5－苯甲酰氨基－1，3－二氧环类化合物及其制备方法以及在制备蛋白激酶C抑制剂药物中的应用

摘要

本发明披露了一种5－苯甲酰氨基－1，3－二氧环类化合物，化合物1－21由N－苯甲酰氨基二醇与1，1，3，3－四甲氧基丙烷进行缩醛转移反应生成；化合物22－48由N－苯甲酰氨基二醇与芳香醛进行立体专属性缩醛化反应，必要时还原硝基再与丙二酸及L－Arg或L－Lys成盐生成。这些化合物具有PKC抑制剂的结构类型及确切的抗炎作用，在医药领域中可作为PKC抑制剂在治疗相关疾病中进行应用。

说明书

技术领域

本发明涉及N-苯甲酰氨基二醇进行缩醛转移反应生成的环缩醛(5-苯甲酰氨基-1，3-二氧环类化合物)及其在制备PKC抑制剂药物中的应用，具体地说，是涉及N-苯甲酰氨基二醇与1，1，3，3-四甲氧基丙烷的缩醛转移反应及其环缩醛类反应产物(5-苯甲酰氨基-1，3-二氧环类化合物)，涉及N-苯甲酰氨基二醇与芳香醛进行的立体专属性缩醛化反应及其具有立体专属性的环缩醛类反应产物(5-苯甲酰氨基-1，3-二氧环类化合物)，以及进一步涉及这些反应产物在制备PKC抑制剂药物中的应用。

背景技术

蛋白激酶C(PKC)属于激酶家族，存在于几乎所有的组织中。PKC的活性涉及许多重要的生理过程(例如肌肉收缩、神经递质释放、血小板活化、生长因子和激素的功能等等)和病理过程(例如癌症、炎症、缺血再灌注损伤、缺血再灌注性损伤相关的心肌缺血及多药耐药，Basu A，The potential of protein kinase C as a target of anticancertreatment，Pharmac.Ther.1993，59，257-280；Weinstein IB，BegemannM，0.Disorders in cell circuitry associated with multistage carcinogeneses：exploctable targets for cancer prevention and therapy，Clin Cancer Res，1997，3，2696-2702)。发明人认真比较了外源性PKC激动剂、佛波酯、teleocidin、ingenol和内源性PKC激动剂二乙酰基甘油(Wender P.A.，The chemistry-medicine continuum：Synthetic，computer，spectroscopicand biological studies on new chemotherapeutic leads，Pure.& Apll.Chem，1998，70(3)，539-546)的结构特征，以及认真研究了五元环内酯构建的二乙酰基甘油竞争性化合物模板的结构特征(Lee J，Conformationally constrained analogues of diacylglycerol，10.Ultrapotent protein kinase C ligands based on a chiral 5-disubstitutedtetrahydro-2-furanone template，J.Med.Chem，1996，39，29-35；LeeJ，Conformationally constrained analogues of diacylglycerol，12.Ultrapotent protein kinase C ligands based on a chiral 5-disubstitutedtetrahydro-2-furanone template，J.Med.Chem.，1996，39，36-45)之后，认识到环缩醛作为PKC抑制剂先导结构的潜力。

发明内容

1989年，发明人发表了以缩醛转移反应合成环缩醛类化合物的通用方法，并揭示了这类化合物的特殊稳定性(Peng SQ，Winterfeldt E，Synthesis of malonaldehyde monoacetals，Liebigs Ann.Chem.，1989，1045-1047)。2000年，发明人发表了N-苯甲酰基氨基二醇与1，1，3，3-四甲氧基丙烷的缩醛转移反应，以及环缩醛类化合物(Lan rong Bi，Ming Zhao，Chao Wang，Shiqi Peng，Stereoselective transacetalization of1，1，3，3-tetramethoxypropane and N-benzoylaminodiols，Eur.J.Org.Chem，2000，2669-2676)。

发明人按照对环缩醛作为PKC抑制剂结构类型的认识，采用公认的PKC抑制剂模型(小鼠耳肿胀炎症模型)评价了环缩醛1-21作为PKC抑制剂的活性。本发明发现，在30mg/kg剂量下口服给药，1次/天，连续给药3天，或在30mg/kg或10mg/kg剂量下口服给药1次，环缩醛1-21显示出了明显的抗炎作用，说明环缩醛1-21确实构成了PKC抑制剂的结构类型。但是，在比较这些环缩醛的抗炎作用时，本发明发现，在化合物1-21的结构中，R基为醛基或环缩醛时，抗炎作用无明显优势；母核为七元环或八元环时，抗炎作用也无明显优势。并且化合物1-21的水溶性都有待于改善。

发明人通过构效关系分析认识到，环缩醛类化合物的2位用芳基取代可以带来制备上的方便和活性上的好处。按照这种认识，本发明用L-氨基酸为原料经甲酯化、苯甲酰化和还原反应制备苯甲酰氨基二醇(包括光学活性的二醇)，然后分别与对硝基苯甲醛或苯丙烯醛进行环合反应，必要时，环合产物中的硝基还原为氨基，进一步必要时还原产物依次与丙二酸及碱性氨基酸成盐，制得2-取代苯基-环缩醛类化合物22-48。这里的碱性氨基酸可以是L-Arg或L-Lys。1.R＝-CH₂CH(OCH₃)₂；                 2.R＝-CH₂CH(OCH₃)OCH₂CH₃5.R＝-CH₂CH(OCH₃)₂；      6.R＝-CH₂CH(OCH₃)OCH₂CH₃9.R＝-CH₂CH(OCH₃)₂；  10.R＝-CH₂CH(OCH₃)OCH₂CH₃；11.R＝-CH₂CH(OC₂H₅)₂25.R＝P-NO₂-C₆H₄；                               31.R＝P-NH₂-C₆H₄；  39.R＝CH₂CHO24.R＝P-NO₂-C₆H₄；8，R＝-CH₂CH(OCH₃)₂；26.R＝P-NO₂-C₆H₄；       32.R＝P-NH₂-C₆H₄40.R＝CH₂CHO；20，R＝CH₂CH(OCH₃)₂；28.R＝P-NO₂-C₆H₄；     33.R＝P-NH₂-C₆H₄；

采用下面的反应式所示的路线，本发明在氯化亚砜甲醇溶液中将L-氨基酸转化为对应的甲酯IIa-d(收率98％)。甲酯IIa-d用苯甲酰氯酰化，得到N-苯甲酰基-L-氨基酸甲酯IIIa-d(收率81％)。用硼氢化钠作还原剂，苯甲酰化的甲酯IIIa-d被顺利地还原为N-苯甲酰氨基二醇

           a             b                c                dI             CH₂OH      CH(CH₃)OH       CH₂COOH       CH₂CH₂COOHII和III       CH₂OH      CH(CH₃)OH       CH₂COOCH₃    CH₂CH₂COOCH₃IV            CH₂OH      CH(CH₃)OH       CH₂CH₂OH     CH₂CH₂CH₂OH

采用下面的反应式所示的路线，对硝基苯甲醛与苯甲酰氨基二醇在无水硫酸钠和对甲苯磺酸的存在下进行环合反应，分别得到对应的顺/反异构体：22/23、24/25、26/27和28/29。根据¹H NMR和NOE实验，22、25、26和28被指定为2，5-顺式二取代物，为主要产物，23、24、27和29被指定为2，5-反式二取代物，为微量产物。从构象上看，2，5-顺式二取代物为热力学稳定的产物，2，5-反式二取代物为动力学控制产物。

为了改善对硝基化产物的水溶性和药代动力学性质，本发明采用下面的反应式所示的路线，将2，5-顺式二取代产物分别用硼氢化钠还原，得到对氨基化产物30-33，化合物30-33再依次与丙二酸及L-Arg或L-Lys成盐，得到水溶性产物41-48。

22    24    26    28    30    31    32    33    41    42    43    44  45R   H    CH₃  H H   H    CH₃ H H  H   CH₃  H    H   H CH₃  H   Hm   0    0   1  2    0    0   1  2   0   0     1    2   0 0     1   2

采用下面的反应式所示的路线，反式苯丙烯醛与2-苯甲酰氨基-1，3-丙二醇(IVa)或(2S，3R)-2-苯甲酰氨基-1，3-丁二醇(IVb)在无水硫酸钠及对甲苯磺酸的存在下进行环合反应，也分别得到对应的顺/反异构体对34/35和36/37。根据¹H NMR和NOE实验，34和36被指定为2，5-顺式二取代产物，为主要产物，35和37被指定为2，5-反式二取代产物，为微量产物。从构象上看，2，5-顺式二取代产物为热力学稳定产物，2，5-反式二取代产物为动力学控制产物。

本发明采用小鼠耳肿胀炎症模型经灌胃评价了5-苯甲酰氨基-1，3-二氧环类化合物的抗炎活性。本发明的化合物按30mg/kg的剂量悬浮于5‰CMC溶液，阳性对照为30mg/kg阿司匹林的5‰ CMC溶液，空白对照为5‰ CMC溶液。体重20-25g左右的雄性昆明小鼠(北京医科大学动物部，二级)随机分为用药组，空白对照组和阳性对照组，每组10只小鼠(实验前禁食8小时，自由饮水)，分别经灌胃一次给药，给药30分钟后往小鼠的左耳外廓涂二甲苯(0.02ml)，4小时后将小鼠颈椎脱臼致死，用直径9mm的打孔器分别在两耳取双圆型耳片，称重求出两耳片重量差作为肿胀度。结果表明，本发明的化合物具有优秀的抗炎作用。

具体实施方式

本发明用以下实施例进一步解释本发明。这些实施例仅仅是例证性的，决不含有任何限制本发明的含义。

实施例1  2-对硝基苯基-5-苯甲酰氨基-1，3二氧六环的制备：

166mg(0.85mmol)2-苯甲酰基氨基-1，3-丙二醇(IVa)、128mg(0.85mmol)对硝基苯甲醛、10mg对硝基苯磺酸、100mg无水硫酸钠以及20ml二氯甲烷/四氢呋喃(5∶1)的悬浮液于50℃搅拌12小时，TLC(氯仿/甲醇，25∶1)显示原料点消失反应混合物降至室温，用无水Na₂CO₃中和，过滤，滤饼用水洗之后置真空干燥器中干燥，得192mg(69％)顺式-2-对硝基苯基-5-苯甲酰氨基-1，3-二氧六环(22)的白色固体；滤液减压浓缩到30mg(11％)反式-2-对硝基苯基-5-苯甲酰氨基-1，3-二氧六环(23)的白色固体。

22：mp，220-224℃；IR(KBr)，v/cm^-1＝3270(NH)，3015(aromaticC＝CH)，2920 and 2860(CH and CH₂)，1620(C＝O)，1605，1580，1545 and1450(aromatic C＝C)，1380(NO₂)，1190 and 1070(C-O-C)，800(1，4disubstituted 1656 and phenyl)，NMR(DMSO)：δ/ppm＝4.205(d，J＝7.5H₂，2H，NHCHCH₂O)，4.249(d，J＝7.5H₂，2H，NHCHCH₂O^-)，4.310(m，1H，NHCHCH₂O-)，5.677(S，1H，-O-CH-O-)，7.482(t，J＝6.6H₂，2H，aromaticH)，7.557(t，J＝6.6H₂，1H，aromatic H)，7.752(d，J＝8.7H₂，2H，aromatic H)，7.869(d，J＝6.9H₂，2H，aromatic H)，8.249(d，J＝8.7H₂，2H₂，aromatic H).FAB-MS(m/e)；329[M+H]⁺，C₁₇H₁₆N₂O₅.Calcd；C 62.18，H4.91，N 8.54；Found C 62.30，H 5.01，N 8.48；molmass：328.32.

23：mp，120-122℃；IR(KBr)，v/cm^-1＝3275(NH)，3020(aromaticC＝CH)，2905 and 2858(CH and CH₂)，1625(C＝O)，1600，1590，1548 and1435(aromatic C＝C)，1649 and 1382(NO₂)，1188 and 1075(C-O-C)，803(1，4-disubstituted phenyl)，719 and 690(monosubstitutied¹HNMR(CDCl₃)：δ/ppm＝4.301(m，5H，NHCHCH₂O)，5.712(S，1H，OCHO)，7，085(d，J＝6.5H₂，1H，NH)，7.694(d，J＝9.0H₂，2H，aromatic H)，7.818(d，J＝6.9H₂，2H，aromatic H)，8.258(d，J＝9.3H₂，2H，aromatic H)，FAB-MS(m/e)：329[M+H]⁺；C₁₇H₁₆N₂O₅.Calcd，C 62.18，H 4.91，N 8.54；Found，C 62.24，H 5.04，N 8.48；mol mass：328.32。

实施例2(2S，4S，5R)-和(2R，4S，5R)-2-对硝基苯基-5-苯甲酰氨基-4-甲基-1，3-二氧六环的制备：

100mg(0.48mmol)(2S，3R)-2-苯甲酰氨基-1，3-丁二醇(IVb)，73mg(0.48mmol)对硝基苯甲醛，10mg对甲苯磺酸，100mg无水硫酸钠以及10ml二氯甲烷/四氢呋喃(5∶1)的悬浮液于50℃搅拌12小时，TLC(氯仿/甲醇，25∶1)显示原料点消失，反应混合物降至常温，用无水碳酸钠中和，过滤，滤液减压浓缩，得到的糖浆物用柱层析(氯仿/甲醇，25∶1)分离，得到(2S，4Sm，5R)-2-对硝基苯基-5-苯甲酰氨基-4-甲基-1，3-二氧六环(25)147mg(90％)的白色固体，得到(2S，4S，5R)-2-对硝基苯基-5-苯甲酰氨基-4-甲基-1，3-二氧六环(24)8mg(5％)的白色固体。

25：mp，90-92℃；IR(KBr)，v/cm^-1＝3450(NH)，3045(aromaticC＝CH)，2975，2940 and 2870(CH，CH₂ and CH₃)，1625(C＝O)，1600，1576，1480 and 1400(aromatic C＝C)，1590 and 1370(NO₂)，1176 and 1070(C-O-C)，795(1，4-disubstituted phenyl)，694 and 741(monosubstitutied phenyl).¹HNMR(CDCl₃)：δ/ppm＝1.322(d，J＝6.2Hz，3H，CH₃CHO)，4.214(dt，J＝3.9Hz，1H，NHCHCH₂O)，4.239(d，J＝3.9Hz，2H，NHCHCH₂O)，4.296(d，J＝4.8Hz，1H，CH₃CHO)，5.707(S，1H，OCHO)，6.773(d，J＝9.6Hz，1H，NH)，7.409(t，J＝1.5Hz，2H，aromatic H)，7.435(t，J＝1.8Hz，1H，aromatic H)，7.486(t，J＝1.8Hz，1H，aromatic H)，7.685(t，J＝8.7Hz，1H，aromatic H)，7.848(d，J＝1.5Hz，2H，aromatic H)，8.234(d，J＝5.1Hz，2H，aromatic H)，in NOESY test the NOE relationships betweenthe CH₃ at 4 position and proton of phenyl at a position，and between theCH₃ at 4 position and the NH at 5 position were observed.FAB-MS(m/e)：343[M+H]⁺，[α]_D²⁰＝-15.4(C＝0.02 in CHCl₃)，C₁₈H₁₈N₂O₅.Calcd，C 63.14，H 5.30，N 8.19；Found，C 63.54，H 5.41，N 8.24；mol mass：342.35。

24：mp，112-114℃；IR(KBr)，v/cm^-1＝3446(NH)，3034(aromaticC＝CH)，2980，2950 and 2860(CH，CH₂ and CH₃)，1655(C＝O)，1607，1580，1482 and 1406(aromatic C＝C)，1595 and 1376(NO₂)，1180 and1068(C-O-C)，790(1，4-disubstituted phenyl)，690and745(monosubstitutiedphenyl).¹HNMR(CDCl₃)：δ/ppm＝1.268(d，J＝6.3Hz，3H，CH₃CHO)，3.930(d，J＝2.7Hz，2H，NHCHCH₂O)，3.934(m，J＝6.3Hz，1H，NHCHCH₂O)，4.060(m，J＝3.6Hz，1H，CH₃CHO)，6.151(S，1H，OCHO)，6.969(d，J＝9.6Hz，1H，NH)，7.481(t，J＝6.6Hz，2H，aromatic H)，7.525(t，J＝7.2Hz，1H，aromatic H)，7.662(d，J＝8.9Hz，2H，aromatic H)，7.856(d，J＝6.3Hz，2H，aromatic H)，8.295(d，J＝8.9Hz，2H，aromatic H).FAB-MS(m/e)：343[M+H]⁺，[α]_D²⁰＝28.5(C＝0.02 in CHCl₃)，C₁₈H₁₈N₂O₅.Calcd：C 63.14，H 5.30，N8.19；Found，C 63.48，H 5.45，N 8.31；mol mass：342.35。

实施例3  (2S，5S)-和(2R，5S)-2-对硝基苯基-5-本甲酰基氨基-1，3-二氧环庚烷的制备：

150mg(0.72mmol)(2s)-2-本甲酰基氨基-1，4-丁二醇(IVc)，108mg(0.72mmol)对硝基苯甲醛，10mg对硝基苯磺酸，100mg无水硫酸钠，以及10ml二氯甲烷/四氢呋喃(5∶1)的悬浮液于50℃搅拌18小时，TLC(乙酸乙酯/石油醚，5∶1)显示原料点消失，反应混合物降至常温，用无水碳酸钠中和，过滤，滤液减压浓缩，得到的糖浆物用柱层析(氯仿/甲醇，25∶1)分离，得到184mg(75％)(2S，5S)-2-对硝基苯基-5-苯甲酰氨基-1，3-二氧环庚烷(26)的白色固体，和25mg(10％)(2R，5S)-2-对硝基苯基-5-苯甲酰氨基-1，3-二氧环庚烷(27)的白色固体。

26：mp，121-123℃；IR(KBr)，v/cm^-1＝3301(NH)，3040(aromaticC＝CH)，2970，2920and 2850(CH，CH₂ and CH₃)，1645(C＝O)，1609，1562，and 1460(aromatic C＝C)，1595 and 1372(NO₂)，1170 and 1068(C-O-C)，793(1，4-disubstituted phenyl)，740 and 690(monosubstitutiedphenyl).¹HNMR(CDCl₃)：δ/ppm＝2.140(m，2H，NHCHCH₂CH₂O)，3.760(d，J＝3.0Hz，2H，NHCHCH₂O)，4.064(t，J＝12.1Hz，2H，NHCHCH₂CH_2O)，4.512(m，1H，NHCHCH₂O)5.789(S，1H，OCHO)，6.646(d，J＝8.7Hz，1H，NH)，7.429(t，J＝7.5Hz，2H，aromatic H)，7.484(t，J＝7.2Hz，1H，aromatic H)，7.692(m，J＝9.0Hz，4H，aromatic H)，.8.223(d，J＝9.0Hz，2H，aromatic H)，.in NOESY test the NOE relationships between the NH at 5position and the protons of phenyl at 2 position were observed.FAB-MS(m/e)：343[M+H]⁺，[α]_D²⁰＝21.0(C＝0.02 in CHCl₃)，C₁₈H₁₈N₂O₅.Calcd：C 63.14，H 5.30，N 8.19；Found，C 63.25，H 5.42，N 8.23；molmass：342.35。

27：mp，121-123℃；IR(KBr)，v/cm^-1＝3310(NH)，3051(aromaticC＝CH)，2960，2910and 2845(CH，CH₂ and CH₃)，1640(C＝O)，1602，1565，1482 and 1456(aromatic C＝C)，1590 and 1370(NO₂)，1165 and1060 (C-O-C)，795(1，4-disubstituted phenyl)，738 and 695(monosubstitutied phenyl).¹HNMR(CDCl₃)：δ/ppm＝2.205(m，2H，NHCHCH₂CH₂O，3.697(t，J＝3.1Hz，2H，NHCHCH₂O)，3.897(t，J＝12.0Hz，2H，NHCHCH₂CH₂O)，3.934(m，1H，NHCHCH₂O)，4.054(s，1H，OCHO)，6.896(d，J＝7.8Hz，1H，NH)，7.457(t，J＝7.5Hz，2H，aromatic H)，7.525(t，J＝6.9Hz，1H，aromatic H)，7.673(d，J＝8.7Hz，2H，aromatic H)，7.815(d，J＝7.8Hz，2H，aromatic H)，8.228(d，J＝5.1Hz，2H，aromatic H).FAB-MS(m/e)：343[M+H]⁺，[α]_D²⁰＝-19.3(C＝0.02 in CHCl₃)，C₁₈H₁₈N₂O₅.Calcd：C 63.14，H 5.30，N 8.19；Found，C 63.28，H 5.37，N 8.26；molmass：342.35。

实施例4(2S，5S)-和(2R，5S)-2-对硝基苯基-5-苯甲酰基-1，3-二氧环辛烷的制备：

106mg(0.47mmol)(2S)-2-苯甲酰氨基-1，5-戊二醇(IVd)，72mg(0.47mmol)对硝基苯甲醛，10mg对硝基苯磺酸，10mg无水硫酸钠，以及20ml二氯甲烷/四氢呋喃(5∶1)的悬浮液于50℃搅拌12小时，TLC(氯仿/甲醇，25∶1)显示原料点消失，反应混合物用无水碳酸钠中和，过滤，滤液减压浓缩，残留物用柱层析分离(氯仿/甲醇，25∶1)，得到108mg(65％)(2S，5R)-2-对硝基苯基-5-甲酰氨基-1，3-二氧环辛烷(28)底白色固体，和13mg(8％)(2R，5S)-2-对硝基苯基-5-苯甲酰基氨基-1，3-二氧环辛烷(29)的白色固体。

28：mp，132-133℃；IR(KBr)，v/cm^-1＝3310(NH)，3050(aromaticC＝CH)，2930，and 2850(CH and CH₂)，1630(C＝O)，1605，1580，1505and 1450(aromatic C＝C)，1650 and 1386(NO₂)，1190 and 1070(C-O-C)，801(1，4-disubstituted phenyl)，718 and 680(monosubstitutedphenyl).¹HNMR(CDCl₃)：δ/ppm＝1.821(m，4H，NHCHCH₂CH₂CH₂O)，3.863(d，J＝6.9Hz，1H，NHCHCH₂O)，3.955(d，J＝6.9Hz，1H，NHCHCH₂O)，3.963(m，J＝5.4Hz，1H，NHCHCH₂O)，4.303(m，J＝6.9Hz，2H，NHCHCH₂CH₂CH₂O)，5.834(s，1H，OCHO)，6.670(d，J＝6.9Hz，1H，NH)，7.408(t，J＝7.8Hz，2H，aromatic H)，7.437(t，J＝7.2Hz，1H，aromatic H)，7.601(d，J＝9.0Hz，2H，aromatic H)，7.63 1(d，J＝9.0Hz，2H，aromatic H)，8.204(d，J＝8.4Hz，2H，aromatic H).FAB-MS(m/e)：357[M+H]⁺，[α]_D²⁰＝20.0(C＝0.02 in CHCl₃)，C₁₉H₂₀N₂O₅.Calcd：C 64.02，H 5.66，N 7.86；Found，C 64.22，H 5.70，N 7.92；mol mass：356.38。

29：mp，116-118℃；IR(KBr)，v/cm^-1＝3318(NH)，3060(aromaticC＝CH)，2950，and 2860(CH and CH₂)，1620(C＝O)，1610，1590，1500and 1460(aromatic H)，1660 and 1383(NO₂)，1119 and 1090(C-O-C)，800(1，4-disubstituted phenyl)，718 and 690(monosubstituted phenyl).¹HNMR(CDCl₃)：δ/ppm＝1.852(m，4H，NHCHCH₂CH₂CH₂O)，3.771(d，J＝6.9Hz，2H，NHCHCH₂O)，3.902(m，J＝6.3Hz，1H，NHCHCH₂O)，4.066(m，J＝6.7Hz，2H，NHCHCH₂CH₂CH₂O)，5.720(s，1H，OCHO)，6.383(d，J＝6.0Hz，1H，NH)，7.240(t，J＝6.9Hz，2H，aromatic H)，7.517(t，J＝7.5Hz，1H，aromatic H)，7.706(d，J＝7.2Hz，2H，aromatic H)，8.022(d，J＝6.6Hz，2H，aromatic H)，8.193(d，J＝8.7Hz，2H，aromatic H).FAB-MS(m/e)：357[M+H]⁺，[α]_D²⁰＝-18.0(C＝0.02 in CHCl₃)，C₁₉H₂₀N₂O₅.Calcd：C 64.02，H 5.66，N 7.86；Found：C 64.28，H 5.79，N 7.98；molmass：356.38

实施例5(顺式)-2-对氨基苯基-5-苯甲酰基氨基-1，3-二氧六环的制备：

78.8mg(0.24mmol)(顺式)-2-对硝基苯基-5-苯甲酰基氨基-1，3-二氧六环，用10ml无水乙醇溶解后，加10mg pd/C(5％)，反应混合物通氢气12小时，TLC(CHCl₃/CH₃OH，15∶1)显示原料点消失，反应混合物过滤，滤液减压浓缩，残留物用柱层析(CHCl₃/CH₃OH，15∶1)纯化，得到61mg(85％)(顺式)-2-对氨基苯基-5-苯甲酰基氨基-1，3-二氧六环(30)，为棕色糖浆状物。

30：IR(涂膜)，v/cm^-1＝3320，3370 and 3270(NH)，3020(aromaticC＝CH)，2930 and 2860(CH and CH₂)，1625(C＝O)，1605，1585，1540and 1460(aromatic C＝C)，1190 and 1065(C-O-C)，825(1，4-disubstitutedphenyl)，710 and 685(monosubstituted phenyl).¹HNMR(DMSO)：δ/ppm＝4.226(d，J＝7.5Hz，2H，NHCHCH₂O)，4.306(d，J＝7.5Hz，2H，NHCHCH₂O)，4.325(m，1H，NHCHCH₂O)，4.785(s，2H，NH₂)，5.705(s，1H，OCHO)，7.350(t，J＝6.4Hz，2H，aromatic H)，7.537(t，J＝6.4Hz，1H，aromatic H)，7.720(d，J＝8.5Hz，2H，aromatic H)，7.843(d，J＝6.7Hz，2H，aromatic H)，8.230(d，J＝8.5Hz，2H，aromatic H).FAB-MS(m/e)：209[M+H]⁺，C₁₇H₁₈N₂O₃.Calcd：C，H，N；Found：C，H，N；

实施例6  (2S，4S，5R)-2-对氨基苯基-5-苯甲酰基氨基-4-甲基-1，3-二氧六环的制备：

115mg(0.34mmol)(2S，4S，5R)-2-对硝基苯基-5-苯甲酰基氨基-4-甲基-1，3-二氧六环，用10ml无水乙醇溶解后，加10mg pd/C(5％)，反应混合物通氢气12小时，TLC(CHCl₃/CH₃OH，15∶1)显示原料点消失，反应混合物过滤，滤液减压浓缩，残留物用柱层析(CHCl₃/CH₃OH，15∶1)纯化，得到91mg(90％)(2S，4S，5R)-2-对氨基苯基-5-苯甲酰基氨基-4-甲基-1，3-二氧六环(31)，为棕色糖浆状物。

31：IR(涂膜)，v/cm^-1＝3425，3369 and 3269(NH)，3034(aromaticC＝CH)，2980，2940 and 2875(CH，CH₂andCH₃)，1660(C＝O)，1605，1578，1480 and 1410(aromatic C＝C)，1189 and 1060(C-O-C)，829(1，4-disubstituted phenyl)，708 and 680(monosubstituted phenyl).¹HNMR(CDCl₃)：δ/ppm＝1.270(d，J＝6.1Hz，3H，CH₃CHO)，3.952(d，J＝2.9Hz，2H，NHCHCH₂O)，3.960(m，J＝6.2Hz，1H，NHCHCH₂O)，4.069(m，J＝3.8Hz，1H，CH₃CHO)，5.001(s，2H，NH₂)，6.150(s，1H，OCHO)，6.945(d，J＝9.4Hz，1H，NH)，7.462(t，J＝6.4Hz，2H，aromatic H)，7.520(t，J＝7.0Hz，1H，aromatic H)，7.660(d，J＝8.7Hz，2H，aromatic H)，7.852(d，J＝6.4Hz，2H，aromatic H)，8.292(d，J＝8.7Hz，2H，aromatic H).FAB-MS(m/e)：313[M+H]⁺，[α]_D²⁰＝29.4(C＝0.02 in CHCl₃)，C₁₈H₂₀N₂O₃.Calcd：C，H，N；Found：C，H，N；

实施例7(2S，5S)-2-对氨基苯基-5-苯甲酰基氨基-1，3-二氧环庚烷的制备：

116mg(0.34mmol)(2S，5S)-2-对硝基苯基-5-苯甲酰基氨基-1，3-二氧环庚烷，用10ml无水乙醇溶解后，加10mg pd/C(5％)，反应混合物通氢气12小时，TLC(CHCl₃/CH₃OH，15∶1)显示原料点消失，反应混合物过滤，滤液减压浓缩，残留物用柱层析(CHCl₃/CH₃OH＝15∶1)纯化，得到92mg(87％)(2S，5S)-2-对氨基苯基-5-苯甲酰基氨基-1，3-二氧环庚烷(32)，为棕红色糖浆状物。

32：IR(KBr涂片)：v/cm^-1＝3430，3365 and 3260(NH)，3040(aromatic C＝CH)，2925 and 2849(CH and CH₂)，1638(C＝O)，1608，1575，1509 and 1460(aromatic C＝C)，1180 and 1065(C-O-C)，830(1，4-disubstituted phenyl)，710 and 675(monosubstituted phenyl).¹HNMR(CDCl₃)：δ/ppm＝1.830(m，4H，NHCHCH₂CH₂CH₂O)，3.901(d，J＝6.8Hz，1H，NHCHCH₂O)，3.959(m，J＝6.8Hz，1H，NHCHCH₂O)，3.965(m，J＝5.4Hz，1H，NHCHCH₂O)，4.310(m，J＝6.8Hz，2H，NHCHCH₂CH₂CH₂O)，5.004(s，2H，NH₂)，5.830(s，1H，OCHO)，6.675(d，J＝6.8Hz，1H，NH)，7.490(t，J＝7.6Hz，2H，aromatic H)，7.434(t，J＝7.0Hz，1H，aromatic H)，7.596(d，J＝9.0Hz，2H，aromatic H)，7.628(d，J＝9.0Hz，2H，aromatic H)，8.200(d，J＝8.4Hz，2H，aromatic H).FAB-MS(m/e)：327[M+H]⁺，[α]_D²⁰＝20.9(C＝0.02 in CHCl₃)，C₁₉H₂₂N₂O₃.Calcd：C，H，N；Found：C，H，N.

实施例8  (顺式)-和(反式)-2-(E)-苯丙烯基-5-苯甲酰基氨基-1，3-二氧六环的制备：

135mg(0.69mmol)2-苯甲酰基氨基-1，3-丙二醇(IVa)，92mg(0.69mmol)苯丙烯醛，10mg对甲苯磺酸，100mg无水硫酸钠，以及20ml氯仿的悬浮液于50℃搅拌12小时，TLC(乙酸乙酯/石油醚，1∶2)显示原料点消失，反应液降温至室温，用无水碳酸钠中和，过滤，滤液减压浓缩，残留物用柱层析(乙酸乙酯/石油醚，1∶2)分离，得到158mg(71％)(顺式)-2-(E)-苯丙烯基-5-苯甲酰基氨基-1，3-二氧六环(34)和49mg(22％)(反式)-2-(E)-苯丙烯基-5-苯甲酰基氨基-1，3-二氧六环(35)，为白色固体。

34：mp，119-122℃，IR(KBr)：v/cm^-1＝3450(NH)，3025(aromaticand olefinic C＝CH)，2950 and 2830(CH and CH₂)，1630(C＝O)，1600，1580，1500 and 1460(aromatic and olefinic C＝C)，1190 and 1070(C-O-C)，740 and 690(monosubstituted phenyl).¹HNMR(CDCl₃)：δ/ppm＝4.032(m，J＝6.5Hz，1H，NHCHCH₂O)，4.175(d，J＝6.4Hz，4H，NHCHCH₂O)，5.526(d，J＝3.3Hz，1H，OCHO)，6.204(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CH-C₆H₅)，6.814(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CH-C₆H₅)，7.185(d，J＝4.5Hz，1H，NH)，7.287(t，J＝6.0Hz，1H，aromatic H)，7.336(t，J＝7.5Hz，2H，aromatic H)，7.409(d，J＝6.6Hz，2H，aromatic H)，7.466(t，J＝5.4Hz，2H，aromatic H)，7.844(d，J＝6.6Hz，2H，aromatic H).FAB-MS(m/e)：324[M+H]⁺，C₂₀H₂₁NO₃..Calcd：C 74.27，H 6.55，N 4.33；Found：C74.35，H 6.61，N 4.38.mol mass：323.39.

35：mp，115-118℃，IR(KBr)：v/cm^-1＝3460(NH)，3030(aromaticand olefinic C＝CH)，2960and 2830(CH and CH₂)，1632(C＝O)，1605，1590，1501 and 1485(aromatic and olefinic C＝C)，1185 and 1069(C-O-C)，745 and 691(monosubstituted phenyl).¹HNMR(CDCl₃)：δ/ppm＝3.687(m，J＝6.5Hz，1H，NHCHCH₂O)，4.134(d，J＝6.9Hz，4H，NHCHCH₂O)，5.123(d，J＝4.3Hz，1H，OCHO)，6.134(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CH-C₆H₅)，6.823(d，J＝16.2Hz，1H，CH＝CH-C₆H₅)，7.299(t，J＝6.0Hz，1H，aromatic H)，7.338(t，J＝6.0Hz，2H，aromatic H)，7.434(d，J＝6.9Hz，1H，aromatic H)，7.451(t，J＝8.7Hz，2H，aromatic H)，7.510(t，J＝6.9Hz，1H，aromatic H)，7.772(d，J＝7.5Hz，2H，aromatic H).FAB-MS(rn/e)：324[M+H]⁺，C₂₀H₂₁NO₃..Calcd：C 74.27，H 6.55，N4.33；Found：C74.32，H 6.55，N 4.41.mol mass：323.39.

实施例9  (2S，4S，5R)-和(2R，4S，5R)-2-(E)-苯丙烯基-5-苯甲酰基氨基-1，3-二氧六环的制备：

128mg(0.61mmol)2-苯甲酰基氨基-1，3-丁二醇(IVb)，82mg(0.61mmol)苯丙烯醛，10mg对甲苯磺酸，100mg无水硫酸钠，以及20ml氯仿的悬浮液于50℃搅拌16小时，TLC(乙酸乙酯/石油醚，1∶1)显示原料点消失，反应混合物降温至室温，残留物用柱层析(乙酸乙酯/石油醚，1∶2)分离，得到179mg(91％)(2S，4S，5R)-2-(E)-苯丙烯基-5-苯甲酰基氨基-4-甲基-1，3-二氧六环(36)的白色固体，和17mg(9％)(2R，4S，5R)-2-(E)-苯丙烯基-5-苯甲酰基氨基-4-甲基-1，3-二氧六环(37)的白色固体。

36：mp，123-125℃，IR(KBr)：v/cm^-1＝3269(NH)，3010(aromaticand olefinic C＝CH)，2936，2860 and 2830(CH CH₂ and CH₃)，1625(C＝O)，1605，1590，1550 and 1480(aromatic and olefinic C＝C)，1386(CH₃)，1189 and 1080(C-O-C)，720 and 685(monosubstitutedphenyl).¹HNMR(CDCl₃)：δ/ppm＝1.218(d，J＝6.0Hz，3H，CH₃)，3.654(m，J＝6.5Hz，1H，NHCHCH₃)，3.875(m，J＝6.6Hz，1H，CH₃CHO)，4.335(d，J＝6.9Hz，2H，NHCHCH₂O)，4.346(d，J＝5.7Hz，1H，OCHO)，6.366(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CH-C₆H₅)，6.575(d，J＝15.9Hz，1H，CH＝CH-C₆H₅)，7.221(d，J＝6.8Hz，1H，NH)，7.244(t，J＝6.9Hz，4H，aromatic H)，7.364(d，J＝6.9Hz，2H，aromatic H)，7.405(d，J＝6.9Hz，2H，aromatic H).FAB-MS(m/e)：324[M+H]⁺，C₂₀H₂₁NO₃..Calcd：C 74.27，H 6.55，N4.33；Found：C74.35，H 6.61，N 4.38.mol mass：323.39.

37：mp，115-118℃，IR(KBr)：v/cm^-1＝3245(NH)，3024(aromatic andolefinic C＝CH)，2930，2860 and 2810(CH CH₂ and CH₃)，1620(C＝O)，1601，1585，1560 and 1460(aromatic and olefinic C＝C)，1380(CH₃)，1190 and 1076(C-O-C)，724 and 680(monosubstituted phenyl).¹HNMR(CDCl₃)：δ/ppm＝1.220(d，J＝6.0Hz，3H，CH₃)，3.641(m，J＝6.3Hz，1H，NHCHCH₂O)，4.119(m，J＝9.6Hz，2H，NHCHCH₂O)，4.305(m，J＝6.5Hz，1H，NHCHCH₂O)，5.298(d，J＝5.2Hz，1H，OCHO)，6.242(d，J＝16.4Hz，1H，CH＝CH-C₆H₅)，6.840(d，J＝16.4Hz，1H，CH＝CH-C₆H₅)，7.219(d，J＝6.5Hz，1H，NH)，7.295(t，J＝6.6Hz，4H，aromatic H)，7.412(t，J＝6.2Hz，2H，aromatic H)，7.507(d，J＝6.6Hz，2H，aromatic H)，7.833(d，J＝6.3Hz，2H，aromatic H).FAB-MS(m/e)：324[M+H]⁺，C₂₀H₂₁NO₃..Calcd：C 74.27，H 6.55，N 4.33；Found：C74.34，H 6.64，N 4.36.mol mass：323.39.

实施例10  抗炎活性评价

体重20-25g雄性昆明种小鼠随机分为用药组、空白对照组和阳性对照组，每组10只小白鼠。空白对照组灌胃给予0.2ml 0.5％羧甲基纤维素，阳性对照组灌胃给予0.2ml阿司匹林与0.5％羧甲基纤维素的悬浮液(30mg/Kg剂量，0.3mg/ml)，用药组灌胃给予0.2ml本发明的化合物与0.5％羧甲基纤维素的悬浮液(30mg/Kg剂量，0.3mg/ml)。1次给药或本次给药30分钟后往小白鼠的左耳廓涂二甲苯(0.02ml)，4小时后将小鼠颈椎脱臼处死，分别在两耳对应的位置用直径9mm的打孔器取圆型耳片，称重，求出两圆耳片的重量差作为肿胀度，结果如下。

1.多次给药  空白对照组每只小鼠每天1次灌胃给予0.2ml羧甲基纤维素(0.5％)；阳性对照组每只小白鼠每天1次灌胃给予0.6mg阿司匹林与0.2ml羧甲基纤维素(0.5％)的悬浮液；用药组每只小鼠每天1次灌胃给予0.6mg本发明的化合物与0.2ml羧甲基纤维素(0.5％)的悬浮液。连续3天。两耳圆片的重量差列入表1，组间用t检验。表1  连续3天给药的耳肿胀度(30mg./Kg)

  Comp.    两耳圆片的重量差(X±SD)mg空白对照    12.01±3.96 Aspirin    4.26±1.44¹⁾    1    8.63±3.13    3    5.74±1.71²⁾    5    5.89±2.03^2，3)    8    4.08±1.77^1，4)    9    3.97±1.49¹⁾    16    3.84±1.99¹⁾

n＝10，1)与空白对照比，P＜0.001；

       2)与空白对照比，P＜0.01；

       3)与1比，P＜0.05；

       4)与1比，P＜0.001。

2.1次给药给药方式与剂量不变，1次给药后测定肿胀度，结果列入表2。表2  1次给药的耳肿胀度

  Comp.    剂量(mg/Kg)  两耳圆片的重量差(X±    SD)mg空白对照Aspirin    30  7.76±1.55  4.17±1.80¹⁾    1    10  2.62±1.37^1，6)    2    10  3.58±1.70^2，4)    3    10  3.73±1.11³⁾    5    30  3.39±2.28^3，4)    9    30  3.28±2.06^3，5)    15    10  2.22±1.41^3，6)    16    30  4.23±2.46¹⁾    17    30  7.97±4.36    18    21  4.31±1.75¹⁾    38    30  5.81±2.46    39    30  4.84±2.30¹⁾    40    21  3.55±1.69^3，6)

n＝10，1)与空白对照比，P＜0.05；

       2)与空白对照比，P＜0.01；

       3)与空白对照比，P＜0.001；

       4)与Aspirin比，P＜0.05；

       5)与Aspirin比，P＜0.01；

       6)与Aspirin比，P＜0.001。

3.量效关系对抗炎活性优秀的化合物进行了量效关系测定，结果列入表3。表3  一些化合物的量效关系

  Comp.  剂量(mg/Kg)  两耳圆片的重量差(X±    SD)mg空白对照    6.29±2.07    1    10    1.90±0.99    5    2.64±1.49    3.5    3.16±1.07    5    30    2.76±1.85    21    3.87±1.06    3.5    5.01±1.81    16    30    3.44±2.00    10    4.10±3.07    3.5    5.82±1.47    24    30    1.43±0.89    7    1.81±0.63    2.3    3.21±1.68    42    30    0.69±0.33    21    0.86±0.40    34    30    1.54±1.09    21    2.17±0.68    7    2.61±1.49