微晶肽混悬剂的持续释放

摘要

本发明涉及一种防止疏水性肽的凝胶形成的方法，该方法是将疏水性肽与一定量和摩尔比的、足以形成液体乳状微晶肽的水混悬剂、而非形成凝胶的抗衡离子相接触。本发明还涉及疏水性肽和水中的抗衡离子的液体的、乳状微晶的水混悬剂，其中，肽和抗衡离子是以一经混合就足以形成混悬剂、而非凝胶剂的量和摩尔比存在。

说明书

发明背景

经常需要将生物活性的肽类做成活性成分能持续释放的制剂来传输给动物或人类。可以将活性成分掺入生物可降解并且生物学相容的聚合物中，以微囊、微粒或植入棒的形式，或者使用机械装置如微型泵或生物不可降解的容器来提供这样的制剂。如果肽在水介质中是高度可溶的，可以将其与不可降解的聚合物如纤维素衍生物一起制成复合体，或者将其与聚合物溶液相混合，一经非肠道注射就能形成凝胶，活性肽再从凝胶中缓慢释放。

上面提到的所有制剂都有其缺点和局限性，如悬浮液的容积大、不可降解的装置必需除去。就形成凝胶的肽类来说，经常存在生物可利用率的问题，这干扰了期望获得的活性成分的持续起效。

归因于肽类的物理化学方面的一些问题已经在R.Deghenghi的论文“Antarelix in Treatment with GnRH Analogs：Controversies andPerspectives”中描述过，由M.Filicori和C.Flamigni编辑，TheParthenon Publishing Group，纽约和伦敦1996，第89-91页。另外的一些问题在J.Rivier发表在GnRH Analogues上面的文章“GnRHanalogues towards the next millennium”中阐明，由B.Lunenfeld编辑，The Parthenon Publishing Group，纽约和伦敦1999，第31-45页。还有一些问题在其它的专著，例如M.F.Powell等人发表在Pharmaceutical Research，Vol.8，1258-1263(1991)上面的文章“Parenteral Peptide Formulations：Chemical and Physical Propertiesof Native LHRH and Hydrophobic Analogues in Aqueous Solution”中阐明。

因此，有必要开发能避免这些问题的新的制剂和给药方法，本发明就满足了这种需要。

发明概述

本发明涉及一种防止疏水性肽的凝胶形成的方法。该方法有利地包括将疏水性肽与抗衡离子(counter-ion)相接触，二者的量和摩尔比应足以形成肽的液体的、乳状的、微晶水混悬剂，而不是形成凝胶。

本发明也涉及疏水性肽和水中的抗衡离子的液体的、乳状的、微晶水混悬剂，其中，肽和抗衡离子是以一经混合就足以形成混悬剂、而非凝胶剂的量和摩尔比存在。

避免形成凝胶使得可以配制可注射的混悬剂。当这样的水混悬剂给哺乳动物，例如人，进行非肠道(也就是皮下或肌内)注射时，可以获得疏水性肽的超时持续释放。

优选地，抗衡离子是强酸盐，如三氟醋酸或硫酸的盐。并且疏水性肽可以是GnRH类似物，优选是GnRH拮抗剂。更优选的GnRH拮抗剂选自Azaline B、Abarelix、Antide、Ganirelix、Cetrorelix或FE200486的强酸盐，例如三氟醋酸盐或硫酸盐。最优选的化合物是Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tyr-D-Hci-Leu-Ilys-Pro-D-Ala-NH₂三氟醋酸盐以及Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tyr-D-Hci-Leu-Ilys-Pro-D-Ala-NH₂硫酸盐。

疏水性肽盐优选是以等于或大于25mg/ml的浓度悬浮在水介质中，并且酸∶肽的摩尔比至少是1.6∶1。至少一部分肽盐是以粒径介于大约5到150μm之间的针晶的形式存在。

如果需要的话，水混悬剂可以包含等渗剂，如甘露醇。水混悬剂还可以包含药学可接受的赋形剂。有利地，混悬剂被干燥至冻干状态，它能通过与水或缓冲液混合而重新组成混悬剂。包含这些干燥混悬剂的冻干组合物以及制备干燥混悬剂的方法在本发明的其它部分将会具体描述。

附图简述

附图1说明了给大鼠皮下注射本发明的teverelix^三氟醋酸盐混悬剂以后所获得的药代动力学效果(睾酮抑制)；并且

附图2说明了在注射了本发明的teverelix^三氟醋酸盐混悬剂的大鼠体内teverelix^肽连续几周的持续释放。

优选方案的具体描述

我们意外的发现，分子式为Ac-D-Nal-D-pClPhe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Hci-Leu-lys(iPr)-Pro-D-Ala-NH₂(teverelix^，一种GnRH拮抗剂)的肽的三氟醋酸盐(TFA)或硫酸盐的高浓度水混悬剂并不像根据它的疏水性所预期的那样会形成凝胶，而是形成了易于给动物或人进行非肠道注射、持续几周释放活性成分的微晶乳状混悬剂(参见附图1和2)。对于其它盐如醋酸盐，这种性质却表现不出来，而是形成了预期中的、但并不需要的、体内生物利用度很低的凝胶剂。

当获得微晶高浓度混悬剂形式的疏水性肽类的延长持续输送时，针对如何抑制疏水性肽类的凝胶化的问题，我们的发明提供了一种简单雅致的解决办法。

我们的发现的另一个优点是这样的混悬剂容积很小，可以用细针进行非肠道注射，也因此提高了对注射物质的局部耐受性。在这样的注射剂中，肽的量大约是0.1到5mg/kg欲以混悬剂给药的哺乳动物的体重。

抗衡离子的量优选超过成盐所需要的量。代表性地，其数量至少是1.6mol酸/mol肽，优选2mol/mol或更多。另外，可注射的混悬剂应当被浓缩至可获得最期望的释放效果。浓缩的意思是肽在整个制剂中的重量百分比含量应当大于2.5％。

混悬剂能通过冻干或喷雾干燥形成冻干组合物，该冻干组合物能被很好地储存，在制备注射剂时仅用水或缓冲液就能重新组成混悬剂。

实施例

实施例1

将200μL 5％的甘露醇加到大约15mg的LHRH拮抗剂teverelix^的三氟醋酸盐中。涡流搅拌一分钟即可获得流动的乳状珍珠似的混悬剂。混悬剂由大约10μm长的微晶组成。微晶能丛生在一起形成刺猥样结构。给大鼠皮下注射该混悬剂(1mg)能提供超过45天的睾酮抑制的药代动力学效果(附图1)。药代动力学分析显示，肽有多达几个星期的持续释放(附图2)。

实施例2

将200μL的水加到大约15mg的LHRH拮抗剂teverelix^的三氟醋酸盐中。涡流搅拌一分钟即可获得流动的乳状珍珠似的混悬剂。

实施例3

将200μL的水加到大约15mg的LHRH拮抗剂teverelix^的醋酸盐中。涡流搅拌一分钟即可获得透明的凝胶。将20μL TFA(3mols/mol)加到凝胶中形成液体的、流动的乳状珍珠似的混悬剂。

实施例4

将200μL 100mM的TFA加到大约15mg的LHRH拮抗剂teverelix^的醋酸盐(2mols/mol)中，以获得流动的乳状混悬剂。另外，将200μL 75mM的TFA与大约15mg LHRH拮抗剂teverelix^的醋酸盐(1.5mol/mol)混合，得到透明的凝胶。在另一项研究中，将100μL各种浓度的TFA加到7.5mg LHRH拮抗剂teverelix^的醋酸盐中，TFA/Teverelix的摩尔比范围是1到3，当摩尔比≥1.6时得到流动的乳状混悬剂，其它的摩尔比则得到凝胶。

实施例5

将200μL 150mM的TFA加到5至30mg的LHRH拮抗剂teverelix^的醋酸盐中(浓度范围25到150mg/ml)。浓度直到100mg/ml都可以获得流动的乳状混悬剂。

实施例6

将200μL 150mM的TFA加到大约15mg的LHRH拮抗剂teverelix^的醋酸盐(3mols/mol)中，混合后得到流动的乳状混悬剂。混悬剂被整晚冻干。将200μL的水或5％甘露醇加到冻干物中，混合并重新构成以后得到流动的乳状混悬剂。

实施例7

将1mL 150mM的TFA加到大约75mg的LHRH拮抗剂teverelix^的醋酸盐(3mols/mol)中，混合后得到流动的乳状混悬剂。混悬剂被整晚冻干。将1mL的水和0.2M pH4.0的醋酸盐缓冲液加到冻干物中，混合并重新构成以后得到流动的乳状混悬剂。在室温下，这些混悬剂至少能稳定保存3天。

实施例8

将100μL 250mM的H₂SO₄加到7.5mg的LHRH拮抗剂teverelix^的醋酸盐(5mols/mol)中，几个小时后得到流动的乳状混悬剂。混悬剂由大约100μm长的微晶组成。微晶能聚合到一起形成刺猥样结构。混悬剂被整晚冻干。将100μL的水或5％甘露醇加到冻干物中，混合并重新构成以后得到流动的乳状混悬剂。