川芎嗪在制备用于治疗阴茎勃起功能障碍的药物中的应用

摘要

本发明披露的实验资料显示川芎嗪(Ligustrazine)具有促使阴茎海绵体平滑肌舒张，增强阴茎勃起的功能，能作为治疗阴茎勃起功能障碍的药物使用，为现有药物川芎嗪提供了新的医疗用途，同时还为川芎嗪的新的医疗用途提供新的制剂，包括贴膜制剂、乳膏剂、尿道栓剂等。

说明书

技术领域

本发明涉及药物，特别是治疗阴茎勃起功能障碍的药物。

背景技术

川芎嗪(Ligustrazine)是从伞形科蒿本属植物川芎的根茎中分离提纯出来的一种生物碱单体，化学名称为：2，3，5，6-四甲基吡嗪，简称四甲基吡嗪(Tetramethylpyradine，TMP)。目前，临床主要用于治疗缺血性心脑血管疾病如脑血栓形成，脑栓塞、冠心病心绞痛、脉管炎以及慢性肺心病、慢性肾功能衰竭等，取得了肯定的疗效。

在国外，六十年代初，Kosuqe等曾从枯草杆菌(bacillus sublitis)的代谢产物中分离出TMP，继而又从波斯树脂，发酵的大豆、可可豆、烟草中，以及生长在尼日利亚的大戟科植物西非痛风麻疯树的茎中也分离得到此成分。我国首先从活血化淤中药川芎根茎中提出。近年又相继从姜科植物温莪术(郁金，curcuma aromatica salisb)的根茎和草麻黄的挥发成分中发现有TMP的存在[郭永田、初学魁、陈玉仁等。温莪术成分的研究。药学学报，1980，15(4)：251]。

川芎嗪为无色针状结晶，mp80～82度。具有特殊气味，有吸湿性，易升华，易溶于热水、石油醚，溶于氯仿，稀盐酸，微溶于乙醚。其结构式如下：

发明内容

本发明的目是为现有药物川芎嗪提供新的医疗用途，将川芎嗪用于治疗阴茎勃起功能障碍，即川芎嗪在制备用于治疗阳痿的药物中的应用。本发明的另一个目的是为川芎嗪的新的医疗用途提供新的制剂，包括贴膜制剂、乳膏剂、尿道栓剂等。

本发明药效学实验资料

观察Ligustrazine的舒张作用，测定Ligustrazine对去氧肾上腺素(Phenylephine，PE)，KCl，CaCl₂所致离体兔阴茎海绵体平滑肌条收缩的影响。

1 材料

1.1 动物20只雄性新西兰大白兔，体重2.8～3.2kg，购于武汉市东西湖实验兔场。

1.2 仪器Powerlab生理记录仪(澳大利亚ADInstmments公司)

1.3 药品和试剂盐酸川芎嗪注射液(江苏常州制药厂生产，批号010822)；去氧肾上腺素(上海和丰制药有限公司生产，批号000601)；其余试剂为市售分析纯。

2 方法和结果：

2.1 标本制作

取雄性新西兰大白兔，空气栓塞致死后迅速取出阴茎，在4℃Krebs液中(mmol.L^-1 NaCl119，KCl 4.7，MgCl₂1.2，CaCl₂ 1.5，NaHCO₃ 15，NaH₂PO₄ 1.2，Glucose 11，pH7.4)去除阴茎皮肤、皮下组织及白膜，应用显微及防损伤技术制成2×2×8mm长条形海绵体平滑肌条。置于37℃恒温预先充以Krebs液的实验浴槽中，持续通以95％O₂+5％CO₂的混合气。用丝线将阴茎海绵体平滑肌条一端系于固定架，另一端连接于张力换能器，采用Powerlab生理记录仪记录收缩舒张反应，结果均采用自身对照。基础张力1.0g，平衡1小时，每15分钟更换一次Krebs液。实验结束后应用KCl 40mmol.L^-1收缩肌条，检验其活性。

2.2 去氧肾上腺素预收缩

待肌条平衡稳定后，在浴槽中加入10umol/L去氧肾上腺素(PE)预收缩，最大收缩张力为100％，处于收缩平台期后依次加入累积浓度为0.05、0.1、0.2、0.4、0.8mg/ml的赋形剂，观察舒张效应。Krebs液反复冲洗后平衡30分钟，在浴槽中加入10umol/L去氧肾上腺素(PE)预收缩，处于收缩平台期后依次加入累积浓度为0.05、0.1、0.2、0.4、0.8mg/ml的Ligustrazine，观察舒张效应。结果提示Ligustrazine可舒张PE诱导的阴茎海绵体平滑肌收缩作用，最大舒张效应为74.1±6.2％(对照组为21.9±5.6％，P＜0.001)，且呈剂量依赖性。见附图1。

2.3 Ligustrazine对PE收缩阴茎海绵体平滑肌条的浓度-效应曲线的影响

按累积浓度加入10^-8～10^-4M的PE，测定PE浓度-效应曲线，Krebs液反复冲洗后，带张力恢复至给药前水平后，加入0.05mg/ml(终浓度)Ligustrazine预孵育20分钟，然后加入累积浓度为10^-8～10^-4M的PE，记录浓度-效应曲线。再次冲洗平衡30分钟，仿上法分别加入0.2、0.8mg/mlLigustrazine预孵育20分钟，分别测定PE浓度-效应曲线。与给药前比较，结果见附图2。不同浓度的Ligustrazine均可使PE引起的阴茎海绵体平滑肌条收缩幅度降低，浓度-效应曲线右移，最大收缩反应降低，表现为非竞争性拮抗特性，高浓度(≥0.2mg/ml)时抑制收缩作用更显著(P＜0.01)。

2.4 Ligustrazine对KCl收缩阴茎海绵体平滑肌条的浓度-效应曲线的影响

按累积浓度加入KCl(10，20，40，80mmol.L^-1)，测定其浓度-效应曲线作为对照，Krebs液反复冲洗后，带张力恢复至给药前水平后，按上述方法分别加入0.05、0.2、0.8mg/mlLigustrazine，再分别测定KCl浓度-效应曲线。结果见附图3，不同浓度的Ligustrazine均可使PE，KCl，CaCl₂引起的阴茎海绵体平滑肌条收缩幅度降低，并呈剂量依赖性。浓度-效应曲线右移，最大收缩反应降低，表现为非竞争性拮抗特性，高浓度(≥0.2mg/ml)时抑制收缩作用更显著(P＜0.01)。

2.5 Ligustrazine对CaCl₂收缩阴茎海绵体平滑肌条的浓度-效应曲线的影响

阴茎海绵体平滑肌条在无Ca²⁺-Krebs液中平衡稳定2小时后，换以无Ca²⁺高K⁺(40mmol.L^-1)去极化液，稳定20分钟，使之去极化。按累积浓度加入CaCl₂(0.1、0.3、1.0、3.0、10.0mmol.L^-1)，测定其量效曲线作为对照。然后用无Ca²⁺-Krebs液冲洗标本，待张力恢复并重复去极化稳定后，分别加入0.05、0.2、0.8mg/ml Ligustrazine，同法测定CaCl₂浓度-效应曲线。结果见附图4，不同浓度的Ligustrazine均可使PE，KCl，CaCl₂引起的阴茎海绵体平滑肌条收缩幅度降低，并呈剂量依赖性。浓度-效应曲线右移，最大收缩反应降低，表现为非竞争性拮抗特性，高浓度(≥0.2mg/ml)时抑制收缩作用更显著(P＜0.01)。

阴茎勃起是在各种性刺激时神经-内分泌系统调节下的阴茎海绵体的血液动力学变化过程，包括阴茎动脉和细小动脉以及阴茎海绵体平滑肌舒张等一系列血管活动，阴茎海绵体平滑肌舒张是阴茎勃起的基础，其舒张结果使得海绵窦血流不断增加而导致阴茎勃起。因此，促使阴茎海绵体平滑肌舒张的药物能增强阴茎勃起。肾上腺素可使阴茎海绵体平滑肌收缩，增加血管阻力而减少阴茎血流，抑制肾上腺素能的作用，可导致平滑肌舒张而诱发勃起。本发明揭示Ligustrazine有明显的舒张PE诱发的阴茎海绵体平滑肌收缩作用，并呈剂量依赖性，最大舒张效应为74.1±6.2％(对照组为21.9±5.6％，P＜0.01)。当加入高浓度Ligustrazine(≥0.2mg/ml)时，其主动张力明显下降。显示Ligustrazine浓度依赖性地降低PE诱发的阴茎海绵体平滑肌收缩反应。

细胞电生理研究证实，阴茎海绵体平滑肌的收缩状态主要是依赖Ca²⁺的持续跨膜内流作用，细胞内钙与钙调素结合，激发兴奋-收缩耦联而使阴茎疲软，抑制细胞外钙内流可使平滑肌舒张。PE和高K⁺分别激活受体操纵性钙通道(ROCC)和电压依赖性钙通道(VDCC)，促使细胞外Ca²⁺内流，引起阴茎海绵体平滑肌收缩。本发明揭示Ligustrazine非竞争性抑制PE和KCl引起的阴茎海绵体平滑肌收缩作用，可使PE、KCl，CaCl₂引起的浓度-效应曲线右移，最大收缩反应降低，表现出非竞争性拮抗特性。

本发明披露的实验资料显示Ligustrazine具有促使阴茎海绵体平滑肌舒张，增强阴茎勃起的功能，能作为治疗阴茎勃起功能障碍的药物使用。

以盐酸川芎嗪注射液治疗阴茎勃起功能障碍，对IIEF评分为12～18的6例轻至中度的阴茎勃起功能障碍患者给予阴茎海绵体内对盐酸川芎嗪注射液4～8mg，结果表明川芎嗪可部分改善阴茎勃起功能，患者基本满意，IIEF分别增加到15～22。

鉴于川芎嗪口服吸收快，约1小时血药浓度即达到高峰，以及有良好的透皮吸收及溶于有机溶剂等特点，可制成各种不同剂型，如口服制剂、凝胶剂、透皮剂、软膏剂、栓剂、注射剂等。剂量按文献报道给予4～50mg，其中经尿道给药或透皮剂等外用剂量可增加至80mg至120mg。

为适应本发明为川芎嗪提供的新的用于治疗阴茎勃起功能障碍医疗用途的需要，本发明还提供了与新的医疗用途相适应的新的制剂，包括贴膜制剂、乳膏剂、尿道栓剂等，各种制剂均是以川芎嗪为有效活性成分加上制药上可接受的添加剂和/或赋形剂制成。贴膜制剂制备方法是：(1)将川芎提取纯化得川芎嗪备用；(2)将十八醇，羊毛脂适量在80℃水上熔融，加入氮酮；(3)将冰片、苯甲酸钠、川芎嗪用无水乙醇溶解，加入上述步骤(2)所得的熔融基质中，搅拌备用；(4)将甘油、水、吐温-80至80℃水溶解，与上述步骤(3)所得混合物混合，搅拌至温度降至50℃以下，冷凝后，均匀涂布于控释裱背材料上即成。乳膏剂制备方法是：(1)将川芎提取纯化得川芎嗪备用；(2)取硬脂酸甘油酯、硬脂酸、白凡士林及液状石蜡加热熔化为油相；另将甘油及蒸馏水加热至90℃，再加入十二烷基硫酸钠及羟苯乙酯溶解为水相；然后将水相缓缓倒入油相中，边加边搅，直至冷凝，即得乳剂型基质；(3)将按步骤(1)备好的川芎嗪加入上述基质中，搅拌均匀即得。尿道栓剂制备方法是：(1)将川芎嗪用乙醇溶解得浸膏备用；(2)取适量聚乙二醇，置水浴上加热熔化后，加入上述步骤(1)所得浸膏、冰片、吐温-80，搅拌均匀，迅速倒入已涂过液体石蜡的栓模中，冷却刮平，取出包装即成。

川芎嗪已广泛应用于临床治疗缺血性心脑血管疾病，其扩张血管作用已得到研究证实。而且其扩张血管作用比较温和，用药剂量范围广，有文献报道静滴80～160mg/d而不出现血压下降或心肌缺血等现象。所以我们采用口服制剂或局部给药，用药剂量4～50mg均在安全范围。在用药过程中，应观察患者的勃起程度(IIEF自我测试法)，必要时采用彩色多普勒监测用药后阴茎血流变化。另外，病人用药后其它系统的改变(如血压变化、心功能变化、食欲等)应密切注意，用药疗程，口服20mg～40mg，3～6个月，经尿道给药20～80mg，3～6个月，随治2～3年。

附图说明

图1：川芎嗪对新福林诱发收缩的阴茎海绵体平滑肌条浓度-效应曲线的影响(数据以x±s表示，n＝9)。

图2：川芎嗪对去氧肾上腺素诱发收缩的阴茎海绵体平滑肌条浓度-效应曲线的影响(数据以x±s表示，n＝6)。与对照组比较，P＜0.01。

图3：川芎嗪对氯化钾诱发收缩的阴茎海绵体平滑肌条浓度-效应曲线的影响(数据以x±s表示，n＝6)。与对照组比较，P＜0.01。

图4：川芎嗪对氯化钙诱发收缩的阴茎海绵体平滑肌条浓度-效应曲线的影响(数据以x±s表示，n＝5)。与对照组比较，P＜0.01。

具体实施方式

实施例1.川芎嗪贴膜

处方：川芎、冰片、十八醇、羊毛脂、氮酮等。

制法：将川芎提取纯化得川芎嗪备用；将十八醇，羊毛脂适量在80℃水上熔融，加入氮酮；另将冰片、苯甲酸钠，川芎嗪用无水乙醇溶解，加入上述熔融基质中，搅拌备用。将甘油、水、吐温-80至80℃水溶解，与上述混合物混合，搅拌至温度降至50℃以下，冷凝后，均匀涂布于控释裱背材料上，即成。

实施例2.川芎嗪乳膏(乳剂型基质软膏)

处方：川芎嗪、硬脂酸甘油、硬脂酸、白凡士林、液状石蜡、甘油、十二烷基硫酸钠、羟苯乙脂、蒸馏水等。

制法：将川芎提取纯化得川芎嗪备用。取硬脂酸甘油酯、硬脂酸、白凡士林及液状石蜡加热熔化为油相。另将甘油及蒸馏水加热至90℃，再加入十二烷基硫酸钠及羟苯乙酯溶解为水相。然后将水相缓缓倒入油相中，边加边搅，直至冷凝，即得乳剂型基质，将备好的川芎嗪加入上述基质中，搅拌均匀即得。

本品为O/W型乳膏，采用十二烷基硫酸钠及单硬脂酸甘油酯(1∶7)为混合乳化剂，其HLB值为11，接近处方中油相所需的HLB值12.7。制得的乳膏剂稳定性好。

实施例3.尿道栓剂：

处方：川芎嗪、聚乙二醇、冰片适量。

将川芎嗪用乙醇溶解得浸膏备用，取适量聚乙二醇，置水浴上加热熔化后，加入浸膏、冰片、吐温-80，搅拌均匀，迅速倒入已涂过液体石蜡的栓模中，冷却刮平，取出包装即可。