甘露聚糖肽在制备口腔局部给药的具有免疫增强的药物中的用途

摘要

本发明提供本发明提供了甘露聚糖肽在制备口腔局部给药的具有免疫增强的药物中的用途。具体地说是甘露聚糖肽在制备口腔局部给药的治疗反复呼吸道感染、白细胞减少症的药物中的用途。通过临床试验证明服用方便，安全；在治疗反复呼吸道感染、慢性咽炎，口疮等局部治疗方法，有显著的优越性，是一种安全、有效的用药途径，为甘露聚糖肽提供了一种新的用药方式。

说明书

                       技术领域

本发明提供了甘露聚糖肽的新的用途，具体地说，是甘露聚糖肽在制备口腔局部给药的具有免疫增强的药物中的用途。

                       背景技术

随着环境的改变，人类肿瘤的发生率不断提高，发生年龄也较过去降低，寻找安全、有效的抗肿瘤药物是人类一直努力的目标。

通过人体防御机理进行肿瘤治疗，是70年代末期由美国国立癌症研究所提倡，80年代在世界范围内逐渐开展，日本在采用免疫激活剂抗肿瘤的研究和开发方面走在前列，已批准生产上市的溶血性链球菌(OK-432)的链球菌制剂1975年上市，云芝胞内多糖(PSK即Krestin)真菌多糖制剂1977年上市，两种药品的销售额每年达1000亿日元，行销世界，销售额占日本抗肿瘤药品的一半，1985年十二月又批准上市的香菇多糖注射剂，正在申请批准的Sohizop-hyllan(SPG)系列皱菌属提取的葡聚糖注射剂、ruburatin诺卡氏菌菌体注射剂和bestatin(苯丁异亮氨酸)口服剂，还有十种类似的免疫激活剂正在临床研究。这类药物能激活机体的免疫功能，通过改变肿瘤宿主对肿瘤细胞的反应能力，改变肿瘤细胞与宿主的关系，以达到治疗肿瘤疾患的效果。日本的溶血性链球菌SU(OK-432)是减毒的溶血性链球菌菌体悬浮于青霉素中的一种生物制剂，副反应较重，主要副反应是发热，注射部位疼痛及细胞减少而应用受限。

中国专利98121898公开了“一种复合甘露聚糖肽口服液”，该口服液中含有多种成分，其甘露聚糖肽分别来自担子真菌、隔担子真菌、多孔目真菌，伞科真菌，成分较为复杂，口服剂量大。

                       发明内容

本发明的所要解决的技术方案是提供甘露聚糖肽的新的用途，具体地说，是甘露聚糖肽在制备口腔局部给药的具有免疫增强的药物中的用途。

本发明另一技术方案是提供了含有甘露聚糖肽的组合物的用途。

本发明另一技术方案是提供该组合物的制备方法。

本发明提供了甘露聚糖肽在制备口腔局部给药的具有免疫增强的药物中的用途。具体地说是甘露聚糖肽在制备口腔局部给药的治疗反复呼吸道感染、白细胞减少症的药物中的用途。

本发明所述的甘露聚糖肽是由以下方法制备得到：

a、以α-溶血性链球菌(Streptococcus hemolyticus-α-Hemolysis)为生产菌进行发酵；

b、收集发酵液，提取纯化甘露聚糖肽。

步骤b的提取全过程的PH值保持为1.5至5.0，所使用的溶剂为60％-99.9％的乙醇。

本发明的甘露聚糖肽是从α-溶血性链球菌(Streptococcushemolyticus-α-hemolysis)发酵产物中提取精制而成的一种具有药理活性的甘露聚糖肽类物质。有关专家在克山病的研究中，根据日本采用溶血性链球菌菌体制剂(OK-432)作为抗肿瘤免疫增强剂的基础上提出采用溶血性链球菌代谢产物抗肿瘤的设想，经过菌种选育和鉴别，发酵生产工艺的研究，发现自人口腔分离得到的α-溶血性链球菌(Streptococcushemolyticus-α-Hemolysis)的发酵产物中含有的α-甘露聚糖肽具有能增强机体的免疫功能、抗炎，升高白细胞，保护和增强骨髓干细胞等多种生理活性。

本发明还提供有效量的甘露聚糖肽加上药学上可接受的辅料制备成口腔局部给药的具有免疫增强的药物组合物。具体地，是治疗反复呼吸道感染的药物组合物。

所述药物组合物为口腔局部用药的固体制剂或液体制剂。

其中所述的固体制剂是口含片、口腔粘附片或膜剂。所述液体制剂是喷雾剂。其中所述的固体制剂每片含甘露聚糖肽5～30mg，所述的喷雾剂的用量为5～30mg/揿。

本发明还提供的制备方法，它是由甘露聚糖肽与药学上常用的辅料混合，即得。

口含片是指含在颊膜内缓缓溶解而发挥治疗作用的片剂。口含片主要用于口腔及咽喉局部患疾，应用后在局部产生较久的疗效。与其它口服片剂比较，口服片剂直接到肠胃。对于口腔及咽喉局部的作用较少，疗效较短。通过甘露聚糖肽的口腔用药，具有免疫增强、治疗反复呼吸道感染、白细胞减少症的用途，且服用方便，为临床提供了一种新的选择。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

                       具体实施方式

实例1  甘露聚糖肽的制备：

发酵过程：i、菌种的制备：选用菌种是α-溶血性链球菌(Streptococcushemolyticus-α-hemolysis)；培养基：菌种培养基：葡萄糖0.4-0.8％、氯化钠0.4-0.8％、蛋白胨0.4-1％、牛肉膏0.1-0.5％、绵羊血10％、琼脂1.5-2％、PH7.2-7.8发酵培养基：葡萄糖0.1-0.5％、蛋白胨0.4-0.7％、酵母膏0.4-0.6％、氯化钠0.4-0.8％、泡敌0.01％

提取、精制过程所需原辅材料：酒精、丙酮、三氯乙酸、无水乙醇

a、母瓶制备：启封菌种冷冻管，用无菌肉汤培养基稀释，在无菌条件下接入血斜面。18-45℃恒温培养24h；

b、子瓶制备：将培养好的血斜面菌种在无菌条件下按1-8％接种量接入肉汤培养基内，18-45℃恒温培养10-24h；

c、菌种培养基灭菌温度为120-124℃，灭菌时间30分钟，灭菌蒸汽压力0.12-0.14Mpa；

d、发酵：将优良的子瓶菌种在无菌条件下按0.2％接种量接入发酵罐，全过程18-45℃恒温培养，无菌空气进气量以能翻动培养液为宜，罐压不超过0.01Mpa，发酵周期20-100小时。发酵培养基灭菌温度为120-124℃，蒸汽压力为0.12-0.14Mpa，时间30min；发酵至20-100小时，灭活放罐，灭活采用加温使发酵液温度达到80℃，恒温30-50分钟后再降温放罐，进行浓缩，使浓缩液比重控制在1.20-1.22即可；

ii、提取：

a、将i步骤的浓缩液加入1-5倍体积量的乙醇，充分搅拌静置后离心去除上清液即得到沉淀物；

b、将所得沉淀物用蒸馏水溶解，调PH，得到溶解液并将溶解液静置并控制静置后的溶解液PH值；

c、将溶解液离心去除杂质得到清液，准确量取清液体积，调PH值，按清液体积计算出所需酒精量，将酒精缓慢加入到清液中，并充分搅拌，静置后离心去除上清液得到沉淀物；

d、以上提取方法按从b-c步骤反复操作至中间检测合格为止，即得到的沉淀物为甘露聚糖肽半成品；

iii、精制：将ii步骤反复提取得到的甘露聚糖肽半成品沉淀物，取样检测符合质量标准后，用无水乙醇进行一次脱水，充分研磨成粉状，得到一次湿粉，再用丙酮进行二次脱水，充分搅拌得到二次湿粉，将二次湿粉在60-100℃烘烤4-10小时即得甘露聚糖肽。

其中ii步骤的提取过程中活性炭的使用方法：使用量为1L溶解液所需活性炭1-10g，加入活性炭后调溶解液PH值，将该液体在40-100℃温度下保温20-70min，离心，并控制炭脱液PH值。

上述提取全过程中的PH值保持为1.5至5.0。

ii步骤的提取过程中的乙醇浓度为60-99.9％。

实例2本发明药物组合物的制备

将甘露聚糖肽制备成50mg/ml药液浆，与辅料经沸腾床制粒，颗粒喷入柠檬酸、柠檬黄色素和香精，整粒，颗粒加入硬脂酸镁混合均匀，压片，制成1000片，即得。

实例3  含量测定

对照品溶液的制备：取经105℃干燥至恒重的D-甘露糖对照品约0.1g，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，再加水稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备：取实例1制备的本发明药物片剂20片，研细，精密称定，精密称取(约相当于甘露聚糖肽25mg)，置25ml容量瓶中，加冷至5℃以下的水20ml溶解，振摇10分钟后，放至室温后加水至刻度，摇匀，立即取10ml(3000r/min)离心10分钟，收集上清液2.5ml置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，配制成每1ml中含甘露聚糖肽25ug的溶液作供试品溶液。

测定法：精密量取对照品与供试品溶液各2ml，分别置具塞试管中，各加2.5％苯酚溶液0.5ml，摇匀，置冰浴中缓慢滴加硫酸5.0ml，摇匀，置沸水中煮沸3分钟，取出，置冰浴中冷却(约3-5分钟)，取出，在10-40分钟内，照分光光法(中国药典2000年版二部附录IV A)在490nm波长处分别测定吸收度，计算，即得，结果：测得含甘露聚糖肽5～30mg。

以下通过临床试验具体说明本发明的有益效果。

实验例1  本发明药物对复发性口疮患者治疗作用临床资料总结

复发性口疮(阿弗他溃疡)，近年来被认为是一种自身免疫性疾病。甘露聚糖肽，作为临床使用多年的一种免疫调节剂，在既往的运用过程中，已证明该药对多种自身免疫性疾病，具有重要的治疗作用。本次观察结合甘露聚糖肽的上述药理特征，从临床复发性口疮治疗的角度，重点对本发明药物的临床治疗作用及安全性进行观察。

含片治疗复发性口疮的疗效较普通的口服片疗效比较见下表：

        两组患者治疗后疗效比较

组别         例数    治愈     有效     无效    总有效率

含片组       81      33       47       1

％                   40.7     58.0     1.3     98.7

片剂组       42      13       24       5

％                   31       57.1     11.9    88.1

两组疗效比较，经统计学处理，P＜0.05，显著性差异。

通过本次观察显示：1、甘露聚糖肽两组，对控制复发性口疮患者的临床症状，具有较好的疗效，其总有效率分别达98.7％、88.1％，两组间显著性差异存在，P＜0.05；2、治疗后两组患者症状反复次数分析，治疗前后两组均存在非常显著性差异，P＜0.01，而治疗后结果提示，两组间无显著性差异存在，P＞0.05；3、治疗疗程上，两组均可迅速有效缓解病员症状，其中，以含片组更为明显，两组间比较，P＜0.05，存在显著性差异。4、两组患者病情轻重与疗效相关性的比较，均以轻症疗效较明显，其中，片剂组轻重症疗效较为均衡，但各组比较，无显著性差异存在，P＞0.05。根据上述结果说明，本发明药物，对于复发性口疮等一类病症，在临床上具有较好的疗效，表现在该药能够迅速有效地缓解复发性口疮患者的临床症状，降低其病症的反复发作次数。其疗效与片剂组间，无显著性差异存在。

证明本发明药物，能迅速改善复发性口疮患者的临床症状，降低病症反复率，其疗效满意，安全可靠，该药含片剂型的临床运用，为临床上述病症的治疗，提供了一种新的治疗选择。

实验例2  本发明药物对慢性咽炎患者治疗作用临床资料总结

采用随机对照原则，两组共观察病例176例，包括含片剂型组110例，片剂对照组66例，剔除病例1例。本次观察结合甘露聚糖肽的上述药理特征，从临床慢性咽炎治疗的角度，重点对本发明药物的临床治疗作用及安全性进行观察。

通过本次观察显示：1、甘露聚糖肽两组(包括含片组、片剂组)，对控制慢性咽炎患者的临床症状，具有较好的疗效，其总有效率分别达97.3％、95.5％，两组间无显著性差异存在，P＞0.05；2、治疗后两组患者症状反复次数分析，治疗前后两组均存在非常显著性差异，P＜0.01；而治疗后结果提示，两组间无显著性差异存在，P＞0.05；3、治疗疗程上，两组均可迅速有效缓解病员症状，其中，以含片组尤为明显，组间比较，P＜0.05，存在显著性差异。4、免疫球蛋白IgM、IgA、IgG值变化结果：两组患者治疗后，IgM、IgA、IgG均明显升高，各单项值治疗前后比较，存在非常显著性差异，P＜0.01，而治疗后组间免疫球蛋白IgM、IgA、IgG值变化比较，P＞0.05，无显著性差异存在。根据上述结果说明，本发明药物，对于慢性咽炎等一类病症，在临床上确具有较好的疗效，表现在该药能够迅速有效地缓解慢性咽炎患者的临床症状，降低其病症的反复发作次数，并能有效提高患者的免疫功能。其疗效与片剂组间，无显著性差异存在。

本发明药物，能迅速改善慢性咽炎患者的临床症状，降低病症反复率，并能明显提高患者免疫功能，其疗效满意，安全可靠，该药含片剂型的临床运用，为临床上述病症的治疗，提供了一种新的治疗选择。

实验例3  本发明药物对反复上呼吸道感染及白细胞减少患者治疗作用临床资料总结

采用随机对照原则，两组共观察病例242例，包括含片剂型组146例，片剂对照组96例，剔除病例1例。观察从临床角度，以多种原因致白细胞减少、免疫功能低下且反复上呼吸道感染患者为对象，并同时与片剂组疗效进行对照分析，其目的是对本发明药物型的临床治疗作用及安全性，进一步加以认识。

通过本次观察显示：1、甘露聚糖肽两组，对控制反复上感患者感染次数，具有较好的疗效，其总有效率分别达96.4％、96.9％，且两组间无显著性差异存在，P＞0.05；结合治疗前后上感次数分析，治疗前后两组均存在非常显著性差异，P＜0.01；而治疗后结果提示，两组间无显著性差异存在，P＞0.05。2、两组能明显提高患者白细胞数水平，治疗前后白细胞值比较，存在非常显著性差异，P＜0.01，治疗后两组间比较，则无显著性差异，P＞0.05。3、免疫球蛋白IgM、IgA、IgG值变化结果：两组患者治疗后，IgM、IgA、IgG均明显升高，各单项值治疗前后比较，存在非常显著性差异，P＜0.01，而治疗后组间免疫球蛋白IgM、IgA、IgG值变化比较，P＞0.05，无显著性差异存在。根据上述结果说明，本发明药物，对于白细胞减少、免疫功能低下及反复上呼吸道感染等病症，在临床上具有较好的疗效。该药能够显著改善患者的反复上感次数，迅速有效提高白细胞数量，增强免疫功能。其疗效与片剂组间，无显著性差异存在。

在临床疗效观察的同时，对病员分别进行了治疗前后肝、肾功等检测及临床症状的观察，未见毒副作用存在。

本发明药物，能显著改善反复上感患者的临床症状，并能明显提高和增强患者白细胞数及免疫功能，其疗效满意，安全可靠，该药含片剂型的临床运用，为临床上述病症的治疗，提供了一种新的治疗选择。

通过临床试验证明本发明药物比口服用药有相同或更好的效果，且服用方便，安全；在治疗反复呼吸道感染、慢性咽炎，口疮等局部治疗方面，有显著的优越性，充分说明本发明提供的本发明药物口腔局部给药途径是一种安全、有效的用药途径，为甘露聚糖肽提供了一种新的用药方式。

通过实施例的方式来进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。

实施例1  本发明药物口含片的制备

甘露聚糖肽       5g         淀粉    390g

甘露醇           75g        柠檬酸  5g

硬脂酸镁        20g          蒸馏水      适量柠檬黄色素、香精适量将甘露聚糖肽制备成50mg/ml药液浆，与辅料经沸腾床制粒，颗粒喷入柠檬酸、柠檬黄色素和香精，整粒，颗粒加入硬脂酸镁混合均匀，压片，制成1000片，0.5g/片，每片含甘露聚糖肽5mg。

实施例2  本发明药物口含片的制备

甘露聚糖肽    5g       淀粉      390g

甘露醇        75g      柠檬酸    5g

硬脂酸镁      20g      蒸馏水    适量柠檬黄色素、香精适量将甘露聚糖肽制备成50mg/ml药液浆，与辅料经沸腾床制粒，颗粒喷入柠檬酸、柠檬黄色素和香精，整粒，颗粒加入硬脂酸镁混合均匀，压片，制成1000片，0.5g/片，每片含甘露聚糖肽5mg。

实施例3  甘露聚糖肽粘附片制备

甘露聚糖肽    5g    辅料是：HPC和CP，乳糖将辅料、甘露聚糖肽分三层：下层用HPC/CP作基质，中层为甘露聚糖肽，上层为乳糖，直接压片，每片含甘露聚糖肽2mg。

实施例4  甘露聚糖肽膜剂制备

甘露聚糖肽    5g    辅料是：聚乙烯用聚乙烯作基质，用膜压机直接压片成膜剂，每片含甘露聚糖肽6mg。

实施例5  甘露聚糖肽喷雾剂用常规的喷雾剂辅料与甘露聚糖肽混合，制备成甘露聚糖肽喷雾剂，规格：3mg/揿。