石首鱼类精子激发大黄鱼雌核发育二倍体的诱导方法

摘要

石首鱼类精子激发大黄鱼雌核发育二倍体的诱导方法，涉及一种鱼类的养殖，尤其是采用异源精子诱导大黄鱼雌核发育二倍体的方法。其步骤为：采用人工受精，将杂交组合中同科不同种父本的精子与大黄鱼的卵混合；将精卵混合后，用海水激活；将受精卵放入压力容器，施压；达到靶压力38～55MPa时停止施压；持续1～30min后降压，完成压力休克的诱导。无须对异源精子进行射线失活处理，简单可行，便于现场操作，安全可靠；对经验的要求不高，便于掌握；远缘杂交产生单倍体，单倍体的致死效应剔除了没有成功进行二倍体诱导的个体，确保了存活个体均为雌核发育二倍体。

说明书

技术领域

本发明涉及一种鱼类的养殖，尤其是采用异源精子诱导大黄鱼雌核发育二倍体的方法。

背景技术

以大黄鱼(Pseudosciaena crocea Richardon)为母本，浅色黄姑鱼(Nibea Chui，Trewavas)或鮸状黄姑鱼(Nibea miichthioides Chu Lo&Wu)或眼斑拟石首鱼(Sciaenopsocellatus Linnaeus)等同科不同种鱼类为父本的属间远缘杂交试验中，受精率较高，但孵化率几乎为零，死亡胚胎具十分明显的单倍体症状，虽有极少部分受精卵可发育至孵化，但孵化仔鱼均为畸形个体，无存活至开口摄食的个体。杂交胚胎典型的单倍体症状表现为：细胞分裂不全、卵裂不规则、细胞边界模糊、躯体短小、围心腔扩大、肌节模糊、色素减少、血液循环不全、脊椎弯曲等。目前有关成功诱导大黄鱼雌核发育二倍体的方法还没有见正式报道。有关大黄鱼三倍体的成功诱导仅见于：1)王军等的大黄鱼三倍体诱导的初步研究(王军，王德祥，尤颖哲，等，大黄鱼三倍体诱导的初步研究[J]，厦门大学学报自然科学版，2001，40(4)：927-930)；2)林琪等的静水压休克诱导大黄鱼三倍体(林琪，吴建绍，曾志南，静水压休克诱导大黄鱼三倍体[J]，海洋科学，2001，25(9)：6-9)。其它鱼类雌核发育二倍体的诱导方法一般如下：取同种鱼类的鲜活精子，用精子稀释液稀释，置于紫外线或X射线或γ射线下照射，一定时间后与新鲜的成熟卵子进行人工授精，而后采用静水压等方法诱导二倍体。由于精子受射线照射失活，只具备激活卵子发育的能力而不参与受精卵的遗传调控，因此受精卵是雌核发育单倍体。该类方法的不足在于：1)精子需要失活处理，不便于现场操作；2)精子失活操作要接触紫外线或X射线或γ射线下照射，具有一定的危险性；3)精子失活操作的条件需要长期的试验摸索，不便于掌握；4)由于精子失活操作不可能十分彻底，因此雌核发育子代中必然混有正常二倍体或三倍体，给实验结果的分析带来困难。

发明内容

本发明旨在提供一种结果纯正，无须精子失活处理，受精率、诱导率和成活率高，便于现场操作、安全可靠、简单易行的石首鱼类精子激发诱导大黄鱼雌核发育二倍体的方法。为此本发明采用异源精子进行诱导的方法。

本发明的步骤为：

1.采用人工受精，将杂交组合中同科不同种父本的精子与大黄鱼的卵混合；

2.将精卵混合后，用海水激活；

3.将受精卵放入压力容器，施压；

4.达到靶压力38～55MPa时停止施压；

5.持续1～30min后降压，完成压力休克的诱导。

在步骤2)中，激活精卵所用海水的水温最好为18～25℃。在步骤3)中，受精后施压时间是受精后1～10min后将受精卵放入压力容器，施压；受精后最佳的施压时间是受精后2.5min。在步骤4)中，最好达到靶压力40～45MPa时停止施压，持续10～15min后降压，完成压力休克的诱导。

本发明的优点在于：

1)无须对异源精子进行射线失活处理，简单可行，便于现场操作，安全可靠；

2)对经验的要求不高，便于掌握；

3)远缘杂交产生单倍体，单倍体的致死效应剔除了没有成功进行二倍体诱导的个体，确保了存活个体均为雌核发育二倍体。

具体实施方式

实施例1

将浅色黄姑鱼的精子与大黄鱼的卵混合，采用干法受精，水温为21～24℃，受精后2.5min将受精卵放入压力容器施压，当靶压力达到42～44MPa时停止施压，持续10～15min后降压，即完成压力休克的诱导。实验结果表明，受精率≥80％，孵化率≥50％，胚胎期二倍体诱导率≥88％。

实施例2

将眼斑拟石首鱼的精子与大黄鱼的卵混合，采用干法受精，水温为20～23℃，受精后1min将受精卵放入压力容器施压，当靶压力达到40～42MPa时停止施压，持续2～2.5min后降压，即完成压力休克的诱导。实验结果表明，受精率≥82％，孵化率≥84.8％，胚胎期二倍体诱导率≥93.75％。

实施例3

与实施例1相似，其不同在于激活所用海水的水温为18～20℃，受精后10min将受精卵放入压力容器施压，靶压力达到38～40MPa时停止施压，持续1～4min后降压，即完成压力休克的诱导。实验结果表明，受精率≥80％，孵化率≥81％，胚胎期二倍体诱导率≥75％。

实施例4

与实施例2相似，其不同在于激活所用海水的水温为23～25℃，受精后8min将受精卵放入压力容器施压，靶压力达到50～55MPa时停止施压，持续25～30min后降压，即完成压力休克的诱导。实验结果表明，受精率≥78％，孵化率≥45％，胚胎期二倍体诱导率≥98％。

实施例5

与实施例1相似，其不同在于激活所用海水的水温为20～22℃，受精后4min将受精卵放入压力容器施压，靶压力达到45～50MPa时停止施压，持续15～20min后降压，即完成压力休克的诱导。实验结果表明，受精率≥81.1％，孵化率≥65％，胚胎期二倍体诱导率≥98％。

实施例6

与实施例2相似，其不同在于激活所用海水的水温为21～23℃，受精后6min将受精卵放入压力容器施压，靶压力达到40～45MPa时停止施压，持续5～10min后降压，即完成压力休克的诱导。实验结果表明，受精率≥78.8％，孵化率≥77％，胚胎期二倍体诱导率≥75％。