3′－(2Z)－1－(3,4－二甲基苯基)－1,5－二氢－3－甲基－5－氧代－4H－吡唑－4－亚基肼基－2′－羟基－1，1′－联苯基－3－羧酸二－（单乙醇胺）

摘要

本发明涉及一种改进的血小板生成素类似物，其为3′－[(2Z)－[1－(3，4－二甲基苯基)－1，5－二氢－3－甲基－5－氧代－4H－吡唑－4－亚基]肼基]－2′－羟基－[1，1′－联苯基]－3－羧酸二－(单乙醇胺)盐。

说明书

技术领域

本发明涉及一种改进的血小板生成素(以下简称为TPO)类似物，其为3’-[(2Z)-[1-(3，4-二甲基苯基)-1，5-二氢-3-甲基-5-氧代-4H-吡唑-4-亚基(ylidene)]肼基]-2’-羟基-[1，1’-联苯基]-3-羧酸的二-(单乙醇胺)盐。该化合物以结构式I表示：

本发明化合物用作TPO受体激动剂，特别是用于促进血小板的生成。

发明详述

3’-[N’-[1-(3，4-二甲基苯基)-3-甲基-5-氧代-1，5二氢吡唑-4-亚基]肼基}-2’-羟基-联苯基-3-羧酸及其可药用盐、水合物、溶剂合物，及其酯用作TPO受体激动剂，特别是用于促进血小板的生成及治疗血小板减少症已在国际申请PCT/US01/16863中公开并要求保护，该申请的国际申请日为2001年5月24日，国际公开号为WO01/89457，国际公开日为2001年11月29日，其所有公开在此引入，作为参考。国际申请PCT/US01/16863没有具体公开其中任何一个化合物的盐的形式。

如今，我们惊奇地发现3’-[(2Z)-[1-(3，4-二甲基苯基)-1，5-二氢-3-甲基-5-氧代-4H-吡唑-4-亚基]肼基]-2’-羟基-[1，1’-联苯基]-3-羧酸的二-(单乙醇胺)盐比其游离酸具有许多优点。游离酸水溶性很差(约5μg/ml)，不利于被制备成药用剂型，并降低了化合物的体内生物利用度。

然而，该游离酸作为TPO受体的激动剂特别有用，特别是用于促进血小板的生成及治疗血小板减少症。3’-[(2Z)-[1-(3，4-二甲基苯基)-1，5-二氢-3-甲基-5-氧代-4H-吡唑-4-亚基]肼基]-2’-羟基-[1，1’-联苯基]-3-羧酸的二-(单乙醇胺)盐具有溶解度及生物利用度提高的其他优点。

本发明化合物3’-[(2Z)-[1-(3，4-二甲基苯基)-1，5-二氢-3-甲基-5-氧代-4H-吡唑-4-亚基]肼基]-2’-羟基-[1，1’-联苯基]-3-羧酸的二-(单乙醇胺)(以下简称为-″活性成分″)用作TPO受体的激动剂特别有用，特别是用于促进血小板的生成及治疗血小板减少症。活性成分可以常用剂型给药，其制备可按照本领域已知的技术，如国际申请PCT/US01/16863所述，将活性成分与常用药用载体或稀释剂结合。给药途径可以是口服，非肠胃给药或局部给药。此处的术语非肠胃给药包括静脉内、肌肉内、皮下、鼻腔内、直肠内、阴道内或腹膜内给药。通常优选口服给药。

此处术语″单乙醇胺″指“2-氨基乙醇”。

上述药用剂量单元的中本发明活性成分的剂量为有效、无毒剂量，优选0.001-100mg/kg总体重，优选0.001-50mg/kg。当治疗需要TPO类似物治疗的患者时，优选口服或非肠胃给药选定剂量1-6次每日。优选的非肠胃给药包括局部、直肠，经皮、注射或持续输液。人类口服给药剂量单元优选包括0.05～3500mg活性成分，最优选0.5～1,000mg活性成分。使用较低剂量的口服给药形式为优选。然而，在对患者安全方便时，也可以施用高剂量非肠胃给药。上述剂量涉及优选的以游离酸表示的活性成分的量。

本领域技术人员应当肯定，活性成分个体剂量的最佳给药数量及间隔视治疗疾病的性质及程度，给药剂型、途径及部位，治疗的具体患者而定，并且该最佳方案可通过常用技术确定。本领域技术人员也应当明白，最佳疗程，即既定时间内每天给予活性成分的剂量次数可经本领域技术人员使用常用的确定疗程的试验进行确定。

一般而言，本发明化合物的制备可通过将游离酸3’-[(2Z)-[1-(3，4-二甲基苯基)-1，5-二氢-3-甲基-5-氧代-4H-吡唑-4-亚基]肼基]-2’-羟基-[1，1’-联苯基]-3-羧酸溶解于合适的有机溶剂中，优选四氢呋喃(以下简称为THF)或乙醇/IMS(工业用甲醇变性酒精)，过滤所得混合物以去除杂质，然后将此溶液加入到2或大于2当量的乙醇胺的有机溶剂溶液中，优选水溶性溶剂，该溶剂可包含一定量的水，优选达5倍游离酸体积的水。本发明化合物过滤后干燥，例如真空或高温空气干燥。

乙醇胺，99％，购自Aldrich Chemical Company，Milwaukee，Wisconsin。

四氢呋喃(THF)及工业用甲醇变性酒精74 O.P.(IMS)购自BDHLaboratory Supplies，Poole，England。

下述实施例进一步阐释本发明。实施例不能理解为限制上述发明内容及权利要求所述的本发明范围。

实施例1

3’-[(2Z)-[1-(3，4-二甲基苯基)-1，5-二氢-3-甲基-5-氧代-4H-吡唑-4-亚基]肼基]-2’-羟基-[1，1’-联苯基]-3-羧酸-羧酸二-(单乙醇胺)的制备

将1g的3’-[(2Z)-[1-(3，4-二甲基苯基)-1，5-二氢-3-甲基-5-氧代-4H-吡唑-4-亚基]肼基]-2’-羟基-[1，1’-联苯基]-3-羧酸橙色粗品加入16.75mlTHF中，在约30℃搅拌。缓慢加入水(2.0ml)并控制温度高于28℃。加水完毕，将温度恢复至30℃，以玻璃纤维垫(2xWhatman GFC滤器)过滤溶液以除去粒状物质。THF(2.0ml)洗涤滤器，洗涤液加入滤液中。滤液冷却至室温。将乙醇胺(0.324g，2.35mol.当量)溶解于IMS(26ml)并于室温氮气氛下搅拌。将含游离酸的滤液用20～30分钟加入至乙醇胺溶液中。搅拌所得深红色悬液3小时，过滤分离固体并于50℃真空烘箱干燥过夜得1.22g(96％)目标化合物。

HNMR(400MHz，DMSO-d6+20ul TFA，内标DMSO-d5δ2.5)：δ2.21(s，3H)，2.26(s，3H)，2.31(s，3H)，2.85(m，4H)，3.57(t，4H)，7.07(m)，7.14(s)，7.18(d，重叠的3H)，7.61(t)，7.63(dd，重叠的2H)，～7.7(m，重叠的2H)，7.79(d)，～7.8(br.s，重叠的2H)，7.96(d，2H)，8.13(s，1H)，13.8(br.s，不可测，与TFA共振重叠)，THF信号为1.76(m)，3.60(为乙醇胺信号掩盖)，在1.05％w/w积分，乙醇信号为1.06(t)，3.44(q)，在1.3％w/w积分.

IR数据

1636，1506，1466，1378，1348，1294，1273，1255，1228，1194，1127，1118，1066，1015，767，747cm^-1.

实施例2

3’-[(2Z)-[1-(3，4-二甲基苯基)-1，5-二氢-3-甲基-5-氧代-4H-吡唑-4-亚基]肼基]-2’-羟基-[1，1’-联苯基]-3-羧酸二-(单乙醇胺)的制备

氮气氛下，将8g 3’-[(2Z)-[1-(3，4-二甲基苯基)-1，5-二氢-3-甲基-5-氧代-4H-吡唑-4-亚基]肼基]-2’-羟基-[1，1’-联苯基]-3-羧酸橙色粗品室温下溶解于盛有THF(240ml)的500ml圆底三颈烧瓶中。用5分钟以注射器加入乙醇胺(2.2ml，2摩尔当量)。室温搅拌所得深红色悬液1.5小时，过滤分离固体并以THF(16ml×2)洗涤，于50℃真空烘箱干燥过夜得10.37g目标化合物(大于定量产率，是由于含有残留溶剂-经NMR测定约2.4％w/w的残留THF，其它同实施例1)。

实施例3

3’-[(2Z)-[1-(3，4-二甲基苯基)-1，5-二氢-3-甲基-5-氧代-4H-吡唑-4-亚基]肼基]-2’-羟基-[1，1’-联苯基]-3-羧酸二-(单乙醇胺)的制备

氮气氛下，将8g 3’-[(2Z)-[1-(3，4-二甲基苯基)-1，5-二氢-3-甲基-5-氧代-4H-吡唑-4-亚基]肼基]-2’-羟基-[1，1’-联苯基]-3-羧酸橙色粗品室温下悬浮于乙醇(800ml)中。用5分钟以注射器加入乙醇胺(2.2ml，2摩尔当量)。室温搅拌所得深红色悬液45小时，过滤分离固体并以乙醇(10ml×2)洗涤，于50℃真空烘箱干燥过夜得9.83g(96％)目标化合物。NMR同实施例1；乙醇含量为1.3％w/w，无THF存在。

实施例4

3’-[(2Z)-[1-(3，4-二甲基苯基)-1，5-二氢-3-甲基-5-氧代-4H-吡唑-4-亚基]肼基]-2’-羟基-[1，1’-联苯基]-3-羧酸二-(单乙醇胺)的制备

室温下，将1g的3’-[(2Z)-[1-(3，4-二甲基苯基)-1，5-二氢-3-甲基-5-氧代-4H-吡唑-4-亚基]肼基]-2’-羟基-[1，1’-联苯基]-3-羧酸(259.0g)加入THF(4660ml)中搅拌直至完全溶解。过滤溶液，通过滤器用THF(520ml)洗涤反应容器(合并滤液得溶液1)。

同时，准备另一个顶部装有搅拌器的反应器装置用于常压蒸馏。依次向反应器中加入IMS74 O.P.(7770ml)、乙醇胺(354ml)。剧烈搅拌溶液，同时加热直至内容物开始蒸馏(BP.76-77C)。

将溶液1转移至反应器上装有的滴液漏斗中。当反应器内容物恒速(约收集50ml蒸馏液时)蒸馏时，自滴液漏斗以与蒸馏速度相当或略低的速度滴加入溶液1。加料完毕，以IMS(260ml×2)洗涤滴液漏斗确保将所有游离酸洗入反应液。重搭仪器装置回流，在氮气氛下回流搅拌所得深红色悬液30分钟。氮气氛下，搅拌使其缓慢(过夜)冷却至室温(约20℃)。

过滤悬液，于滤器上以IMS(520ml×2)洗涤所得深紫色固体。室温真空干燥，然后50℃真空烘箱干燥过夜。产率323.9g，98％。残留溶剂(GCS)THF＝＜0.05％，乙醇＝0.12％。

除微量的残留溶剂存在，目标化合物的NMR及IR图谱基本上同实施例1所示。

实施例5

相对溶解度

3’-[(2Z)-[1-(3，4-二甲基苯基)-1，5-二氢-3-甲基-5-氧代-4H-吡唑-4-亚基]肼基]-2’-羟基-[1，1’-联苯基]-3-羧酸的游离酸(化合物A)及二-(单乙醇胺)盐(化合物B)在三种不同的系统中测其溶解度：水，0.1HCl及甲醇中。数据总结于下表1。

                      表1

溶剂                化合物A mg/ml         化合物B mg/ml

溶解度25℃          mg/ml                 mg/ml

水                  ＜0.001               14.2

0.1％HCl            ＜0.001               ＜0.001

甲醇                1.9                   6.4

本发明范围包括药物组合物，该组合物包括作为活性成分的3’-[(2Z)-[1-(3，4-二甲基苯基)-1，5-二氢-3-甲基-5-氧代-4H-吡唑-4-亚基]肼基]-2’-羟基-[1，1’-联苯基]-3-羧酸二-(单乙醇胺)，以及可药用的载体及稀释剂。本发明化合物可口服或非肠胃给药，可制成合适剂型包括片剂、丸剂、粉剂及颗粒剂用于各种给药途径。在这些固体剂型中，活性成分至少与一种惰性稀释剂相混和。按照常规操作，口服制剂也可包括除惰性稀释剂以外的其它物质，如润滑剂、助流剂及抗氧化剂。若制成胶囊、片剂及丸剂，制剂中可包括缓冲剂。片剂及丸剂还可制成持续释放剂型。

尽管也可采用乳剂的非水悬液，本发明的非肠胃给药制剂包括无菌水溶液。这些剂型也可包括佐剂，如防腐剂、润湿剂、渗透剂、缓冲剂、乳化剂及分散剂。其灭菌可采用细菌截留滤器(bacteria retaining filter)过滤，向组合物中加入灭菌剂，照射组合物或加热组合物的方法灭菌。

下述实施例进一步阐释具有本发明特征的药物组合物。

实施例6

片剂组合物

将乳糖、微晶纤维素、羟基乙酸淀粉钠，硬脂酸镁及3’-[(2Z)-[1-(3，4-二甲基苯基)-1，5-二氢-3-甲基-5-氧代-4H-吡唑-4-亚基]肼基]-2’-羟基-[1，1’-联苯基]-3-羧酸二-(单乙醇胺)按照下表2的比例混和。然后将化合物压成片剂。

                       表2

    组分    mg.3’-[(2Z)-[1-(3，4-二甲基苯基)-1，5-二氢-3-甲基-5-氧代-4H-吡唑-4-亚基]肼基]-2’-羟基-[1，1’-联苯基]-3-羧酸二-(单乙醇胺)微晶纤维素乳糖羟基乙酸淀粉钠硬脂酸镁      8.45     112    70    8    2

实施例7

可注射的非肠胃给药组合物

可注射给药的3’-[(2Z)-[1-(3，4-二甲基苯基)-1，5-二氢-3-甲基-5-氧代-4H-吡唑-4-亚基]肼基]-2’-羟基-[1，1’-联苯基]-3-羧酸二-(单乙醇胺)制剂的制备方法为，将5.0mg化合物于1.0ml生理盐水中搅拌。

本发明的优选实施方案如上所述，然而应当明白，本发明不局限于此处公开的具体说明，我们保留所有在权利要求范围内修改的权利。