呋喃－和噻吩硫代甲酰胺衍生物,其制备及其作为HIV－1和HIV－1突变型复制的抑制剂的应用

摘要

式(Ⅰ)化合物,其中X是O或S。本发明化合物可用于在体外或体内抑制人免疫缺陷病毒－1(HIV－1)及其逆转录酶(RT)突变型的复制。可将该化合物用于由HIV－1及其RT突变型导致的疾病,如获得性免疫缺陷综合征的治疗性或预防性治疗。

说明书

本发明涉及一种可用于抑制HIV-1和HIV-1突变株复制的化合物。更具体地讲，本发明涉及甲基呋喃基-和甲基噻吩基-戊烯基醚衍生物，这类衍生物是野生型HIV-1及HIV-1逆转录酶突变株复制的抑制剂。本发明还涉及预防或治疗患者的HIV-1感染的方法，该方法包括给患者服用有效量的所述甲基呋喃基-或甲基噻吩基-戊烯基醚衍生物。

已披露了多种作为人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的体外抑制剂的、作用于病毒编码的逆转录酶(RT)的化合物，例如，nevirapine、吡啶酮(pyridinone)、TIBO、BHAP、TSAO和喹喔啉。美国专利US5,268,389披露了一些可用于抑制HIV复制的硫代羧酸酯化合物。该化合物对HIV-1的选择性是由于与HIV-1 RT的高度专一的相互作用。

抗几种HIV-1-专一性RT抑制剂的HIV-1毒株在细胞培养物及AIDS患者体内的迅速产生已引起了对在临床上进一步研制这种抑制剂的关注。例如，在其RT上含有100 Leu→Ile突变的HIV-1株抗TIBO R82913和R82150。在其RT上含有138Glu→Lys突变的HIV-1株抗TSAO衍生物。HIV-1株在RT上的181 Tyr→Cys突变使得突变病毒能抗nevirapine和吡啶酮。例如，参见Balzarini等，J.Virology 67(9)：5353-5359(1993)(“Balzarini I”)，和Balzarini等，Virology 192：246-253(1993)(“BalzariniII”)。

已尝试过对各种HIV-1 RT抑制剂进行组合以克服病毒抗性。例如，参见Balzarini I。

本发明的目的是提供其本身能抑制或阻抑野生型HIV-1和HIV-1 RT突变株出现的化合物。本发明的目的还在于提供一种通过服用这类化合物预防或治疗HIV-1感染的方法。

本发明涉及下式化合物：其中，X是O或S。

本发明化合物可用于在体外和体内抑制人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)及其逆转录酶(RT)突变型的复制。该化合物可用于由HIV-1及其RT突变型所引起的疾病，如获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的治疗或预防性治疗。

本发明还涉及一种含有治疗有效量的式I化合物和一种可以药用的载体的药用组合物。

本发明还涉及一种治疗受感染宿主的HIV-1感染的方法，该方法包括给所述宿主服用治疗有效量的式I化合物。

理想的是，本发明涉及下式的化合物：合成方法可以通过让式A-COOH的酸，其中A是与下式的苯胺衍生物反应来制备本发明化合物。首先将酸A-COOH转化成其酰基氯，然后在合适的溶剂中用所述苯胺衍生物及一种酸清除剂处理，以形式酰胺。所述酸清除剂可以是一种有机碱，如吡啶，或碱金属氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐，如碳酸氢钠。适用于该步骤的溶剂包括：二氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯等。然后在合适溶剂中，在有诸如吡啶或碳酸氢钠的酸清除剂的条件下让所得到的酰胺与诸如Lawesson’s试剂或五硫化二磷的亚硫酰化剂反应。为完成亚硫酰化反应，通常进行加热。适用于亚硫酰化反应的溶剂包括甲苯、二甲苯、DME等。[S]＝亚硫酰化剂

制备本发明化合物的第二种方法是，在-75℃至-80℃的温度下用n-丁基锂对式A-Br的溴代化合物进行金属取代。然后让所得到的锂复合物与下式的异硫氰酸酯反应：然后，通过酸化可直接生成本发明化合物(硫代甲酰胺)。

可以上述方法的类似方式制备对照化合物1-117。一般，所述对照化合物的制备包括酰胺的生成及随后用Lawesson’s试剂或五硫化二磷进行亚硫酰化。

(i)碱

(ii)Lawesson’s试剂或P₂S₅与吡啶或碳酸氢钠

A、Z和B的含义如表1。

本发明化合物可以口服、肠胃外服用、含服、吸入雾剂、经直肠或皮肤使用，以含有常规无毒可以药用的载体、辅药和媒介物的剂量单位制剂形式使用。可用于本发明组合物中的可以药用的载体、辅药及媒介物可从标准药物学教材中查到，如Remington’s Pharmaceutical Sciences，16th Edition，Mack Publishing Company，Easton，PA(1980)。

可以与所述药用载体组合以制成单一剂型的本发明化合物的治疗有效量随受治疗宿主的年龄、状态及具体用药方式而变化。一般，本发明化化合物最好以这样的浓度使用：通常可产生有效的抗病毒效果，而又不会造成任何有害的副作用。

尽管可以作为唯一活性药剂使用本发明化合物，本发明化合物也可用于与一种或几种其它药剂组合，所述这些药剂不会破坏本发明化合物的活性，或其与本化合物的组合不会产生对受治疗宿主的损害作用。

所提供的以下实施例是用于说明本发明的。

                        实施例材料和方法试验化合物

(A)化合物IA的制备如下：(方法I)步骤1制备2-氯-5-硝基苯酚

在0-5℃下将2-氨基-5-硝基苯酚(65.6g)搅拌下加入36％氢氯酸(200ml)中。用1.5小时滴加溶于水(75ml)中的亚硝酸钠(33.25g)溶液，然后，在这一温度下将该第一反应混合物再保持1小时。用分批加入的氨基磺酸(1.5g)分解过剩亚硝酸。然后将第一反应混合物分批加入搅拌的溶解在20％氢氯酸(50ml)中的氯化酮(I)(8.5g)悬浮液中。产生大量泡沫。在上述添加过程之后，将所得到的第二反应混合物搅拌1小时。然后将得自第二反应混合物的沉淀收集在滤器上，用水洗涤并干燥，得到63.2g褐色固体。将该固体与1.5g活性炭在甲醇(500ml)中回流15分钟；通过硅藻土(celite)过滤；蒸发，得到60.8g褐色2-氯-5-硝基苯酚。步骤2制备1-氯-2-(3-甲基-2-丁烯氧基)-4-硝基苯

在环境温度下将2-氯-5-硝基苯酚(50.6g)、无水碳酸钾(44.5g)、溴化四丁铵(4.7g)和4-溴-2-甲基-2-丁烯(53.3g，90％)在甲基乙基酮(263ml)中的反应混合物搅拌过夜。该反应混合的TLC显示有痕量苯酚残留。再将溴化异戊二烯(prenyl bromide)(1ml)加入该反应混合物中并搅拌2小时。然后从该反应混合物中除去溶剂。再用水处理该反应混合物的残余物，并萃取到乙醚中。用2NNaOH₂和水洗涤该萃取物，干燥(MgSO₄)、过滤并蒸发，留下褐色固体，从乙酸乙酯/异丙醇中再结晶，得到1-氯-2-(3-甲基-2-丁烯氧基)-4-硝基苯，49.5g，一种米色固体，在TLC(乙酸乙酯∶己烷，20∶80)上有一个点。步骤3制备4-氯-3-(3-甲基-2-丁烯氧基)苯胺

向充分搅拌的铁粉(19.6g，100目)在乙醇(60ml)、水(13.4ml)和36％氢氯酸(1.4ml)中的回流悬浮液中分批加入1-氯-2-(3-甲基-2-丁烯氧基)-4-硝基苯(24g)，用时15-30分钟。3小时后，薄层色谱法(TLC)(乙酸乙酯∶己烷，40∶60)显示无底物。然后对该反应混合物进行热过滤，并用热乙醇洗涤氧化铁滤饼。蒸发合并的乙醇洗液，得到一种残余物。将该残余物溶解在乙醚中，用含水碳酸氢盐和水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，并蒸发，得到4-氯-3-(3-甲基-2-丁烯氧基)苯胺，19.8g淡褐色油状物。

步骤4

制备2-甲基-3-呋喃甲酰氯

搅拌氯乙醛缩二甲醇(300g)、水(400ml)和36％氢氯酸(40ml)的第一反应混合物，并进行回流。当该第一反应混合物变匀后让其冷却，并加入搅拌的乙酰乙酸乙酯(260g)和吡啶(500ml)溶液中，并在环境温度下搅拌72小时，以生成第二反应混合物。然后从第二反应混合物中分离有机层，并用水稀释水层并用二氯甲烷萃取。用2N氢氯酸洗涤合并的有机物，然后除去溶剂。用水(700ml)和乙醇(100ml)中的NaOH(80g)溶液处理残余物，得到第三种反应混合物。在回流1小时后将第三反应混合物倾入冰/水中，并用氢氯酸酸化。生成一种奶油色沉淀物。将该沉淀物收集在滤器上，用水洗涤并干燥，得到180g 2-甲基-3-呋喃甲酸。将100g 2-甲基-3-呋喃甲酸分批加入亚硫酰氯(500ml)中，回流3小时。然后蒸馏除去多余亚硫酰氯，得到一种残余物。用水泵蒸馏该残余物，得100g 2-甲基-3-呋喃甲酰氯，bp.62℃。步骤5制备N-[4-氯-3-(3-甲基-2-丁烯氧基)苯基]-2-甲基-3-呋喃甲酰胺

在冰/盐浴中搅拌由2-甲基-3-呋喃甲酰氯(13.57g)在二氯甲烷(94ml)中形成的第一溶液。将由4-氯-3-(3-甲基-2-丁烯氧基)苯胺(19.8g)、三乙胺(14ml)在二氯甲烷(94ml)中形成的第二溶液加入第一溶液中，加入速度以能将温度维持在-5℃-0℃为限。当完成加入过程后，搅拌所得到的反应混合物至环境温度，并继续搅拌15小时。将水加入该反应混合物中，然后分离有机层并用水、稀氢氯酸、水、碳酸氢钠水溶液和水依次洗涤。干燥(MgSO₄)之后将洗过的有机层中的溶剂除去，并从异丙醇中再结晶残余物，得到17g N-[4-氯-3-(3-甲基-2-丁烯氧基)苯基-2-甲基-3-呋喃甲酰胺，一种白色固体。还得到第二批米色结晶7.6克。步骤6制备N-[4-氯-3-(3-甲基-2-丁烯氧基)-苯基]-2-甲基-3-呋喃硫代甲酰胺(化合物IA)

用1 1/2小时将由N-[4-氯-3-(3-甲基-2-丁烯氧基)苯基]-2-甲基-3-呋喃甲酰胺(4g)、NaHCO₃(7.4g)和Lawesson’s试剂(3.6g)在甲苯(l68ml)中形成的反应混合物逐渐加热至85℃，再在该温度下保持2 1/2小时。然后让该反应混合物冷却，并通过中性氧化铝填料过滤，用乙醚∶石油醚(1∶1)洗脱。蒸发溶剂，得到2.6g N-[4-氯-3-(3-甲基-2-丁烯氧基)苯基]-2-甲基-3-呋喃硫代甲酰胺产物。

(B)化合物IB的制备如下：(方法II)步骤1制备3，5-二溴-2-甲基噻吩

在搅拌中将溶于二噁烷(2L)中的溴(320g)滴加到溶于二噁烷(500ml)中的2-甲基噻吩(98g)中，用时7.5小时，然后再环境温度下静置过夜。再将反应混合物加热回流3小时，倾入水(4L)中，并用乙醚萃取。用碳酸氢盐水溶液和水依次洗涤乙醚萃取物，并干燥(MgSO₄)。蒸发后得到一种油状物，蒸馏得到234.6g 3，5-二溴-3-甲基噻吩，bp.98℃。步骤2制备3-溴-2-甲基噻吩

用四氢呋喃(THF)(25ml)覆盖镁屑(5g)，并在搅拌下用3，5-二溴-2-甲基噻吩(5g)处理。发生放热。通过冷却将反应混合物保持在35℃±5℃的温度下。将另外的3，5-二溴-2-甲基噻吩(47g)滴加到反应混合物中，同时将温度保持在上述范围内。在滴加过程将要结束时将温度升至40℃。大部分镁已发生反应。当该反应放热结束后，通过外部加热将反应混合物的温度从40℃提高到50℃，并在50℃下保持1小时。再将该反应混合物缓慢倾入剧烈搅拌的冰/水/稀HCl中，得到第二混合物。将第二混合物萃取到乙醚中，用水洗，干燥(MgSO₄)，并蒸发，留下一种液体，在水泵中将其蒸馏，得到32.6g 3-溴-2-甲基噻吩，一种透明液体，bp.62-65℃。步骤3制备1-氯-2-(3-甲基-2-丁烯氧基)-4-异氰硫基苯

将1-氯-2-(3-甲基-2-丁烯氧基)苯胺(19.9g)(参见方法I，步骤3)溶于二氯甲烷(75ml)中，形成第一溶液。然后在剧烈搅拌下用冰/水(250ml)覆盖该第一溶液。然后将由硫光气(7.3ml)在二氯甲烷(25ml)中形成的第二溶液滴加到第一溶液中。再用冰浴保持所得到的反应混合物冷却。从该反应混合物中沉淀出一种固体，但随着时间推移，该固体进一步反应，并溶于二氯甲烷中。然后让反应混合物回至环境温度，此时反应结束。然后从反应混合物中分离有机物，用水洗涤，干燥并在减压条件下蒸发(用一种碱洗气器吸收多余硫光气)，以形成一种暗灰色固体。通过溶于商用己烷、让溶解的固体通过硅胶柱(最小3.5cm直径×6cm长)、再用己烷洗脱该柱来纯化所述固体。蒸发该己烷溶液，得到一种白色固体22g，为1-氯-2-(3-甲基-2-丁烯氧基)-4-异氰硫基苯，在TLC(己烷)上有一个点。步骤4制备N-[4-氯-3-(3-甲基-2-丁烯氧基)-苯基]-2-甲基-3-噻吩硫代甲酰胺(化合物#IB)

在氮气环境中，在丙酮/干冰浴中冷却3-溴-2-甲基噻吩(5.5g)在干乙醚(25ml)中形成的溶液。将n-丁基锂(10ml，在己烷中的浓度为2M)滴加到该溶液中，加入速度以不使所得到的第一反应混合物的温度升高超过2℃为限。在这一滴加过程之后，在-75℃下搅拌第一反应混合物1.5小时。将溶于干乙醚(25ml)中的1-氯-2-(3-甲基-2-丁烯氧基)-4-异氰硫基苯)(6.2g)滴加到第一反应混合物中，加入速度以不使所得到的第二反应混合物升温2℃以上为限(1.25小时)。在该滴加过程之后，用2小时让第二反应混合物缓慢回到环境温度。然后用冰/水/稀HCl/乙醚处理第二反应混合物。从第二反应混合物中分离有机物。再用水洗涤有机物，干燥(MgSO₄)，并除去溶剂。留下一种粘性黄色油状物。当该油状物与商用己烷一起搅拌时得到一种黄色固体。将该黄色固体收集在滤器上，有6.2g，并从环己烷/乙醚中再结晶，得到4.7g N-[4-氯-3-(3-甲基-2-丁烯氧基)苯基]-2-甲基-3-噻吩硫代甲酰胺，一种黄色固体，mp 118-120℃(未校正)。

化合物IA和IB具有令人满意的I.R.和NMR谱。

表1                            

表1(续)                             

表1(续)                        

表1(续)                            

表1(续)                            

表1(续)                          

表1(续)                        细胞和病毒

CEM细胞获自美国组织细胞培养物保藏所(Rockville，Md.)。HIV-1(III_B)最初获自持续由HIV-1感染的H9细胞的培养物上清液，并由R.C.Gallo和M.Popovic提供(NationalCancer Institute，National Institutes of Health，Bethesda，MD)。HIV-1 RT突变株的选择及鉴定方法如下：按Balzarini等所述方法(Virology 192：246-253(1993))，选择HIV-1/100-Ile(“100-Ile”)对TIBO R82150的抗性；按Balzarini等所述方法(Virology 192：246-253(1993))选择HIV-1/103-Asn(“103-Asn”)对TIBO R82913的抗性；按照Balzarini等所述方法(J.Virol.67：5353-5359(1993))选择HIV-1/106-Ala(“106-Ala”)对nevirapine的抗性；按照Balzarini等所述方法(Virology 192：246-253(1993)和Balzarini等，Proc.Nat.Acad.Sci.USA 90：6952-6956(1993))选择HIV-1/Lys-138(“Lys-138”)对TSAO-m³T的抗性；按照Balzarini等所述方法(Virology 192：246-253(1993))选择HIV-1/181-Cys(“181-Cys”)对吡啶酮L-697，661的抗性；按照Balzarini等所述方法(Mol.Pharmocol.44：694-701(1993))选择HIV-1/188-His(“188-His”)对HEPT的抗性。在缺少HEPT的条件下在细胞培养物中进一步传代时，188-His被进一步转化成HIV-1/188-Leu(“188-Leu”)。试验化合物在细胞培养物中的抗病毒活性

以大约每ml培养基300,000个细胞的密度悬浮CEM细胞，并用大约为100CCID₅₀(CCID₅₀为50％细胞培养物感染剂量)的上述HIV-1(III_B)或HIV-1 RT突变株之一感染。然后将100μl感染过的细胞悬浮液加至含有100μl的试验化合物的适当连续(5倍)稀释液的200μl微量滴定板的孔中。试验化合物对HIV-1引起的CEM细胞中的合胞体生成的抑制作用，通过显微镜在感染后第4天进行检查。50％有效浓度(EC₅₀)被定义为可对HIV-1感染的细胞培养物中的合胞体生成产生50％的抑制的试验化合物浓度。结果

从下面的表2A和2B可以看出，化合物IA和IB具有极低的、实际上类似的抗HIV-1(III_B)的EC₅₀值(称为“WT”

                                       表2A

                                   抗病毒活性^c

化合物                                                   EC₅₀(μg/ml)^a  CC₅₀  (μg/ml)^b    WT  100-Ile  103-Asn  106-Ala  138-Lys  181-Cys  188-Leu    IA 0.003 0.003 0.006 0.005 0.005 0.011 0.50＞100    IB 0.003 0.004 0.004 0.005 0.005 0.005 0.60 5.8^a50％有效浓度(即：抑制病毒诱发的细胞发病率50％所需的化合物浓度)^b50％细胞静止浓度(即：抑制CEM细胞增殖50％所需的化合物浓度)^c数据为2-3个独立实验的平均值

                                               表2B

                                    对照化合物的抗病毒活性^c

化合物                                               EC₅₀(μg/ml)^a    CC₅₀    (μg/ml)^b    WT    100-Ile   103-Asn   106-Ala    138-Lys    181-Cys    188-Leu    1  0.0055    0.048   0.048   0.023  0.018  0.03  0.65    5.9    2  0.006    0.048   0.023   0.04  0.018  0.075  0.65    9.0    3  0.0065    0.057   0.23   0.03  0.045  0.08  0.91    5.8    4  0.007    0.22   0.4   0.22  0.039  0.59  0.93    ＞100    5  0.013    0.055   0.08   0.025  0.04  0.025  ＞2    10    6  0.0041    0.037   0.03   0.018  0.03  0.045  1.0    4.7    7  0.0065    0.065   0.058   0.03  0.04  0.045  1.2    11    8  0.0055    0.032   0.023   0.023  0.025  0.025  ≥2.0    5.1    9  0.0032    0.057   0.13   0.03  0.02  0.032  ＞2    6.0    10  0.02    0.65   1.27   0.23  0.09  0.033  ＞2    6.5    11  0.029    0.13   0.17   0.1  0.13  0.045  ＞2    13    12  0.007    0.035   0.035   0.08  0.035  0.07  ≥2.0    ＞100    13  0.08    0.26   0.38   0.17  0.25  0.07  ＞2    11.4    14  0.067    0.16   0.12   0.1  0.24  0.087  ＞2    2.1    15  0.03    0.06   0.065   0.06  0.07  0.09  ＞2    11.4    16  0.0041    0.15   0.33   0.077  0.03  0.1  ≥2.0    5.9    17  0.22    0.49   0.73   0.3  0.18  0.45  ＞2    7.0    18  0.014    0.33   0.33   0.15  0.22  0.13  ＞2    8.5    19  0.17    0.85   ≥2.0   0.4  0.6  0.13  ＞2    5.2    20  0.13    0.34   0.44   0.15  0.43  0.14  ＞2    5.4    21  0.008    0.3   0.61   0.23  0.11  0.17  ＞2    6.0    22  0.08    0.48   0.65   0.26  0.55  0.18  ＞2    5.8    23  0.03    0.7   ≥2.0   0.22  0.73  0.27  ＞2    5.8

                                         表2B(续)

                                  对照化合物的抗病毒活性^c

化合物                                                 EC₅₀(μg/ml)^a    CC₅₀    (μg/ml)^b    WT  100-Ile  103-Asn  106-Ala  138-Lys  181-Cys  188-Leu    24  0.13  0.48  0.6  0.5  0.5  0.33  ＞2    9.7    25  0.03  0.2  0.4  0.2  0.13  0.44  ＞2    3.3    26  0.033  0.33  0.33  0.09  0.50  ≥2.0  ＞2    5.3    27  0.01  0.36  0.5  0.11  0.15  0.46  ＞2    6.0    28  0.029  0.22  0.33  0.23  0.11  0.5  ＞2    4.3    29  0.14  0.5  0.43  0.5  0.05  0.55  ＞2    6.2    30  0.015  1.27  1.67  0.34  0.23  0.65  ＞2    ＞100    31  0.09  ≥2.0  ≥2.0  0.6  0.93  0.73  ＞2    5.5    32  0.16  ≥2.0  ≥2.0  ≥2.0  ≥2.0  0.95  ＞2    4.1    33  0.063  0.95  1.0  0.65  0.62  1.07  ＞2    7.0    34  0.08  0.65  0.8  0.28  0.5  1.2  ＞2    4.8    35  0.16  1.5  0.55  0.8  0.7  1.6  ＞2    5.9    36  0.18  1.23  1.2  0.85  0.85  1.6  ＞2    7.8    37  0.16  ≥2.0  ≥2.0  1.3  1.25  1.73  ＞2    5.0    38  0.08  ≥2.0  ≥2.0  0.7  ≥2.0  ＞2  ＞2    5.5    39  0.15  1.4  0.7  ＞2  0.5  ≥2.0  ＞2    4.1    40  0.24  1.4  ≥2.0  ＞2  1.2  ＞2  ＞2    5.8    41  0.28  ≥2.0  ≥2.0  ≥2.0  ≥2.0  ≥2.0  ＞2    ＞100    42  0.36  ≥2.0  ≥2.0  ≥2.0  ≥2.0  ≥2.0  ＞2    5.0    43  0.65  1.2  1.3  4.5  1.3  ＞2  ＞2    11    44  0.0073  0.035  0.08  0.06  0.03  0.08  ＞10    ＞100

                                      表2B(续)

                              对照化合物的抗病毒活性^c

化合物                                                    EC₅₀(μg/ml)^a    CC₅₀   (μg/ml)^b    WT  100-Ile  103-Asn  106-Ala  138-Lys  181-Cys  188-Leu    45  0.15  0.6  0.95  0.85  0.65  0.5  ＞10.0    87    46  0.37  4.5  4.0  3.0  0.6  5.5  ≥2    25    47  0.23  ≥10  ≥10  ≥10  ≥10  ≥10  ≥10    ＞100    48  0.45  6.5  -  6.5  3.5  6.0  -    3.8    49  0.007  0.6  -  0.6  0.6  0.2  -    5.2    50  0.15  5.0  -  1.0  1.0  1.9  -    3.7    51  0.006  0.8  -  0.03  0.03  0.10  -    6.7    52  0.70  8.5  -  5.5  4.0  ≥10  -    6.2    53  0.03  0.85  -  0.29  0.08  0.55  -    18    54  0.6  ＞10  -  5.0  ＞10  1.0  -    44    55  0.009  0.65  -  0.08  0.18  0.11  -    17    56  0.7  ＞10  -  6.5  ＞10  ≥10  -    52    57  0.009  1.3  -  0.2  0.08  0.50  -    ＞100    58  0.19  5.5  -  7.0  6.0  5.0  -    6.5    59  0.09  0.65  -  0.60  0.40  0.35  -    15    60  0.23  4.5  -  1.6  1.57  3.0  -    14    61  0.01  0.2  -  0.2  0.05  0.2  -    12    62  0.4  3.5  -  5.0  5.0  5.5  -    6.2    63  0.05  4.5  -  5.0  2.2  5.0  -    4.3    64  0.6  ≥10  -  2.0  4.0  5.0  -    33    65  0.04  0.3  -  0.26  0.09  0.25  -    19    66  0.6  ＞10  -  9.0  ＞10  ≥10  -    25

                                                表2B(续)

                                     对照化合物的抗病毒活性^c

化合物                                                EC₅₀(μg/ml)^a    CC₅₀    (μg/ml)^b    WT  100-Ile  103-Asn  106-Ala  138-Lys  181-Cys  188-Leu    67  0.75  ≥10    -  ≥10  5.5  ＞10    -  29    68  0.45  5.0    -  8.5  5.5  8.5    -  ＞100    69  0.04  0.65    -  0.65  0.55  3.5    -  10    70  0.19  2.5    -  6.5  5.5  2.5    -  5.2    71  0.049  0.6    -  3.0  3.0  1.6    -  4.0    72  0.03  2.3    -  0.5  0.085  1.6    -  24    73  0.017  2.9    -  0.80  0.09  0.85    -  ＞100    74  0.015  6.0    -  0.45  0.09  3.0    -  ＞100    75  0.009  0.9    -  0.7  0.35  0.6    -  16    76  0.035  2.7    -  ≥1  0.73  ＞1    -  5.3    77  0.045  ≥1    -  ≥1  0.55  ＞1    -  3.6    78  0.045  5.0    -  2.0  1.13  3.3    -  7.1    79  0.03  0.85    -  0.07  0.07  0.08    -  4.1    80  0.50  4.0    -  5.0  4.0  3.0    -  8.3    81  0.04  0.7    -  0.65  0.6  4.5    -  12    82  0.03  2.0    -  1.0  0.55  0.8    -  5.2    83  0.004  0.17    -  0.057  0.035  0.07    -  9.7    84  0.049  0.6    -  3.0  3.0  1.6    -  4.0    85  0.5  6.0    -  7.5  5.5  5.3    -  6.7    86  0.1  5.0    -  5.0  4.0  5.0    -  7.4    87  0.02  3.0    -  1.0  0.55  0.53    -  15    88  0.01  0.7    -  0.6  0.3  0.27    -  5.2    89  0.09  3.0    -  4.0  1.9  4.0    -  4.9

                                           表2B(续)

                                  对照化合物的抗病毒活性^c

化合物                                                   EC₅₀(μg/ml)^a    CC₅₀    (μg/ml)^b  WT  100-Ile  103-Asn  106-Ala  138-Lys  181-Cys  188-Leu    90  0.19  3.5     -  6.0  0.7  5.5    -    27    91  0.45  4.5     -  8.5  5.0  7.5    -    5.8    92  0.02  0.4     -  0.75  0.50  0.37    -    4.3    93  0.03  2.0     -  0.10  0.08  0.7    -    9.7    94  0.01  0.75     -  0.50  0.15  0.6    -    3.1    95  0.008  0.65     -  0.08  0.16  0.5    -    13    96  0.05  ＞1     -  0.75  0.17  ＞1    -    9.0    97  0.009  3.5     -  ≥4  2.0  3.3    -    3.3    98  0.06  ＞1     -  0.85  0.7  ＞1    -    7.5    99  0.10  ＞1     -  ＞10  ＞10  ＞10    -    ＞100    100  0.03  4.0     -  0.8  0.4  0.65    -    ＞100    101  0.045  3.0     -  0.2  0.33  0.55    -    ≥100    102  0.03  0.85     -  0.85  0.08  0.65    -    3.7    103  0.01  0.19     -  0.075  0.06  0.07    -    8.5    104  0.01  0.65     -  0.4  0.2  0.37    -    11    105  0.015  0.4     -  0.2  0.085  0.07    -    6.7    106  0.007  0.5     -  0.08  0.065  0.085    -    ＞100    107  0.04  0.6     -  0.3  0.15  0.3    -    16    108  0.007  0.27     -  0.08  0.07  0.08    -    7.0    109  0.005  0.17     -  0.04  0.035  0.045    -    4.3    110  0.04  4.0     -  0.2  0.1  0.5    -    25    111  0.007  0.5     -  0.085  0.077  0.3    -    12    112  0.025  0.75     -  0.35  0.5  0.8    -    10

                                    表2B(续)

                             对照化合物的抗病毒活性^c   

化合物                                                     EC₅₀(μg/ml)^a  CC₅₀  (μg/ml)^b    WT  100-Ile  103-Asn  106-Ala  138-Lys  181-Cys  188-Leu    113 0.023 0.27  - 0.085 0.15 0.13   -    5.4    114 0.05 0.085  - 0.13 0.075 0.075   -    5.8    115 0.29 0.65  - 0.2 0.77 0.5   -    4.3    116 0.085 1.8  - 5.5 0.6 2.0   -    ≥100    117 0.06 5.0  - 0.75 0.35 4.0   -    18^a 50％有效浓度(即：抑制病毒诱发的细胞发病率50％所需的化合物浓度)^b50％细胞静止浓度(即：抑制CEM细胞增殖50％所需的化合物浓度)^c数据为2-3个独立实验的平均值