具有选择性雌激素活性的16,17－碳环缩合类固醇化合物

摘要

本发明公开了一种具有分子式(1)的类固醇化合物，其中加点的键表示可选的双键；R6是H，＝CH2，或－CH3，或－CH2－CH3；R7是H，C1－4－烷基，C2－5－链烯基或C2－5－炔基，其中的烷基，链烯基或炔基基团可以被1至3个卤素原子所取代，这些卤素原子独立地选自氟或氯原子基团；R11是H，C1－4－烷基，C2－4－链烯基或C2－4－炔基或C1－4－亚烷基，其中的烷基、链烯基、炔基或亚烷基基团可以被1至3个卤素原子所取代，这些卤素原子独立地选自氟或氯原子基团；E和类固醇骨架上碳原子16和17一起表示一个4至7元环，该环相对于类固醇骨架形成α顺式构型，该环可选地包含1或2个桥环键；或者其前体药物。此化合物能用于治疗和雌激素受体活性选择性修饰的方法。

说明书

本发明涉及一种类固醇化合物，该化合物具有与类固醇骨架上环D相连的E环，并有雌激素活性。

人们对于和雌激素受体具有亲和力的新化合物有着持久的兴趣。这源于两种不同的雌激素受体亚型的发现，这两种亚型称作ERα和ERβ(见Mosselman等人，FEBS Letters 392(1996)49-53以及EP-A-0798 378)。有些化合物对上述受体亚型有着选择性，这些化合物就有可能提供一种更具有选择性的雌激素受体相关的疗法。其优势例如可以从人组织中受体亚型的不同分布来获得。这能够降低治疗中雌激素相关的副作用的负担。雌激素相关的医学治疗能够从那些有选择性的化合物获益，例子有避孕，绝经期病症的治疗，骨质疏松症的治疗，以及依赖于雌激素的肿瘤控制。

在EP 0 869 132中雌激素类固醇化合物得到了描述，其具有分子式(1)：

                     分子式1其中：

加点的键表示可选的双键；

R₆是H，＝CH₂，或-CH₃，或-CH₂-CH₃；

R₇是H，C_1-4-烷基，C_2-5-链烯基或C_2-5-炔基，其中的烷基，链烯基

    或炔基基团可以被1至3个卤素原子所取代，这些卤素原子独

    立地选自氟或氯原子基团；

R₁₁是H，C_1-4-烷基，C_2-4-链烯基，C_2-4-炔基或C_1-4-亚烷基，其中的

    烷基、链烯基、炔基或亚烷基基团可以被1至3个卤素原子所

    取代，这些卤素原子独立地选自氟或氯原子基团；

E和类固醇骨架上碳原子16和17一起表示一个4至7元环，该环

    相对于类固醇骨架形成α顺式构型，该环可选地包含1或2

    个桥环键并可用R_E代替，R_E有多种含义。

在EP 0 869 132中进一步揭示出，具有分子式(1)的类固醇化合物之中的任意烷基、链烯基、炔基和亚烷基基团可以是分支的或不分支的。如果R₆或R₁₁通过单键与类固醇骨架相连，它们在类固醇骨架上取代处的碳原子就会包含一个氢原子或者参与形成碳碳双键。该化合物可能含有不同的手性中心，其能够以对映异构体和非对映异构体存在。羟基可能用例如酰基或烷基等取代基加帽，从而导致根据分子式1的化合物的前体药物产生。

目前发现，具有分子式1(有上述含义的符号与术语)的类固醇化合物，出人意料地对于结合了高效价雌激素α的雌激素受体α有着一致的更好的选择性，该类固醇化合物的特征在于R_E是-羟基或其前体药物。这样的化合物(在下文指本发明的化合物)其通常不仅在雌激素受体上具有非常低的活性，而且事实上其一般作为雌激素受体的拮抗物，该化合物不仅有助于对雌激素受体α的高度选择性，而且使得基于雌激素受体β阻断的选择性治疗成为可能。本发明的化合物在其范围内含有前述的对映异构体和非对映异构体，每一种独立的(R)和(S)对映异构体基本上不以低于5％，优选地低于2％，尤其是低于1％的比例结合其它对映异构体和这样的对映异构体任意比例的混合物，包括基本上含有相等量的这两种对映异构体的外消旋混合物。

本发明一个优选的实施方案是如前面所描述的类固醇化合物，其进一步的特征在于R₆是H，R₇是分支或不分支的C_1-3-烷基，E-环是一个没有双键的5或6元环，并在22位上有一个S-立体构型的羟基，其构型根据类固醇立体化学通告的一般含义可以换句话表述为相对于类固醇骨架形成β构型。

最优选的是根据分子式2的化合物，即是(7α，16β，17α，22S)-7-丙基-16，24-环-19，21-二降胆烷(dinorchola)-1，3，5(10)-三烯-3，17，22-三醇，其编码名称为Org41621。

                 分子式2；Org 41621

因此，根据本发明的化合物对于有机体中雌激素α或β受体的活性能够进行进一步定向的，换句话也就是选择性的修饰。

前体药物是这样一种化合物，其在受者的身体内能转化成根据分子式1(R_E是β羟基)的化合物。特别地，例如在3，17位和E-环上的羟基能够转化成醚(烷基*氧基)或者酯(如酰基*氧基、磷酸酯、硫酸酯、磺酸酯或芳香羧酸酯)，因此认为用星号(*)表示的基团的碳链长度是没有严格限定的。酰基基团来源于线性的或有分支的烷烃^*，芳香羧酸酯通常包含苯基、吡啶基或嘧啶基。依据想得到的前体药物的特性，烷基和酰基的长度是可选择的，因此链更长的前体药物(例如带有月桂基或己酰基链)会更适合于持久释放和长效制剂。已知，这样的取代基经过自然水解和酶催化水解，产生游离的化合物骨架上的羟基取代基。这样的前体药物的生物活性可以与它们在受者体内转化成的化合物相比。前体药物转化成的具有活性的化合物叫做亲本化合物。前体药物在体内作用的启动和作用的持续时间以及分布可不同于亲本药物的这些特性。

无论对于医学治疗，还是生理学、医学、药理学实验，现在所发现的这些具有选择性的化合物是极其需要的。作为本发明的一个方面，本发明的化合物可以用于治疗，这种治疗是通过将化合物给予受者(人或动物，优选哺乳动物)的方式进行的。有机体不同组织的α和β受体分布的差异为更有选择性地干预不同组织功能提供了目标。已知，种属依赖性的雌激素受体α主要在阴道组织和肝脏组织中表达，而β受体则主要在前列腺组织、大鼠膀胱上皮细胞层、血管内皮平滑肌细胞和大脑的某些部位(例如基底前脑(basal forebrain)、新皮质和海马)中表达。两种受体都存在的组织有例如垂体、下丘脑、胸腺、子宫、卵巢和骨。

本发明中化合物与雌激素受体亲和性曲线，使得它们在降低雌激素相关的副作用过程中适合充当改良的雌激素或抗-雌激素。因此，本发明揭示出了一种对雌激素受体的活性进行选择性修饰的方法，该方法是通过将本发明的化合物与雌激素受体相互接触来实现的。这样的方法可以是对人或动物体的治疗，也可以是非医疗方法。后者的方法可以是实验方法，例如对于具有选择性的化合物的分析，或者是为获得雌激素受体或化合物相互作用的信息所采用的体外实验室方法。优选地，这些化合物能用于选择性的雌激素受体α或β相关的避孕、实验或医学治理，例子有如下病症的治疗或预防：雌激素受体相关的疾病、绝经期病症、骨质疏松症、心血管疾病、垂体激素调节的调整、良性前列腺肥大、雌激素依赖性肿瘤控制、结肠癌、子宫内膜异位或中枢神经系统疾病。这些具有选择性的方法和治疗的一个重要的共同特性就是，它们都包含有将本发明的化合物与雌激素受体相互接触这个过程。

本发明也涉及了根据本发明的化合物在以下方面的用途，包括用于雌激素受体相关的选择性治疗的药物和用于雌激素受体α相关疾病治疗的药物的制造，和将根据本发明的化合物给病人施用(以适当的药物剂量形式)。考虑到本发明化合物对雌激素受体β的拮抗剂作用，本发明还提供了用于制备治疗雌激素受体β相关疾病的药物的用途，包括向病人施用本发明的化合物(以适当的药物剂量形式)。

此外，本发明涉及了根据本发明的化合物在制备具有避孕活性药物中的用途。因此，本发明也适用于避孕的医学适应症，即包括了给药于主体(妇女或雌性动物)的避孕方法，该药是指在本领域常用的孕激素和雌激素，其中的雌激素是根据本发明的化合物(以适当的药物剂量形式)。

最后，本发明涉及了根据本发明的化合物在制造具有选择性雌激素活性的药物中的用途，这样的药物通常适合用在HRT(激素代替疗法)领域，其具有缓解绝经期病症，尤其是有抗骨质疏松症的活性。

本发明化合物的药剂数量可以采用雌激素相关化合物的正常范围，例如每次给药采用0.01至100mg的范围。

最终的药剂单位可以按照含有在上述治疗剂量相同范围内的数量的本发明化合物来准备。因此，本发明也涉及到了药物组合物，其中包含与一种或多种药物学上可接受的辅助物混合的本发明的化合物。

本发明的化合物可以用多种方法生产，这些方法一般在有机化学领域，尤其在类固醇化学领域是熟知的。例如见：Fried，J.和Edwards，J.A.，《类固醇化学中的有机反应》(“Organic Reactionsin Steroid Chemistry”)卷I和II，Van Nostrand Reinhold Company，New York，1972；和C.Djerassi，《类固醇反应》(“SteroidReactions”)，Holden-Day，Inc.，San Francisco，1963。

为了合成根据本发明的化合物，带有附加的16，17增加的(anellated)环的类固醇必须合成。其合成方法在EP 0 869 132中有描述。为了得到本发明的化合物，附加的羟基官能团必须引入到增加的环上。为了达到此目的，采用下述方法进行增环反应是方便的，经过合成反应步骤可得到位置合适的双键，例如通过用所熟知的烯烃置换反应程序，该反应程序通过使用来自例如钌、钼或钨的过渡元素金属催化剂，可以将16α，17α-双不饱和片断关闭形成不饱和的增环5或6元环。如此合成的烯烃环首先被立体选择性地环氧化。这一点通常可通过以下方式进行：使用像过酸(优选地在缓冲介质中)这类试剂，或者使用带有氧化试剂(像过氧化氢或叔丁基过氧氢)的金属复合物催化反应体系。在本例中，在碳酸氢钠缓冲液中的过苯甲酸一般可以给出良好的结果。环氧化物几乎可以通过用氢化物试剂进行区域选择性地还原，而打开成为所需的β-醇。羟基基团也可以很容易地通过硼氢化/氧化反应程序来合成。在α-羟基化合物已经获得的情况下，Mitsunobu转换反应可以很容易地导致β-醇的产生，这正是所希望得到的物质。这些羟基化合物能够转化成前体药物，例如烷基醚、酰基酯、碳酸酯、磺酸酯或磷酸酯，只要与所需的适当的卤代烷烃或酰基氯反应即可。

可以制备出包含有一种或多种根据本发明的化合物的药物学组合物，其中有或者没有混合药物学上可接受的辅助物，这正如标准的参考文献(Gennaro等人，Remmingto’s Pharmaceutical Sciences，(18th ed.，Mack publishing Company，1990，尤其要注意第八部分：Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture))中所描述的一样。一种或多种根据本发明的化合物和一种或多种药物学上可接受的辅助物的混合物可以压缩成固体药剂单位(例如药丸或药片)，或者加入到胶囊或栓剂中。通过使用药物学上合适的液体，这种化合物还能作为注射制剂(以溶液、悬浮液、乳浊液的形式存在)或喷雾剂(例如鼻喷雾剂)来使用。本发明的化合物还可以加入到植入物、阴道环、贴剂、凝胶，以及其他任何可持续释放的制剂之中。为了制造药剂单位，例如药片，常规添加剂(例如填料或载体、显色剂、多聚粘合剂等等)的使用是要加以考虑的。通常，任何药物学上可接受的添加剂，只要不干扰活性化合物的功能，就可以使用。合适的载体可以和组合物一起给药，其包括合适数量的乳糖、淀粉、纤维素衍生物等等，或者它们的混合物。

实施例：

在方案I和II中，图解说明了实施例中用到的合成路线。用于识别化合物的数字在这些方案中用结构式得到了详细说明。方案I方案II

化合物2

在-50℃，向5.65ml乙烯基三丁基亭置于50ml无水四氢呋喃中所形成的溶液里，逐滴加入12ml 1.6M正丁基锂的己烷溶液。其后，经过0.5小时的搅拌，在-50℃再加入6.2格令(gr)16α-烯丙基，7α-乙基雌酮-3-O-甲基醚(1)置于20ml无水四氢呋喃中所形成的溶液。再次搅拌1/2小时之后，紧接着将混合物倒入饱和NH₄Cl中，然后用乙酸乙酯提取。用硅胶色谱法将有机相浓缩，就得到4.2g油样的2，R_f0.47(甲苯/乙酸乙酯95/5)，对于1R_f0.65。NMR(CDCl₃)δ5.80(m，1，CH烯丙基)，6.07(m，1，CH乙烯基)0.98(s，CH₃)，0.93(t，3，乙基)，3.78(s，3，CH₃)。

化合物3

向4.2g的2置于80ml二氯甲烷中所形成的溶液里加入0.32g二氯化亚苄基三环己基膦酰基钌(Grubbs置换催化剂)。在经过1小时的搅拌后，再加入0.3g催化剂。当反应完全后(2小时)，将混合物浓缩，并把残余物用柱色谱法纯化，就得到3.5g的3，R_f0.29(庚烷/乙酸乙酯8/2，对于2R_f0.55)。NMR(CDCl₃)δ5.72(m，CH＝)6.02(m，1，C＝)0.99(s，3，CH₃)，0.89(t，3，CH₃)3.77(OCH₃)0.92(m，3，CH₃)。

化合物4

0.4g类固醇3和0.5g NaHCO₃置于12ml二氯甲烷中所形成的混合物用0.34g间氯过苯甲酸处理。在环境温度下搅拌几个小时之后，该反应体系用水稀释，然后用硫代硫酸钠溶液处理来破坏残余的过氧化物。有机物质用乙酸乙酯提取，并最后用色谱法提纯，就得到110mg所需的β-环氧化物4；Rf0.50(甲苯-丙酮9/1)；NMR(CDCl₃)δ0.98(t，3，CH₃)，0.92(t，3，CH₃)，3.65+3.70(2xm，环氧化物CH’s)。

化合物5

80mg类固醇4置于3ml四氢呋喃中所形成的溶液用10mg LiAlH₄回流。2小时之后，起始物消失了。然后，混合物用加入30μl饱和Na₂SO₄溶液和0.20g Na₂SO₄来猝灭，搅拌15分钟后用硅藻土过滤。将所得滤液浓缩，剩下的残渣经过短的二氧化硅柱，就得到55mg 5；R_f0.24(甲苯-丙酮9/1)；NMR(CDCl₃)δ4.04(m，1，CHOH)，3.78(s，3，OCH₃)2.85(m，2，CH₂在C6)，0.92(s，3，CH₃)。

化合物6

向乙硫醇钠(用0.7ml乙硫醇和0.27g 60％NaH分散体反应制得)置于9ml DMF中所形成的溶液里，加入120mg类固醇5。让该混合物回流3h。然后将反应体系倒入水中，并用乙酸乙酯提取。有机物质经过色谱法纯化，就得到80mg6，Mp224-226；R_f0.30(甲苯-丙酮8/2)；NMR(CDCl₃)δ4.00(m，1，CHOH)，7.12(ar H1)，6.20(ar H2)，6.45(ar H4)。

化合物7

在0℃，向2.7g类固醇3置于20ml二氯甲烷和3ml吡啶中形成的溶液里，加入1.9ml三甲基氯硅烷。搅拌1/2小时后，将反应体系倒入水中，并用乙酸乙酯提取，就得到3.3g基本上纯的甲硅烷氧基衍生物7，R_f0.8(庚烷-丙酮8/2)；NMR(CDCl₃)δ0.03(s，9，TMS)，5.68，5.91(2xs，CH烯烃)。

化合物8

在0℃，3.2g 7置于25ml无水四氢呋喃中所形成的溶液用2.2ml硼烷-二甲基硫复合物置于20ml无水四氢呋喃中所形成的溶液来处理。随后，该反应体系在45℃搅拌2小时。然后，小心加入4.5ml无水乙醇，接着小心加入11ml 2N NaOH和7.7ml 30％过氧化氢，来破坏剩余的试剂。该反应体系搅拌过夜，然后用水稀释，并用乙酸乙酯提取。所得的粗产品用柱色谱纯化，得到1.7g所要的α-醇8。R_f0.36(庚烷-丙酮8/2)；NMR(CDCl₃)δ4.42(m，1，CHOH)，0.12(s，9，TMS)，0.79(s，3，CH3)。

化合物9

在0℃，1.6g 8和1.3g三苯膦置于60ml甲苯中所得溶液用0.84g对硝基苯甲酸和0.8ml偶氮二羧酸二乙酯来处理。搅拌1小时后，反应即可完成。将混合物倒入饱和NaHCO₃水溶液中，并用乙酸乙酯提取。经过色谱法纯化，就可得到2.9gβ-硝基苯甲酸酯，R_f0.64(庚烷-丙酮8/2)；NMR(CDCl₃)δ5.34(m，1，CHOC(O)Ar)，0.91(s，3，CH₃)，0.95(t，3，CH3)，3.80(s，3，OCH₃)。将这一物质溶解在40ml四氢呋喃-甲醇(1/1 v/v)混合液中，然后用4ml 2N NaOH溶液处理。经过15分钟的搅拌后，将该反应体系倒入水中，并用乙酸乙酯将产物提取出来。在经过短的二氧化硅柱后，就可获得1.3gβ-醇9；R_f0.64(庚烷-丙酮8/2)；NMR(CDCl₃)δ 4.31(m，1，CHOH)。

化合物10

1.3g9置于30ml丙酮中所形成的溶液用2ml 2N HCl来处理。1小时之后，加入饱和NaHCO₃来中和混合物，并加以浓缩。残余物用水稀释，并用乙酸乙酯提取，就得到1.0g 10，R_f0.10(庚烷-丙酮8/2)；NMR(CDCl₃)δ0.90(t，3，CH₃)，0.95(s，3，CH₃)，4.48(m，1，CHOH)。

化合物11

向乙硫醇钠(用0.7ml乙硫醇和0.3g 60％NaH分散体反应制得)置于9ml DMF中所形成的溶液里，加入120mg类固醇10。将该混合物回流3h。然后，将反应体系倒入水中，并用乙酸乙酯提取。用色谱法纯化有机物质，就得到80mg 11，MP 143-145℃(乙醇-水)；Rf0.41(甲苯-丙酮7/3)；NMR(CDCl₃)δ4.45(m，1，CHOH)，0.93(s，3，CH₃)，0.90(t，3，CH₃)，6.62+7.10(AB，2，H1，2)，6.53(d，1，H4)。

化合物13

向29ml 1M溴化烯丙基镁的醚溶液中加入80ml无水四氢呋喃。在-50℃，加入10格令(gr)7á-丙基，16á-烯丙基雌酮-3-O-苄基醚12置于40ml四氢呋喃中所形成的溶液。经过1/2小时的搅拌后，让混合物回到室温，然后倒入300ml饱和NH₄Cl水溶液中。用乙酸乙酯提取出产品并纯化(通过硅胶色谱法除去立体异构体)，就得到7.2g所要的16á，17á-二烯丙基衍生物13。Rf0.26(庚烷-乙酸乙酯9/1)；17á-烯丙基异构体R_f0.45。NMR(CDCl₃)δ0.88(t，3，CH₃)，0.96(s，3，CH₃)，6.08(m，1，CH烯丙基)，5.80(m，1，CH烯丙基)，4.95-5.20(m，4，2xCH₂烯丙基)5.02(CH₂OBz)。

化合物14

将40mg二氯化亚苄基三环己基膦酰基钌(Grubbs置换催化剂)加入到450mg 13置于10ml二氯甲烷中所形成的溶液里。搅拌1小时后，再追加400mg催化剂。2小时之后，除去溶剂，取而代之为20ml甲苯，然后混合物加入5g碱性氧化铝，在60℃搅拌以吸收催化剂。经过用硅藻土过滤和用甲苯与乙酸乙酯洗涤，就可得到400mg几乎纯的14；Rf0.34(庚烷-乙酸乙酯8/2)；R_f130.45。NMR(CDCl₃)δ5.02(s，2，CH₂O)，5.97(s，2，CH＝CH)，0.97(s，3，CH₃)。

化合物15

向340mg 14置于0.5ml二氯甲烷中所形成的溶液里加入8ìl吡啶，0.14ml 30％双氧水和2mg甲基三氧合铼。经过1小时的搅拌后，环氧化反应就完成了，其结果主要产生了所要的-环氧化物，也包括一些α异构体。将混合物倒入水和饱和Na₂S₂O₃中，并用乙酸乙酯提取。用色谱法纯化后得到230mg 15和80mg不想要的á-环氧化物。R_f0.36(甲苯-乙酸乙酯95/5；对照：R_f化合物14：0.39)。NMR(CDCl₃)δ3.31，3.38(m，2，CH(O)CH)。

化合物16

将4.2g 15和350mg LiAlH₄置于20ml无水四氢呋喃中所形成的混合物回流2小时。然后将混合物冷却，接着用1ml饱和含水的Na₂SO₄，28ml乙酸乙酯和8g Na₂SO₄来处理。在环境温度下搅拌1/2小时之后，将反应体系用硅藻土过滤，把滤液浓缩并用色谱法纯化，就得到3，4g16，Mp 147-148℃，R_f0.20(甲苯-乙酸乙酯8/2；R_f 23 0.55)。NMR(CDCl₃)δ4.25(宽的s，1，CHOH)，0.90(s，3，CH₃)，0.86(t，3，CH₃)，5.02(s，2，OCH₂Ar)。

化合物17；(＝7α，16β，17α，22S)-7-丙基-16，24-环-19，21-二降胆烷-1，3，5(10)-三烯-3，17，22-三醇

在300mg 5％Pd/C存在的条件下，将3.3g 16置于200ml乙醇中所形成的溶液进行氢化。当反应完全后，用硅藻土过滤除去催化剂，再将溶剂浓缩。把剩余物先加醚再加水进行研制，就得到1.7g 17；Mp 146-147℃，R_f0.53(甲苯-乙酸乙酯1/1；R_f 16 0.60)。NMR(CDCl₃)δ4.26(宽的s，1，CHOH)，7.14，6.62(AB，2，H1，H2)，6.54(d，H4)。

雌激素活性的体外测试

化合物对于雌激素受体的活性的测试，是采取使用人雌激素受体α和β的结合试验和反式激活试验来进行的。

和来源于重组中国仓鼠卵巢(CHO)细胞的胞质人雌激素受体α和β的竞争性结合，可用来测定被测化合物的相对结合亲和力(＝RBA)(效价比)，这一效价比是通过与(17β)-雌二醇(E₂)和重组CHO细胞溶质中雌激素受体α或β的结合试验相比较而获得的，该重组CHO细胞稳定地转染了人雌激素受体α(hERα)或β(hERβ)。

通过体外生物测试，化合物的雌激素和抗雌激素活性得到了测定，该测试使用了稳定地共转染了人雌激素受体α(hERα)或β(hERβ)基因、大鼠催产素启动子(RO)和荧光素酶报道基因(LUC)的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。被测化合物的雌激素激动性反式激活(效价比)是和标准的雌激素雌二醇相比较而得到的，其可以刺激通过雌激素受体hERα或hERβ介导的荧光素酶的反式激活。被测化合物的抗雌激素活性(效价比)是和标准的ICI 164.384(＝(7α，17β)-N-丁基-3，17-二羟基-N-甲基雌烷(methylestra)-1，3，5(10)-三烯-7-十一烷酰胺相比较而得到的，其可以抑制用(17β)-雌二醇通过雌激素受体hERα或hERβ介导的荧光素酶的反式激活。

结果：

                    分子式3

 分子式3 的化合物R7 R11 6-环(n＝1)或 5-环(n＝0)   结合试验   Erα/Erβ   反式激活   Erα/Erβ  拮抗选择性   Erα/Erβ AH H 6-环   8.6/0.3   5.5/02    27 BCH₃ H 6-环   20/5.2   16/＜0.1    ＞160 C(＝11)C₂H₅ H 5-环   18/14   12/＜0.1    ＞120 DC₂H₅ H 6-环   17/8.7   11.5/＜0.1    ＞115 E(＝17¹⁾)C₃H₇ H 6-环   42/13.9   26/＜0.1    ＞260 FH C₃H₇ 5-环   16.3/0.4   11/0.2    55¹⁾17是Org 41621

化合物17在拮抗物试验中的选择性比Erα/Erβ＜0.1/67。

在现有技术中根据分子式3的化合物没有22-羟基但有R₇α-丙基，R₁₁氢和6元E-环，将其命名为(7α，16β，17α)-7-丙基-16，24-环-19，21-二降胆烷-1，3，5(10)-三烯-3，17-二醇，其Erα/Erβ比在结合试验中是15/7，在激动剂反式激活试验中是0.3/＜0.1。

防止大鼠中卵巢切除术导致的骨质损失的测试(抗骨质疏松症测试)

导言

大鼠的卵巢切除术将导致其骨质的损失，这是因为雌激素的缺乏。若给予雌激素化合物可以防止这种情况的发生。本试验可以对化合物在作了卵巢切除术的(OVX)大鼠体内的抗骨质疏松症活性作出评价。对于骨骼物质的效应可通过外围定量计算断层摄影术(pQCT)或X-射线照片的定量分析来评价。血浆中的骨钙蛋白与尿中的脱氧吡啶啉、钙和磷酸盐反映出了骨骼新陈代谢的状况。子宫重量的增加及身体和胸腺重量的减少反映出雌激素的效应。

测试动物

成熟的225-250g雌性处女Wistar大鼠。品系：Hsd/Cpd：Wu，SPF-bred by Harlan，CPB，Zeist，荷兰。

实验

实验的第一天，将大鼠称重，并按其重量分装入不同的笼子，也就是最轻的大鼠装入第一个笼子，最重的装入最后一个。对于这些大鼠处理是随机的。在乙醚麻醉条件下，进行假手术和卵巢切除术。当大鼠从麻醉状态中恢复过来之后，在24小时内，将载体、参照化合物或测试化合物以每日一次或两次的方式给予大鼠，这样持续4个星期。在此期间大鼠每星期都要称重。4个星期之后进行解剖。在解剖时，大鼠用乙醚麻醉，其血从腹主动脉收集。股骨、脊椎骨L1L2L3L4(可选)、子宫、胸腺、肝、肾、肾上腺、甲状腺和垂体都要解剖开来。在解剖那天，对于新鲜组织，用pQCT进行骨骼的矿物质密度和右股骨几何学的测量。股骨干骺端部分的小梁骨矿物质密度(FBMDDISmg/cm³)用pQCT(外围定量计算断层摄影术仪；XCT 960A，Stratec，Birkenfeld，Germany)测量。

结果的解释

卵巢切除术导致股骨的远端骨骼密度和小梁骨体积在统计学上的显著减少，以及血液中骨钙蛋白和尿中脱氧吡啶啉水平在统计学上的显著增加(P≤0.05，2 way ANOVA)。

与做了卵巢切除术的对照组相比较，当远端股骨的平均骨密度值显著增长时可以认为测试化合物是有用的。化合物对于尿中脱氧吡啶啉水平的影响反映了对于骨质再吸收的作用，而其对于血浆骨钙蛋白水平的影响反映了对于骨质更新的作用，这可能有助于理解其作用机制。

最小有效剂量(MAD)是指，在这种剂量下，小梁骨矿物质密度的平均比例性差异达到40至60％。

参者文献

Wronski T.J.和Yen C.F.：卵巢切除后的大鼠作为绝经后骨质损失

的动物模型(The ovariectomosed rat as an animal model

for postmenopausal bone loss)。Cells and Materials，

Supp.1(1991)：69-76.Yamazaki I.和Yamaguchi H.：卵巢切除的骨质疏松症大鼠模型的

特征(Characteristics of an ovariectomised osteopenic

rat model)。J.Bone Min.Res.4(1989)：12-22.Ederveen A.G.H.和Kloosterboer H.J.：替勃龙(一种具有组织

特异性激素特性的类固醇)可以在性成熟大鼠中完全防止卵巢

切除手术引起的骨质损失(Tibolone，a steroid with a

tissue-specific hormonal profile，completely prevents

ovariectomy-induced bone loss in sexually mature rats)。

Bone & Mineral Research Vol 14，PP 1963-1970，1999.

结果

化合物17(Org 41621)：骨质疏松症试验要口服30ìg/kg。

现有技术化合物(7α，16β，17α)-7-丙基-16，24-环-19，21-二降胆烷-1，3，5(10)-三烯-3，17-二醇：每次口服190ìg/kg。

雌激素活性的体内测试

体内雌激素活性的测定，可通过Allen Doisy测试来进行，此法在F.Allen，L.A.Doisy，J.Amer.Med.Assoc.，81，819-821(1923)中有描述。

结果

化合物17(Org 41621)：Allen Doisy sc 5ìg/kg，口服30ìg/kg。

现有技术化合物(7α，16β，17α)-7-丙基-16，24-环-19，21-二降胆烷-1，3，5(10)-三烯-3，17-二醇：Allen Doisy sc 24ìg/kg，口服125ìg/kg。