抑制导致癌细胞转移的自由基复合物

摘要

本发明公开的是以提高化学稳定性为目的,由茶提取物EGCg与微生素C衍生物配合组成的一类复合物。这类复合物,不仅能消除引发癌细胞浸润转移的多种自由基,而且,当这两种物质有效组合后,其各自的稳定性得到提高,从而克服了这两种物质单独使用时的缺陷。

说明书

                      技术领域

本发明涉及一种抑制自由基复合物，特别涉及一种抑制导致癌细胞增殖、浸润和转移的自由基的复合物。

                      背景技术

健康人体内的自由基产生和清除是平衡的。临床上90％疾病的产生如癌症，心脏病，高血压，糖尿病等多与人体内自由基的代谢失衡即氧应激相关。因此，探求有效的抑制自由基物质，在防止疾病的发生和发展上具有重大的意义。

癌细胞的浸润转移，是引起癌症患者死亡的主要原因，抑制癌细胞的浸润转移是肿瘤治疗学的一个重要领域。近年来，对癌症采取化疗、放疗和手术治疗虽取得一定疗效，但因其毒副作用而未能有效地抑制其死亡率。其中，这些治疗手段产生的自由基，非但不能抑制癌细胞的增殖，反而显示出促进残存癌细胞增殖、浸润和转移，已成为肿瘤治疗学上的一个难点。研究表明人体内自由基具有促进癌细胞蛋白酶合成作用，这种酶在癌细胞转移过程中能分解基底膜，形成癌浸润转移过程中必不可少的环节。自由基能促进癌细胞的DNA合成，静止期的细胞经自由基类物质处理后，在诱导DNA合成的同时，能使c-fos，c-myc，c-jun基因表达增强。自由基能促进癌组织的血管新生。自由基能使Rho因子活化，进而导致细胞机动蛋白的F-actin聚合增强，细胞的运动能增强。癌细胞从自身线粒体中放出的自由基，在癌细胞的增殖，浸润和转移过程中具有很重要的作用。因此，自由基在癌细胞的增殖，浸润和转移过程中具有很重要的作用。通过抑制自由基，则能有效的抑制肿瘤细胞的浸润转移。近来，抑制自由基已作为抗癌转移药物筛选的一个新靶位点。

维生素C(Ascorbic acid，缩写Asc.)为一种自由基抑制物质，但由于其具有对光、热很不稳定且易被氧化的特点，从而难以有效的到达细胞内发挥其生物活性。发明者通过对Asc的衍生物研究表明其具有良好的稳定性，进入体内后可使细胞内Asc高浓度化，能有效的抑制癌细胞的氧自由基，因而显示出抗癌细胞浸润转移。然而自由基有多种类型，其中以氧自由基，羟基自由基和NO自由基为最常见的自由基，这些自由基不仅与人类常见的几种主要疾病相关，而且与癌细胞浸润转移相关。因此，在抑制癌细胞的浸润转移中，不仅要有效的抑制氧自由基，同时还要能有效的抑制羟基自由基和NO自由基。针对引发癌细胞浸润转移的数种不同类型的自由基，开发出自由基抑制剂，可望能进一步提高抗癌细胞浸润转移的目的。

目前开发的抑制自由基活性物质，存在以抑制某种自由基为主的特点，而对其它种类的自由基抑制效果存在差别。同时迄今为止有公开报道的自由基抑制剂，也仅以某种单一的活性成分为主，而能同时能抑制数种自由基的复合物未见报道。

                        发明内容

本发明公开一种能同时抑制导致癌细胞增殖、浸润和转移的氧自由基、羟基自由基和NO自由基的复合物，且复合物中活性组分的化学性质较其单独使用时更趋于稳定，从而解决了现有自由基抑制剂存在不能同时抑制数种自由基及在使用时其活性组分化学性质不稳定的问题。

本发明的技术构思：

自由基是以氧自由基为主的多种自由基，因此，根据维生素C及其衍生物具有抗氧化的特性，在本发明中使用的活性组分之一为维生素C衍生物-Asc2P6Plm，其为维生素C与脂肪酸的水脂化，具有水脂相溶的特性，能有效的抑制人体内的氧自由基。本发明所述的复合物的另一活性组分为EGCg，(Epigallocatechin Gallate)其为茶叶的提取物，具有化学性质不稳定性的特性，其能抑制羟基自由基和NO自由基。本发明人经大量实验研究发现将其与维生素C衍生物-Asc2P6Plm复配后能达到抑制数种自由基的目的，同时能提高两者化学性质的稳定性。

发明的技术方案：

本发明所述的抑制导致癌细胞转移的自由基的复合物主要由活性组分维生素C衍生物-Asc2P6Plm和EGCg(Epigallocatechin Gallate)组成，其中Asc2P6Plm和EGCg的重量比以0.1-2∶0.1-1为佳。所述的Asc2P6Plm的制备参见EP 0875514A1，EGCg为市售商品。

本发明所述的复合物制备方法：

在水溶剂(如蒸留水)，水溶性制剂(如生理盐水)或脂溶剂(如胡麻油)中按Asc2P6Plm∶EGCg，0.1-2∶0.1-1g/L(重量单位/体积单位)溶合而形成复合物。

本发明所述的复合物的使用方法：

本发明所述的复合物在使用上无特定的剂型限制，其能与药理学上允许的添加成分(稀释剂，着色剂，安定剂，界面活性剂，助溶剂，缓冲剂，矫味剂，香料，保存剂，糖衣剂)相组合，制成经口给药的固型制剂，如散剂、丸剂、片剂及胶囊剂和非经口给药的外用剂型，如软膏、贴敷剂及注射剂。

本发明所述的复合物对包括恶性黑色素瘤、恶性淋巴瘤、消化器官的肿瘤(胃癌，肠癌，肝癌，胆囊癌，胆道癌，胰腺癌)、肺癌、乳癌、生殖器官肿瘤(睾丸癌，卵巢癌，子宫癌，前列腺癌)、口腔类肿瘤(口腔癌、咽喉癌、上颚癌、舌癌、)，甲状腺癌、脑部肿瘤、各类肉瘤、骨肉瘤、白血病、神经系统肿瘤、膀胱肿瘤、皮肤癌及皮肤附属器官癌的癌细胞转移具有抑制作用。

本发明所述的复合物具有抑制癌细胞浸润转移活性高，副作用低及使用方便等优点。

                  具体实施方法

下面通过实施例对本发明作进一步的说明，但其并不限制本发明的保护范围：

                     实施例

对肺癌细胞转移抑制的试验

用8-9周龄的C57/BL6小鼠进行以下的试验。

把以下的试剂用0.2ml的PBS中溶解，通过腹腔进行注射。

1组，空白对照组(5只)PBS 0.2ml

2组，Asc2P6Plm组，用Asc2P6Plm 0.2mg/0.2ml

3组，Asc2P6Plm 0.13mg，EGCg0.07mg溶解于PBS中

腹腔注射后，立即通过尾静脉注射入PBS悬混的B 16 Melanoma细胞5×104，从第二天起连续7天腹腔进行注射，结束后再连续饲养14天，然后进行解剖，统计小鼠肺脏的转移灶。结果显示，2组的肺脏转移灶抑制率是33.7％，3组的肺脏转移灶抑制率是56.7％。

对人皮肤纤维肉瘤细胞浸润抑制试验

用Matrigel(Colaborative制)31μg涂于浸润用的多孔膜的小腔(孔径8μm；Becton Dickinson制)内，等干燥后将癌细胞(人皮肤纤维肉瘤细胞或B 16 Melanoma细胞)播种到腔内，经105分钟和4小时后，用棉棒擦去多孔膜小腔表面的细胞，经台盼蓝染色后，从小腔上取下膜，贴附到载玻片上，在显微镜下对浸润细胞数进行测定。所用的癌细胞是经过250μM和Asc2P6Plm 20μg与EGCg10μg的混合溶解物培养。这个培养的条件，经验证不显出细胞的毒性。结果显示，Asc2P6Plm组细胞浸润抑制率是59-68％，本发明组细胞浸润抑制率是77-82％。