新的中间体及其制备N,N'-桥连的双吲哚基马来酰亚胺的用途

摘要

本发明提供式(Ⅱ)的化合物,本发明还提供用这种化合物制备N,N′－桥连的双吲哚基马来酰亚胺,本发明进一步提供用于抑制哺乳动物中蛋白激酶C的药物制剂及其使用方法。

说明书

蛋白激酶C同功酶的广泛存在性及其在生理上的重要作用提供了生产高度选择性的PKC抑制剂的兴趣。由于有证据表明某些同功酶与疾病有关，有理由假定，相对于其它PKC同功酶和其它蛋白激酶，对一两种蛋白激酶C的同功酶有选择性的抑制剂作用的化合物是优越的治疗药剂。由于这样的化合物具有特异性，他们表现了更高的药效和更低的毒性。

于1995年6月14日出版的EP0657458中，Heath等人公开了一类对PKC同功酶具有选择性的N，N′-桥连的双吲哚基马来酰亚胺。在这类N，N′-桥连化合物中，优选的化合物包括一种式I的化合物：其中R为氨基、烷基氨基或二烷基氨基。Heath等人列举了下列几种已制备的氨基取代的N，N′-桥连的双吲哚基马来酰亚胺：

不幸的是，发现在制备氨基取代的N，N′-桥连的双吲哚基马来酰亚胺时，用于制备氨基取代的N，N′-桥连的双吲哚基马来酰亚胺的O-甲磺酸酯基具有毒性并含有不需要的杂质，必须使用昂贵的纯化技术来确保O-甲磺酸酯从最终产物中除去。

本发明提供一种用于合成氨基取代的N，N′-桥连的双吲哚基马来酰亚胺的关键的中间体，这种新的中间体很容易转变为氨基取代的N，N′-桥连的双吲哚基马来酰亚胺，而不需要经过O-甲磺酸酯中间体，这种中间体的活性明显地更高。优选在更低的温度下、以更短的反应时间、以高产率和更少的副产物用这种中间体制备氨基取代的N，N′-桥连的双吲哚基马来酰亚胺。因此，这种中间体可用于高产率地、不产生不需要的有毒杂质用以制备N，N′-桥连的双吲哚基马来酰亚胺。

另外，所要保护的化合物可用作PKC同功酶的选择性抑制剂。这样，这些化合物可用于治疗与糖尿病及其综合症、出血、发炎、中枢神经系统疾病、心血管疾病、皮肤病和癌症有关的病症。

本发明提供式II的化合物：其中R₁为Br、I或O-甲苯磺酰基。

本发明还提供一种含有式II的化合物和一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋性剂的药物制剂。

本发明的另一个方面是一种用式II的化合物制备式I的N，N′-桥连的双吲哚基马来酰亚胺的方法，该方法包括使式II的化合物与一种胺在非活性的极性溶剂中反应。

为了本发明的公开和要求保护的目的，下列术语和缩写按照下述定义。

术语“C_1-4烷基”代表含有1-4个碳原子的环烷基、直链烷基或支链烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基等。

术语“芳基”代表取代或未取代的苄基、苯基或萘基。

这里所用的术语“胺”是指-N(CF₃)(CH₃)、-NH(CF₃)或-NR₃R₄，其中R₃和R₄各自为氢、C_1-4烷基、苯基、苄基，或者R₃和R₄和其相连的氮原子一起形成一个饱和或不饱和的5元环或6元环。

如上所述，本发明提供一种式II的化合物：其中R₁为Br、I或O-甲苯磺酰基。

认识到式II的化合物可能存在多种立体异构体，优选的本发明的化合物是式IIa和IIb的化合物：然而，外消旋体和单个的对映体及其混合物都是本发明的一部分。

本发明的化合物最容易从下式的化合物制备：

这种羟基取代的N，N′-桥连的双吲哚基马来酰亚胺-化合物III是用1995年6月14日出版的EP0657457中Heath等人所述的技术制备的，在此作为参考文献引入。

要求保护的化合物按照下述方式制备：R₁如上定义，优选地，R₁为Br或I，最优选地，R₁为Br。要求保护的甲苯磺酸酯(对甲苯磺酰基)化合物可以通过使醇与对甲苯磺酸酐在一种碱(例如吡啶)的存在下，在THF、乙醚、二氯甲烷或其它的非活性的有机溶剂中反应而制得。反应一般在氮气气氛下，在室温至反应混合物的回流温度下进行。

要求保护的卤化物是通过使醇与一种溴化物或碘化物原料反应而制备的。该溴化物或碘化物原料可以是一些本领域中常用的试剂，包括：HI、HBr、LiBr、CaBr₂、PBr₃、R₅PBr₂、N-溴代丁二酰亚胺、CBr₄、烯丙基溴、苄基溴、SOBr₂；其中R₅为苯基、苯氧基、烷基或芳基。本领域的技术人员将会认识到可以向反应中加入各种活化剂，例如1，1′-羰基二咪唑。可以用本领域常用的技术和Richard C.Larock在A Guide ToFunctional Group Preparations，VCH出版，p.356-63(1989)中公开的技术(在此通过参考文献引入)把羟基化合物(III)转变为卤化物(II)。优选的条件包括溴化物或碘化物在磷的卤化物(例如PX₃、(Ph)₃PX₂或(PhO)₃PX₂，其中X为Br或I)的存在下反应。反应适合在THF、乙腈、二氯甲烷或其它的本领域常用的非活性的有机溶剂中进行。由于形成如Barluenga J.在Synthesis p.426(1985)和Hodosi G.在Carbohydrate Research 230：327-42(1992)中所述的Vilsneier型反应试剂，DMF或其它溶剂也可以使用。

式II的化合物也可以按下列方式转变为式IV的氨基取代的N，N′-桥连的双吲哚基马来酰亚胺：其中R₁为Br、I或O-甲苯磺酰基；R₂为-N(CF₃)CH₃)、-NH(CF₃)或-NR₃R₄，其中R₃和R₄各自为氢、C_1-4烷基、苯基、苄基，或者R₃和R₄与和其相连的氮原子一起形成一个饱和或不饱和的5员环或6员环，优选R₂为N(CH₃)。

用化合物II生成化合物IV的方法包括使化合物II与下式的一种胺：-HN(CF₃)(CH₃)、HNH(CF₃)或HNR₃R₄(其中R₃和R₄各自为氢、C_1-4烷基、苯基、苄基，或者R₃和R₄与和其相连的氮原子一起形成一个饱和或不饱和的5员环或6员环)在一种非活性的极性非质子性溶剂中反应。反应优选在DMF、THF-水、二甲基乙酰胺的溶液中，在0℃至反应混合物的回流温度的温度范围下进行。反应一般在大约1-20小时内完成。优选地，反应在室温至50℃下进行。化合物IV可以从反应混合物用标准技术纯化而制得，但是优选直接从反应混合物结晶而制得。

最出人意料的是，使用要求保护的中间体来制备氨基取代的N，N′-桥连的双吲哚基马来酰亚胺，产率高而且没有有毒的杂质。与已知的甲磺酸酯相比，要求保护的中间体的反应活性出奇得高。各种离去基团与HN(CH₃)₂反应的活性列于表I中，本领域预言的相关反应活性在RAREYAND SUNDBERG，Part A，3rd Edition，page 291(1990)中有描述。表I.与HN(CH₃)₂反应的速率基团                                K_rel(离去基团与HN(CH₃)₂反应的

                                速率)对甲苯磺酸酯                        2.2×10^-2MsO^-                               5.5×10^-3Cl^-                                9.8×10^-4I^-                                 2.0×10^-1Br^-                                2.2×10^-2

表I中的数据表明，甲苯磺酸酯、溴化物和碘化物具有出人意料的反应活性，特别是溴化物和碘化物，其反应活性比已知的甲磺酸酯高8-36倍。这种比MsO更高的反应活性也可以在与H₂NCH₃，H₂N(PhCH₃)的反应中观察到。反应活性的增大导致在更低的反应温度下，以更短的反应时间完成反应。使用要求保护的中间体还导致产物中含有更少的杂质。使用已知的O-甲磺酸酯中间体反应来生产氨基取代的N，N′-桥连的双吲哚基马来酰亚胺时，由于马来酰亚胺的羰基上的反应而产生的副产物，使得杂质水平达到15-30％。使用要求保护的中间体，杂质水平小于5％，具有实质性的改善。

如前所述，发现用于制备氨基取代的N，N′-桥连的双吲哚基马来酰亚胺的O-甲磺酸酯官能团具有毒性，并且是制备氨基取代的N，N′-桥连的双吲哚基马来酰亚胺时不希望有的杂质。必须采用昂贵的纯化技术来确保从最终产物中除去O-甲磺酸酯中间体。因此，本发明的中间体和使用所要求保护的中间体制备氨基取代的N，N′-桥连的双吲哚基马来酰亚胺的方法另一个优点是避免了艰难地除去有毒杂质的步骤。

优选的使用所要求保护的中间体制备的化合物为下列的化合物：(S)-13-[(二甲基氨基)甲基]-10，11，14，15-四氢-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮，特别是其甲磺酸盐；(S)-13-[(一甲基氨基)甲基]-10，11，14，15-四氢-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮；(S)-13-[(吡咯烷基)甲基]-10，11，14，15-四氢-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮一盐酸盐；和(S)-13-[苄基氨基甲基]-10，11，14，15-四氢-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮。

优选的式IV的一取代胺可以直接从要求保护的化合物制备。直接用甲磺酸酯中间体高产率地制备这些化合物的方法是不可能的。

可以用本领域常用的技术制备自由碱形式的式IV的化合物，并且可以优选地转变为一种药学上可接受的盐。优选的盐包括盐酸盐和甲磺酸盐。

下列的实施例和制备例只是用于进一步说明本发明，本发明的保护范围不应解释为仅仅由下列实施例组成。在下列的实施例和制备例中，熔点、核磁共振光谱、质谱、硅胶高压液相色谱、N，N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃和乙酸乙酯分别缩写为M.Pt.、NMR、MS、HPLC、DMF、THF和EtOAc。术语“NMR”和“MS”表示光谱与所需要的结构一致。

                         制备例1

3-(2-[(甲磺酰基)氧基乙氧基]-4-三苯基甲氧基)-1-丁醇甲磺酸酯

在氮气保护下，把三苯甲基氯(175.2g，0.616摩尔)溶于500mlCH₂Cl₂中，加入三乙胺(71.9g，100ml，0.710摩尔)，然后加入R，S-缩水甘油(50.0g，0.648摩尔)，将反应溶液加热温和回流(42℃)4小时。把反应液冷却到室温，用250ml饱和氯化铵水溶液萃取两次，然后用250ml盐水萃取。水层用100mlCH₂Cl₂反萃取，干燥有机层(MgSO₄)并真空蒸馏，得到油状的三苯甲基缩水甘油，使该油状物在乙醇中重结晶，得到104.4g(54％)的三苯甲基缩水甘油固体。

在氮气保护下，把1M的溴化乙烯基镁的THF溶液(50ml，50mmol，2.0当量)冷却到-20℃，加入催化量的碘化铜(0.24g，1.26mmol，0.5当量)。所得的混合物在-20℃搅拌5分钟，然后在-20℃下，用15分钟的时间滴加三苯甲基缩水甘油(7.91g，25.0mmol)溶于40ml干燥的THF中的溶液。反应混合物在-20℃下搅拌3小时，然后温热到室温并搅拌15分钟。通过把反应混合物冷却到-30℃来淬灭反应，缓慢加入125ml饱和的氯化铵水溶液。所得的反应混合物用200ml乙酸乙酯萃取，然后用0.93g(2.50mmol，0.1当量)乙二胺四乙酸(EDTA)二钠盐二水合物溶于125ml去离子水的水溶液萃取以除去金属。水层用50ml乙酸乙酯反萃取，合并的有机层用100ml盐水洗涤，干燥(MgSO₄)并真空蒸馏，得到油状物，使该油状物通过硅胶(76g)过滤，用1.2L的3∶1的己烷∶乙酸乙酯洗脱。真空蒸馏滤液，得到9.07g的淡黄色的油状的1-(三苯基甲氧基)-4-戊烯-2-醇(100％)。

在室温下，把60％的氢化钠的矿物油悬浮液(6.13g，0.153mol，1.5当量)悬浮于175ml的干燥THF中。所得的混合物在45℃下搅拌1.5小时，然后通过注射器加入17.7ml(0.204mmol，2.0当量)新蒸馏的烯丙基溴。反应物在45℃加热1小时，反应可以用TLC或HPLC监测。把反应混合物冷却到0℃，缓慢加入400ml饱和氯化铵水溶液以淬灭过量的碱。所得的混合物用800ml乙酸乙酯萃取，有机层用500ml水洗涤，水层用100乙酸乙酯反萃取，合并的有机层用200ml盐水洗涤，干燥(MgSO₄)并真空蒸馏，得到41.5g(＞100％)黄色油状的1，1′，1″-[[[2-(2-丙烯氧基)-4-戊烯基]氧基]次甲基]三苯。

把1，1′，1″-[[[2-(2-丙烯氧基)-4-戊烯基]氧基]次甲基]三苯(39.3g，0.102mol)溶解于390ml的无水甲醇和60ml的CH₂Cl₂的溶液中，然后冷却到-50℃-40℃，同时用氮气向粘稠的反应液中鼓泡。然后在-50℃-40℃下，用臭氧向反应液中鼓泡80分钟，直到反应物颜色变成兰灰色。使所得的反应混合物在氮气保护下温热到0℃，然后缓慢加入硼氢化钠(23.15g，0.612mol，6当量)溶于85ml乙醇/85ml水的溶液以淬灭反应，同时把反应温度维持在10℃以下。反应物在冰浴中搅拌30分钟，然后温热到室温并搅拌过夜，温热下温度升高到31℃。反应混合物用400ml饱和氯化铵水溶液稀释并用800ml乙酸乙酯萃取，有机层用400ml水洗涤，水层用150ml乙酸乙酯反萃取，合并的有机层用200ml盐水洗涤，干燥(MgSO₄)并真空蒸馏，得到絮状油。该油状物用2∶1的己烷∶乙酸乙酯分三批重结晶，得到28.9g 3-(2-羟基乙氧基]-(4-三苯基甲氧基)-1-丁醇(72％)。

在氮气保护下，把3-(2-羟基乙氧基]-4-三苯基甲氧基)-1-丁醇(14.0g，35.7mmol)溶解于140ml的CH₂Cl₂中并冷却到0℃，加入三乙胺(10.8g，14.9ml，0.107mol，3.0当量)，然后在＜5℃的温度下滴加入甲磺酰氯(11.0g，7.46ml，94.6mmol，2.7当量)。所得的反应混合物再用CH₂Cl₂(300ml)稀释，用200ml水和200ml饱和氯化铵水溶液洗涤，水层用50ml CH₂Cl₂反萃取，合并的有机层用100ml盐水洗涤，干燥(MgSO₄)并真空蒸馏，得到18.4g(94％)的3-(2-[(甲磺酰基)氧基]乙氧基]-4-三苯基甲氧基)-1-丁醇甲磺酸酯的白色固体。 

                         制备例2

                  (S)-三装甲基缩水甘油

在氮气保护下，把三苯甲基氯(2866g，10.3摩尔)溶于7LCH₂Cl₂中，加入三乙胺(1189g，1638ml，11.8摩尔)，然后用1L的CH₂Cl₂作为淋洗剂，加入(R)-(+)缩水甘油(795.0g，10.6摩尔)，将反应溶液加热到温和回流(42℃)3-4小时。把反应液冷却到室温，然后加入3L盐水，干燥有机层(600g MgSO₄)并真空蒸馏，得到油状的标题化合物，使该油状物在乙醇中重结晶，得到2354g(70％)的标题化合物固体。

                             制备例3

(S)-3-[2-[(甲磺酰基)氢基]乙氨基]-4-(三苯基甲氧基)-1-丁醇甲磺酸酯

在氮气保护下，把1M的溴化乙烯基镁的THF溶液(5.76L，5.76mol，1.96当量)冷却到-20℃，加入催化量的碘化铜(28.2g，0.148mol，0.05当量)。所得的混合物在-20℃搅拌5分钟，然后在-20℃下，用1.5小时的时间滴加(S)-三苯甲基缩水甘油(929.0g，2.94mol)溶于3.2L干燥的THF中的溶液。反应混合物在-20℃下搅拌1小时。通过把反应混合物冷却到-30℃来淬灭反应，缓慢加入5L饱和的氯化铵水溶液。有机层用1L10％重量/体积的乙二胺四乙酸二钠盐二水合物的溶液萃取以除去金属。有机层用2L盐水洗涤，干燥(MgSO₄)并真空蒸馏，得到1061g(96％)的油状的(S)-1-0-(三苯基甲基)-4-羟基戊醇。

在室温下，把60％的氢化钠的矿物油悬浮液(268.9g，6.72mol，1.5当量)悬浮于2.8L的干燥THF中，加入(S)-1-0-(三苯基甲基)-4-羟基戊醇(1543g，4.48mol)溶于5.6L干燥的THF中的溶液，所得的混合物在室温下搅拌1.5小时，然后通过注射器用20分钟的时间加入770ml(8.89mol，2.0当量)新蒸馏的烯丙基溴。反应物在45℃加热1-2小时。把反应混合物冷却到15-20℃，缓慢加入2L饱和氯化铵水溶液以淬灭过量的碱。所得的混合物用1L乙酸乙酯和1L水稀释，分离出有机层，水层用500乙酸乙酯反萃取，干燥合并的有机层(MgSO₄)、真空蒸馏，得到1867g(98％)黄色油状的(S)-1，1′，1″-[[[2-(2-丙烯氧基)-4-戊烯基]氧基]次甲基]三苯。

把(S)-1，1′，1″-[[[2-(2-丙烯氧基)-4-戊烯基]氧基]次甲基]三苯(1281g，3.33mol)溶解于4L的无水甲醇和3.6L的CH₂Cl₂的溶液中，然后冷却到-50℃-40℃，同时用氮气向粘稠的反应液中鼓泡。向反应液中加入苏丹(Sudan)III指示剂，然后在-50℃-35℃下，用臭氧向反应混合物中鼓泡13小时，直到反应物由桃色变为淡绿/黄色。使所得的反应混合物在氮气保护下温热到0℃，然后用40分钟的时间，向溶液中缓慢加入硼氢化钠(754g，19.9mol，6当量)溶于2.5L乙醇/2.5L水中的溶液，同时把反应温度维持在30℃以下。然后使反应物在室温搅拌过夜。反应可以用HPLC监测。把反应混合物冷却到10-15℃，并在＜20℃的温度下缓慢加入4L饱和氯化铵水溶液。然后过滤淬灭的反应混合物，固体用3L的CH₂Cl₂洗涤，分离出有机层并用3L的饱和氯化铵水溶液洗涤，水层用1L CH₂Cl₂反萃取，干燥合并的有机层并真空蒸馏，得到1361g(＞100％)油状的(S)-3-(2-羟基乙氧基)-4-(三苯基甲氧基)-1-丁醇。

在氮气保护下，把(S)-3-(2-羟基乙氧基)-4-(三苯基甲氧基)-1-丁醇(500g，1.27mol)溶解于4.8L的CH₂Cl₂中并冷却到0℃，加入三乙胺(386.4g，532ml，3.81mol，3.0当量)，然后在＜5℃的温度下用30分钟的时间滴加入甲磺酰氯(396.3g，268ml，3.46mol，2.7当量)。所得的反应混合物在0-5℃下搅拌1-2小时并用HPLC监测。反应混合物再用CH₂Cl₂稀释，用2L水和2L饱和氯化铵水溶液洗涤两次，水层用1L CH₂Cl₂反萃取，干燥合并的有机层并真空蒸馏，得到一种固体粗产物，该粗产物用1∶1的庚烷∶乙酸乙酯分三批重结晶，得到615g(88％)的(S)-3-[2-[(甲磺酰基)氧基]乙氧基]-4-(三苯基甲氧基)-1-丁醇甲磺酸酯的固体。NMR.MS.

                               制备例4

(S)-10，11，14，15-四氢-13-(羟甲基)-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E.K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮

把2，3-双-(1H-吲哚-3-基)-N-甲基马来酰亚胺(114.7g，0.336mol)和(S)-3-(2-[(甲磺酰基)氧基]乙氧基]-4-(三苯基甲氧基)-1-丁醇甲磺酸酯(220.0g，0.401mol，1.2当量)溶解于4.3LDMF中，然后用70小时(以大约1ml/分钟的速率)的时间把该试液缓慢加入到50℃的碳酸铯(437.8g，1.34mol，4.0当量)溶于7L DMF的浆液中。70-72小时后，冷却反应液并过滤，真空蒸馏除去DMF，将得到的残留物溶于4.6L CH₂Cl₂中。有机层用1.15L的1NHCl溶液萃取，然后用4.6L盐水萃取。合并的水层用1.1LCH₂Cl₂反萃取。干燥合并的有机层(Na₂SO₄)并过滤。真空蒸馏除去绝大部分溶剂，所得的溶液通过2Kg硅胶过滤并且另用4-5加仑的CH₂Cl₂除去原始材料。真空蒸馏除去溶剂，所得的紫色固体用7倍体积的乙腈(根据粗产物(S)-10，11，14，15-四氢-2-甲基-13-[(三苯基甲氧基)甲基]-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮的重量)研制，经干燥后得到150.2g(57％)的(S)-10，11，14，15-四氢-2-甲基-13-[(三苯基甲氧基)甲基]-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮(经HPLC分析与标准比较，纯度为89％)。

把(S)-10，11，14，15-四氢-2-甲基-13-[(三苯基甲氧基)甲基]-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮(32.7g，46.9mmol)悬浮于1.6L的乙醇和1.6L的10N的KOH水溶液中。把所得的混合物加热温和回流(78℃)19小时，绝大部分固体在达到回流温度时溶解。将反应混合物冷却到10-15℃，在＜15℃下缓慢加入10N的HCl(1.2L)，把酸度调节到pH＝1。酸化后，浆液变红。反应混合物用500ml CH₂Cl₂稀释，搅拌20分钟，过滤除去大部分盐，另用CH₂Cl₂(1.5L)洗涤盐，滤液用1L水萃取两次，合并的水层用1L CH₂Cl₂反萃取，干燥有机层(MgSO₄)。真空蒸馏除去溶剂，得到36.0g(＞100％)的(S)-10，11，14，15-四氢-13-[(三苯基甲氧基)甲基]-4，9：16，21-二次甲基桥-13H-二苯并[E，K]呋喃并[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮的紫色固体(经HPLC面积分析测得纯度为80％)。

在氮气保护下，把(S)-10，11，14，15-四氢-13-[(三苯基甲氧基)甲基]-4，9：16，21-二次甲基桥-13H-二苯并[E，K]呋喃并[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮(36.0g，视为46.9mmol)溶解于320ml干燥的DMF中，并加入1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷(99ml，75.7g，0.469mol，10当量)和甲醇(9.5ml，7.52g，0.235mol，5当量)的预先混合的溶液。所得的溶液在45℃加热7小时。可以用HPLC监测反应。真空蒸馏除去大部分DMF，把所得的残留物萃取到200ml的乙酸乙酯中，并用200ml水洗涤，用100ml 5％的LiCl水溶液洗涤两次，水层用100ml乙酸乙酯反萃取。合并的有机层用200ml饱和氯化铵水溶液洗涤，并干燥(MgSO₄)、真空蒸馏，得到35.9g(＞100％)的粗产物(S)-10，11，14，15-四氢-13-[(三苯基甲氧基)甲基]-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮的紫色固体。

在氮气保护下，把(S)-10，11，14，15-四氢-13-[(三苯基甲氧基)甲基]-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮(34.0g，视为46.8mmol)溶解于350ml干燥的CH₂Cl₂中，并冷却到-25℃。在＜0℃下，以干燥的HCl气体向反应溶液中鼓泡约1-2分钟。使所得的浆液温热到室温并搅拌1小时。反应可以用HPLC监测。过滤浆液，固体用200ml CH₂Cl₂洗涤并于50℃在真空炉中干燥，得到18.6g(90％)的(S)-10，11，14，15-四氢-13-羟甲基-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮的紫色固体(经HPLC面积分析测得纯度为80％)。

                       实施例1

(S)-10，11，14，15-四氢-13-[溴代(甲基)]-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮

把溴(2.0当量)和吡啶(0.1当量)加入二氯甲烷(10倍体积)中，溶液冷却到-5℃。用三苯基磷(2.0当量)滴定溴。当所有的溴都消耗完时，溶液由黄变澄清。向第二个反应器中加入(S)-10，11，14，1 5-四氢-13-[羟基(甲基)]-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮(1.0当量)的二氯甲烷溶液(10倍体积)，把该浆液冷却到-5℃。然后把二溴三苯基磷溶液加入到吡咯并二酮的浆液中，把反应液温热到室温并搅拌12-16小时直到反应完全(经HPLC分析化合物III少于0.4％)。在室温下真空浓缩浆液2小时，然后用1体积的去离子水淬灭并搅拌15分钟。向反应浆液中加入甲苯(40倍的体积)以沉淀产物。在10℃下搅拌1小时后，过滤分离出产物并用甲苯洗涤(5倍体积)两次，用去离子水(5倍体积)洗涤，最后用5倍体积的甲苯洗涤，于50℃下在真空干燥器中干燥标题溴化物，产率85-90％(含杂质1-2％)。

为了进一步降低杂质的水平，用一种溶剂体系(例如丙酮∶水、甲醇∶水、异丙醇∶水、或乙酸乙酯)把产物再一次制成浆液，优选地，用THF∶水以1∶1-5∶1(THF∶水)的比例，把产物再一次制成浆液。

                            实施例2

(S)-13-[(二甲基氨基)甲基]-10，11，14，15-四氢-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮

向(S)-10，11，14，15-四氢-13-[溴代(甲基)]-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮(1.0当量)的N，N-二甲基甲酰胺(17倍体积)溶液中加入二乙胺(10.73Kg，12当量)，密封反应容器并在45℃加热9小时。然后把反应液冷却到室温并搅拌12-16小时。向反应液中加入NaOH(12N，1.1当量)以形成自由碱，再搅拌反应液2小时，真空蒸馏除去N，N-二甲基甲酰胺，使溶液达到5-7倍体积，然后用1小时的时间把60℃的甲醇(30倍体积)加入到60℃的反应液中。然后把反应液冷却到室温并搅拌过夜，再进一步冷却到0-10℃。过滤分离出产物并用甲醇(3倍体积)洗涤，于50℃下在真空干燥器中干燥至重量不变，产率85-90％。可用于该反应中的其它溶剂为THF∶水和N，N-二甲基甲酰胺，由于原料和产物的溶解度较低，反应应当在非质子性极性溶剂中进行。为了使HBr盐原位游离出来，还试验了其它的碱(见下述)，但是最有效的碱是6N NaOH、12N NaOH和K₂CO₃。

                      实施例3

(S)-10，11，14，15-四氢-13-[碘代(甲基)]-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮

把(S)-10，11，14，15-四氢-13-[甲磺酰氧基]-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮(1.0g，1.94mmol)溶解于20ml干燥的N，N-二甲基甲酰胺(20倍体积)。向该溶液中加入碘化钠(3.0g，19.4mmol，10.0当量)，反应液在50℃搅拌加热36小时。待反应物冷却到室温后，通过加入水(50ml，50倍体积)分离出产物，沉淀出紫色的固体产物，用5∶1的THF∶水重结晶该固体产物，得到0.87g(81％)的标题化合物。

                          实施例4

(S)-10，11，14，15-四氢-13-[对甲苯磺酰氧基(甲基)]-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮

把(S)-10，11，14，15-四氢-13-[羟甲基]-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮(1.0g，2.27mmol)溶解于20ml干燥的二氯甲烷(20倍体积)中。向该溶液中加入甲磺酸酐(2.22g，6.80mmol，3.0当量)和吡啶(0.72g，9.08mmol，4.0当量)，反应液在42℃搅拌加热回流2小时。把反应物冷却到室温并用40ml二氯甲烷稀释。有机相用50ml1N HCl和50ml盐水洗涤，水层用30ml二氯甲烷反萃取，把合并的有机相的溶剂从二氯甲烷置换为乙醇，沉淀出紫色的固体产物，过滤得到1.25g(93％)的标题化合物。

                       实施例5

(S)-13-[(一甲基氨基)甲基]-10，11，14，15-四氢-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮

把甲胺(37.1g，1.19mol，20当量)溶解于600ml的N，N-二甲基乙酰胺中，同时将温度维持在23℃以下，向反应液中加入实施例1的化合物(30g，0.0595mol)。反应液在密闭的容器中于室温下搅拌24小时，加入三乙胺(8.3ml，0.0595mol，1当量)以清除反应中形成的HBr，再搅拌反应液30分钟，然后把反应液冷却到4℃，缓慢加入水(450ml)同时保持反应温度低于25℃。再次加入水后得到一浆液，搅拌该浆液1小时并过滤，用200ml水洗涤滤出的固体，于50℃下在真空炉中干燥该固体，得到25.02g(93％)的标题化合物。

                           实施例6

(S)-13-[(吡咯烷基)甲基]-10，11，14，15-四氢-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮一盐酸盐

把实施例1的化合物(1.0g，1.0当量)溶解于5ml的N，N-二甲基乙酰胺中，加入吡咯烷(1.6ml，10当量)中，反应液在45℃加热9小时，然后冷却到室温，向红色浆液中加入12N NaOH(0.17ml，1.0当量)，混合物在室温下搅拌2小时，得到一红色溶液。真空蒸馏除去溶剂，油状物用二氯甲烷(100ml)稀释，用氯化铵饱和溶液(100ml)和5％的LiCl溶液(2×100ml)洗涤，真空蒸馏除去二氯甲烷，得到一油状物，加入甲基叔丁基醚沉淀出红色固体的标题化合物。过滤分离出该固体，于50℃下在真空炉中干燥，得到0.8g(81％)的产物。

                        实施例7

(S)-13-[苯甲氨基甲基]-10，11，14，15-四氢-4，9：16，21-二次甲基桥-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并-[3，4-H][1，4，13]噁二唑十六碳因-1，3(2H)-二酮

把实施例1的化合物溶解于20倍体积的N，N-二甲基乙酰胺中，一次性加入苄胺(6.0当量)，于80℃下，在密闭的容器中搅拌并加热反应液24小时，然后把反应液冷却到室温，加入三乙胺(1当量)以清除HBr，再搅拌反应液30分钟。加入乙酸乙酯，有机层用氯化钠饱和溶液洗涤，把溶液的溶剂从乙酸乙酯置换为乙醇，得到一红色浆液。过滤该浆液，得到一种红色固体的标题化合物，产率79％。

                     实施例8

                    动力学研究

X＝I(化合物A)                      R＝NHCH₃(化合物F)

X＝Br(化合物B)                     R＝N(CH₃)₂(化合物G)

X＝Cl(化合物C)                     R＝NHBn(化合物H)

X＝OMs(化合物D)

X＝OTs(化合物E)

制备用于动力学研究的2M的二甲胺的N，N-二甲基乙酰胺(DMA)溶液。分别把化合物A(0.25g，0.45mmol)、B(0.229g，0.45mmol)、C(0.209g，0.45mmol)、D(0.236g，0.45mmol)、E(0.271g，0.45mmol)溶解于DMA(～20ml/g，4-6ml)中，向各溶液中加入2M的二甲胺的DMA溶液(4.5ml，9.0mmol，20当量)。密封反应液，在23℃下搅拌并隔时取样进行HPLC分析。用4.6mm×25cmZorbax SB-CN柱子，以等体积配比(isocratic)的50/50的THF/0.1％三氟乙酸缓冲水溶液作流动相，流速为1ml/分钟，UV检测器定在233nm(化合物A的R_t＝10.4分钟，化合物B的R_t＝9.3分钟，化合物C的R_t＝9.0分钟，化合物D的R_t＝6.2分钟，化合物E的R_t＝10.6分钟)。反应物浓度通过响应因子确定，每个化合物的响应因子可以从三点(对应于响应面积的浓度为0.1mg/ml，0.05mg/ml和0.025mg/ml，)校正曲线的直线方程得到。在HPLC分析前，把反应液样品(0.1ml)在容量瓶中稀释到25ml，并且把浓度(mg/ml)换算为摩尔浓度(mmol/ml)。以二甲胺浓度除以化合物A、B、C、D或E的浓度的自然对数对时间作图。从每个图得到的直线的斜率除以初始胺浓度减去初始化合物浓度的差，得到二级速率常数(单位：LM^-1Hr^-1)。结果列于表I中。

                     实施例9

二甲胺、甲胺和苄胺的甲磺酸盐与溴化物的竞争速率研究

制备用于动力学研究的2M的甲胺和二甲胺的N，N-二甲基乙酰胺(DMA)溶液。把化合物D(1.03g，1.98mmol)和化合物B(1.00g，1.98mmol)一起溶于N，N-二甲基乙酰胺(对于甲胺和二甲胺的反应来说为20ml/g，对于苄胺的反应来说为36ml/g)，加入2M的甲胺的DMA溶液(19.8ml，39.7mmol，20当量)或2M的二甲胺的DMA溶液(19.8ml，39.7mmol，20当量)或苄胺(4.25g，39.7mmol，20当量)。密封反应液，在23℃下搅拌并隔时取样进行HPLC分析。用4.6mm×25cmZorbax SB-CN柱子，以等体积配比(isocratic)的45/55的THF/0.1％三氟乙酸缓冲水溶液作流动相，流速为1ml/分钟，UV检测器定在233nm(化合物D的R_t＝11.4分钟，化合物B的R_t＝19.9分钟)。反应物浓度通过响应因子确定，每个化合物的响应因子可以从三点(对应于响应面积的浓度为0.1mg/ml，0.05mg/ml和0.025mg/ml，)校正曲线的直线方程得到。在HPLC分析前，把反应液样品(0.1ml)在容量瓶中稀释到25ml，并且把浓度(mg/ml)换算为摩尔浓度(mmol/ml)。以胺浓度除以化合物的浓度的自然对数对时间作图。从每个图得到的直线的斜率除以初始胺浓度减去初始化合物浓度的差，得到二级速率常数(单位：LM^-1Hr^-1)。甲胺和苄胺衍生物直接高产率地从要求保护的溴化物中间体制备。甲磺酸盐中间体不能以高产率直接生产甲胺和苄胺衍生物。

如上所述，本发明的化合物还具有作为选择性的蛋白激酶C抑制剂的活性。这些化合物的活性通过Heath等人在出版于1995年6月14日的EP0657458中所述的、在此通过参考文献引入的依赖于钙调蛋白的蛋白激酶分析、酪蛋白蛋白激酶II分析、依赖于cAMP的蛋白激酶催化亚基分析和蛋白-酪氨酸激酶分析测定。在这些IC₅₀值小于10μM的分析中，要求保护的化合物具有活性和同功酶选择性。

已证明具有这种药理活性的化合物可用于治疗病理与蛋白激酶C有关的疾病。本领域中已知的疾病包括：糖尿病及其综合症(特别是微脉管系统性糖尿病综合症、视网膜病、肾病和神经病)、局部缺血、发炎、中枢神经系统疾病、心血管疾病、早老性痴呆症、皮肤病和癌症。

优选式II的化合物在给药前制成制剂。因此，本发明的另一个实施方式是一种含有式II的化合物和一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋性剂的药物制剂。

本发明的药物制剂用众所周知的容易得到的成分、通过已知的方法制备。在制备本发明的组合物时，通常把活性成分与一种载体混合，或用一种载体稀释，或者以胶囊、糖衣、纸或其它包裹物的形式把活性成分包裹在载体中。当载体作为稀释剂时，载体可以是固体、半固体或用作活性成分的赋性剂或媒介物或载体的液体材料。因此，这些组合物可以是片剂、丸剂、粉剂、锭剂、糖衣剂、扁囊剂、泻剂、悬浮剂、乳剂、溶液、针剂、气雾剂(作为固体或以液体作为媒介物)、软胶囊或硬胶囊、栓剂、无菌注射液和无菌的包装粉末。

一些合适的载体、赋性剂和稀释剂的例子包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖、甘露糖、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、糖浆水、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油。制剂还可以包含润滑剂、加湿剂、乳化剂和悬浮剂、防腐剂、甜味剂或调味剂。本发明的组合物还可以这样配制以使活性成分在向病人给药后能快速、持续或延迟释放。

化合物的药效量表示能抑制哺乳动物的PKC活性的药量。典型的每日剂量是大约0.01-20mg/kg的活性化合物，优选地剂量将是大约0.01-10mg/kg。优选把组合物制成单位剂量，每单位剂量含有大约1-500mg、更通常地含有大约5-300mg的活性成分。然而，应当明白，治疗时的给药剂量将由内科医生根据有关的情况(包括治疗条件、给药的化合物的选择和选择的给药途径)作出决定。因此，上述的剂量范围目的不以任何方式限定本发明的范围。术语“单位剂量”是指适用作人体和其它哺乳动物的单位剂量的可分的物质单元，每个单元含有经过计算的预定量的活性材料，使得与一种合适的药物载体结合时产生所期望的治疗效果。

下列的制剂例仅用于解释本发明，而不以任何方式限定本发明的范围。 

                       制剂1

用下列成分制备硬明胶胶囊：

                                      数量(mg/胶囊)活性剂                                          5干燥的淀粉                                      185硬脂酸镁                                        10

                总计                        200mg

把上述的成分混合并以200mg的数量装填入硬明胶胶囊中。

                        制剂2

用下列成分制备片剂：

                                         数量(mg/片)活性剂                                          20 微晶纤维素                                      400发烟二氧化硅                                    10硬脂酸                                          5

              总计                          435mg

把上述的成分混合并压缩成每片重为435mg的片剂。

                     制剂3

每片含有10mg活性成分的片剂按照下列方式制造：

                                        数量(mg/片)活性剂                                          10淀粉                                            45微晶纤维素                                      35聚乙烯吡咯烷酮(10％的水溶液)                    4羧甲基淀粉钠                                    4.5硬脂酸镁                                        0.5滑石                                            1

               总计                         100mg

把活性成分、淀粉和纤维素用45号筛目的美国筛子过筛并完全混合。使聚乙烯吡咯烷酮的溶液与所得的粉末混合，然后用14号筛目的美国筛子过筛。这样制得的颗粒在50℃干燥并用18号筛目的美国筛子过筛。然后把用60号筛目的美国筛子筛过的钠羧甲基淀粉、硬脂酸镁和滑石加入到上述颗粒中。混合后，在制片机上压缩制成每片重100mg的片剂。

                            制剂4

每个含有40mg药物的胶囊按照下列方式制造：

                                        数量(mg/胶囊)活性剂                                           40淀粉                                             59微晶纤维素                                       59硬脂酸镁                                         2

                  总计                       200mg

把活性成分、纤维素、淀粉和硬脂酸镁混合，用45号筛目的美国筛子过筛，然后以200mg的数量装填入硬明胶胶囊中。

前面已经具体描述了本发明的原理、优选实施例和操作方式。然而，在这里，本发明想要保护的范围不应解释为仅限于已经公开的具体的实施形式，因为他们应当被解释为说明性的而非限定性的。本领域的技术人员可以在不偏离本发明实质的情况下，对本发明进行变化和改变。