液体培养基中促进白腐真菌生长的天然添加剂

摘要

本发明公开了属于有机材料范围的一种液体培养基中促进白腐真菌生长的天然添加剂。该添加剂是分别取新鲜土豆、腐朽木材、玉米芯按重量比配取，切成小块，加去离子水、煮沸、过滤取得上清的浸出液，混合加入基础培养基中配成液体培养基，在相同的培养条件下对白腐真菌进行培养，结果表明，添加浸出液的培养基的小球产量均能够达到80g/L以上，是未添加浸出液的基础培养基的小球产量的5倍。该天然添加剂中比较复杂的有机成分促进白腐真菌在液体培养基中的生长，克服了合成培养基培养白腐真菌时对真菌小球增长速率的限制。天然添加剂耐其它微生物污染能力强，能在较长时期内保持良好的泥水分离能力，是较好的液体培养生长促进添加剂。

说明书

技术领域

本发明属于有机材料范围，特别涉及一种液体培养基中促进白腐真菌生长的天然添加剂。

背景技术

白腐真菌因其具有对难降解有机物很强的降解能力而受到广泛关注，包括多环芳烃(PAHs)、氯酚、多氯联苯(PCBs)、军工废水、农药、漂白厂废水、合成染料、合成多聚物、和杂芬油等。在研究白腐真菌小球的生理生化及降解特性时，大多数研究者采用液体培养基在摇床条件下进行扩大培养，目前多采用合成培养基。因为白腐真菌生长需要的营养条件还不是很清楚，为了促进其生长，各研究者对培养基成分进行了调整，所以报道中不同的研究者采用的培养基成份常常各不相同，这使得不同研究间的可比性降低。对于白腐真菌培养基的专门研究还比较少见报道，有必要对白腐真菌培养基进行更为深入的研究，为白腐真菌的研究提供更为合理的标准培养基。

根据培养基的组成成分，培养基可分为天然和合成两大类。天然培养基含有化学成分不完全明了的天然物质，如蛋白陈、牛肉膏等。其特点为取材方便，成本低，微生物增殖效果较好。合成培养基由已知化学成分的营养物质组成。这种合成培养基的配方成分都是已知的，所以只要配制过程的操作严格要求，各批培养基的质量可做到稳定一致，但是因为和微生物自然生长状况差别比较大，往往生长效果比较差。

发明内容

本发明的目的是提供一种液体培养基中促进白腐真菌生长的天然添加剂，所述添加剂包含土豆、木材、玉米芯，其特征在于：所述添加剂为土豆、木材、玉米芯按重量比(5～8)∶1∶(1～3)配取，分别取新鲜土豆、腐朽木材、玉米芯切成1cm×1cm×1cm见方的小块，加去离子水适量，电炉上煮沸，保持沸腾20min，然后用40目纱网过滤，其中木材浸出液和玉米芯浸出液再用快速滤纸过滤，取上清液备用。

所述天然添加剂用于促进白腐真菌在液体培养基中的生长培养，在相同的培养条件下对白腐真菌进行培养；其培养过程为：将木材、玉米芯、土豆的浸出液分别按成分进行不同搭配，且成分之间按等量混合，添加在液体培养基中，及加适当的去离子水配成液体培养基，再用250ml锥形瓶分装，每瓶加入培养基100ml，8层纱布封口；在高压灭菌锅中121℃下灭菌10min；冷却，用接种环轻刮固体培养基表面黄孢平革菌的粉状孢子，接种到液体培养基中；然后置30℃恒温、150r/min恒转速摇床进行培养；3天后用40目筛网过滤收集白腐真菌菌丝球。

本发明的有益效果为：1.在液体培养基中添加木材、玉米芯、土豆浸出液，对于白腐真菌的产量提高有极大的促进作用，在外加碳源为10g/L葡萄糖的条件下，经过3天培养，添加浸出液的培养基的小球产量均能够达到80g/L以上，是未添加浸出液的基础培养基的小球产量的5倍。2.在未添加任何浸出液的基础培养基中，小球产量很低，并且外加碳源葡萄糖浓度的增大，对小球产量影响甚小。3.添加土豆浸出液的样品容易染菌，添加玉米芯浸出液的样品培养较长时间后容易发生小球膨胀，添加木材浸出液的培养基用于培养白腐真菌小球，产量高、耐其它微生物污染能力强，能在较长时期内保持良好的泥水分离能力，是较好的液体培养生长促进添加剂。木材、玉米芯、土豆浸出液相互混合有利于白腐真菌的生长。4.用添加木材浸出液的培养基培养白腐真菌，在不同浓度葡萄糖条件下，小球产量的差别在初期并不明显，随着培养时间增加，小球产量差别逐渐增大。

具体实施方式

本发明为一种液体培养基中促进白腐真菌生长的天然添加剂，所述添加剂包含土豆、木材、玉米芯，是按土豆、木材、玉米芯的重量比(5～8)∶1∶(1～3)配取，如分别取新鲜土豆15g、腐朽木材2.5g、玉米芯3.75g，切成1cm×1cm×1cm见方的小块，加去离子水适量，电炉上煮沸，保持沸腾20min，然后用40目纱网过滤，其中木材浸出液和玉米芯浸出液再用快速滤纸过滤，取得的上清液为一份土豆、木材、玉米芯浸出液。其浸出液的基本成分为：葡萄糖10g/L；KH₂PO₄2g/L；酒石酸铵0.2g/L；CaCl₂0.1g/L；MgSO₄ 0.25g/L；维生素B₁ 5mg/L；微量元素1ml/L。微量元素成分：CuSO₄.7H₂O 0.08g/L；H₂MoO₄ 0.05g/L；MnSO₄.7H₂O0.07g/L；ZnSO₄.7H₂O 0.043g/L；Fe₂(SO₄)₃ 0.05g/L。将得到的天然添加剂上清液加适当的去离子水配成液体培养基，用于促进白腐真菌在液体培养基中的生长培养，在相同的培养条件下对白腐真菌进行培养；其培养过程为；将木材、玉米芯、土豆的浸出液分别按表1中所示成分进行不同搭配，且成分之间按等量混合，添加在液体培养基中，及加适当的去离子水配成液体培养基，再用250ml锥形瓶分装，每瓶加入培养基100ml，8层纱布封口；在高压灭菌锅中121℃下灭菌10min；冷却，用接种环轻刮固体培养基表面黄孢平革菌的粉状孢子，接种到液体培养基中；然后置于30℃恒温、150r/min恒转速摇床进行培养；3天后用40目筛网过滤收集白腐真菌菌丝球。

表1中所示是基础培养基中添加不同混合的木材、土豆、玉米芯浸出液得到的培养基，用于白腐真菌培养三天后得到的小球产量比较。从表1中可以看到，将三种浸出液等量混合加入基础培养基时，小球产量最高，达到135.5g/L，将两种浸出液等量混合加入基础培养基时，小球平均产量为99.8g/L，添加单一天然成分的培养基平均产量75.4g/L。这一结果表明，比较复杂的有机成分有利于白腐真菌的生长，这和它的腐生特性是相吻合的，进一步说明，采用成分较为简单的人工合成培养基对白腐真菌进行培养对真菌小球增长速率有一定限制，得到的小球用于白腐真菌性质的研究还不能最大限度地反映白腐真菌的降解潜力。

表1添加不同混合成分的添加液的培养基培养白腐真菌小球3天后的产量比较

    培养基名称木材浸液(份)玉米芯浸液(份)  土豆浸液(份)小球产量(g/L)木材、玉米芯、土豆浸出混合液培养基    1/3    1/3    1/3    135.5木材、玉米芯浸出混合液培养基    1/2    1/2    0    108.5木材、土豆浸出混合液培养基    1/2    0    1/2    100玉米芯、土豆浸出混合液培养基    0    1/2    1/2    91木材、浸出液培养基    1    0    0    69.5玉米芯浸出液培养基    0    1    0    75.25土豆浸出液培养基    0    0    1    81.5基础培养基    0    0    0    14.5