药物或化妆品组合物及抑制朗格汉斯细胞迁移的PKC抑制剂和MMP抑制剂的应用

摘要

本发明涉及一种药物或化妆品组合物，其特征在于它包括至少一种用于抑制朗格汉斯细胞迁移的活性化合物，所述的活性化合物选自蛋白激酶C(PKC)抑制化合物、基质金属蛋白酶(MMP)抑制化合物，和它们的组合，以及至少一种药学上或化妆品上可接受的载体。所述的组合物能够显著地抑制由变应原剂的存在诱导的朗格汉斯细胞迁移。

说明书

本发明涉及一种药物或化妆品组合物，并且还涉及至少一种用于抑制免疫和/或炎性和/或刺激性反应涉及的细胞(例如，真皮树突细胞(dermal dendrocytes)，单核细胞，淋巴细胞，并且更具体地是朗格汉斯细胞)迁移的活性化合物的应用。

皮肤的一种主要功能是保护身体抵抗外界环境的攻击。这种保护大部分通过皮肤中存在的细胞的协作提供，这些是在存在有害试剂的情况下能够产生抗这种有害试剂的炎性和/或免疫反应的细胞。它们是树突细胞、表皮朗格汉斯细胞(LCs)和真皮树突细胞、单核细胞、淋巴细胞、角质化细胞、肥大细胞和血管内皮细胞。

LCs是源自脊髓的树状细胞，它位于非淋巴组织，例如皮肤和粘膜(口腔、肺、膀胱、直肠、阴道)。皮肤中，LCs插入棘细胞位置内的表皮角质化细胞之间。至于超微结构，它们的特征在于出现膜源的特异性细胞器，伯贝克(Birbeck)颗粒。在免疫组织化学术语中，LCs具体表示CDla分子和II类主要组织相容性复合分子。

作为抗原呈递细胞，LCs在免疫中起决定作用。准确地说，对小鼠进行的实验证实LCs捕获位于表皮的抗原并且朝穿流皮肤的淋巴组织迁移，这里它们向T细胞呈递抗原。皮肤免疫应答的开始取决于LCs离开表皮以迁移至邻近的淋巴结的能力。大量因素能影响这种迁移：粘附分子的表达，细胞外基质蛋白，半抗原，细胞因子，等等。然而，还未完全阐明涉及LC迁移的机理。具体来说，在到达淋巴结之前，LCs必须不仅越过真皮表皮连接(DEJ)，而且本身建立通过皮肤细胞外基质(ECM)通道。DEJ主要由层粘连蛋白5、IV和VII型胶原、巢蛋白和基膜蛋白聚糖组成。环绕皮肤成纤维细胞的ECM主要包含I和III型胶原。

作为捕获表面抗原之后LC迁移的结果，还能观察到皮肤病学的病理学条件。

在特应性湿疹中，LCs能够在表面附着IgEs并且诱导病理学免疫应答。

在接触性湿疹中，LCs起重要作用，这是由于它们在将抗原呈递至T淋巴细胞之前捕获和处理抗原。这种T淋巴细胞将其保持在记忆中，在第二次接触时会触发免疫反应。

根据上述，因此非常希望能够修改LCs的迁移能力以试图修改免疫和/或炎性反应的诱导。

现已完全令人吃惊和意外地发现，某些化合物使得惊人地抑制由变应原剂的存在诱导的朗格汉斯细胞迁移是可能的。

因此本发明涉及一种药物或化妆品组合物，其特征在于它包括至少一种用于抑制朗格汉斯细胞迁移的活性化合物，所述的活性化合物选自蛋白激酶C(PKC)抑制剂、基质金属蛋白酶(MMP)抑制化合物，和它们的组合，以及至少一种药学上或化妆品上可接受的赋形剂。

按照本发明，术语“蛋白激酶C”或“PKCs”意欲指催化细胞底物上磷酸化反应的酶。

当它们被激活时，PKCs磷酸化蛋白底物上根据细胞类型变化的特异性丝氨酸或苏氨酸残基。在许多细胞中，PKC活化增加了特异性基因的转录。

蛋白激酶C(PKCs)是由一族基因(11个不同的异构体)编码的蛋白。具体已知，这些蛋白涉及由生长因子和细胞因子，并且还由一定数量的其它生物学分子介导的细胞外信号转导。蛋白激酶β2(PKC-β2)显示出由表皮LCs特异性表达。

因此任何对本领域技术人员已知的抑制PKCs磷酸化作用活性的化合物都能够用作本发明的PKC-抑制化合物。例如，可提及在申请WO99/43805(Incyte Pharma Inc.)中描述的多肽。

具体来说，这种活性化合物是选自非特异性PKC抑制剂、特异于异构体PKC-β2的抑制剂，和它们的组合的PKC-抑制化合物。

更具体地，这种活性化合物是一种PKC-抑制化合物，它选自苯酚和多元酚化合物，原花青素(儿茶素、表儿茶素，等)，α-香树精，羽扇醇，亚油酸羽扇醇酯，甾醇，甾烷醇，三萜烯醇和其氢化同系物，抗生素如十字孢碱或Ro-318425(或Calbiochem公司销售的2-(8)-(氨甲基)-6，7，8，9-四氢吡啶酚(1，2-a)-吲哚-3-基)-3-(1-甲基吲哚-3-基马来酰亚胺，HCl)，通过和生理学PKC活化剂竞争起作用的化合物，如二酰基甘油或佛波醇酯，(溶血)鞘脂质型的皮肤脂质，溶血磷脂如神经酰胺和拟神经酰胺，或者鞘氨醇和植物鞘氨醇，以及这些化合物的天然或合成起源的衍生物、前体、类似物和同系物。

按照本发明，术语“苯酚和多元酚化合物”意欲指简单的酚，苯醌、酚酸、苯乙酮、苯乙酸、羟基肉桂酸、香豆素和异香豆素、色酮、萘醌、呫吨酮、蒽醌、类黄酮、木酚素和新木酚素、木质素、查耳酮、二氢查耳酮、噢哢、黄酮、黄酮醇、黄烷酮醇、黄烷酮、黄烷醇、黄烷双醇或隐色花色素、花色素、异类黄酮、双类黄酮、原花色素和稠合的单宁。

按照本发明，术语“甾醇”更具体地意欲指甾醇，即在3位具有羟基基团的全氢化-1，2-环戊并菲化合物，和如下面通式(I)的甾醇的类似物。

因此，优选地，按照本发明可使用的甾醇对应于通式：

其中位置5的虚线表示的不饱和对应于甾醇情况下的不饱和，R表示直链或支链的包含1至25个碳原子的不饱和或饱和的烃基链。具体来说，R选自C₁-C₁₂烷基、C₁-C₈烷氧基、C₂-C₈烯基、C₃-C₈环烷基、卤代C₂-C₈烯基，和卤代C₂-C₈炔基。术语“卤代”表示一个或多个卤素取代基，即一个或多个氯、氟、溴或碘原子。

在按照本发明能被有益地使用的甾醇之中，可具体提及β-谷甾醇、α-谷甾醇、γ-谷甾醇、豆甾醇或选择性地，菜油甾醇，和它们的混合物。例如，β-谷甾醇可以Kaukas公司销售的商品“Ultra”(主要包括β-谷甾醇)产品的形式使用。在使用甾醇混合物的情况中，例如可提及汉高公司销售的商品“Generol”，其主要包括β-谷甾醇(约50重量％)、豆甾醇和菜油甾醇，否则是Kaukas公司的产品“Primal”。

在按照本发明能被有益地使用的三萜烯醇中，可具体提及β-香树精、吉柯二醇、蒲公英甾醇、环阿屯醇、24-亚甲基-环阿屯醇、羽扇醇、羊毛甾醇及它们的混合物。

按照本发明，术语三萜烯醇的“氢化同系物”意欲指其中可能存在的不饱和键已经根据本领域技术人员公知的方法进行氢化(即，转化成饱和键)的相应的三萜烯醇化合物。

甚至更具体地，活性化合物是对应于该通式的PKC-抑制化合物：

其中：

R₁表示氢原子或者含有1至40个碳原子，具体是8至36个，且更具体是16至20个碳原子的直链或支链烃基链，该链可包括一个或多个双键且可包括一个或多个羟基取代基；

R₂表示氢原子或如化学式Z-CO-的基团，这里Z表示：

(u)含有1至40个碳原子，具体是16至36个，更具体是20至34个碳原子的直链或支链烃基链，它可包括一个或多个双键且可包括一个或多个羟基取代基；或

(v)R₆-CO-O-A-基团，这里R₆表示含有1至40个碳原子，具体是8至38个，更具体是18至34个碳原子的直链或支链烃基链，它可包括一个或多个双键且可包括一个或多个羟基取代基，并且这里A表示含有1至40个碳原子，具体是16至38个，更具体是24至36个碳原子的直链或支链烃基链，它可包括一个或多个双键且可包括一个或多个羟基取代基；

X表示氢原子、单糖残基或低聚糖残基，尤其是半乳糖残基、硫代半乳糖基团、磷酰胆碱或如化学式(GalNAc)(Sia)Gal-Glc-的基团；且

Y表示氢原子或如化学式R₃-W-CHOH-的基团，这里

R₃表示含有1至40个碳原子，具体是8至36个，更具体是

14至18个碳原子的直链或支链烃基链，它可包括一个或多个双键；并且这里

W表示：

(i)如化学式-CH＝CH-的基团；

(ii)如化学式-CH₂-CH(OR₄)-的基团，这里R₄表示氢原子或R₅-CO-基团，其中R₅表示含有1至40个碳原子，具体是8至36个，更具体是14至18个碳原子的直链或支链烃基链，它可包括一个或多个双键且可包括一个或多个羟基取代基；或者

(iii)基团-CH₂-CH₂。

甚至更具体地，这种活性化合物是PKC-抑制化合物，它选自鞘脂质和溶血磷脂，如下表引用的那些：

            表1：鞘脂质和溶血鞘脂质结构

                               鞘脂质                 溶血鞘脂质

结构

X：H-             神经酰胺                       鞘氨醇

X：半乳糖-        半乳糖脑苷脂                   鞘氨醇半乳糖苷

                                                 (半乳糖基鞘氨醇)

X：硫代半乳糖-    硫脂                           溶血硫苷脂

                                                 (硫代半乳糖基鞘氨醇)

X：

  GM₂                            溶血GM₂

X：磷酰胆碱-      鞘磷脂                          溶血鞘磷脂

作为PKC-抑制剂化合物，更具体地，还可提及鞘脂质或溶血磷脂类型的皮肤脂质。

作为鞘脂质，可提及最基本的那些，如鞘氨醇(D-赤-1，3-二羟基-2-氨基-4-反式-十八烯)和其异构体，或植物鞘氨醇(D-核糖-1，3，4-三羟基-2-氨基十八烷)和其异构体；以及，溶血鞘脂质(包括溶血硫苷脂和鞘氨醇半乳糖苷)、硫代半乳糖基鞘氨醇、二氢鞘氨醇(2-氨基-1，3-十八烷二醇)和鞘磷脂。

作为磷脂，可提及磷脂酰基氨基醇和磷脂酰基多元醇族中的那些。磷脂酰基氨基醇组具体包括磷脂酰乙醇胺(或磷脂酰胆胺)、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸和N-乙酰基磷脂酰乙醇胺。至于磷脂酰基多元醇组，它包括磷脂酰肌醇(phosphatidylcholinositol)、二磷酸肌醇磷脂、溶血二磷酸肌醇磷脂、磷脂酰甘油和心磷脂(cardiolipid)。

作为PKC-抑制化合物，更具体地还可提及神经酰胺，特别是表皮的角化细胞间粘固剂的神经酰胺以及神经酰胺前体，主要是鞘氨醇和植物鞘氨醇。

通常地，该神经酰胺可以化学合成(具体参考拟神经酰胺)，可以是动物来源(相对高浓度的鞘脂质位于哺乳动物大脑和脊柱)，可以是植物来源(主要是脑苷脂和其它糖基化鞘脂质)，否则可源自酵母(和位于人皮肤的天然神经酰胺相同的立体化学构造)。

表皮角化细胞间粘固剂的神经酰胺可采用常规方法(薄层色谱法)分离成六个部分，对应于脂肪酸的性质和所包含基底的性质不同的化合物(鞘氨醇，它是不饱和的，或者植物鞘氨醇，它是饱和的)。根据Werts和Downing分类，下表2举例说明了位于这些部分中的各自的结构。第6部分本身通过更精细的方法可细分成两个实体：神经酰胺6a和6b。

          表2：表皮神经酰胺的六个主要部分

因此，神经酰胺1，极性最小的，包括在神经酰胺6a中发现的完全特殊的结构：酰胺化该基底的长链ω-羟基酸，并且在其ω末端经酯键与另一脂肪酸(O-酰基神经酰胺)连接。在部分1的情况中，连接鞘氨醇的脂肪酸实质是C24、C26、C30、C32或C34，它们可以是饱和的(如图5表示的C30)，单烯键的(主要为C30、C32和C34)或双烯键的(C32并且特别是C34)。至于连接先前那个的ω末端的脂肪酸，它是，主要支配地适于神经酰胺1的亚油酸；表皮的混合屏障功能的基本作用是公知的。

部分2，它具有更常规的结构(经酰胺键连接脂肪酸的鞘氨醇或二氢鞘氨醇，主要是C20至C28)，是最丰富的。

部分3是相当相似的，差别与基底的性质有关，这种情况中，它实质由饱和的植物鞘氨醇表示。

部分4和5实质由与鞘氨醇连接的α-羟基酸的存在表征。

部分6b接近部分4和5，它包括α-羟基酸，但与饱和的植物鞘氨醇连接。

部分6a，如同神经酰胺1，包括仅仅在表皮神经酰胺中发现的特征性部分，即位于与鞘氨醇连接的脂肪酸的ω位置的羟基与这次不是亚油酸而是α-羟基酸的末端脂肪酸的羧基之间的酯键。

植物神经酰胺(基于植物鞘氨醇的神经酰胺)，合成的胆固醇神经酰胺，和乳-或葡糖脑苷脂也应被提及。

最后，在按照本发明能够使用的PKC-抑制化合物中，鞘氨醇天然存在于皮肤中，并且，作为鞘脂质(神经酰胺和神经鞘糖酯)的前体，在角质层的屏障功能中起着尤其重要的作用。它可以源于生物来源，如牛脑的提取物，或者经合成途径，采用丝氨酸，例如，如在NewmanJ.Am.CHEM.，95(12)：4098(1973)中的论文所述的那样。更具体地可提及鞘氨醇的异构体形式：D-赤、L-苏、L-赤和D-苏。D-赤型是自然界中存在的最普遍的形式。

按照本发明，作为抑制朗格汉斯细胞迁移的活性化合物，可以使用的PKC-抑制化合物包括上述PKC抑制化合物的异构体、衍生物(盐、络合物，等等)、类似物、同系物、前体和代谢物。

按照本发明，表述“基质金属蛋白酶(MMP)抑制化合物”意欲指本领域技术人员已知的具有通过MMP抑制细胞外基质降解活性能力的任何化合物。

MMPs组成一族锌依赖性酶(目前已经鉴别和表征了超过大约20种)，它们具有非常保守的结构并具有降解细胞外基质组分的能力。根据它们的底物的性质，它们分为胶原酶、明胶酶和基质分解素。它们可由皮肤内各种细胞类型合成(成纤维细胞、角质化细胞、巨噬细胞、内皮细胞、嗜曙红细胞、朗格汉斯细胞，等等)。因此MMP组包括四小类：(1)胶原酶，(2)明胶酶，(3)基质分解素和(4)膜型MMPs(MT-MMPs)。MMP的活性可由天然存在的蛋白酶抑制剂调节，例如金属蛋白酶的组织抑制剂(TIMPs；尤其TIMP-1和TIMP-2)。

在生理学情形(结瘢、血管生成、胚胎发育，等)和病理学情形(慢性溃疡、光诱导的皮肤老化、肿瘤细胞侵入等)中，现在清楚地确立了MMP在细胞外基质的解蛋白改型中的主要作用。

具体来说，用于抑制朗格汉斯细胞的活性化合物是抑制至少一种选自MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MMP-13和MMP-18的MMP的化合物。

按照本发明，表述“MMP-抑制化合物”，作为抑制朗格汉斯细胞迁移的活性化合物，具体用来指金属蛋白酶组织抑制剂(TIMPs)，α-2-巨球蛋白、纤溶酶原活化剂抑制剂、锌螯合剂、薯司他丁-1(bryostatin-1)、抗生素(强力霉素、二甲胺四环素等)，具有类似于MMP底物结构的合成或天然的肽(巴马司他(batimastat)、马立马司他(marimastat)等)，类维生素A(特别是非芳香族类维生素A，如视黄醛、维甲酸或9-顺-视黄酸、维生素A，单芳香族类维生素A，如阿维A酯、全-反-阿维A或莫维A胺(motrerinide)，和多芳香类维生素A，如阿达帕林(adapalene)、他佐罗汀(tazarotene)、tamibarotene或芳维甲酸甲基砜)，抗氧化剂(纯态氧清除剂，等)，抗癌剂(或“抗转移剂”)，麦芽水解物，如Coletica公司销售的Colalift，海藻提取物，如Secma公司销售的Kelpadelie，鲨鱼软骨提取物，如Atrium公司销售的MDI复合物，米肽，例如，Pentapharm公司销售的Colhibin，和羽扇豆的肽提取物。

更具体地，按照本发明的MMP-抑制化合物选自羽扇豆的肽提取物，即“羽扇豆肽”，例如1999年4月19日Laboratoires Pharmascience提交的专利申请FR-9904875中描述的那些。可具体提及在申请FR9904875中描述的名为提取物B(LU105)的肽提取物。

最后，已经完全令人惊奇地和意想不到地注意到，当用于抑制朗格汉斯细胞迁移的活性化合物是至少一种PKC-抑制化合物如上述的那些，和至少一种MMP-抑制化合物如上述的那些的组合时，得到特别有益的结果。

因此如以下实施例说明的，能够注意到这样一种特定的组合有利地使得加强各自活性，或者甚至提供协同作用成为可能，以便因此获得朗格汉斯细胞迁移的惊人抑制作用，它可与反应的、敏感的和/或变应性的皮肤免疫应答的完全消退，即，正常皮肤反应性的获得相比。

具体来说，相对于药物或化妆品组合物的总重量，用于抑制朗格汉斯细胞迁移的活性化合物的浓度在大约0.001和大约10重量％之间，更具体地在大约0.01和3重量％之间。

优选地，按照本发明的组合物特征在于PKC-抑制活性化合物是鞘氨醇和/或其异构体，并且所述的MMP-抑制化合物是羽扇豆的肽提取物，更优选地是提取物B(LU105)。

按照本发明的组合物还可包括至少一种药学上，尤其皮肤病学上，或者化妆品上可接受的赋形剂。为了局部、经口、肠内或非肠道给药起见，可以使用任何本领域的技术人员已知的适合于药学形式的赋形剂。

具体来说，赋形剂可适于获得呈油或水溶液、油包水乳剂或水包油乳剂、微乳剂、油或水凝胶、无水凝胶、乳膏、洗剂、喷雾剂、面膜、乳、载体分散体、微胶囊或微粒，否则呈明胶胶囊或者软明胶或植物胶囊(plant capsule)形式的组合物。

优选地，使用适于外部局部给药的赋形剂。

最后，按照本发明的组合物还包括至少一种药学上或化妆品上可接受的本领域技术人员已知的佐剂，例如增稠剂、防腐剂、香味剂、染料、化学或矿物掩蔽剂、增湿剂、温泉水，等等。

本发明的主题也是选自蛋白激酶C(PKC)-抑制化合物，尤其上述的那些，基质金属蛋白酶(MMP)-抑制化合物，尤其上述的那些，和它们的组合的活性化合物在制备用于抑制朗格汉斯细胞迁移的组合物中的应用。

相对于药物或化妆品组合物的总重量，按照本发明使用的活性组合物的浓度在大约0.001和大约10重量％之间，更具体地在0.01和3重量％之间。

这样制备的组合物还包括至少一种药学上，尤其皮肤病学上，或化妆品上可接受的赋形剂，以及至少一种如上所述的助剂。

具体来说，通过按照本发明的应用制备的组合物意欲用于皮肤和粘膜(口腔、肺、膀胱、直肠、阴道)的变态反应的治疗和预防，这是由于它能够减少特别是由于LC迁移诱导的变态反应。

更具体地，通过按照本发明的应用制备的组合物意欲用于特应性湿疹的治疗和预防，这是由于它能够减少特别是由于在表面附着IgEs的LCs迁移诱导的免疫应答。

通过按照本发明的应用制备的组合物还意欲用于接触性湿疹的治疗和预防，这是由于它能够减少特别是由于抗原捕获、处理和这种抗原通过LCs呈递至T淋巴细胞诱导的免疫应答。

通过按照本发明的应用制备的组合物还意欲用于敏感/反应的皮肤的治疗和预防。

通过按照本发明的应用制备的组合物还意欲用于炎性皮肤病和/或刺激性皮炎的治疗和预防。

因此应该注意，上述的组合物可有利地用作含有本质是变应性的主要活性化合物的药物或化妆品产品或选择性地香味剂中的额外组分，尤其适于外部局部应用。这种变态反应因此将有益地相应减少，或者本质是变应性的主要活性化合物的剂量可因此甚至有益地增加。

通过按照本发明的应用制备的组合物还意欲用于自身免疫性疾病或炎性疾病，例如牛皮癣的治疗和预防。

通过按照本发明的应用制备的组合物还意欲用于光免疫抑制的预防。

最后，通过按照本发明的应用制备的组合物还意欲用于移植排斥的预防。

下列实施例用于说明本发明，决不解释为能够限制其范围。图1是说明如实施例1所述测量的LCs迁移指数的直方图：1：对照细胞；2：用半抗原DNSB致敏的细胞；3：DNSB+LU105(5μg/ml)；4：DNSB+D-鞘氨醇(2.5μM)；5：DNSB+D-鞘氨醇(2.5μM)+LU105(5μg/ml)。

实施例1：PKC抑制剂和MMP抑制剂的组合对LC迁移抑制的活性的研究

1)材料和方法

1.1制备富含LCs的悬浮液

通过对源自整形手术的正常人皮肤的片段进行酶处理(0.05％胰蛋白酶，+4℃，18h)获得表皮细胞的悬浮液。得到的悬浮液包含平均为2至4％的LCs。平均含70％LCs的悬浮液的制备基于密度梯度离心原理(Lymphoprep^TM)和角质化细胞的去除。

1.2制备基质

选择用于整个研究用的基础培养基是RPMI 1640(Gibco BRL，法国)。

在乙醇中稀释D-鞘氨醇，以便获得5×10^-3M母液。使用浓度为2.5μM的D-鞘氨醇，在含有1％牛血清白蛋白(RPMI-BSA)的RPMT中进行稀释。

将羽扇豆的肽提取物用作MMP抑制剂。它是来自LaboratoiresPharmascience的肽提取物LU105。LU105在RPMI-1640中稀释以便获得250mg/ml的母液。

LU105以5μg/ml的最终浓度使用，在RPMI-1640中进行稀释。在向培养基加入半抗原DNSB作为敏化剂之前，将细胞在LU105存在下在37℃预培养60分钟。

1.3 LCs的敏化

作为敏化剂，使用DNSB(Sigma Aldrich)，溶解形式的DNCB(二硝基氯苯)，溶于RPMI-BSA并且在50μM的浓度下使用。

1.4 LCs的迁移

使用两隔室的培养室系统(Falcon，Becton Dickinson，法国)。上隔室和下隔室通过8μm孔的膜分开，在其上沉淀50μg/cm²的Matrigel。接着将该膜覆盖以蛋白质，形成相当于基膜的薄膜(层粘连蛋白、胶原IV、巢蛋白、内功素、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖)。将RPMI-BSA培养基吸收的细胞单独或在有各种产品的情况下置于上隔室。将正常人成纤维细胞培养物上清液加入下隔室。在37℃培养18小时之后，已经越过Matrigel且在下隔室中的活细胞的数量在显微镜下计数(LCs通过它们的树枝状外形是易于识别的)。每个试验一式三份地进行。

2)结果

2.1下表3给出了结果，它由图1的直方图说明。

        表3：LC迁移指数

12345迁移指数11.611.381.150.88

表3和图1直方图的图例

1：对照细胞

2：用半抗原DNSB致敏的细胞

3：DNSB+LU105(5μg/ml)

4：DNSB+D-鞘氨醇(2.5μM)

5：DNSB+LU105(5μg/ml)+D-鞘氨醇(2.5μM)

2.2 LCs的迁移

结果表示为在DNSB±D-鞘氨醇或LU105或D-鞘氨醇+LU105组合的存在下已经迁移的细胞数量和正常条件下已经迁移的细胞(未致敏、未处理的对照细胞)的数量之间的比例。由表皮新鲜分离的LCs不具有高迁移能力。在表述这些结果中，对照(未处理和未致敏)LCs的迁移能力任意地确定在1。

与正常未刺激细胞(对照细胞)相比，细胞以半抗原DNSB处理显著刺激了LC迁移(增加61％)。

2.5μM浓度的D-鞘氨醇(表3)显著抑制DNSB诱导的LC迁移。

在细胞未接触到半抗原DNSB而是只接触LU105(三个浓度)的实验中，与对照(未致敏和未处理)细胞相比，未观察到迁移指数改变。这表明，没有LCs刺激的情况下，LU105对迁移无影响。LU105(5μg/ml)显著抑制DNSB诱导的LC迁移。

D-鞘氨醇+LU105组合使完全抑制DNSB对LCs的作用是可能的，在DNSB+D-鞘氨醇+LU105的存在下，已经迁移的LCs的数量接近于对照(未致敏和未处理)细胞的数量。这种组合因此对试验的这两个产品的内在的性能有加强的作用。

3)结论

在此研究中，使用位于两隔室的培养室系统(允许细胞迁移)的新鲜分离的LCs，我们已经证明，D-鞘氨醇(PKC抑制剂)加强LU105(MMP抑制剂)对半抗原DNSB敏化的LCs迁移的抑制作用，反之亦然。准确地说，分别使用的这两种分子显著抑制LC迁移。当它们结合时，敏化LCs具有类拟于未活化的LCs的迁移能力。换言之，按照本实施例，PKC抑制剂和MMP抑制剂的组合使完全消灭反应/敏感和变应性的皮肤的免疫应答成为可能，从而复原至正常皮肤的状态。