、N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱亚磺酸(II-2)、N-(全反式-视黄酰基)-L-高半胱磺酸(I-3)、N-(13-顺式-视黄酰基)-L-高半胱磺酸(II-3)和这些化合物的钠盐以及它们的酯和酰胺的钠盐，所述化合物本身具有治疗作用，而且所述化合物与多西他赛、紫杉醇、多柔比星和米托蒽醌等细胞毒性化合物联用，具有协同作用。此外，本发明公开了溶解性差的药物(诸如多西他赛和紫杉醇)的水溶性制剂的制备方法，所述制剂表现出增强的药理学活性；并且公开了水溶性药物(诸如多柔比星和米托蒽醌)制剂的制备方法，所述制剂表现出改进的治疗功效。本发明也提供了用于治疗癌症的方法，其中将溶于含有钙离子并富含钠离子的水性介质中的本发明化合物和制剂给予患者。本发明也提供包含在钙存在下溶于盐溶液的至少一种本发明化合物、最好一种所述化合物的两种相应的顺式异构体和反式异构体的新型药用组合物，所述异构体能与钙形成络合物。

发明描述

在同时待审的申请(US 10/098,873和PCT/SE02/00380)中，本发明人已经证明N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱磺酸(I-1)、N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱磺酸(II-1)、N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱亚磺酸(I-2)、N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱亚磺酸(II-2)、N-(全反式-视黄酰基)-L-高半胱磺酸(I-3)和N-(13-顺式-视黄酰基)-L-高半胱磺酸(II-3)能增加紫杉醇的溶解度，以及提高其治疗功效。

现在，本发明人已惊奇地发现一组新型酯(I-1a-I-1e，I-3a；II-1a-II-1e，II-3b)的钠盐和这些化合物的酰胺(I-1f-I-1h，I-3f，II-1f)的钠盐具有相同特性。

这些化合物的通用结构式和各自合成的化合物的结构式如下所示：

其中

R₂＝OH、ONa、NH₂、NHCH₃、N(CH₃)₂、OX，其中X为C₁-C₄烷基。

以上通式范围内的单个化合物已经由本发明人合成，并制备其衍生物。这些化合物的实例如下给出。

首先，一组N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱磺酸衍生物示例如下：

N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱磺酸

N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱磺酸甲酯

N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱磺酸乙酯

N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱磺酸异丙酯

N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱磺酸丙酯

N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱磺酸丁酯

N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱磺酸酰胺

(N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱磺酸甲基酰胺

N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱磺酸二甲基酰胺。

本发明也包括以上示例的这些化合物(I-1，I-1a-I-1h)的钠盐，以及该通式所包括的所有化合物的钠盐。本发明也包括以下化合物(I-2)及其衍生物：

N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱亚磺酸。

本发明也包括以上化合物(I-2)的钠盐。

本发明也包括以下化合物(I-3，I-3a，I-3f)及其衍生物：

N-(全反式-视黄酰基)-L-高半胱磺酸

N-(全反式-视黄酰基)-L-高半胱磺酸甲酯

N-(全反式-视黄酰基)-L-高半胱磺酸酰胺。

本发明也包括以上示例的这些化合物(I-3，I-3a，I-3f)的钠盐，以及该通式所包括的所有化合物的钠盐。

此外，本发明包括一组N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱磺酸衍生物(II-1，II-1a-II-1f)：

N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱磺酸

N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱磺酸甲酯

N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱磺酸乙酯

N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱磺酸异丙酯

N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱磺酸丙酯

N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱磺酸丁酯

N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱磺酸酰胺。

本发明也包括以上示例的这些化合物(II-1，II-1a-II-1f)的钠盐，以及该通式所包括的所有化合物的钠盐。

此外，本发明包括以下化合物(II-2)及其衍生物。

N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱亚磺酸。

本发明也包括以上化合物(II-2)的钠盐。

本发明也包括以下化合物(II-3，II-3b)及其衍生物：

N-(13-顺式-视黄酰基)-L-高半胱磺酸

N-(13-顺式-视黄酰基)-L-高半胱磺酸乙酯。

本发明也包括以上示例的以上化合物(II-3，II-3b)的钠盐，以及该通式所包括的所有化合物的钠盐。

本发明提供所述通式定义的化合物、特别是以上示例的化合物、它们的钠盐或其衍生物在制备药物中的用途。本发明也提供所述通式定义的化合物、特别是以上示例的化合物、它们的钠盐或其衍生物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

此外，本发明提供一种药用组合物，所述组合物包含治疗有效量的活性物质和一种如所述通式定义的化合物、特别是以上示例的化合物、它们的钠盐或其衍生物。具体地讲，本发明提供一种药用组合物，其中所述活性物质是细胞毒性化合物，而所述增效化合物是一种上述化合物、它们的钠盐或其衍生物。根据本发明的一个实施方案，所述活性物质是多西他赛、紫杉醇、多柔比星和米托蒽醌。

本发明的另一个实施方案是用于提高药用活性物质功效的方法，其中所述物质是以含有至少一种上述化合物、它们的钠盐或其衍生物的胶束形式制备的。

另一个实施方案是用于增加药用活性物质溶解度的方法，其中所述物质是以含有至少一种上述化合物、它们的钠盐或其衍生物的胶束形式制备的。

又一个实施方案是用于改进药用活性物质生物利用度的方法，其中所述物质是以含有至少一种上述化合物、它们的钠盐或其衍生物的胶束形式制备的。

本发明也提供一种新型药用组合物，其中至少一种上述化合物、最好是一种上述化合物相应的顺式异构体和反式异构体、它们的钠盐或其衍生物是在盐水中在钙离子存在下存在。所述制剂在本说明书和实施例中进一步公开，已证明它们表现出惊人的特性。因此，本发明也提供用于治疗癌症的方法，其中将溶于含有钙离子并富含钠离子的水性介质中的至少一种上述化合物或上述化合物的两种顺反异构体、它们的钠盐或其衍生物给予患者。钙的用量优选相当于约2.2-2.6mmol/L(8.8-10.4mg/dL)之间的CaCl₂浓度或者最优选2.3mmol/L的CaCl₂浓度。

本发明也提供用于治疗癌症的方法，其中至少一种细胞毒性物质与至少一种上述化合物或上述化合物的两种顺反异构体、它们的钠盐或其衍生物混合并以溶于含有钙离子并富含钠离子的水性介质形式给予患者。具体地讲，本发明涉及所述方法，其中至少一种细胞毒性物质选自多西他赛、紫杉醇、多柔比星和米托蒽醌。

本发明人已证明溶解性差的化合物多西他赛和紫杉醇可溶于以下的胶束中：N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱磺酸(I-1)、N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱磺酸(II-1)、N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱亚磺酸(I-2)、N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱亚磺酸(II-2)、N-(全反式-视黄酰基)-L-高半胱磺酸(I-3)、N-(13-顺式-视黄酰基)-L-高半胱磺酸(II-3)、它们的酯(I-1a-I-1e，I-3a；II-1a II-1e，H-3b)的钠盐和它们的酰胺(I-If-I-1h，I-3f，II-1f)的钠盐，产生混合胶束。这样，以混合胶束形式存在的多西他赛和紫杉醇在盐水中可达到良好的溶解度。

在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231培养物中，对呈钠盐形式的浓度范围在10^-9-10^-7M的化合物(I-1a-I-1h，I-3a，I-3f；II-1a-II-1f，II-3b)进行细胞毒性评价试验，揭示出以下依从关系：本发明化合物浓度增加导致细胞生长抑制的加强，对于化合物I-1a和II-1a达到接近47％的值；对于化合物I-1b和II-1b达到接近48％的值；对于化合物I-1c和II-1c达到接近50％的值；对于化合物I-1d和II-1d达到接近54％的值；对于化合物I-1e和II-1e达到接近54％的值；对于化合物I-1f和II-1f达到接近53％的值；对于化合物I-1g达到接近43％的值；对于化合物I-1h达到接近46％的值；对于化合物I-3a达到接近49％的值；对于化合物I-3f达到接近55％的值；对于化合物II-3b达到接近62％的值。

化合物I-1和II-1的钠盐可转变成所述化合物相应的酸形式并溶于甲醇中，以便制备多西他赛/化合物I-1制剂、多西他赛/化合物II-1制剂和紫杉醇/化合物II-1制剂。

多西他赛/化合物(I-1和II-1)制剂对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞生长抑制接近86％(相比之下，作为阳性对照的多西他赛单用接近48％)。要想表现出细胞生长抑制达50％的相同效果，在多西他赛/化合物I-1制剂和多西他赛/化合物II-1制剂中，多西他赛所需浓度比多西他赛单用要低5倍以上。

紫杉醇/化合物II-1制剂对人卵巢腺癌细胞系SKOV-3细胞生长抑制接近84％(相比之下，作为阳性对照的紫杉醇单用接近44％)。要想表现出细胞生长抑制达50％的相同效果，在紫杉醇/化合物II-1制剂中，紫杉醇所需浓度比紫杉醇单用要低3倍以上。

在多西他赛和化合物(I-1a-I-1c，II-1a-II-1c)钠盐制剂的细胞毒性评价试验中，紫杉醇和化合物II-1a钠盐制剂表现出以下效果：多西他赛/化合物(I-1a和II-1a)制剂对人前列腺癌细胞系DU 145细胞生长抑制接近88％(相比之下，作为阳性对照的多西他赛单用接近53％)；多西他赛/化合物(I-1b和II-1b)制剂对人卵巢腺癌细胞系SCOV-3细胞生长抑制接近84％(相比之下，多西他赛接近51％)；而多西他赛/化合物(I-1c和II-1c)制剂对人肺癌细胞系A549细胞生长抑制接近88％(相比之下，多西他赛接近40％)。要想表现出细胞生长抑制达50％的相同效果，在多西他赛/化合物(I-1a-I-1c和II-1a-II-1c)制剂中，多西他赛所需浓度比多西他赛单用约低2-5倍。

紫杉醇/化合物II-1a制剂对人卵巢腺癌细胞系SKOV-3细胞生长抑制接近82％(相比之下，作为阳性对照的紫杉醇单用接近39％)。要想表现出细胞生长抑制达50％的相同效果，在紫杉醇/化合物II-1a制剂中，紫杉醇所需浓度比紫杉醇单用低2.8倍。

在多柔比星和化合物(I-1d和II-1d)钠盐制剂的细胞毒性评价试验中，表现出以下效果：多柔比星/化合物(I-1d和II-1d)对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞生长抑制接近76％(相比之下，多柔比星接近48％)。要想表现出细胞生长抑制达50％的相同效果，在多柔比星/化合物I-1d制剂和多柔比星/化合物II-1d制剂中，多柔比星所需浓度比多柔比星单用约低5-6倍。

在米托蒽醌和化合物(I-1e，I-1f，II-1e和II-1f)钠盐制剂的细胞毒性评价试验中，表现出以下效果：米托蒽醌/化合物(I-1e和II-1e)制剂对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞生长抑制接近78％(相比之下，米托蒽醌接近47％)；米托蒽醌/化合物(I-1f和H-1f)制剂对人前列腺癌细胞系DU 145细胞生长抑制接近80％(相比之下，米托蒽醌接近52％)。要想表现出细胞生长抑制达50％的相同效果，在米托蒽醌/化合物(I-1e和II-1e)制剂中米托蒽醌所需浓度比米托蒽醌单用低12-20倍。要想表现出细胞生长抑制达50％的相同效果，在米托蒽醌/化合物(I-1f和II-1f)制剂中米托蒽醌所需浓度比米托蒽醌单用低4-6倍。

如下制备以下本发明化合物和多西他赛或紫杉醇制剂：N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱磺酸(I-1)、N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱磺酸(11-1)、N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱亚磺酸(I-2)、N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱亚磺酸(II-2)、N-(全反式-视黄酰基)-L-高半胱磺酸(1-3)、N-(13-顺式-视黄酰基)-L-高半胱磺酸(II-3)、这些化合物的钠盐、它们的酯(I-1a-I-1e，I-3a；II-1a-II-1e，II-3b)的钠盐、它们的酰胺(I-1f-I-1h，I-3f，II-1f)的钠盐。

首先，制备溶于乙醇(或其它脂族醇)的合适浓度的多西他赛或紫杉醇和任一本发明的化合物(I-1-I-3，II-1-II-3或这些化合物的钠盐；I-1a-I-1e，I-3a；II-1a-II-1e，II-3b；I-1f-I-1h，I-3f，II-1f)溶液。然后，将这些溶液部分混合，以形成具有所需摩尔比的多西他赛/化合物(I-1-I-3，II-1-II-3或这些化合物的钠盐；I-1a-I-1e，I-3a；II-1a-II-1e，II-3b；I-1f-I-1h，I-3f，II-1f)或紫杉醇/化合物(I-1-I-3，II-1-II-3或这些化合物的钠盐；I-1a-I-1e，I-3a；II-1a-II-1e，II-3b；I-1f-I-1h，I-3f，II-1f)的混合胶束溶液。搅拌后，将有机溶剂在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于水中。所得溶液经22μm除菌滤器过滤并冻干，得到干形式的制剂。

在混合胶束系统中以干形式存在的多西他赛/化合物制剂和紫杉醇/化合物制剂在足够的待用周期内显示出稳定性。在4℃下贮存6个月期间活性成分浓度没有变化。在4℃下贮存6个月后用水或盐水重建多西他赛/化合物(I-1-I-3，II-1-II-3或这些化合物的钠盐；I-1a-I-1e，I-3a；II-1a-II-1e，II-3b；I-1f-I-1h，I-3f，II-1f)制剂和紫杉醇/化合物(I-1-I-3，II-1-II-3或这些化合物的钠盐；I-1a-I-1e，I-3a；II-1a II-1e，II-3b；I-1f-I-1h，I-3f，II-1f)制剂，对MDA-MB-231细胞系表现出不变的细胞毒性作用。

如下制备多柔比星/化合物制剂或米托蒽醌/化合物制剂：

将以下化合物的水-醇储液部分在旋转蒸发器上减压蒸发：N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱磺酸(I-1)、N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱磺酸(II-1)、N-(全反式-视黄酰基)-L-半胱亚磺酸(I-2)、N-(13-顺式-视黄酰基)-L-半胱亚磺酸(II-2)、N-(全反式-视黄酰基)-L-高半胱磺酸(I-3)、N-(13-顺式-视黄酰基)-L-高半胱磺酸(II-3)、这些化合物的钠盐、它们的酯(I-1a-I-1e，I-3a；II-1a-II-1e，II-3b)的钠盐，它们的酰胺(I-1f-I-1h，I-3f，II-1f)的钠盐。将所得干燥膜状物溶于水中。将所得溶液与等分的多柔比星水溶液混合或者与等分的米托蒽醌水溶液混合，以形成具有所需摩尔比的多柔比星/化合物(I-1-I-3，II-1-II-3或这些化合物的钠盐；I-1a-I-1e，I-3a；II-1a-II-1e，II-3b；I-1f-I-1h，I-3f，II-1f)或米托蒽醌/化合物(I-1-I-3，II-1-II-3或这些化合物的钠盐；I-1a-I-1e，I-3a；II-1a-II-1e，II-3b；I-1f-I-1h，I-3f，II-1f)的混合胶束溶液。每种溶液经22μm除菌滤器过滤并冻干，得到干形式的制剂。在混合胶束系统中以干形式存在的多柔比星/化合物制剂和米托蒽醌/化合物制剂在足够的待用周期内显示出稳定性。在4℃下在6个月贮存期间活性成分浓度没有变化。在4℃下6个月贮存期后用水重建多柔比星/化合物(I-1-I-3，II-1-II-3或这些化合物的钠盐；I-1a-I-1e，I-3a；II-1a-II-1e，II-3b；I-1f-I-1h，I-3f，II-1f)制剂和米托蒽醌/化合物(I-1-I-3，II-1-II-3或这些化合物的钠盐；I-1a-I-1e，I-3a；II-1a-II-1e，II-3b；I-1f-I-1h，I-3f，II-1f)制剂，对MDA-MB-231细胞系表现出不变的细胞毒性作用。

用本发明化合物原液连续稀释后加入到细胞培养物中，进行本发明化合物的细胞毒性比较性评价。通过用含2.3mM CaCl₂的盐水(A)、生理盐水(B)和含5％FBS的培养基(C)连续稀释它们的原液，示例了钙离子对所述化合物本身细胞毒性和对所述制剂细胞毒性的影响。

选用2.3mM的CaCl₂浓度，是因为众所周知人血清中总钙维持在2.2-2.6mmol/L(8.8-10.4mg/dL)之间。

将呈钠盐形式的化合物(I-1，I-1f-I-1h，I-3f；II-1，II-1a，II-1f，II-3b)的原液在(A)和(B)中稀释至浓度范围在10^-9-10^-7M，在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231培养物中对它们进行细胞毒性评价比较性试验，得出以下结果：本发明化合物浓度增加导致对细胞生长抑制的增加，对于(B)中的化合物I-1细胞生长抑制达到接近31％的值，而对于(A)中的化合物I-1接近41.5％的值(相比之下，B中的化合物I-1接近15％)；对于(B)中的化合物I-1f接近45％的值，而对于(A)中的化合物I-1f接近53％的值(相比之下，B中的化合物I-1f接近15％)；对于(B)中的化合物I-1g接近23％的值，而对于(A)中的化合物I-1g接近43％的值(相比之下，B中的化合物I-1g接近26.5％)；对于(B)中的化合物I-1h接近26％的值，而对于(A)中的化合物I-1h接近42％的值(相比之下，B中的化合物I-1h接近21％)；对于(B)中的化合物I-3f接近41％的值，而对于(A)中的化合物I-3f接近54％的值(相比之下，B中的化合物I-3f接近22％)；对于(B)中的化合物II-1接近32％的值，而对于(A)中的化合物II-1接近43％的值(相比之下，B中化合物II-1接近15.5％)；对于(B)中的化合物II-1a接近40.5％的值，而对于(A)中的化合物II-1a接近49％的值(相比之下，B中化合物II-1a接近14％)；对于(B)中的化合物II-1f接近46％的值，而对于(A)中的化合物II-1f接近54％(相比之下，B中化合物II-1f接近15％)；对于(B)中的化合物II-3b接近44％的值，而对于(A)中的化合物II-3b接近60.5％的值(相比之下，B中的化合物II-3b接近29％)。

将呈钠盐形式的化合物II-1a的原液在(A)和(B)中稀释至浓度范围在10^-9-10^-7M，在人肺癌细胞系A549培养物中对它们进行细胞毒性评价比较性试验，得出以下结果：本发明化合物浓度增加导致细胞生长抑制的增加，对于(B)中的化合物II-1a细胞生长抑制达到接近26％的值，而对于(A)中的化合物II-1a接近34％的值(相比之下，B中的化合物II-1接近12％)。

将多西他赛/化合物(I-1a+II-1a)制剂、紫杉醇/化合物I-1制剂、紫杉醇/化合物(I-1a+II-1a)制剂、多柔比星/化合物(I-1a+II-1a)制剂、多柔比星/化合物I-1f制剂的原液在(A)和(B)和(C)中稀释至浓度范围在10^-9-10^-7M，在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231培养物中对它们进行细胞毒性评价比较性试验，得出以下结果：多西他赛浓度为10^-7M的多西他赛/化合物(I-1a+II-1a)制剂细胞生长抑制在(A)中接近86％(相比之下，多西他赛单用接近41％)，在(B)中接近81％(相比之下，多西他赛单用接近18％)，在(C)中接近86.5％(相比之下，多西他赛单用接近43％)；紫杉醇浓度为10^-7M的紫杉醇/化合物I-1制剂在(A)中接近83％(相比之下，紫杉醇单用接近39％)，在(B)中接近79％(相比之下，紫杉醇单用接近26％)，在(C)中接近84％(相比之下，紫杉醇单用接近42％)；紫杉醇浓度为10^-7M的紫杉醇/化合物(I-1a+II-1a)制剂在(A)中接近84％(相比之下，紫杉醇单用接近45％)，在(B)中接近79％(相比之下，紫杉醇单用接近25％)，在(C)中接近85％(相比之下，紫杉醇单用接近48％)；多柔比星浓度为10^-7M的多柔比星/化合物(I-1a+II-1a)制剂在(A)中接近77％(相比之下，多柔比星单用接近48％)，在(B)中接近66％(相比之下，多柔比星单用接近25％)，在(C)中接近78％(相比之下，多柔比星单用接近51％)；多柔比星浓度为10^-7M的多柔比星/化合物I-1f制剂在(A)中接近81％(相比之下，多柔比星单用接近58％)，在(B)中接近70％(相比之下，多柔比星单用接近33％)，在(C)中接近82％(相比之下，多柔比星单用接近60％)。

要想表现出细胞生长抑制达50％的相同效果，在(A)中、(B)中、(C)中的多西他赛/化合物(I-1a+II-1a)制剂中，多西他赛所需浓度分别比多西他赛单用要低约5.7倍、低约3.3倍、低约7.7倍。

要想表现出细胞生长抑制达50％的相同效果，在(A)中、(B)中、(C)中的紫杉醇/化合物I-1制剂中，紫杉醇所需浓度分别比紫杉醇单用要低约11.3倍、低约2.8倍、低约14.1倍。

要想表现出细胞生长抑制达50％的相同效果，在(A)中、(B)中、(C)中的紫杉醇/化合物(I-1a+II-1a)制剂中，紫杉醇所需浓度分别比紫杉醇单用要低约7.7倍、低约2.1倍、低约10.0倍。

要想表现出细胞生长抑制达50％的相同效果，在(A)中、(B)中、(C)中的多柔比星/化合物(I-1a+II-1a)制剂中，多柔比星所需浓度分别比多柔比星单用要低约18.2倍、低约2.8倍、低约34.4倍。

要想表现出细胞生长抑制达50％的相同效果，在(A)中、(B)中、(C)中的多柔比星/化合物I-1f制剂中，多柔比星所需浓度分别比多柔比星单用要低约17.3倍、低约3.0倍、低约30.5倍。

将多西他赛/化合物(I-1a+II-1a)制剂的原液在(A)和(B)和(C)中稀释至浓度范围在10^-9-10^-7M，在人肺癌细胞系A549培养物中对它们进行细胞毒性评价比较性试验，得出以下结果：多西他赛浓度为10^-7M的多西他赛制剂细胞生长抑制在(A)中接近88％(相比之下，多西他赛单用接近44％)，在(B)中接近85％(相比之下，多西他赛单用接近23％)，在(C)中接近88％(相比之下，多西他赛单用接近41％)。

要想表现出细胞生长抑制达50％的相同效果，在(A)中、(B)中、(C)中的多西他赛/化合物(I-1a+II-1a)制剂中，多西他赛所需浓度分别比多西他赛单用要低约2.2倍、低约1.5倍、低约2.2倍。

将本发明化合物本身和所述制剂原液在生理盐水和含2.3mMCaCl₂的盐水中稀释，对它们进行细胞毒性比较性评价，表现出与最后的溶媒相关的惊人效果。在最后这种情况下，细胞生长抑制的平均值接近用培养基稀释后的所述化合物和所述制剂活性的结果。在这种关系中，有必要强调的是，本文公开的实施例中所用的所有培养基都含有Ca²⁺离子。实验结果揭示了Ca²⁺离子对本发明化合物的治疗活性、特别是抗肿瘤活性的重要作用。富含钠离子也含少量钙离子的水性介质对本发明化合物细胞毒性创造了最佳条件。

本发明化合物的结构易于Ca²⁺的结合。化合物I-1、I-2、I-3和II-1、II-2、II-3的钠盐含有磺酸基团或亚磺酸基团和羧酸基团，在约生理pH的水性介质中主要以中和Na⁺离子的共轭碱形式存在。化合物I-1f-I-1h、II-1f、I-3f的钠盐含有中和Na⁺离子的磺酸基团和甲酰胺基团。化合物I-1a-I-1e、II-1a-II-1e、I-3a和II-3b的钠盐含有中和Na⁺离子的磺酸基团和酯基。在富含钠离子的介质中，少量钙离子可形成钙-螯形(helate)络合物，其包含至少一个和/或两个本发明化合物的分子和结合的金属原子。螯合作用是指配体的两个或多个供体原子与中心金属原子的配位作用。所得络合物具有稳定性，该稳定性部分来自有利的熵因子伴随水分子从配位层中释放。

为了在中枢神经系统中具有活性，以不稳定的钙-螯形络合物形式存在的本发明化合物需要在与一个金属原子的配位中包括每个配体的顺式异构体和反式异构体，也就是说，全反式-视黄酰基-L-半胱磺酸和13-顺式-视黄酰基-L-半胱磺酸；全反式-视黄酰基-L-半胱磺酸甲酯和13-顺式-视黄酰基-L-半胱磺酸甲酯；全反式-视黄酰基-L-半胱磺酸酰胺和13-顺式-视黄酰基-L-半胱磺酸酰胺等等。众所周知，Ca²⁺离子易于形成高配位数和不规则配位几何学。

本发明的化合物本身具有低毒性。在大鼠中进行了腹膜内单剂量毒性研究。剂量水平为100mg/kg体重的化合物(I-1、I-2、II-3、I-1a、II-1a、I-1f、I-1h、II-1f、I-3a、I-3f、II-3b)都不导致死亡。因此，对于这些化合物来说，最小致死剂量大于100mg/kg体重。

本发明的化合物可以照原样使用或作为药用组合物的组分使用。所述化合物可系统给予或局部给予。所述化合物本身和在药用组合物中所述化合物的合适给药模式包括静脉内给药、腹膜内给药。所述化合物的口服、直肠和经皮给药是合适而有效的。所述化合物在中枢神经系统中可表现出高活力，而且口服、直肠和经皮给药仅需要低剂量的化合物就能得到高响应率。在患者治疗中为了获得最佳结果，所述化合物本身和以药用制剂形式存在的所述化合物都必须溶于富含钠离子并含有少量钙离子的水性介质中。

实施例

材料与方法

全反式-视黄酸、13-顺式-视黄酸和L-半胱磺酸、L-半胱亚磺酸、L-高半胱磺酸购自Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO，USA。所有其它化学试剂和溶剂购自Aldrich Chemical Co.。

¹H-NMR谱用Varian Unity-400分光计、在400MHz进行记录。DMSO-d₆用作溶剂。

Merck硅胶60预包埋板用于薄层色谱(TLC)并在含有氯仿-甲醇(4∶1，v/v)的溶剂系统中展层。通过喷洒溶于甲醇的10％H₂SO₄后加热至150℃，用碘染色并在紫外光(λ366nm)下检测，可检测TLC板上的化合物。

合成的化合物的浓度检验可通过紫外光谱(Shimadzu UV-mini-1240分光光度计，λ÷250-500nm，EtOH)进行，对于全反式-视黄酸衍生物：λ_最大348-350nm，ε45000；对于13-顺式-视黄酸衍生物：λ_最大348-350nm，ε37000。用紫外光谱检测的浓度等于样品重量。

将合成的化合物溶于氯仿、乙醇、甲醇和70％乙醇水溶液中。所有合成步骤都在干燥氮气氛下进行。

4种人肿瘤细胞系的细胞都购自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(Rockville，MD，USA)：人乳腺癌细胞系MDA-MB-231(ATCC-HTB-26，批号1227150)、人前列腺癌细胞系DU 145(ATCC-HTB-81，批号1391494)、人卵巢腺癌细胞系SKOV-3(ATCC-HTB-77，批号1658010)和人肺癌细胞系A549(ATCC-CCL-185，批号1388888)。

MDA-MB-231细胞在含有2mM L-谷氨酰胺、10％热灭活胎牛血清(FBS)和抗生素的MEM培养基中增殖。DU 145细胞在含有2mML-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠、10％FBS和抗生素的MEM培养基中培养。SKOV-3细胞在补充了1,5mM L-谷氨酰胺、10％FBS和抗生素的McCoy 5A培养基中培养。A549细胞在含有1mM L-谷氨酰胺、10％FBS和抗生素的Ham F-12培养基中培养。所有培养基和补充成分都购自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO，USA)。所有细胞系的细胞增殖都在Falcon^TM 25cm²培养瓶(Becton Dickinson Labware)中进行。

采用供贴壁细胞用的Falcon 96孔培养板(Becton DickinsonLabware)，进行药物细胞毒性试验。细胞以12×10³MDA-MB-231细胞/孔、或12×10³DU 145细胞/孔、或14×10³SKOV-3细胞/孔、或10×10³ A549细胞/孔的量、以200μL/孔的体积接种这些培养板。

培养瓶和培养板都在37℃、在95％空气和5％CO₂的增湿气氛中保温。

培养板中细胞培养物在24小时培养中允许贴壁。在细胞接种后第1天，向培养物中加入溶于含5％FBS的培养基的2μL待测药物溶液。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。细胞连续培养2天。在培养周期结束时，贴壁细胞用胰蛋白酶消化分散，用锥虫蓝排除试验和血细胞计数器统计活细胞数。所有数据来自3次测定、每次6个重复的平均值。结果表示为平均细胞数±SE，并通过学生t-检验评价试验系列与对照间的差异。根据对细胞生长抑制程度来评价药物细胞毒性。试验药物的细胞生长抑制计算如下：

在将本发明化合物本身和所述制剂的原液连续稀释后加入到培养物中，对它们进行细胞毒性比较性评价的情况下，将2μL溶于含5％FBS的培养基、生理盐水和含2.3mM CaCl₂的盐水的待测药物加入到培养物中。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基、生理盐水和含2.3mM CaCl₂的盐水作为溶剂对照(阴性对照)。这些对照系列间的差异并不显著。因此，计算阴性对照的平均值。在其它对照培养物中，将2μL溶于含5％FBS的培养基、生理盐水和含2.3mM CaCl₂的盐水的多西他赛、紫杉醇、多柔比星溶液加入到培养物(阳性对照)中。各种抗生素的对照序列间的差异并不显著。因此，计算阳性对照的平均值(对每种抗生素)。

实施例1.N-视黄酰基-L-半胱磺酸酯和酰胺以及N-视黄酰基-L-高半胱磺酸酯和酰胺的合成

L-半胱磺酸酯和L-高半胱磺酸酯的合成。在搅拌中将亚硫酰氯(3mmol，0.219ml)加入到50ml合适的醇中，15分钟后再加入L-半胱磺酸一水合物(1mmol，187mg)或L-高半胱磺酸(1mmol，183mg)，将混合物回流48小时。减压蒸发醇，残余物从乙醇重结晶。对于所有酯，得到的收率在85-95％之间。

L-半胱磺酸酰胺和L-高半胱磺酸酰胺的合成。将10ml合适胺的水溶液(28％的NH₃水溶液或40％甲胺或二甲胺水溶液)加入到5ml合适酸的甲酯水溶液(1mmol)中，将所得溶液放置2-7天。减压除去溶剂和多余的胺并将残余物从甲醇重结晶。对于所有酰胺，得到的收率在30-85％之间。

L-半胱磺酸酯和酰胺以及L-高半胱磺酸酯和酰胺的酰化。将全反式-视黄酸或13-顺式-视黄酸(150mg，0.5mmol)和三乙胺(0.083ml，0.6mmol)溶于1ml无水四氢呋喃中，再加入无水乙腈(2ml)，将混合物冷却至-20℃，再加入0.07ml(0.55mmol)氯甲酸丁酯。30分钟后，将没有沉淀三乙胺盐酸盐的混合物用吸管移至L-半胱磺酸或L-高半胱磺酸(0.75mmol)的合适衍生物在3ml饱和NaHCO₃溶液(约1.1M)、10ml H₂O、8ml甲醇和15ml THF的混合物的溶液中。在室温下搅拌10小时后，将混合物部分减压蒸馏，直至未反应的视黄酸开始沉淀(至残余物体积约为10ml)。然后，将15ml H₂O加入到残余物中，并将未反应的视黄酸用乙醚(5×30ml)萃取。将20ml饱和NaCl溶液加入到该水溶液中，产物经乙酸乙酯(3×30ml)萃取。减压蒸发溶剂。将所得残余物溶于20ml乙醇中并滤出所有不溶性杂质。产物以所得纯品的澄清溶液形式贮存。

为了得到所述化合物的酸形式，将其钠盐溶液减压蒸发，溶于水中，用0.1M HCl小心酸化至pH 3.5并用氯仿-乙醇(1∶1，v/v)萃取。减压蒸发氯仿，得到浓缩的乙醇-水溶液，必要时，用乙醇稀释并过滤。然后立即使用所得化合物溶液。

化合物(I-1a)：

收率：65％.R_f0.30-0.35.¹H-NMR(CD₃SOCD₃，400MHz)δ1.00[6H，s，C(CH₃)₂]，1.43和1.56[2H+2H，2m，CH₂CH₂C(CH₃)₂]，1.68[3H，s，CH₃C＝CC(CH₃)₂]，1.95[3H，s，CH₃C＝(CH)₃C(CH₃)＝CHCO]，1.99(2H，m，CH₂C＝)，2.24(3H，s，CH₃C＝CHCO)，2.81(2H，d，J 6.0Hz，SCH₂)，3.57(3H，s，OCH₃)，4.47(1H，m，NCH)，5.83(1H，s，＝CHCO)，6.12-6.26[3H，m，CH＝CHC(CH₃)＝CHCH＝CH]，6.34[1H，d，J 15.0Hz，CHC(CH₃)＝CHCO]，6.92[1H，dd，J 15.0，11.5Hz，CH＝CHC(CH₃)＝CHCO]，8.16(1H，d，J 6.4Hz，NH).

化合物(I-1b)：

收率：55％.R_f0.35-0.40.¹H-NMR(CD₃SOCD₃，400MHz)δ1.00[6H，s，C(CH₃)₂]，1.16(3H，t，J 7.1Hz，CH₃CH₂)，1.42和1.56[2H+2H，2m，CH₂CH₂C(CH₃)₂]，1.67[3H，s，CHH₃C＝CC(CH₃)₂]，1.95[3H，s，CH₃C＝(CH)₃C(CH₃)＝CHCO]，1.99(2H，m，CH₂C＝)，2.24(3H，s，CH₃C＝CHCO)，2.81(2H，d，J 6.1Hz，SCH₂)，4.04(2H，q，J 7.1Hz，OCH₂)，4.44(1H，m，NCH)，5.84(1H，s，＝CHCO)，6.11-6.26[3H，m，CH＝CHC(CH₃)＝CHCH＝CH]，6.34[1H，d，J 15.0Hz，CHC(CH₃)＝CHCO]，6.91[1H，dd，J 15.0，11.5Hz，CH＝CHC(CH₃)＝CHCO]，8.14(1H，d，J 6.4Hz，NH).

化合物(I-1c)：

收率：57％.R_f0.35-0.40.¹H-NMR(CD₃SOCD₃，400MHz)δ1.00[6H，s，C(CH₃)₂]，1.14和1.17[3H+3H，2d，J 6.2Hz，(CH₃)₂CHO]，1.43和1.55[2H+2H，2m，CH₂CH₂C(CH₃)₂]，1.68[3H，s，CH₃C＝CC(CH₃)₂]，1.95[3H，s，CH₃C＝(CH)₃C(CH₃)＝CHCO]，1.99(2H，m，CH₂C＝)，2.24(3H，s，CH₃C＝CHCO)，2.79(2H，d，J 6.0Hz，SCH₂)，4.38(1H，m，NCH)，4.84(1H，m，OCH)，5.84(1H，s，＝CHCO)，6.11-6.26[3H，m，CH＝CHC(CH₃)＝CHCH＝CH]，6.34[1H，d，J15.0Hz，CHC(CH₃)＝CHCO]，6.91[1H，dd，J 15.0，11.5Hz，CH＝CHC(CH₃)＝CHCO]，8.12(1H，d，J 6.2Hz，NH).

化合物(I-1d)：

收率：58％.R_f040-0.45.¹H-NMR(CD₃SOCD₃，400MHz)δ0.86(3H，t，J 7.3Hz，CH₃CH₂)，1.00[6H，s，C(CH₃)₂]，1.43和1.55[2H+2H，2m，CH₂CH₂C(CH₃)₂]，1.55(2H，m，CH₂CH₃)，1.67[3H，s，CH₃C＝CC(CH₃)₂]，1.95[3H，s，CH₃C＝(CH)₃C(CH₃)＝CHCO]，1.99(2H，m，CH₂C＝)，2.24(3H，s，CH₃C＝CHCO)，2.81(2H，d，J 6.0Hz，SCH₂)，3.95(2H，m，OCH₂)，4.44(1H，m，NCH)，5.84(1H，s，＝CHCO)，6.12-6.26[3H，m，CH＝CHC(CH₃)＝CHCH＝CH]，6.34[1H，d，J 15.2Hz，CHC(CH₃)＝CHCO]，6.91[1H，dd，J 15.2，11.3Hz，CH＝CHC(CH₃)＝CHCO]，8.15(1H，d，J6.4Hz，NH).

化合物(I-1e)：

收率：60％.R_f0.40-0.45.¹H-NMR(CD₃SOCD₃，400MHz)δ0.86(3H，t，J 7.3Hz，CH₃CH₂)，1.00[6H，s，C(CH₃)₂]，1.31(2H，m，CH₂CH₃)，1.43和1.55[2H+2H，2m，CH₂CH₂C(CH₃)₂]，1.52(2H，m，CH₂CH₂O)，1.68[3H，s，CH₃C＝CC(CH₃)₂]，1.95[3H，s，CH₃C＝(CH)₃C(CH₃)＝CHCO]，1.99(2H，m，CH₂C＝)，2.24(3H，s，CH₃C＝CHCO)，2.81(2H，d，J 6.0Hz，SCH₂)，3.99(2H，m，OCH₂)，4.43(1H，m，NCH)，5.84(1H，s，＝CHCO)，6.11-6.26[3H，m，CH＝CHC(CH₃)＝CHCH＝CH]，6.34[1H，d，J 15.0Hz，CHC(CH₃)＝CHCO]，6.91[1H，dd，J 15.0，11.5Hz，CH＝CHC(CH₃)＝HCO]，8.15(1H，d，J 6.4Hz，NH).

化合物(I-1f)：

收率：32％.R_f0.10-0.15.¹H-NMR(CD₃SOCD₃，400MHz)δ1.00[6H，s，C(CH₃)₂]，1.42和1.55[2H+2H，2m，CH₂CH₂C(CH₃)₂]，1.67[3H，s，CH₃C＝CC(CH₃)₂]，1.95[3H，s，CH₃C＝(CH)₃C(CH₃)＝CHCO]，1.99(2H，m，CH₂C＝)，2.25(3H，s，CH₃C＝CHCO)，2.73(1H，dd，J 13.9，7.7Hz，SCH^aH^b)，2.83(1H，dd，J 13.9，4.8Hz，SCH^aH^b)，4.36(1H，m，NCH)，5.83(1H，s，＝CHCO)，6.11-6.27[3H，m，CH＝CHC(CH₃)＝CHCH＝CH]，6.33[1H，d，J 15.2Hz，CHC(CH₃)＝CHCO]，6.90[1H，dd，J 15.2，11.5Hz，CH＝CHC(CH₃)＝CHCO]，6.93(1H，br s，NH^aH^b)，7.34(1H，br s，NH^aH^b)，8.02(1H，d，J 6.4Hz，NHCH).

化合物(I-1g)：

收率：30％.R_f0.20-0.25.¹H-NMR(CD₃SOCD₃，400MHz)δ0.99[6H，s，C(CH₃)₂]，1.42和1.56[2H+2H，2m，CH₂CH₂C(CH₃)₂]，1.67[3H，s，CH₃C＝CC(CH₃)₂]，1.94[3H，s，CH₃C＝(CH)₃C(CH₃)＝CHCO]，1.99(2H，m，CH₂C＝)，2.27(3H，s，CH₃C＝HCO)，2.53(3H，d，J 4.6Hz，CH₃NH)，2.73(1H，dd，J 13.7，7.9Hz，SCH^aH^b)，2.83(1H，dd，J 13.7，4.8Hz，SCH^aH^b)，4.40(1H，m，NCH)，5.84(1H，s，＝CHCO)，6.10-6.27[3H，m，CH＝CHC(CH₃)＝CHCH＝CH]，6.32[1H，d，J 15.0Hz，CHC(CH₃)＝CHCO]，6.90[1H，dd，J15.0，11.4Hz，CH＝CHC(CH₃)＝CHCO]，7.77(1H，m， NHCH₃)，8.04(1H，d，J 6.4Hz，NHCH).

化合物(I-1h)：

收率：21％.R_f0.20-0.25.¹H-NMR(CD₃SOCD₃，400MHz)δ1.00[6H，s，C(CH₃)₂]，1.42和1.56[2H+2H，2m，CH₂CH₂C(CH₃)₂]，1.67[3H，s，CH₃C＝C(CH₃)₂]，1.94[3H，s，CH₃C＝(CH)₃C(CH₃)＝CHCO]，1.99(2H，m，CH₂C＝)，2.25(3H，s，CH₃C＝CHCO)，2.59(1H，dd，J 13.5，6.4Hz，SCH^aH^b)，2.77[3H，s，(CH₃)^aN(CH₃)^b]，2.82(1H，dd，J 13.5，6.2Hz，SCH^aH^b)，3.11[3H，s，(CH₃)^aN(CH₃)^b]，5.00(1H，m，NCH)，5.84(1H，s，＝CHCO)，6.10-6.32[4H，m，CH＝CHC(CH₃)＝CHCH＝CH]，6.89[1H，dd，J 15.2，11.5Hz，CH＝CHC(CH₃)＝CHCO]，8.13(1H，d，J 7.1Hz，NH).

化合物(I-3a)：

收率：58％.R_f0.30-0.35.¹H-NMR(CD₃SOCD₃，400MHz)δ1.00[6H，s，C(CH₃)₂]，1.42和1.55[2H+2H，2m，CH₂CH₂C(CH₃)₂]，1.67[3H，s，CH₃C＝CC(CH₃)₂]，1.86-2.07(2H，br m，CH₂CH₂S)，1.95[3H，s，CH₃C＝(CH)₃C(CH₃)＝CHCO]，1.99(2H，m，CH₂C＝)，2.25(3H，s，CH₃C＝CHCO)，2.47(2H，m，SCH₂)，3.61(3H，s，OCH₃)，4.31(1H，m，NCH)，5.90(1H，s，＝CHCO)，6.11-6.29[3H，m，CH=CHC(CH₃)＝CHCH＝CH]，6.29[1H，d，J 15.0Hz，CHC(CH₃)＝CHCO]，6.91[1H，dd，J 15.0，11.5Hz，CH＝CHC(CH₃)＝CHCO]，8.46(1H，d，J6.9Hz，NH).

化合物(I-3f)：

收率：35％.R_f0.10-0.15.¹H-NMR(CD₃SOCD₃，400MHz)δ1.00[6H，s，C(CH₃)₂]，1.42和1.55[2H+2H，2m，CH₂CH₂C(CH₃)₂]，1.67[3H，s，CH₃C＝CC(CH₃)₂]，1.80-2.00(2H，br m，CH₂CH₂S)，1.94[3H，s，CH₃C＝(CH)₃C(CH₃)＝CHCO]，1.98(2H，m，CH₂C＝)，2.26(3H，s，CH₃C＝CHCO)，2.45(2H，m，SCH₂)，4.26(1H，m，NCH)，5.96(1H，s，＝CHCO)，6.10-6.31[4H，m，CH＝CHC(CH₃)＝CHCH＝CH]，6.89[1H，dd，J 15.0，11.3Hz，CH＝CHC(CH₃)＝CHCO]，7.00(1H，br s，NH^aH^b)，7.41(1H，br s，NH^aH^b)，8.12(1H，d，J 8.1Hz，NHCH).

化合物(II-1a)：

收率：63％.R_f0.25-0.30.¹H-NMR(CD₃SOCD₃，400MHz)δ1.00[6H，s，C(CH₃)₂]，1.42和1.56[2H+2H，2m，CH₂CH₂C(CH₃)₂]，1.67[3H，s，CH₃C＝CC(CH₃)₂]，1.95和1.98(3H+3H，2s，CH₃C＝(CH)₃C(CH₃)＝CHCO]，1.99(2H，m，CH₂C＝)，2.82(2H，d，J 6.0Hz，SCH₂)，3.57(3H，s，OCH₃)，4.46(1H，m，NCH)，5.70(1H，s，＝CHCO)，6.13-6.26[3H，m，CH＝CHC(CH₃)＝CHCH＝CH]，6.88[1H，dd，J 15.4，11.4Hz，CH＝CHC(CH₃)＝CHCO]，7.84[1H，d，J 15.4Hz，CHC(CH₃)＝CHCO]，8.16(1H，d，J 6.4Hz，NH).

化合物(II-1b)：

收率：60％.R_f0.30-0.35.¹H-NMR(CD₃SOCD₃，400MHz)δ1.00[6H，s，C(CH₃)₂]，1.16t，J 7.1Hz，CH₃CH₂)，1.42和1.56[2H+2H，2m，CH₂CH₂C(CH₃)₂]，1.67[3H，s，CH₃C＝CC(CH₃)₂]，1.95和1.98(3H+3H，2s，CH₃C＝(CH)₃C(CH₃)＝CHCO]，2.00(2H，m，CH₂C＝)，2.80(2H，d，J 6.2Hz，SCH₂)，4.04(2H，q，J 7.1Hz，OCH₂)，4.41(1H，m，NCH)，5.68(1H，s，＝CHCO)，6.13-6.26[3H，m，CH＝CHC(CH₃)＝CHCH＝CH]，6.88[1H，dd，J 15.4，11.5Hz，CH＝CHC(CH₃)＝CHCO]，7.83[1H，d，J 15.4Hz，CHC(CH₃)＝CHCO]，8.12(1H，d，J6.2Hz，NH).

化合物(II-1c)：

收率：55％.R_f0.35-0.40.¹H-NMR(CD₃SOCD₃，400MHz)δ1.00[6H，s，C(CH₃)₂]，1.14和1.17[3H+3H，2d，J 6.2Hz，(CH₃)₂CHO]，1.42和1.56[2H+2H，2m，CH₂CH₂C(CH₃)₂]，1.67[3H，s，CH₃C＝CC(CH₃)₂]，1.95和1.98(3H+3H，2s，CH₃C＝(CH)₃C(CH₃)=CHCO]，1.99(2H，m，CH₂C＝)，2.78(2H，d，J 6.0Hz，SCH₂)，4.36(1H，m，NCH)，4.84(1H，m，OCH)，5.68(1H，s，＝CHCO)，6.13-6.26[3H，m，CH＝CHC(CH₃)＝CHCH＝CH]，6.87[1H，dd，J 15.2，11.4Hz，CH＝CHC(CH₃)＝CHCO]，7.82[1H，d，J 15.2Hz，CHC(CH₃)＝CHCO]，8.08(1H，d，J 6.0Hz，NH).

化合物(II-1d)：

收率：58％.R_f0.35-0.40.¹H-NMR(CD₃SOCD₃，400MHz)δ0.85(3H，t，J 7.3Hz，CH₃CH₂)，1.00[6H，s，C(CH₃)₂]，1.42和1.56[2H+2H，2m，CH₂CH₂C(CH₃)₂]，1.55(2H，m，CH₂CH₃)，1.67[3H，s，CH₃C＝CC(CH₃)₂]，1.95和1.98(3H+3H，2s，CH₃C＝(CH)₃C(CH₃)＝CHCO]，1.99(2H，m，CH₂C＝)，2.81(2H，d，J 6.0Hz，SCH₂)，3.95(2H，m，OCH₂)，4.42(1H，m，NCH)，5.69(1H，s，＝CHCO)，6.13-6.27[3H，m，CH＝CHC(CH₃)＝CHCH＝CH]，6.87[1H，dd，J 15.4，11.4Hz，CH＝CHC(CH₃)＝CHCO]，7.83[1H，d，J 15.4Hz，CHC(CH₃)＝CHCO]，8.13(1H，d，J6.2Hz，NH).

化合物(II-1e)：

收率：59％.R_f0.35-0.40.¹H-NMR(CD₃SOCD₃，400MHz)δ0.85(3H，t，J 7.4Hz，CH₃CH₂)，1.00[6H，s，C(CH₃)₂]，1.30(2H，m，CH₂CH₃)，1.43和1.55[2H+2H，2m，CH₂CH₂C(CH₃)₂]，1.52(2H，m，CH₂CH₂O)，1.67[3H，s，CH₃C＝CC(CH₃)₂]，1.95和1.98(3H+3H，2s，CH₃C＝(CH)₃C(CH₃)＝CHCO]，1.99(2H，m，CH₂C＝)，2.80(2H，d，J 6.1Hz，SCH₂)，3.98(2H，m，OCH₂)，4.41(1H，m，NCH)，5.68(1H，s，＝CHCO)，6.13-6.26[3H，m，CH＝CHC(CH₃)＝CHCH＝CH]，6.87[1H，dd，J 15.4，11.4Hz，CH＝CHC(CH₃)＝CHCO]，7.82[1H，d，J 15.4Hz，CHC(CH₃)＝CHCO]，8.13(1H，d，J 6.2Hz，NH).

化合物(II-1f)：

收率：34％.R_f0.10-0.15.¹H-NMR(CD₃SOCD₃，400MHz)δ1.00[6H，s，C(CH₃)₂]，1.43和1.56[2H+2H，2m，CH₂CH₂C(CH₃)₂]，1.67[3H，s，CH₃C＝CC(CH₃)₂]，1.95和1.97[3H+3H，2s，CH₃C＝(CH)₃C(CH₃)＝CHCO]，1.99(2H，m，CH₂C＝)，2.71(1H，dd，J 13.9，7.9Hz，SCH^aH^b)，2.82(1H，dd，J 13.9，4.9Hz，SCH^aH^b)，4.33(1H，m，NCH)，5.68(1H，s，＝CHCO)，6.12-6.26[3H，m，CH＝CHC(CH₃)＝CHCH＝CH]，6.87[1H，dd，J 15.6，11.3Hz，CH＝CHC(CH₃)＝CHCO]，6.90(1H，br s，NH^aH^b)，7.33(1H，br s，NHa^Hb)，7.88[1H，d，J 15.6Hz，CHC(CH₃)＝CHCO]，7.96(1H，d，J 6.2Hz，NHCH).

化合物(II-3b)：

收率：54％.R_f 0.30-0.35.¹H-NMR(CD₃SOCD₃，400MHz)δ1.00[6H，s，C(CH₃)₂]，1.17(3H，t，J 7.1Hz，CH₃CH₂)，1.42和1.56[2H+2H，2m，CH₂CH₂C(CH₃)₂]，1.67[3H，s，CH₃C＝CC(CH₃)₂]，1.84-2.11(2H，br m，CH₂CH₂S)，1.95和1.97(3H+3H，2s，CH₃C＝(CH)₃C(CH₃)＝CHCO]，1.99(2H，m，CH₂C＝)，2.46(2H，m，SCH₂)，4.07(2H，m，OCH₂)，4.24(1H，m，NCH)，5.75(1H，s，＝CHCO)，6.12-6.26[3H，m，CH＝CHC(CH₃)＝CHCH＝CH]，6.87[1H，dd，J 15.4，11.4Hz，CH＝CHC(CH₃)＝CHCO]，7.86[1H，d，J 15.4Hz，CHC(CH₃)＝CHCO]，8.41(1H，d，J 7.0Hz，NH).

实施例2.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物I-1a的细胞毒性评价涉及培养物中化合物I-1a的终浓度

通过将干物质溶于盐水中，制备化合物I-1a的原液(1mg/ml)。从该溶液，通过连续稀释制备溶于含5％FBS的MEM的不同浓度的化合物I-1a的工作液，用于加入到培养物中。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的化合物I-1a的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物I-1a终浓度在10^-9-10^-7mol/L之间。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。

连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物I-1a试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(57.2±3.00)×10³细胞。

经化合物I-1a溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：(34.3±2.27)×10³，细胞生长抑制为40.0％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：(31.1±1.90)×10³，细胞生长抑制为45.6％(p＜0.001)；

10^-7mol/L：(29.8±2.44)×10³，细胞生长抑制为47.9％(p＜0.001)。

因此，化合物I-1a被证明对人乳腺癌细胞发挥显著细胞毒性作用。当增加化合物I-1a的浓度时，细胞生长抑制程度增加47.9％(p＜0.001)。

实施例3.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物I-1b的细胞毒性评价涉及培养物中化合物I-1b的终浓度

通过将干物质溶于盐水中，制备化合物I-1b的原液(1mg/ml)。从该溶液，通过连续稀释制备溶于含5％FBS的MEM的不同浓度的化合物I-1b的工作液，用于加入到培养物中。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的化合物I-1b的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物I-1b终浓度在10^-9-10^-7mol/L之间。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物I-1b试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(57.2±3.00)×10³细胞。

经化合物I-1b溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：(34.8±2.41)×10³，细胞生长抑制为39.2％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：(31.9±2.16)×10³，细胞生长抑制为44.2％(p＜0.001)；

10^-7mol/L：(30.5±1.82)×10³，细胞生长抑制为46.7％(p＜0.001)。

因此，化合物I-1b被证明对人乳腺癌细胞发挥显著细胞毒性作用。当增加化合物I-1b的浓度时，细胞生长抑制程度增加46.7％(p＜0.001)。

实施例4.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物I-1c的细胞毒性评价涉及培养物中化合物I-1c的终浓度

通过将干物质溶于盐水中，制备化合物I-1c的原液(1mg/ml)。从该溶液，通过连续稀释制备溶于含5％FBS的MEM的不同浓度的化合物I-1c的工作液，用于加入到培养物中。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的化合物I-1c的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物I-1c终浓度在10^-9-10^-7mol/L之间。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物I-1c试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(57.2±3.00)×10³细胞。

经化合物I-1c溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：(34.0±2.13)×10³，细胞生长抑制为40.6％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：(30.4±1.79)×10³，细胞生长抑制为46.9％(p＜0.001)；

10^-7mol/L：(28.9±1.52)×10³，细胞生长抑制为49.5％(p＜0.001)。

因此，化合物I-1c被证明对人乳腺癌细胞发挥显著细胞毒性作用。当增加化合物I-1c的浓度时，细胞生长抑制程度增加49.5％(p＜0.001)。

实施例5.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物I-1d的细胞毒性评价涉及培养物中化合物I-1d的终浓度

通过将干物质溶于盐水中，制备化合物I-1d的原液(1mg/ml)。从该溶液，通过连续稀释制备溶于含5％FBS的MEM的不同浓度的化合物I-1d的工作液，用于加入到培养物中。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的化合物I-1d的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物I-1d终浓度在10^-9-10^-7mol/L之间。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物I-1d试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(53.3±2.66)×10³细胞。

经化合物I-1d溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：(29.2±1.89)×10³，细胞生长抑制为45.2％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：(26.3±1.67)×10³，细胞生长抑制为50.7％(p＜0.001)；

10^-7mol/L：(24.1±1.46)×10³，细胞生长抑制为54.8％(p＜0.001)。

因此，化合物I-1d被证明对人乳腺癌细胞发挥显著细胞毒性作用。当增加化合物I-1d的浓度时，细胞生长抑制程度增加54.8％(p＜0.001)。

实施例6.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物I-1e的细胞毒性评价涉及培养物中化合物I-1e的终浓度

通过将干物质溶于盐水中，制备化合物I-1e的原液(1mg/ml)。从该溶液，通过连续稀释制备溶于含5％FBS的MEM的不同浓度的化合物I-1e的工作液，用于加入到培养物中。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的化合物I-1e的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物I-1e终浓度在10^-9-10^-7mol/L之间。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物I-1e试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(53.3±2.66)×10³细胞。

经化合物I-1e溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：(29.5±2.18)×10³，细胞生长抑制为44.7％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：(27.1±1.75)×10³，细胞生长抑制为49.2％(p＜0.001)；

10^-7mol/L：(24.8±1.34)×10³，细胞生长抑制为53.5％(p＜0.001)。

因此，化合物I-1e被证明对人乳腺癌细胞发挥显著细胞毒性作用。当增加化合物I-1e的浓度时，细胞生长抑制程度增加53.5％(p＜0.001)。

实施例7.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物I-1f的细胞毒性评价涉及培养物中化合物I-1f的终浓度

通过将干物质溶于盐水中，制备化合物I-1f的原液(1mg/ml)。从该溶液，通过连续稀释制备溶于含5％FBS的MEM的不同浓度的化合物I-1f的工作液，用于加入到培养物中。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的化合物I-1f的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物I-1f终浓度在10^-9-10^-7mol/L之间。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物I-1f试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(53.3±2.66)×10³细胞。

经化合物I-1f溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：(29.4±2.15)×10³，细胞生长抑制为44.8％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：(27.4±1.42)×10³，细胞生长抑制为48.6％(p＜0.001)；

10^-7mol/L：(25.3±1.11)×10³，细胞生长抑制为52.5％(p＜0.001)。

因此，化合物I-1f被证明对人乳腺癌细胞发挥显著细胞毒性作用。当增加化合物I-1f的浓度时，细胞生长抑制程度增加52.5％(p＜0.001)。

实施例8.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物II-1a的细胞毒性评价涉及培养物中化合物II-1a的终浓度

通过将干物质溶于盐水中，制备化合物II-1a的原液(1mg/ml)。从该溶液，通过连续稀释制备溶于含5％FBS的MEM的不同浓度的化合物II-1a的工作液，用于加入到培养物中。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的化合物II-1a的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物II-1a终浓度在10^-9-10^-7mol/L之间。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物II-1a试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(58.5±3.35)×10³细胞。

经化合物II-1a溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：(35.8±2.50)×10³，细胞生长抑制为38.8％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：(32.7±2.06)×10³，细胞生长抑制为44.1％(p＜0.001)；

10^-7mol/L：(31.3±2.15)×10³，细胞生长抑制为46.5％(p＜0.001)。

因此，化合物II-1a被证明对人乳腺癌细胞发挥显著细胞毒性作用。当增加化合物II-1a的浓度时，细胞生长抑制程度增加46.5％(p＜0.001)。

实施例9.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中的化合物II-1b细胞毒性评价涉及培养物中化合物II-1b的终浓度

通过将干物质溶于盐水中，制备化合物II-1b的原液(1mg/ml)。从该溶液，通过连续稀释制备溶于含5％FBS的MEM的不同浓度的化合物II-1b的工作液，用于加入到培养物中。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的化合物II-1b的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物II-1b终浓度在10^-9-10^-7mol/L之间。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物II-1b试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(58.5±3.35)×10³细胞。

经化合物II-1b溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：(34.3±1.88)×10³，细胞生长抑制为41.4％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：(31.4±1.94)×10³，细胞生长抑制为46.3％(p＜0.001)；

10^-7mol/L：(29.8±1.70)×10³，细胞生长抑制为49.1％(p＜0.001)。

因此，化合物II-1b被证明对人乳腺癌细胞发挥显著细胞毒性作用。当增加化合物II-1b的浓度时，细胞生长抑制程度增加49.1％(p＜0.001)。

实施例10.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物II-1c的细胞毒性评价涉及培养物中化合物II-1c的终浓度

通过将干物质溶于盐水中，制备化合物II-1c的原液(1mg/ml)。从该溶液，通过连续稀释制备溶于含5％FBS的MEM的不同浓度的化合物II-1c的工作液，用于加入到培养物中。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的化合物II-1c的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物II-1c终浓度在10^-9-10^-7mol/L之间。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物II-1c试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(58.5±3.35)×10³细胞。

经化合物II-1c溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：(33.6±2.75)×10³，细胞生长抑制为42.6％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：(31.0±2.05)×10³，细胞生长抑制为47.0％(p＜0.001)；

10^-7mol/L：(29.0±1.26)×10³，细胞生长抑制为50.4％(p＜0.001)。

因此，化合物II-1c被证明对人乳腺癌细胞发挥显著细胞毒性作用。当增加化合物II-1c的浓度时，细胞生长抑制程度增加50.4％(p＜0.001)。

实施例11.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物II-1d的细胞毒性评价涉及培养物中化合物II-1d的终浓度

通过将干物质溶于盐水中，制备化合物II-1d的原液(1mg/ml)。从该溶液，通过连续稀释制备溶于含5％FBS的MEM的不同浓度的化合物II-1d的工作液，用于加入到培养物中。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的化合物II-1d的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物II-1d终浓度在10^-9-10^-7mol/L之间。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物II-1d试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(56.8±3.16)×10³细胞。

经化合物II-1d溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：(31.3±2.68)×10³，细胞生长抑制为44.9％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：(28.2±1.29)×10³，细胞生长抑制为50.4％(p＜0.001)；

10^-7mol/L：(26.3±1.86)×10³，细胞生长抑制为53.7％(p＜0.001)。

因此，化合物II-1d被证明对人乳腺癌细胞发挥显著细胞毒性作用。当增加化合物II-1d的浓度时，细胞生长抑制程度增加53.7％(p＜0.001)。

实施例12.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物II-1e的细胞毒性评价涉及培养物中化合物II-1e的终浓度

通过将干物质溶于盐水中，制备化合物II-1e的原液(1mg/ml)。从该溶液，通过连续稀释制备溶于含5％FBS的MEM的不同浓度的化合物II-1e的工作液，用于加入到培养物中。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的化合物II-1e的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物II-1e终浓度在10^-9-10^-7mol/L之间。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物II-1e试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(56.8±3.16)×10³细胞。

经化合物II-1e溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：(30.9±1.82)×10³，细胞生长抑制为45.6％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：(28.0±1.34)×10³，细胞生长抑制为50.7％(p＜0.001)；

10^-7mol/L：(26.0±1.27)×10³，细胞生长抑制为54.2％(p＜0.001)。

因此，化合物II-1e被证明对人乳腺癌细胞发挥显著细胞毒性作用。当增加化合物II-1e的浓度时，细胞生长抑制程度增加54.2％(p＜0.001)。

实施例13.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物II-1f的细胞毒性评价涉及培养物中化合物II-1f的终浓度

通过将干物质溶于盐水中，制备化合物II-1f的原液(1mg/ml)。从该溶液，通过连续稀释制备溶于含5％FBS的MEM的不同浓度的化合物II-1f的工作液，用于加入到培养物中。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的化合物II-1f的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物II-1f终浓度在10^-9-10^-7mol/L之间。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物II-1f试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(56.8±3.16)×10³细胞。

经化合物II-1f溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：(31.2±2.42)×10³，细胞生长抑制为45.1％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：(28.5±2.13)×10³，细胞生长抑制为49.8％(p＜0.001)；

10^-7mol/L：(26.6±1.83)×10³，细胞生长抑制为53.2％(p＜0.001)。

因此，化合物II-1f被证明对人乳腺癌细胞发挥显著细胞毒性作用。当增加化合物II-1f的浓度时，细胞生长抑制程度增加53.2％(p＜0.001)。

实施例14.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中多西他赛/化合物I-1制剂的细胞毒性评价涉及多西他赛∶化合物I-1的摩尔比

将化合物I-1的钠盐转变成化合物I-1的酸形式并溶于甲醇中。将多西他赛的甲醇溶液与化合物I-1的甲醇溶液混合。搅拌后，蒸发有机溶剂。将所得干燥膜状物溶于盐水中。

按多西他赛∶化合物I-1的摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10，制备所述制剂溶于盐水中的原液(1mg/ml)。从这些溶液，制备溶于含5％FBS的培养基的工作液。多西他赛的浓度等于10^-5M。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中多西他赛终浓度等于10^-7M。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(57.6±3.04)×10³细胞。

经浓度为100nM的多西他赛处理的培养物含有(15.4±1.02)×10³细胞，细胞生长抑制为73.3％(p＜0.001)。

经多西他赛/化合物I-1摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10的制剂溶液处理的MDA-MB-231培养物具有以下活细胞数：

1∶3：(9.3±0.75)×10³，细胞生长抑制为83.9％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加39.6％(p＜0.001)；

1∶6：(8.4±0.53)×10³，细胞生长抑制为85.4％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加45.5％(p＜0.001)；

1∶10：(7.8±0.61)×10³，细胞生长抑制为86.5％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加49.4％(p＜0.001)。

实施例15.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中多西他赛/化合物I-1制剂(多西他赛∶化合物I-1摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多西他赛/化合物I-1制剂的终浓度

从该原液，制备溶于含5％FBS的培养基的工作液，用于加入到培养物中。接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的制剂的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中多西他赛终浓度为1×10^-9mol/L、1×10^-8mol/L和1×10^-7mol/L。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表1)。

表1.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中多西他赛/化合物I-1制剂(多西他赛∶化合物I-1摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多西他赛/化合物I-1制剂的终浓度

药物制剂肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 多西他赛， mol/L 化合物 I-1， mol/L 对照 0 0 55.8±1.99 - - - 多西他赛 10^-9 0 34.2±2.28 38.7^* - 3.6×10^-9 10^-8 0 23.4±2.15 58.1^* - 10^-7 0 13.7±1.03 75.4^* - 制剂 10^-9 6×10^-9 25.6±1.34 54.1^* +25.1^** 6.3×10^-10 (b) 10^-8 6104 14.9 73.3 36.3 10^-7 6×10^-7 7.2±0.65 87.1^* +47.4^**

(a)使用以3种不同浓度测定的细胞生长抑制数据，来计算与未处理对照培养物相比抑制50％细胞生长的药物浓度。所有数据都是3次测定、每次6个重复的平均值。

(b)外推值。

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.01

实施例16.在人前列腺癌DU 145细胞系培养物中多西他赛/化合物I-1a制剂的细胞毒性评价涉及多西他赛∶化合物I-1a的摩尔比

将化合物I-1a的钠盐(2mg)的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于甲醇中。将多西他赛的甲醇溶液与化合物I-1a的甲醇溶液混合。搅拌后，蒸发有机溶剂。将所得干燥膜状物溶于盐水中。

按多西他赛∶化合物I-1a的摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10，制备所述制剂溶于盐水中的原液。从这些溶液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。多西他赛的浓度等于10^-5M。

接种后第1天，用药物溶液处理DU 145细胞培养物。将等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中多西他赛终浓度等于10^-7M。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(55.7±2.69)×10³细胞。

经浓度为100nM的多西他赛处理的培养物含有(14.2±0.85)×10³细胞，细胞生长抑制为74.5％(p＜0.001)。

经多西他赛/化合物I-1a摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10的溶于含5％FBS的培养基的制剂溶液处理的DU 145细胞培养物具有以下活细胞数：

1∶3：(8.0±0.69)×10³，细胞生长抑制为85.6％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加43.7％(p＜0.001)；

1∶6：(7.2±0.66)×10³，细胞生长抑制为87.1％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加49.3％(p＜0.001)；

1∶10：(6.4±0.52)×10³，细胞生长抑制为88.5％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加54.9％(p＜0.001)。

实施例17.在人前列腺癌DU 145细胞系培养物中多西他赛/化合物I-1a制剂(多西他赛∶化合物I-1a摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多西他赛/化合物I-1a的终浓度

从该原液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。接种后第1天，用药物溶液处理DU 145细胞培养物。将不同浓度的制剂的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中多西他赛终浓度为1×10^-9mol/L、1×10^-8mol/L和1×10^-7mol/L。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表2)。

表2.在人前列腺癌DU 145细胞系培养物中多西他赛/化合物I-1a制剂(多西他赛∶化合物I-1a摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多西他赛/化合物I-1a的终浓度

药物制剂肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 多西他赛， mol/L 化合物 I-1a， mol/L 对照 0 0 41.5±2.93 - - - 多西他赛 10^-9 0 27.1±1.07 34.7^* - 8.0×10^-9 10^-8 0 20.0±1.16 51.8^* - 10^-7 0 10.8±0.94 74.0^* - 制剂 10^-9 6×10^-9 22.2±0.88 46.5^* +18.1^** 1.5×10^-9 10^-8 6×10^-8 14.8±1.11 64.3^* +26.0^** 10^-7 6×10^-7 5.9±0.45 85.8^* +45.4^*

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.01

实施例18.在人卵巢腺癌SKOV-3细胞系培养物中多西他赛/化合物I-1b制剂的细胞毒性评价涉及多西他赛∶化合物I-1b的摩尔比

将化合物I-1b的钠盐(2mg)的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于甲醇中。将多西他赛的甲醇溶液与化合物I-1a的甲醇溶液混合。搅拌后，蒸发有机溶剂。将所得干燥膜状物溶于盐水中。

按多西他赛∶化合物I-1b的摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10，制备所述制剂溶于盐水中的原液。从这些溶液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。多西他赛的浓度等于10^-5M。

接种后第1天，用药物溶液处理SKOV-3细胞培养物。将等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中多西他赛终浓度等于10^-7M。

在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(51.5±2.84)×10³细胞。

经浓度为100nM的多西他赛处理的培养物含有(16.1±0.94)×10³细胞，细胞生长抑制为68.7％(p＜0.001)。

经多西他赛/化合物I-1b摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10的溶于含5％FBS的培养基的制剂溶液处理的SKOV-3细胞培养物具有以下活细胞数：

1∶3：(9.2±0.82)×10³，细胞生长抑制为82.1％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加42.9％(p＜0.001)；

1∶6：(8.4±0.75)×10³，细胞生长抑制为83.7％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加47.8％(p＜0.001)；

1∶10：(7.6±0.69)×10³，细胞生长抑制为85.2％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加52.8％(p＜0.001)。

实施例19.在人卵巢腺癌SKOV-3细胞系培养物中多西他赛/化合物I-1b制剂(多西他赛∶化合物I-1b摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多西他赛/化合物I-1b的终浓度

将化合物I-1b的钠盐(2mg)的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于甲醇中。将多西他赛的甲醇溶液与化合物I-1b的甲醇溶液混合。搅拌后，蒸发有机溶剂。将所得干燥膜状物溶于盐水中。

从该原液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。接种后第1天，用药物溶液处理SKOV-3细胞培养物。将不同浓度的制剂的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中多西他赛终浓度为1×10^-9mol/L、1×10^-8mol/L和1×10^-7mol/L。

在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表3)。

表3.在人卵巢腺癌SKOV-3细胞系培养物中多西他赛/化合物I-1b制剂(多西他赛∶化合物I-1b摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多西他赛/化合物I-1b的终浓度

药物制剂肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 多西他赛， mol/L 化合物 I-1b， mol/L 对照 0 0 52.1±2.96 - - - 多西他赛 10^-9 0 34.3±2.01 34.2^* - 5.2×10^-9 10^-8 0 23.2±2.19 55.5^* - 10^-7 0 16.8±0.80 67.8^* - 制剂 10^-9 6×10^-9 26.5±1.29 49.1^* +22.7^** 1.2×10^-9 10^-8 6×10^-8 15.3±0.85 70.6^* +34.1^** 10^-7 6×10^-7 8.7±0.80 83.3^* +48.2^*

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.01

实施例20.在人肺癌A549细胞系培养物中多西他赛/化合物I-1c制剂的细胞毒性评价涉及多西他赛∶化合物I-1c的摩尔比

将化合物I-1c的钠盐(2mg)的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于甲醇中。将多西他赛的甲醇溶液与化合物I-1c的甲醇溶液混合。搅拌后，蒸发有机溶剂。将所得干燥膜状物溶于盐水中。

按多西他赛∶化合物I-1c的摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10，制备所述制剂溶于盐水中的原液。从这些溶液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。多西他赛的浓度等于10^-5M。

接种后第1天，用药物溶液处理A549细胞培养物。将等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中多西他赛终浓度等于10^-7M。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(53.7±2.59)×10³细胞。

经浓度为100nM的多西他赛处理的培养物含有(10.6±0.72)×10³细胞，细胞生长抑制为80.3％(p＜0.001)。

经多西他赛/化合物I-1c摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10的溶于含5％FBS的培养基的制剂溶液处理的A549细胞培养物具有以下活细胞数：

1∶3：(7.0±0.53)×10³，细胞生长抑制为87.0％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加34.0％(p＜0.002)；

1∶6：(6.6±0.58)×10³，细胞生长抑制为87.7％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加37.7％(p＜0.002)；

1∶10：(6.3±0.42)×10³，细胞生长抑制为88.3％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加40.6％(p＜0.001)。

实施例21.在人肺癌A549细胞系培养物中多西他赛/化合物I-1c制剂(多西他赛∶化合物I-1c摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多西他赛/化合物I-1c的终浓度

从该原液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。接种后第1天，用药物溶液处理A549细胞培养物。将不同浓度的制剂的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中多西他赛终浓度为1×10-9mol/L、1×10-8mol/L和1×10^-7mol/L。

在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表4)。

表4.在人肺癌A549细胞系培养物中多西他赛/化合物I-1c制剂(多西他赛∶化合物I-1c摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多西他赛/化合物I-1c的终浓度

药物制剂肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 多西他赛， mol/L 化合物 I-1c， mol/L 对照 0 0 54.6±2.79 - - - 多西他赛 10^-9 0 34.1±2.07 37.5^* - 2.2×10^-9 10^-8 0 15.6±0.49 71.4^* - 10^-7 0 10.5±0.97 80.8^* - 制剂 10^-9 6×10^-9 27.4±1.83 49.8^* +19.6· 1.0×10^-9 10^-8 6×10^-8 9.7±0.46 82.2^* +37.8^* 10^-7 6×10^-7 6.5±0.43 88.1^* +38.1^**

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.01

(·)p＜0.05

实施例22.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中多西他赛/化合物II-1制剂的细胞毒性评价涉及多西他赛∶化合物II-1的摩尔比

将化合物II-1的钠盐转变成化合物II-1的酸形式并溶于甲醇中。将多西他赛的甲醇溶液与化合物II-1的甲醇溶液混合。搅拌后，蒸发有机溶剂。将所得干燥膜状物溶于盐水中。

按多西他赛∶化合物II-1的摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10，制备所述制剂溶于盐水中的原液。从这些溶液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。多西他赛的浓度等于10^-5M。

培养3天后，对照培养物含有(57.6±3.04)×10³细胞。

经浓度为100nM的多西他赛处理的培养物含有(15.4±1.02)×10³细胞，细胞生长抑制为73.3％(p＜0.001)。

经多西他赛/化合物II-1摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10的溶于含5％FBS的培养基的制剂溶液处理的MDA-MB-231细胞培养物具有以下活细胞数：

1∶3：(9.5±0.62)×10³，细胞生长抑制为83.5％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加38.3％(p＜0.001)；

1∶6：(8.6±0.57)×10³，细胞生长抑制为85.1％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加44.2％(p＜0.001)；

1∶10：(8.1±0.59)×10³，细胞生长抑制为85.9％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加47.4％(p＜0.001)。

实施例23.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中多西他赛/化合物II-1制剂(多西他赛∶化合物II-1摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多西他赛/化合物II-1的终浓度

从该原液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的制剂的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中多西他赛终浓度为1×10-9mol/L、1×10^-8mol/L和1×10^-7mol/L。

在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表5)。

表5.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中多西他赛/化合物II-1制剂(多西他赛∶化合物II-1摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多西他赛/化合物II-1的终浓度

药物制剂肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 多西他赛， mol/L 化合物 II-1， mol/L阴性对照 0 0 55.8±1.99 - - -多西他赛 10^-9 0 34.2±2.28 38.7^* - 3.6×10^-9 10^-8 0 23.4±2.15 58.1^* - 10^-7 0 13.7±1.03 75.4^* -制剂 10^-9 6×10^-9 26.3±1.49 52.9^* +23.1· 7.0×10^-10 (b) 10^-8 6×10 ^-8 15.6±1.22 72.0^* +33.3^** 10^-7 6×10^-7 7.7±0.64 86.2^* +43.8^*

(b)外推值。

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.01

(·)p＜0.02

实施例24.在人前列腺癌DU 145细胞系培养物中多西他赛/化合物II-1a制剂的细胞毒性评价涉及多西他赛∶化合物II-1a的摩尔比

将化合物II-1a的钠盐(2mg)的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于甲醇中。将多西他赛的甲醇溶液与化合物II-1a的甲醇溶液混合。搅拌后，蒸发有机溶剂。将所得干燥膜状物溶于盐水中。

按多西他赛∶化合物II-1a的摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10，制备所述制剂溶于盐水中的原液。从这些溶液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。多西他赛的浓度等于10^-5M。

培养3天后，对照培养物含有(55.7±2.69)×10³细胞。

经浓度为100nM的多西他赛处理的培养物含有(14.2±0.85)×10³细胞，细胞生长抑制为74.5％(p＜0.001)。

经多西他赛/化合物II-1a摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10的溶于含5％FBS的培养基的制剂溶液处理的DU 145细胞培养物具有以下活细胞数：

1∶3：(7.9±0.73)×10³，细胞生长抑制为85.8％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加44.4％(p＜0.001)；

1∶6：(7.5±0.59)×10³，细胞生长抑制为86.5％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加47.2％(p＜0.001)；

1∶10：(6.8±0.58)×10³，细胞生长抑制为87.8％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加52.1％(p＜0.001)。

实施例25.在人前列腺癌DU 145细胞系培养物中多西他赛/化合物II-1a制剂(多西他赛∶化合物II-1a摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多西他赛/化合物II-1a的终浓度

表6.在人前列腺癌DU 145细胞系培养物中多西他赛/化合物II-1a制剂(多西他赛∶化合物II-1a摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多西他赛/化合物II-1a的终浓度

药物制剂肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 多西他赛， mol/L 化合物 II-1a， mol/L 对照 0 0 41.5±2.93 - - - 多西他赛 10^-9 0 27.1±1.07 34.7^* - 8.0×10^-9 10^-8 0 20.0±1.16 51.8^* - 10^-7 0 10.8±0.94 74.0^* - 制剂 10^-9 6×10^-9 23.1±1.52 44.3^* +14.8·· 2.2×10^-9 10^-8 6×10^-8 15.8±1.27 61.9^* +21.0· 10^-7 6×10^-7 6.4±0.54 84.6^* +40.7^**

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.002

(·)p＜0.05

(··)p＞0.05

实施例26.在人卵巢腺癌SKOV-3细胞系培养物中多西他赛/化合物II-1b制剂的细胞毒性评价涉及多西他赛∶化合物II-1b的摩尔比

将化合物II-1b的钠盐(2mg)的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于甲醇中。将多西他赛的甲醇溶液与化合物II-1b的甲醇溶液混合。搅拌后，蒸发有机溶剂。将所得干燥膜状物溶于盐水中。

按多西他赛∶化合物II-1b的摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10，制备所述制剂溶于盐水中的原液。从这些溶液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。多西他赛的浓度等于10^-5M。接种后第1天，用药物溶液处理SKOV-3细胞培养物。将等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中多西他赛终浓度等于10^-7M。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(51.5±2.84)×10³细胞。

经浓度为100nM的多西他赛处理的培养物含有(16.1±0.94)×10³细胞，细胞生长抑制为68.7％(p＜0.001)。

经多西他赛/化合物II-1b摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10的溶于含5％FBS的培养基的制剂溶液处理的SKOV-3细胞培养物具有以下活细胞数：

1∶3：(9.6±0.86)×10³，细胞生长抑制为81.4％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加40.4％(p＜0.001)；

1∶6：(8.8±0.72)×10³，细胞生长抑制为82.9％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加45.3％(p＜0.001)；

1∶10：(8.1±0.70)×10³，细胞生长抑制为84.3％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加49.7％(p＜0.001)。

实施例27.在人卵巢腺癌SKOV-3细胞系培养物中多西他赛/化合物II-1b制剂(多西他赛/化合物II-1b摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多西他赛/化合物II-1b的终浓度

在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表7)。

表7.在人卵巢腺癌SKOV-3细胞系培养物中多西他赛/化合物II-1b制剂(多西他赛∶化合物II-1b摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多西他赛/化合物II-1b的终浓度

药物制剂肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 多西他赛， mol/L 化合物 II-1b， mol/L 对照 0 0 52.1±2.96 - - - 多西他赛 10^-9 0 34.3±2.01 34.2^* - 5.2×10^-9 10^-8 0 23.2±2.19 55.5^* - 10^-7 0 16.8±0.80 67.8^* - 制剂 10^-9 6×10^-9 27.4±1.36 47.4^* +20.1^** 1.3×10^-9 10^-8 6×10^-8 15.9±1.04 69.5^* +31.5^** 10^-7 6×10^-7 9.2±0.68 82.3^* +45.2^*

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.02

实施例28.在人肺癌A549细胞系培养物中多西他赛/化合物II-1c制剂的细胞毒性评价涉及多西他赛∶化合物II-1c的摩尔比

将化合物II-1c的钠盐(2mg)的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于甲醇中。将多西他赛的甲醇溶液与化合物II-1c的甲醇溶液混合。搅拌后，蒸发有机溶剂。将所得干燥膜状物溶于盐水中。

按多西他赛∶化合物II-1c的摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10，制备所述制剂溶于盐水中的原液。从这些溶液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。多西他赛的浓度等于10^-5M。

培养3天后，对照培养物含有(53.7±2.59)×10³细胞。

经浓度为100nM的多西他赛处理的培养物含有(10.6±0.72)×10³细胞，细胞生长抑制为80.3％(p＜0.001)。

经多西他赛/化合物II-1c摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10的溶于含5％FBS的培养基的制剂溶液处理的A549细胞培养物具有以下活细胞数：

1∶3：(7.2±0.61)×10³，细胞生长抑制为86.6％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加32.1％(p＜0.01)；

1∶6：(6.8±0.52)×10³，细胞生长抑制为87.3％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加35.8％(p＜0.002)；

1∶10：(6.5±0.50)×10³，细胞生长抑制为87.9％(p＜0.001)，与多西他赛细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加38.7％(p＜0.001)。

实施例29.在人肺癌A549细胞系培养物中多西他赛/化合物II-1c制剂(多西他赛/化合物II-1c摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多西他赛/化合物II-1c的终浓度

从该原液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。接种后第1天，用药物溶液处理A549细胞培养物。将不同浓度的制剂的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中多西他赛终浓度为1×10^-9mol/L、1×10^-8mol/L和1×10^-7mol/L。

在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表8)。

表8.在人肺癌A549细胞系培养物中多西他赛/化合物II-1c制剂(多西他赛/化合物II-1c摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多西他赛/化合物II-1c的终浓度

药物制剂肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 多西他赛， mol/L 化合物 II-1c， mol/L 对照 0 0 54.6±2.79 - - - 多西他赛 10^-9 0 34.1±2.07 37.5^* - 2.2×10^-9 10^-8 0 15.6±0.49 71.4^* - 10^-7 0 10.5±0.97 80.8^* - 制剂 10^-9 6×10^-9 28.6±1.39 47.6^* +16.1· 1.2×10^-9 10^-8 6×10^-8 10.4±0.75 81.0^* +33.3^* 10^-7 6×10^-7 6.9±0.52 87.4^* +34.3^**

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.01

(·)p＜0.05

实施例30.在人卵巢腺癌SKOV-3细胞系培养物中紫杉醇/化合物II-1制剂的细胞毒性评价涉及紫杉醇∶化合物II-1的摩尔比

将化合物II-1的钠盐转变成化合物II-1的酸形式并溶于甲醇中。将紫杉醇的甲醇溶液与化合物II-1的甲醇溶液混合。搅拌后，蒸发有机溶剂。将所得干燥膜状物溶于盐水中。

按紫杉醇∶化合物II-1的摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10，制备所述制剂溶于盐水中的原液。从这些溶液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。紫杉醇的浓度等于10^-5M。

接种后第1天，用药物溶液处理SKOV-3细胞培养物。将等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中紫杉醇终浓度等于10^-7M。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(50.5±2.58)×10³细胞。

经浓度为100nM紫杉醇处理的培养物含有(14.6±0.82)×10³细胞，细胞生长抑制为71.1％(p＜0.001)。

经紫杉醇/化合物II-1摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10的制剂溶液处理的SKOV-3细胞培养物具有以下活细胞数：

1∶3：(9.6±0.68)×10³，细胞生长抑制为81.0％(p＜0.001)，与紫杉醇细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加34.2％(p＜0.001)；

1∶6：(8.7±0.63)×10³，细胞生长抑制为82.8％(p＜0.001)，与紫杉醇细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加40.4％(p＜0.001)；

1∶10：(8.2±0.70)×10³，细胞生长抑制为83.8％(p＜0.001)，与紫杉醇细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加43.8％(p＜0.001)。

实施例31.在人卵巢腺癌SKOV-3细胞系培养物中紫杉醇/化合物II-1制剂(紫杉醇∶化合物II-1的摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中紫杉醇/化合物II-1的终浓度

从该原液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。接种后第1天，用药物溶液处理SKOV-3细胞培养物。将不同浓度的制剂的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中紫杉醇终浓度为1×10^-9mol/L、1×10^-8mol/L和1×10^-7mol/L。

在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表9)。

表9.在人卵巢腺癌SKOV-3细胞系培养物中紫杉醇/化合物II-1制剂(紫杉醇∶化合物II-1的摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中紫杉醇/化合物II-1的终浓度

药物制剂肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 紫杉醇， mol/L 化合物 II-1， mol/L 对照 0 0 49.6±3.13 - - - 紫杉醇 10^-9 0 37.3±1.80 24.8^** - 4.5×10^-9 10^-8 0 19.9±1.45 59.9^* - 10^-7 0 14.1±0.98 71.6^* - 制剂 10^-9 6×10^-9 27.6±1.56 44.4^* +26.0· 1.4×10^-9 10^-8 6×10^-8 13.3±0.71 73.2^* +33.2· 10^-7 6×10^-7 8.3±0.57 83.3^* +41.1^*

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.01

(·)p＜0.002

实施例32.在人卵巢腺癌SKOV-3细胞系培养物中紫杉醇/化合物II-1a制剂的细胞毒性评价涉及紫杉醇∶化合物II-1a的摩尔比

将化合物II-1a的钠盐(2mg)的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于甲醇中。将紫杉醇的甲醇溶液与化合物II-1a的甲醇溶液混合。搅拌后，蒸发有机溶剂。将所得干燥膜状物溶于盐水中。

按紫杉醇∶化合物II-1a的摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10，制备所述制剂溶于盐水中的原液(1mg/ml)。从这些溶液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。紫杉醇的浓度等于10^-5M。

培养3天后，对照培养物含有(50.5±2.58)×10³细胞。

经浓度为100nM紫杉醇处理的培养物含有(14.6±0.82)×10³细胞，细胞生长抑制为71.1％(p＜0.001)。

经紫杉醇/化合物II-1的摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10的制剂溶液处理的SKOV-3细胞培养物具有以下活细胞数：

1∶3：(10.1±0.73)×10³，细胞生长抑制为80.0％(p＜0.001)，与紫杉醇细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加30.8％(p＜0.002)；

1∶6：(9.4±0.80)×10³，细胞生长抑制为81.4％(p＜0.001)，与紫杉醇细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加35.6％(p＜0.001)；

1∶10：(8.9±0.64)×10³，细胞生长抑制为82.4％(p＜0.001)，与紫杉醇细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加39.0％(p＜0.001)。

实施例33.在人卵巢腺癌SKOV-3细胞系培养物中紫杉醇/化合物II-1a制剂(紫杉醇∶化合物II-1a的摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中紫杉醇/化合物II-1a的终浓度

在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表10)。

表10.在人卵巢腺癌SKOV-3细胞系培养物中紫杉醇/化合物II-1a制剂(紫杉醇∶化合物II-1a的摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中紫杉醇/化合物II-1a的终浓度

药物制剂肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 紫杉醇， mol/L 化合物 II-1a， mol/L 对照 0 0 49.6±3.13 - - - 紫杉醇 10^-9 0 37.3±1.80 24.8^** - 4.5×10^-9 10^-8 0 19.9±1.45 59.9^* - 10^-7 0 14.1±0.98 71.6^* - 制剂 10^-9 6×10^-9 28.4±1.72 42.7^* +23.9^** 1.6×10^-9 10^-8 6×10^-8 14.2±1.00 71.4^* +28.6^** 10^-7 6×10^-7 9.3±0.64 81.3^* +34.0·

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.01

(·)p＜0.002

实施例34.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中多柔比星/化合物I-1d制剂的细胞毒性评价涉及多柔比星∶化合物I-1d的摩尔比

将化合物I-1d的钠盐(2mg)的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于水中。将等分的所得溶液与等分的多柔比星水溶液混合。

按多柔比星∶化合物I-1d的摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10，制备所述制剂溶于水中的原液。从这些溶液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。多柔比星的浓度等于10^-5M。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中多柔比星终浓度等于10^-7M。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(50.9±2.07)×10³细胞。

经浓度为100nM的多柔比星处理的培养物含有(23.6±1.02)×10³细胞，细胞生长抑制为53.6％(p＜0.001)。

经多柔比星/化合物I-1d摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10的制剂溶液处理的MDA-MB-231细胞培养物具有以下活细胞数：

1∶3：(12.2±0.62)×10³，细胞生长抑制为76.0％(p＜0.001)，与多柔比星细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加48.3％(p＜0.001)；

1∶6：(12.1±0.69)×10³，细胞生长抑制为76.2％(p＜0.001)，与多柔比星细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加48.7％(p＜0.001)；

1∶10：(11.9±0.74)×10³，细胞生长抑制为76.6％(p＜0.001)，与多柔比星细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加49.6％(p＜0.001)。

实施例35.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中多柔比星/化合物I-1d制剂(多柔比星/化合物I-1d摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多柔比星/化合物I-1d的终浓度

从该原液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的制剂的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中多柔比星终浓度为1×10^-9mol/L、1×10^-8mol/L和1×10^-7mol/L。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表11)。

表11.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中多柔比星/化合物I-1d制剂(多柔比星/化合物I-1d摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多柔比星/化合物I-1d的终浓度

药物制剂肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 多柔比星， mol/L 化合物 I-1d， mol/L 对照 0 0 55.7±2.49 - - - 多柔比星 10^-9 0 48.0±1.85 13.8^** - 7.6×10^-8 10^-8 0 41.0±1.50 26.4^* - 10^-7 0 26.2±1.29 53.0^* - 制剂 10^-9 3×10^-9 37.7±1.62 32.3^* +21.5· 1.3×10^-8 10^-8 3×10^-8 29.7±1.48 46.7^* +27.6^* 10^-7 3×10^-7 13.5±0.74 75.8^* +48.5^*

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.05

(·)p＜0.002

实施例36.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中多柔比星/化合物II-1d制剂的细胞毒性评价涉及多柔比星∶化合物II-1d的摩尔比

将化合物II-1d的钠盐(2mg)的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于水中。将等分的所得溶液与等分的多柔比星水溶液混合。

按多柔比星∶化合物II-1d的摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10，制备所述制剂溶于水中的原液。从这些溶液，制备用于加入到培养物中的溶于5％FBS介质的工作液。多柔比星的浓度等于10^-5M。

培养3天后，对照培养物含有(50.9±2.07)×10³细胞。

经浓度为100nM的多柔比星处理的培养物含有(23.6±1.02)×10³细胞，细胞生长抑制为53.6％(p＜0.001)。

经多柔比星/化合物II-1d摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10的制剂溶液处理的MDA-MB-231细胞培养物具有以下活细胞数：

1∶3：(13.0±0.76)×10³，细胞生长抑制为74.5％(p＜0.001)，与多柔比星细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加44.9％(p＜0.001)；

1∶6：(12.8±0.60)×10³，细胞生长抑制为74.9％(p＜0.001)，与多柔比星细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加45.8％(p＜0.001)；

1∶10：(12.6±0.68)×10³，细胞生长抑制为75.2％(p＜0.001)，与多柔比星细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加46.6％(p＜0.001)。

实施例37.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中多柔比星/化合物II-1d制剂(多柔比星∶化合物II-1d摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多柔比星/化合物II-1d的终浓度

将化合物II-1d的钠盐(2mg)的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于水中。将所得溶液和多柔比星水溶液混合。

从该原液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的制剂的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中多柔比星终浓度为1×10^-9mol/L、1×10^-8mol/L和1×10^-7mol/L。

在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表12)。

表12.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中多柔比星/化合物II-1d制剂(多柔比星∶化合物II-1d摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中多柔比星/化合物II-1d的终浓度

药物制剂肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 多柔比星， mol/L 化合物 II-1d， mol/L 对照 0 0 55.7±2.49 - - - 多柔比星 10^-9 0 48.0±1.85 13.8^** - 7.6×10^-8 10^-8 0 41.0±1.50 26.4^* - 10^-7 0 26.2±1.29 53.0^* - 制剂 10^-9 3×10^-9 39.6±1.76 28.9^* +17.5· 1.6×10^-8 10^-8 3×10^-8 31.2±1.53 44.0^* +23.9^* 10^-7 3×10^-7 14.5±0.81 74.0^* +44.7^*

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.05

(·)p＜0.01

实施例38.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中米托蒽醌/化合物I-1e制剂的细胞毒性评价涉及米托蒽醌∶化合物I-1e的摩尔比

将化合物I-1e的钠盐(2mg)的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于水中。将等分的所得溶液与等分的米托蒽醌水溶液混合。

按米托蒽醌∶化合物I-1e的摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10，制备所述制剂溶于水中的原液。从这些溶液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。米托蒽醌的浓度等于10^-5M。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中米托蒽醌终浓度等于10^-7M。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(55.6±2.88)×10³细胞。

经浓度为100nM的米托蒽醌处理的培养物含有(22.9±1.49)×10³细胞，细胞生长抑制为58.8％(p＜0.001)。

经米托蒽醌/化合物I-1e摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10的制剂溶液处理的MDA-MB-231细胞培养物具有以下活细胞数：

1∶3：(13.7±1.05)×10³，细胞生长抑制为75.4％(p＜0.001)，与米托蒽醌细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加40.2％(p＜0.001)；

1∶6：(12.5±0.98)×10³，细胞生长抑制为77.5％(p＜0.001)，与米托蒽醌细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加45.4％(p＜0.001)；

1∶10：(11.9±0.82)×10³，细胞生长抑制为78.6％(p＜0.001)，与米托蒽醌细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加48.0％(p＜0.001)。

实施例39.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中米托蒽醌/化合物I-1e制剂(米托蒽醌/化合物I-1e摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中米托蒽醌/化合物I-1e的终浓度

从该原液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的制剂的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中米托蒽醌终浓度为1×10^-9mol/L、1×10^-8mol/L和1×10^-7mol/L。

在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表13)。

表13.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中米托蒽醌/化合物I-1e制剂(米托蒽醌/化合物I-1e摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中米托蒽醌/化合物I-1e的终浓度

药物制剂肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 米托蒽醌， mol/L 化合物 I-1e， mol/L 对照 0 0 57.8±1.97 - - - 米托蒽醌 10^-9 0 32.6±1.99 43.6^* - 5.0×10^-9 10^-8 0 27.4±1.90 52.6^* - 10^-7 0 22.5±1.63 61.1^* - 制剂 10^-9 6×10^-9 25.1±1.88 56.6^* +23.0· 2.5×10^-10 (b) 10^-8 6×10^-8 18.3±0.55 68.3^* +33.2^* 10^-7 6×10^-7 11.6±0.86 79.9^* +48.4^*

(b)外推值。

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.01

(·)p＜0.02

实施例40.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中米托蒽醌/化合物II-1e制剂的细胞毒性评价涉及米托蒽醌∶化合物II-1e的摩尔比

将化合物II-1e的钠盐(2mg)的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于水中。将等分的所得溶液与等分的米托蒽醌水溶液混合。

按米托蒽醌∶化合物II-1e的摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10，制备所述制剂溶于水中的原液。从这些溶液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。米托蒽醌的浓度等于10^-5M。

培养3天后，对照培养物含有(55.6±2.88)×10³细胞。

经浓度为100nM的米托蒽醌处理的培养物含有(22.9±1.49)×10³细胞，细胞生长抑制为58.8％(p＜0.001)。

经米托蒽醌/化合物II-1e摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10的制剂溶液处理的MDA-MB-231细胞培养物具有以下活细胞数：

1∶3：(14.0±1.23)×10³，细胞生长抑制为74.8％(p＜0.001)，与米托蒽醌细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加38.9％(p＜0.001)；

1∶6：(12.9±0.62)×10³，细胞生长抑制为76.8％(p＜0.001)，与米托蒽醌细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加43.7％(p＜0.001)；

1∶10：(12.3±1.01)×10³，细胞生长抑制为77.9％(p＜0.001)，与米托蒽醌细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加46.3％(p＜0.001)。

实施例41.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中米托蒽醌/化合物II-1e制剂(米托蒽醌∶化合物II-1e摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中米托蒽醌/化合物II-1e的终浓度

在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表14)。

表14.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中米托蒽醌/化合物II-1e制剂(米托蒽醌∶化合物II-1e摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中米托蒽醌/化合物II-1e的终浓度

药物制剂肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 米托蒽醌， mol/L 化合物 II-1e， mol/L 对照 0 0 57.8±1.97 - - - 米托蒽醌 10^-9 0 32.6±1.99 43.6^* - 5.0×10^-9 10^-8 0 27.4±1.90 52.6^* - 10^-7 0 22.5±1.63 61.1^* - 制剂 10^-9 6×10^-9 26.2±1.43 54.7 +19.6· 4.0×10^-10 (b) 10^-8 6×10^-8 19.5±1.12 66.3 +28.8^** 10^-7 6×10^-7 13.0±0.91 77.5 +42.2^*

(b)外推值。

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.01

(·)p＜0.05

实施例42.在人前列腺癌DU 145细胞系培养物中米托蒽醌/化合物I-1f制剂的细胞毒性评价涉及米托蒽醌∶化合物I-1f的摩尔比

将化合物I-1f的钠盐(2mg)的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于水中。将等分的所得溶液与等分的米托蒽醌水溶液混合。

按米托蒽醌∶化合物I-1f的摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10，制备所述制剂溶于水中的原液。从这些溶液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。米托蒽醌的浓度等于10^-5M。

接种后第1天，用药物溶液处理DU 145细胞培养物。将等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中米托蒽醌终浓度等于10^-7M。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(48.2±3.14)×10³细胞。

经浓度为100nM的米托蒽醌处理的培养物含有(19.2±1.16)×10³细胞，细胞生长抑制为60.2％(p＜0.001)。

经米托蒽醌/化合物I-1f摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10的制剂溶液处理的DU 145细胞培养物具有以下活细胞数：

1∶3：(9.9±0.48)×10³，细胞生长抑制为79.5％(p＜0.001)，与米托蒽醌细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加48.4％(p＜0.001)；

1∶6：(9.3±0.54)×10³，细胞生长抑制为80.7％(p＜0.001)，与米托蒽醌细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加51.6％(p＜0.001)；

1∶10：(8.8±0.65)×10³，细胞生长抑制为81.7％(p＜0.001)，与米托蒽醌细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加54.2％(p＜0.001)。

实施例43.在人前列腺癌DU 145细胞系培养物中米托蒽醌/化合物I-1f制剂(米托蒽醌∶化合物I-1f摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中米托蒽醌/化合物I-1f的终浓度

从该原液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。接种后第1天，用药物溶液处理DU 145细胞培养物。将不同浓度的制剂的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中米托蒽醌终浓度为1×10^-9mol/L、1×10^-8mol/L和1×10^-7mol/L。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表15)。

表15.在人前列腺癌DU 145细胞系培养物中米托蒽醌/化合物I-1f制剂(米托蒽醌∶化合物I-1f摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中米托蒽醌/化合物I-1f的终浓度

药物制剂肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 米托蒽醌， mol/L 化合物 I-1f， mol/L 对照 0 0 57.5±3.03 - - 米托蒽醌 10^-9 0 46.5±2.32 19.1· - 3.2×10^-8 10^-8 0 35.0±1.70 39.1^* - 10^-7 0 23.1±1.34 59.8^* - 制剂 10^-9 6×10^-9 37.9±2.86 34.1^* +18.5·· 5.2×10^-9 10^-8 6×10^-8 25.2±0.93 56.2^* +28.0^* 10^-7 6×10^-7 11.4±0.74 80.2^* +50.6^*

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.01

(·)p＜0.02

(··)p＜0.05

实施例44.在人前列腺癌DU 145细胞系培养物中米托蒽醌/化合物II-1f制剂的细胞毒性评价涉及米托蒽醌∶化合物II-1f的摩尔比

将化合物II-1f的钠盐(2mg)的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于水中。将等分的所得溶液与等分的米托蒽醌水溶液混合。

按米托蒽醌∶化合物II-1f的摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10，制备所述制剂溶于水中的原液。从这些溶液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。米托蒽醌的浓度等于10^-5M。

培养3天后，对照培养物含有(48.2±3.14)×10³细胞。

经浓度为100nM的米托蒽醌处理的培养物含有(19.2±1.16)×10³细胞，细胞生长抑制为60.2％(p＜0.001)。

经米托蒽醌/化合物II-1f摩尔比等于1∶3、1∶6和1∶10的制剂溶液处理的DU 145细胞培养物具有以下活细胞数：

1∶3：(10.9±0.83)×10³，细胞生长抑制为77.4％(p＜0.001)，与米托蒽醌细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加43.2％(p＜0.001)；

1∶6：(10.4±0.70)×10³，细胞生长抑制为78.4％(p＜0.001)，与米托蒽醌细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加45.8％(p＜0.001)；

1∶10：(9.7±0.53)×10³，细胞生长抑制为79.9％(p＜0.001)，与米托蒽醌细胞生长抑制相比，细胞生长抑制增加49.5％(p＜0.001)。

实施例45.在人前列腺癌DU 145细胞系培养物中米托蒽醌/化合物II-1f制剂(米托蒽醌∶化合物II-1f摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中米托蒽醌/化合物II-1f的终浓度

从该原液，制备用于加入到培养物中的溶于含5％FBS的培养基的工作液。接种后第1天，用药物溶液处理DU 145细胞培养物。将不同浓度的制剂的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中米托蒽醌终浓度为1×10^-9mol/L、1×10^-8mol/L和1×10^-7mol/L。

在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表16)。

表16.在人前列腺癌DU 145细胞系培养物中米托蒽醌/化合物II-1f制剂(米托蒽醌∶化合物II-1f摩尔比为1∶6)的细胞毒性评价涉及培养物中米托蒽醌/化合物II-1f的终浓度

药物制剂肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 米托蒽醌， mol/L 化合物 II-1f， mol/L 对照 0 0 57.5±3.03 - - - 米托蒽醌 10^-9 0 46.5±2.32 19.1· - 3.2×10^-8 10^-8 0 35.0±1.70 39.1^* - 10^-7 0 23.1±1.34 59.8^* - 制剂 10^-9 6×10^-9 39.3±2.15 31.7^* +15.5·· 7.2×10^-9 10^-8 6×10^-8 27.1±1.57 52.9^* +22.6^** 10^-7 6×10^-7 13.7±0.88 76.2^* +40.7^*

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.01

(·)p＜0.02

(··)p＜0.05

实施例46.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物I-1g的细胞毒性评价涉及培养物中化合物I-1g的终浓度

通过将干物质溶于盐水中，制备化合物I-1g的原液(1mg/ml)。从该溶液，通过连续稀释制备溶于含5％FBS的MEM的不同浓度的化合物I-1f的工作液，用于加入到培养物中。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的化合物I-1g的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物I-1g终浓度在10^-9-10^-7mol/L之间。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物I-1g试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(56.5±2.35)×10³细胞。

经化合物I-1g溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：(40.8±2.14)×10³，细胞生长抑制为27.8％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：(36.2±1.95)×10³，细胞生长抑制为35.9％(p＜0.001)；

10^-7mol/L：(32.1±1.72)×10³，细胞生长抑制为43.2％(p＜0.001)。

因此，化合物I-1g被证明对人乳腺癌细胞发挥显著细胞毒性作用。当增加化合物I-1g的浓度时，细胞生长抑制程度增加43.2％(p＜0.001)。

实施例47.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物I-1h的细胞毒性评价涉及培养物中化合物I-1h的终浓度

通过将干物质溶于盐水中，制备化合物I-1h的原液(1mg/ml)。从该溶液，通过连续稀释制备溶于含5％FBS的MEM的不同浓度的化合物I-1h的工作液，用于加入到培养物中。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的化合物I-1h的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物I-1h终浓度在10^-9-10^-7mol/L之间。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物I-1h试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(56.5±2.35)×10³细胞。

经化合物I-1h溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：(38.4±2.11)×10³，细胞生长抑制为32.0％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：(34.1±1.89)×10³，细胞生长抑制为39.6％(p＜0.001)；

10^-7mol/L：(30.3±1.55)×10³，细胞生长抑制为46.4％(p＜0.001)。

因此，化合物I-1h被证明对人乳腺癌细胞发挥显著细胞毒性作用。当增加化合物I-1h的浓度时，细胞生长抑制程度增加46.4％(p＜0.001)。

实施例48.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物I-3a的细胞毒性评价涉及培养物中化合物I-3a的终浓度

通过将干物质溶于盐水中，制备化合物I-3a的原液(1mg/ml)。从该溶液，通过连续稀释制备溶于含5％FBS的MEM的不同浓度的化合物I-3a的工作液，用于加入到培养物中。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的化合物I-3a的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物I-3a终浓度在10^-9-10^-7mol/L之间。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物I-3a试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(56.5±2.35)×10³细胞。

经化合物I-3a溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：(40.0±2.06)×10³，细胞生长抑制为29.2％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：(34.9±1.64)×10³，细胞生长抑制为38.2％(p＜0.001)；

10^-7mol/L：(28.8±1.15)×10³，细胞生长抑制为49.0％(p＜0.001)。

因此，化合物I-3a被证明对人乳腺癌细胞发挥显著细胞毒性作用。当增加化合物I-3a的浓度时，细胞生长抑制程度增加49.0％(p＜0.001)。

实施例49.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物I-3f的细胞毒性评价涉及培养物中化合物I-3f的终浓度

通过将干物质溶于盐水中，制备化合物I-3f的原液(1mg/ml)。从该溶液，通过连续稀释制备溶于含5％FBS的MEM的不同浓度的化合物I-3f的工作液，用于加入到培养物中。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的化合物I-3f的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物I-3f终浓度在10^-9-10^-7mol/L之间。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物I-3f试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(56.5±2.35)×10³细胞。

经化合物I-3f溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：(33.1±1.90)×10³，细胞生长抑制为41.4％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：(29.0±1.32)×10³，细胞生长抑制为48.7％(p＜0.001)；

10^-7mol/L：(25.3±0.76)×10³，细胞生长抑制为55.2％(p＜0.001)。

因此，化合物I-3f被证明对人乳腺癌细胞发挥显著细胞毒性作用。当增加化合物I-3f的浓度时，细胞生长抑制程度增加55.2％(p＜0.001)。

实施例50.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物II-3b的细胞毒性评价涉及培养物中化合物II-3b的终浓度

通过将干物质溶于盐水中，制备化合物II-3b的原液(1mg/ml)。从该溶液，通过连续稀释制备溶于含5％FBS的MEM的不同浓度的化合物II-3b的工作液，用于加入到培养物中。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将不同浓度的化合物II-3b的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物II-3b终浓度在10^-9-10^-7mol/L之间。在对照培养物中，加入2μL含5％FBS的培养基作为溶剂对照。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物II-3b试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(56.5±2.35)×10³细胞。

经化合物II-3b溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：(29.5±1.21)×10³，细胞生长抑制为47.8％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：(25.2±1.27)×10³，细胞生长抑制为55.4％(p＜0.001)；

10^-7mol/L：(21.4±0.88)×10³，细胞生长抑制为62.1％(p＜0.001)。

因此，化合物II-3b被证明对人乳腺癌细胞发挥显著细胞毒性作用。当增加化合物II-3b的浓度时，细胞生长抑制程度增加62.1％(p＜0.001)。

实施例51.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物I-1细胞毒性比较性评价涉及其原液在含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和生理盐水(B)中的稀释度

将化合物I-1的钠盐的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将一份所得干燥膜状物溶于含2.3mM CaCl₂的盐水中，另一份溶于生理盐水中，形成浓度为10^-3M的化合物I-1的原液。从这些原液制备溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的化合物I-1浓度为10^-5M的两种工作液。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的不同浓度的化合物I-1的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物I-1终浓度为1×10^-9mol/L至1×10^-7mol/L。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物I-1试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(56.9±3.30)×10³细胞。

经溶于A和B的化合物I-1溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：A(35.9±1.38)×10³，细胞生长抑制为36.9％(p＜0.001)

B(42.8±1.56)×10³，细胞生长抑制为24.8％(p＜0.01)

I-1的细胞生长抑制在A中比在B中增加16.1％(p＜0.01)；

10^-8mol/L：A(34.0±1.32)×10³，细胞生长抑制为40.2％(p＜0.001)

B(40.0±1.35)×10³，细胞生长抑制为29.7％(p＜0.001)

I-1的细胞生长抑制在A中比在B中增加15.0％(p＜0.01)；

10^-7mol/L：A(33.3±1.17)×10³，细胞生长抑制为41.5％(p＜0.001)

B(39.1±1.41)×10³，细胞生长抑制为31.3％(p＜0.001)

I-1的细胞生长抑制在A中比在B中增加14.8％(p＜0.01)。

实施例52.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物II-1细胞毒性比较性评价涉及其原液在含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和生理盐水(B)中的稀释度

将化合物II-1的钠盐的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将一份所得干燥膜状物溶于含2.3mM CaCl₂的盐水中，另一份溶于生理盐水中，形成浓度为10^-3M的化合物II-1的原液。从这些原液制备溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的化合物II-1浓度为10^-5M的两种工作液。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的不同浓度的化合物II-1的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物II-1终浓度为1×10^-9mol/L至1×10^-7mol/L。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物II-1试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(56.9±3.30)×10³细胞。

经溶于A和B的化合物II-1溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：A(35.6±1.29)×10³，细胞生长抑制为37.4％(p＜0.001)

B(42.4±1.63)×10³，细胞生长抑制为25.5％(p＜0.01)

II-1的细胞生长抑制在A中比在B中增加16.0％(p＜0.01)；

10^-8mol/L：A(33.4±1.20)×10³，细胞生长抑制为41.3％(p＜0.001)

B(39.5±1.46)×10³，细胞生长抑制为30.6％(p＜0.001)

II-1的细胞生长抑制在A中比在B中增加15.4％(p＜0.01)；

10^-7mol/L：A(32.6±1.09)×10³，细胞生长抑制为42.7％(p＜0.001)

B(38.6±1.25)×10³，细胞生长抑制为32.2％(p＜0.001)

II-1的细胞生长抑制在A中比在B中增加15.5％(p＜0.01)。

实施例53.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物II-1a细胞毒性比较性评价涉及其原液在含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和生理盐水(B)中的稀释度

将化合物II-1a的钠盐的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将一份所得干燥膜状物溶于含2.3mM CaCl₂的盐水中，另一份溶于生理盐水中，形成浓度为10^-3M的化合物II-1a的原液。从这些原液制备溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的化合物II-1a浓度为10^-5M的两种工作液。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的不同浓度的化合物II-1a的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物II-1终浓度为1×10^-9mol/L至1×10^-7mol/L。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物II-1a试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(57.3±1.70)×10³细胞。

经溶于A和B的化合物II-1a溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：A(36.8±1.74)×10³，细胞生长抑制为35.8％(p＜0.001)

B(44.1±2.24)×10³，细胞生长抑制为23.0％(p＜0.001)

II-1a的细胞生长抑制在A中比在B中增加16.6％(p＜0.05)；

10^-8mol/L：A(33.4±1.25)×10³，细胞生长抑制为41.7％(p＜0.001)

B(39.4±2.28)×10³，细胞生长抑制为31.2％(p＜0.001)

II-1a的细胞生长抑制在A中比在B中增加15.2％(p＜0.05)；

10^-7mol/L：A(29.3±0.76)×10³，细胞生长抑制为48.9％(p＜0.001)

B(34.1±1.97)×10³，细胞生长抑制为40.5％(p＜0.001)

II-1a的细胞生长抑制在A中比在B中增加14.1％(p＜0.05)。

实施例54.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物I-1f细胞毒性比较性评价涉及其原液在含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和生理盐水(B)中的稀释度

将化合物I-1f的钠盐的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将一份所得干燥膜状物溶于含2.3mM CaCl₂的盐水中，另一份溶于生理盐水中，形成浓度为10^-3M的化合物I-1f的原液。从这些原液制备溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的化合物I-1f浓度为10^-5M的两种工作液。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的不同浓度的化合物I-1f的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物I-1f终浓度为1×10^-9mol/L至1×10^-7mol/L。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物I-1f试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(57.4±3.10)×10³细胞。

经溶于A和B的化合物I-1f溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：A(35.3±1.34)×10³，细胞生长抑制为38.6％(p＜0.001)

B(42.6±0.80)×10³，细胞生长抑制为25.8％(p＜0.001)

I-1f的细胞生长抑制在A中比在B中增加17.1％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：A(30.8±1.23)×10³，细胞生长抑制为46.3％(p＜0.001)

B(36.7±0.75)×10³，细胞生长抑制为36.1％(p＜0.001)

I-1f的细胞生长抑制在A中比在B中增加16.1％(p＜0.01)；

10^-7mol/L：A(26.8±0.63)×10³，细胞生长抑制为53.3％(p＜0.001)

B(31.6±0.89)×10³，细胞生长抑制为44.9％(p＜0.001)

I-1f的细胞生长抑制在A中比在B中增加15.2％(p＜0.002)。

实施例55.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物II-1f细胞毒性比较性评价涉及其原液在含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和生理盐水(B)中的稀释度

将化合物II-1f的钠盐的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将一份所得干燥膜状物溶于含2.3mM CaCl₂的盐水中，另一份溶于生理盐水中，形成浓度为10^-3M的化合物II-1f的原液。从这些原液制备溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的化合物II-1f浓度为10^-5M的两种工作液。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的不同浓度的化合物II-1f的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物II-1f终浓度为1×10^-9mol/L至1×10^-7mol/L。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物II-1f试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(57.4±3.10)×10³细胞。

经溶于A和B的化合物II-1f溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：A(34.4±1.20)×10³，细胞生长抑制为40.1％(p＜0.001)

B(41.8±1.46)×10³，细胞生长抑制为27.2％(p＜0.001)

II-1f的细胞生长抑制在A中比在B中增加17.7％(p＜0.01)；

10^-8mol/L：A(30.2±0.75)×10³，细胞生长抑制为47.4％(p＜0.001)

B(36.0±1.28)×10³，细胞生长抑制为37.3％(p＜0.001)

II-1f的细胞生长抑制在A中比在B中增加16.1％(p＜0.01)；

10^-7mol/L：A(26.3±0.68)×10³，细胞生长抑制为54.2％(p＜0.001)

B(31.1±0.96)×10³，细胞生长抑制为45.8％(p＜0.001)

II-1f的细胞生长抑制在A中比在B中增加15.4％(p＜0.002)。

实施例56.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物I-1g细胞毒性比较性评价涉及其原液在含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和生理盐水(B)中的稀释度

将化合物I-1g的钠盐的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将一份所得干燥膜状物溶于含2.3mM CaCl₂的盐水中，另一份溶于生理盐水中，形成浓度为10^-3M的化合物I-1g的原液。从这些原液制备溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的化合物I-1g浓度为10^-5M的两种工作液。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的不同浓度的化合物I-1g的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物I-1g终浓度为1×10^-9mol/L至1×10^-7mol/L。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物I-1g试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(55.8±1.37)×10³细胞。

经溶于A和B的化合物I-1g溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：A(39.9±1.76)×10³，细胞生长抑制为28.5％(p＜0.001)

B(53.5±3.21)×10³，细胞生长抑制为4.2％(p＞0.05)

I-1g的细胞生长抑制在A中比在B中增加25.4％(p＜0.01)；

10^-8mol/L：A(35.3±1.94)×10³，细胞生长抑制为36.7％(p＜0.001)

B(47.9±2.86)×10³，细胞生长抑制为14.2％(p＜0.05)

I-1g的细胞生长抑制在A中比在B中增加26.3％(p＜0.01)；

10^-7mol/L：A(31.7±2.13)×10³，细胞生长抑制为43.2％(p＜0.001)

B(43.1±2.03)×10³，细胞生长抑制为22.8％(p＜0.001)

I-1g的细胞生长抑制在A中比在B中增加26.5％(p＜0.01)。

实施例57.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物I-1h细胞毒性比较性评价涉及其原液在含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和生理盐水(B)中的稀释度

将化合物I-1h的钠盐的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将一份所得干燥膜状物溶于含2.3mM CaCl₂的盐水中，另一份溶于生理盐水中，形成浓度为10^-3M的化合物I-1h的原液。从这些原液制备溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的化合物I-1h浓度为10^-5M的两种工作液。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的不同浓度的化合物I-1h的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物I-1h终浓度为1×10^-9mol/L至1×10^-7mol/L。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物I-1h试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(55.8±1.37)×10³细胞。

经溶于A和B的化合物I-1h溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：A(40.9±2.47)×10³，细胞生长抑制为26.7％(p＜0.001)

B(51.9±3.46)×10³，细胞生长抑制为7.0％(p＞0.05)

I-1h的细胞生长抑制在A中比在B中增加21.1％(p＜0.05)；

10^-8mol/L：A(36.7±2.04)×10³，细胞生长抑制为34.2％(p＜0.001)

B(46.1±2.65)×10³，细胞生长抑制为17.4％(p＜0.02)

I-1h的细胞生长抑制在A中比在B中增加20.4％(p＜0.02)；

10^-7mol/L：A(32.5±1.26)×10³，细胞生长抑制为41.8％(p＜0.001)

B(41.3±0.99)×10³，细胞生长抑制为26.0％(p＜0.001)

I-1h的细胞生长抑制在A中比在B中增加21.3％(p＜0.001)。

实施例58.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物I-3f细胞毒性比较性评价涉及其原液在含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和生理盐水(B)中的稀释度

将化合物I-3f的钠盐的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将一份所得干燥膜状物溶于含2.3mM CaCl₂的盐水中，另一份溶于生理盐水中，形成浓度为10^-3M的化合物I-3f的原液。从这些原液制备溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的化合物I-3f浓度为10^-5M的两种工作液。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的不同浓度的化合物I-3f的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物I-3f终浓度为1×10^-9mol/L至1×10^-7mol/L。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物I-3f试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(55.4±1.76)×10³细胞。

经溶于A和B的化合物I-3f溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：A(33.8±2.36)×10³，细胞生长抑制为39.0％(p＜0.001)

B(43.3±2.88)×10³，细胞生长抑制为21.8％(p＞0.01)

I-3f的细胞生长抑制在A中比在B中增加21.9％(p＜0.05)；

10^-8mol/L：A(29.5±1.14)×10³，细胞生长抑制为46.8％(p＜0.001)

B(37.6±1.52)×10³，细胞生长抑制为32.1％(p＜0.001)

I-3f的细胞生长抑制在A中比在B中增加21.5％(p＜0.002)；

10^-7mol/L：A(25.7±0.90)×10³，细胞生长抑制为53.6％(p＜0.001)

B(32.8±0.99)×10³，细胞生长抑制为40.8％(p＜0.001)

I-3f的细胞生长抑制在A中比在B中增加21.6％(p＜0.001)。

实施例59.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中化合物II-3b细胞毒性比较性评价涉及其原液在含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和生理盐水(B)中的稀释度

将化合物II-3b的钠盐的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将一份所得干燥膜状物溶于含2.3mM CaCl₂的盐水中，另一份溶于生理盐水中，形成浓度为10^-3M的化合物II-3b的原液。从这些原液制备溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的化合物II-3b浓度为10^-5M的两种工作液。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的不同浓度的化合物II-3b的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物II-3b终浓度为1×10^-9mol/L至1×10^-7mol/L。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算MDA-MB-231细胞的生长抑制程度，以便评价化合物II-3b试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(55.4±1.76)×10³细胞。

经溶于A和B的化合物II-3b溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：A(29.9±1.23)×10³，细胞生长抑制为46.0％(p＜0.001)

B(41.4±2.15)×10³，细胞生长抑制为25.3％(p＞0.001)

II-3b的细胞生长抑制在A中比在B中增加27.8％(p＜0.001)；

10^-8mol/L：A(25.7±1.13)×10³，细胞生长抑制为53.6％(p＜0.001)

B(35.6±1.97)×10³，细胞生长抑制为35.7％(p＜0.001)

II-3b的细胞生长抑制在A中比在B中增加27.8％(p＜0.002)；

10^-7mol/L：A(21.9±0.98)×10³，细胞生长抑制为60.5％(p＜0.001)

B(30.8±1.60)×10³，细胞生长抑制为44.4％(p＜0.001)

II-3b的细胞生长抑制在A中比在B中增加28.9％(p＜0.001)。

实施例60.在人肺癌A549细胞系培养物中化合物II-1a细胞毒性比较性评价涉及其原液在含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和生理盐水(B)中的稀释度

接种后第1天，用药物溶液处理A549细胞培养物。将溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)和溶于生理盐水(B)的不同浓度的化合物II-1a的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中化合物II-1a终浓度为1×10^-9mol/L至1×10^-7mol/L。连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，计算A549细胞的生长抑制程度，以便评价化合物II-1a试验溶液的细胞毒性。

培养3天后，对照培养物含有(55.8±1.90)×10³细胞。

经溶于A和B的化合物II-1a溶液处理的培养物具有以下活细胞数：

10^-9mol/L：A(44.4±2.03)×10³，细胞生长抑制为20.4％(p＜0.002)

B(51.8±2.48)×10³，细胞生长抑制为7.2％(p＞0.05)

II-1a的细胞生长抑制在A中比在B中增加14.3％(p＜0.05)；

10^-8mol/L：A(40.8±1.14)×10³，细胞生长抑制为26.9％(p＜0.001)

B(47.1±1.43)×10³，细胞生长抑制为15.6％(p＜0.01)

II-1a的细胞生长抑制在A中比在B中增加13.4％(p＜0.01)；

10^-7mol/L：A(36.6±1.13)×10³，细胞生长抑制为34.4％(p＜0.001)

B(41.5±1.80)×10³，细胞生长抑制为25.6％(p＜0.001)

II-1a的细胞生长抑制在A中比在B中增加11.8％(p＜0.05)。

实施例61.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中多西他赛/化合物I-1a+化合物II-1a制剂(多西他赛∶(化合物I-1a+化合物II-1a)摩尔比为1∶(2.5+2.5))的细胞毒性比较性评价涉及其原液在含2.3mMCaCl₂的盐水(A)、生理盐水(B)和含5％FBS的培养基(C)中的稀释度

将化合物I-1a的钠盐和化合物II-1a的钠盐的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液混合并在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于甲醇中。将一等份多西他赛甲醇溶液加入到含有化合物I-1a和化合物II-1a甲醇溶液的3种相同溶液中，形成具有多西他赛∶(化合物I-1a+化合物II-1a)为1∶(2.5+2.5)的所需摩尔比的溶液。搅拌后，蒸发有机溶剂。将一份所得干燥膜状物溶于含2.3mM CaCl₂的盐水中，另一份溶于生理盐水中。在制剂的这三种原液中多西他赛的浓度都等于10^-3M。从这些原液，制备溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)、生理盐水(B)和含5％FBS的培养基(C)的制剂的三种工作液，用于加入到培养物中。在这三种工作液中多西他赛的浓度都等于10^-5M。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)、生理盐水(B)和含5％FBS的培养基的不同浓度的制剂的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中多西他赛终浓度为1×10^-9mol/L、1×10^-8mol/L和1×10^-7mol/L。

连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表17)。

表17.

药物多西他赛， mol/L 肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 阴性对照 0 57.9±2.14 多西他赛 10^-9 36.8±1.70 36.4^* 4.6×10^-9 10^-8 25.3±1.18 56.3^* 10^-7 13.6±0.72 76.5^* 溶于(A)的制剂 10^-9 26.6±0.98 54.1^* +27.7^* 8.0×10^-10 (b) 10^-8 15.1±0.74 73.9^* +40.3^* 10^-7 8.0±0.41 86.2^* +41.2^* 溶于(B)的制剂 10^-9 31.1±1.56 46.3^* +15.5^** 1.4×10^-9 10^-8 18.9±0.86 67.4^* +25.3· 10^-7 11.2±0.65 80.7^* +17.6^** 溶于(C)的制剂 10^-9 26.0±1.31 55.1^* +29.3^* 6.0×10^-10 (b) 10^-8 13.9±0.62 76.0^* +45.1^* 10^-7 7.8±0.53 86.5^* +42.6^*

(b)外推

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.05

(·)p＜0.002

实施例62.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中多柔比星/化合物I-1a+化合物II-1a制剂(多柔比星∶(化合物I-1a+化合物II-1a)摩尔比为1∶(1.5+1.5))的细胞毒性比较性评价涉及其原液在含2.3mMCaCl₂的盐水(A)、生理盐水(B)和含5％FBS的培养基(C)中的稀释度

将化合物I-1a的钠盐和化合物II-1a的钠盐的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液混合并在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于水中。将一等份多柔比星水溶液加入到含有化合物I-1a和化合物II-1a水溶液的3种相同溶液中，形成具有多柔比星∶(化合物I-1a+化合物II-1a)的所需摩尔比为1∶(1.5+1.5)的溶液。在制剂的这三种原液中多柔比星的浓度都等于10^-3M。

从这些原液，制备溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)、生理盐水(B)和含5％FBS的培养基(C)的制剂的三种工作液，用于加入到培养物中。在这三种工作液中多柔比星的浓度都等于10^-5M。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)、生理盐水(B)和含5％FBS的培养基的不同浓度的制剂的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中多柔比星终浓度为1×10^-9mol/L、1×10^-8mol/L和1×10^-7mol/L。

连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表18)。

表18

药物多柔比星， mol/L 肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 阴性对照 0 57.2±1.60 多柔比星 10^-9 46.1±2.07 19.4· - 6.2×10^-8 10^-8 40.4±1.65 29.4^* - 10^-7 25.5±0.71 55.4^* - 溶于(A)的制剂 10^-9 30.3±1.87 47.0^* +34.3^* 3.4×10^-9 10^-8 26.0±1.08 54.5^* +35.6^* 10^-7 13.2±0.25 76.9^* +48.2^* 溶于(B)的制剂 10^-9 38.3±1.34 33.0^* +16.9^** 2.2×10^-8 10^-8 33.1±1.31 42.1^* +18.1^** 10^-7 19.2±1.14 66.4^* +24.7^* 溶于(C)的制剂 10^-9 29.5±1.26 48.4^* +36.0^* 1.8×10^-9 10^-8 25.3±0.24 55.8^* +37.4^* 10^-7 12.5±0.69 78.1^* +51.0^*

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.01

(·)p＜0.002

实施例63.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中多柔比星/化合物I-1f制剂(多柔比星∶化合物I-1f摩尔比为1∶3)的细胞毒性比较性评价涉及其原液在含2.3mM CaCl₂的盐水(A)、生理盐水(B)和含5％FBS的培养基(C)中的稀释度

将化合物I-1f的钠盐的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于水中。将一等份多柔比星水溶液加入到含有化合物I-1f水溶液的3种相同溶液中，形成具有多柔比星∶化合物I-1f的所需摩尔比为1∶3的溶液。在制剂的这三种原液中多柔比星的浓度都等于10^-3M。

连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表19)。

表19

药物多柔比星， mol/L 肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 阴性对照 0 56.4±1.78 多柔比星 10^-9 45.6±1.38 19.1^* 6.4×10^-8 10^-8 41.0±0.96 27.3^* 10^-7 25.2±1.56 55.3^* 溶于(A)的制剂 10^-9 30.3±1.55 46.3^* +33.6^* 3.7×10^-9 10^-8 25.5±1.15 54.8^* +37.8^* 10^-7 10.8±0.55 80.9^* +57.1^* 溶于(B)的制剂 10^-9 36.7±1.07 34.9^* +19.5^* 2.1×10^-8 10^-8 32.6±0.93 42.2* +20.5^* 10^-7 16.8±0.91 70.2^* +33.3^* 溶于(C)的制剂 10^-9 29.5±1.14 47.7^* +35.3^* 2.1×10^-9 10^-8 24.6±0.53 56.4^* +40.0^* 10^-7 10.0±0.42 82.3^* +60.3^*

(^*)p＜0.001

实施例64.在人肺癌A549细胞系培养物中多西他赛/化合物I-1a+化合物II-1a制剂(多西他赛∶(化合物I-1a+化合物II-1a)摩尔比为1∶(2.5+2.5))的细胞毒性比较性评价涉及其原液在含2.3mM CaCl₂的盐水(A)、生理盐水(B)和含5％FBS的培养基(C)中的稀释度

将化合物I-1a的钠盐和化合物II-1a的钠盐的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液混合并在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于甲醇中。将一等份多西他赛甲醇溶液加入到含有化合物I-1a和化合物II-1a甲醇溶液的3种相同溶液中，形成具有多西他赛∶(化合物I-1a+化合物II-1a)的所需摩尔比为1∶(2.5+2.5)的溶液。搅拌后，蒸发有机溶剂。将一份所得干燥膜状物溶于含2.3mM CaCl₂的盐水中，另一份溶于生理盐水中。在制剂的这三种原液中多西他赛的浓度都等于10^-3M。从这些原液，制备溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)、生理盐水(B)和含5％FBS的培养基(C)的制剂的三种工作液，用于加入到培养物中。在这三种工作液中多西他赛的浓度都等于10^-5M。

接种后第1天，用药物溶液处理A549细胞培养物。将溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)、生理盐水(B)和含5％FBS的培养基的不同浓度的制剂的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中多西他赛终浓度为1×10^-9mol/L、1×10^-8mol/L和1×10^-7mol/L。

连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表20)。

表20

药物多西他赛， mol/L 肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 阴性对照 0 55.8±1.90 多西他赛 10^-9 35.7±1.51 36.0^* 2.2×10^-9 10^-8 16.2±0.75 71.0^* 10^-7 11.0±0.73 80.3^* 溶于(A)的制剂 10^-9 27.9±1.03 50.0^* +21.8· 1.0×10^-9 10^-8 9.5±0.53 83.0^* +41.4^* 10^-7 6.6±0.45 88.2^* +40.0^* 溶于(B)的制剂 10^-9 32.4±1.64 41.9^* +9.2° 1.5×10^-9 10^-8 12.8±0.65 77.1^* +21.0^** 10^-7 8.5±0.60 84.8^* +22.7^*** 溶于(C)的制剂 10^-9 27.7±1.22 50.4^* +22.4· 1.0×10^-9 10^-8 9.3±0.58 83.3^* +42.6^* 10^-7 6.5±0.47 88.4^* +40.9^*

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.01

(^***)p＜0.05

(·)p＜0.002

(°)p＞0.05

实施例65.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中紫杉醇/化合物I-1制剂(紫杉醇∶化合物I-1摩尔比为1∶6)的细胞毒性比较性评价涉及其原液在含2.3mM CaCl₂的盐水(A)、生理盐水(B)和含5％FBS的培养基(C)中的稀释度

将化合物I-1的钠盐转化成化合物I-1的酸形式并溶于甲醇中。将一等份紫杉醇甲醇溶液加入到化合物I-1甲醇溶液的3种相同溶液中，形成具有紫杉醇∶化合物I-1的所需摩尔比为1∶3的溶液。

搅拌后，蒸发有机溶剂。将一份所得干燥膜状物溶于含2.3mMCaCl₂并含有化合物I-1的钠盐的盐水中，另一份溶于含有化合物I-1的钠盐的生理盐水中，形成具有紫杉醇∶化合物I-1的所需摩尔比为1∶6的制剂的原液。在制剂的所有这三种原液中紫杉醇的浓度都等于10_-3M。

从这些原液，制备溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)、生理盐水(B)和含5％FBS的培养基(C)的制剂的三种工作液，用于加入到培养物中。在这三种工作液中紫杉醇的浓度都等于10^-5M。

接种后第1天，用药物溶液处理MDA-MB-231细胞培养物。将溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)、生理盐水(B)和含5％FBS的培养基的不同浓度的制剂的等分工作液(2μL)加入到200μL培养物中，使培养物中紫杉醇终浓度为1×10^-9mol/L、1×10^-8mol/L和1×10^-7mol/L。

连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表21)。

表21

药物紫杉醇， mol/L 肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 阴性对照 0 56.8±2.94 紫杉醇 10^-9 41.3±1.93 27.3· 1.7×10^-8 10^-8 32.2±1.60 43.3^* 10^-7 16.0±0.72 71.8^* 溶于(A) 的制剂 10^-9 29.9±1.06 47.4^* +27.6^* 1.5×10^-9 10^-8 22.8±0.75 59.9^* +29.2^* 10^-7 9.7±0.42 82.9^* +39.4^* 溶于(B) 的制剂 10^-9 34.0±1.49 40.1^* +17.7^*** 6.0×10^-9 10^-8 26.2±0.86 53.9^* +18.6^** 10^-7 11.9±0.61 79.0^* +25.6· 溶于(C) 的制剂 10^-9 29.2±0.94 48.6^* +29.3^* 1.2×10^-9 10^-8 22.3±0.89 60.7^* +30.7^* 10^-7 9.3±0.38 83.6^* +41.9^*

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.01

(^***)p＜0.02

(·)p＜0.002

实施例66.在人乳腺癌MDA-MB-231细胞系培养物中紫杉醇/化合物I-1a+化合物II-1a制剂(紫杉醇∶(化合物I-1a+化合物II-1a)摩尔比为1∶(2.5+2.5))的细胞毒性比较性评价涉及其原液在含2.3mMCaCl₂的盐水(A)、生理盐水(B)和含5％FBS的培养基(C)中的稀释度

将化合物I-1a的钠盐和化合物II-1a的钠盐的乙醇-水(2∶1，v/v)等分储液混合并在旋转蒸发器上减压蒸发。将所得干燥膜状物溶于甲醇中。将一等份紫杉醇甲醇溶液加入到含有化合物I-1a和化合物II-1a甲醇溶液的3种相同溶液中，形成具有紫杉醇∶(化合物I-1a+化合物II-1a)为1∶(2.5+2.5)的所需摩尔比的溶液。搅拌后，蒸发有机溶剂。将一份所得干燥膜状物溶于含2.3mM CaCl₂的盐水中，另一份溶于生理盐水中。在制剂的所有这三种原液中多柔比星的浓度都等于10^-3M。从这些原液，制备溶于含2.3mM CaCl₂的盐水(A)、生理盐水(B)和含5％FBS的培养基(C)的制剂的三种工作液，用于加入到培养物中。在这三种工作液中紫杉醇的浓度都等于10^-5M。

连续培养2天后，统计培养物中的活细胞数，以便评价所述制剂试验溶液的细胞毒性(表22)。

表22

药物紫杉醇， mol/L 肿瘤细胞数， ×10³ 细胞生长抑制，％正效应，％ IC₅₀ mol/L(a) 阴性对照 0 58.5±1.76 紫杉醇 10^-9 42.3±1.55 27.7^* 1.7×10^-8 10^-8 32.8±1.07 43.9^* 10^-7 16.6±0.86 71.6^* 溶于(A) 的制剂 10^-9 31.6±1.24 46.0^* +25.3^* 2.2×10^-9 10^-8 24.4±1.06 58.3^* +25.6^* 10^-7 9.1±0.43 84.4^* +45.2^* 溶于(B) 的制剂 10^-9 36.8±1.94 37.1^* +13.0· 8.0×10^-9 10^-8 28.1±1.19 52.0^* +14.3^*** 10^-7 12.4±0.85 78.8^* +25.3^** 溶于(C) 的制剂 10^-9 31.0±1.36 47.0^* +26.7^* 1.7×10^-9 10^-8 23.7±0.81 59.5^* +27.7^* 10^-7 8.7±0.52 85.1 +47.6^*

(^*)p＜0.001

(^**)p＜0.01

(^***)p＜0.02

(·)p＜0.05

尽管已经用构成本发明人目前已知的最佳方式的优选实施方案描述了本发明，但是人们应该知道，在不偏本文所附权利要求书所提出的本发明范围的情况下，可以进行对本发明普通技术人员而言显而易见的各种变化和修改。

参考文献

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1. 视黄醇衍生物、它们在治疗癌症和增强其它细胞毒性剂功效中的应用 [P] . 中国专利： CN100360502C . 2008.01.09
2. 视黄醇衍生物、它们在治疗癌症和增强其它细胞毒性剂功效中的应用 [P] . 中国专利： CN1668583A . 2005-09-14
3. Retinol derivatives, their use in the treatment of cancer and to enhance the effectiveness of other cytotoxic agents [P] . ES2452540T3 . 2014-04-01

机译：视黄醇衍生物，其在癌症治疗中的用途以及增强其他细胞毒剂的功效
4. USE OF VITAMIN D DERIVATIVES TO POWER THE EFFECTIVENESS OF CITOTOXIC AGENTS. [P] . ES2222615T3 . 2005-02-01

机译：使用维生素D衍生物增强细胞毒性剂的功效。
5. use of vitamin d derivatives to enhance efficacy of cytotoxic agents [P] . 欧洲知识产权局专利： EP1491198A1 . 2004-12-29

机译：使用维生素D衍生物增强细胞毒性剂的功效