抗鸭瘟及鸭病毒性肝炎的异源动物高免血清的制备方法

摘要

本发明公开了一种抗鸭瘟及鸭病毒性肝炎的异源动物高免血清的制备方法，包括鸭瘟种毒的制取，鸭病毒性肝炎种毒的制取，一免抗原的制取，二免抗原的制取、异源动物血清的制取，用该方法制成的高免血清对预防和治疗鸭瘟和鸭病毒性肝炎具有显著疗效，其预防率为95％，治愈率87％。

说明书

本发明涉及一种动物血清的制备方法，具体为一种抗鸭瘟及病毒性肝炎的异源动物血清的制备方法。

鸭瘟和鸭病毒性肝炎都是由病毒引起的急烈性传染病所致，涉及面广、发病率高、死亡率均在90％以上，给饲养鸭禽的单位或个人带来极大的经济损失，同时，由于对病亡的鸭禽处理不当，往往造成病毒的漫延，产生更大的恶果。目前，社会上尚未发现一种专用于治疗鸭瘟和鸭病毒性肝炎的特效药物，这是鸭禽饲养单位或个人最感头痛的事。

本发明的任务在于提供一种专用于预防和治疗鸭瘟和鸭病毒性肝炎的特效药物的制备方法，即抗鸭瘟及病毒性肝炎的异源动物血清的制备方法。

本发明抗鸭瘟和鸭病毒性肝炎的异源动物血清的制备方法包括：鸭瘟种毒的制取、鸭病毒性肝炎种毒的制取、一免抗原的制取、二免抗原的制取、异源动物血清的制取，其具体制备方法为：

a、鸭瘟种毒的制取：

1、在无菌条件下取因患鸭瘟病死亡的鸭内脏(包括心、肝、脾、肺、脑)，放入组织捣碎机中捣碎；

2、按总重量为100计算，取占总量为10-20％的被捣碎的鸭组织与占总重量为80-90％的浓度为0.8％的生理盐水混合，形成混合组织悬液；

3、将混合组织悬液放入离心机中，在4000转/分条件下离心20-40分钟后取其上清液；

4、在其上清液中，按每毫升上清液各加入2000单位青霉素和2000单位链霉素的配比加入青霉素和链霉素后即形成鸭瘟种毒，并将其放入冰箱中在-4℃条件下储藏备用；

b、鸭病毒性肝炎种毒的制取

在无菌条件下取因患鸭病毒性肝炎死亡的鸭内脏(包括心、肝、脾、肺、脑)，采取与a所述方法完全相同的方法即获鸭病毒性肝炎种毒，并将其放入冰箱中在-4℃条件下储藏备用。

c、一免抗原的制取

1、将a中所述方法制取的鸭瘟种毒，放入浓度为0.8％的生理盐水中稀释100倍，形成鸭瘟种毒稀释液，用0.1毫升剂量的鸭瘟种毒稀释液接种于9-12日龄的鸭胚尿囊中，接种后选取在48-120小时之间具有出血、水肿等特征死亡的鸭胚，取其尿囊液，在每毫升尿囊液中各加入2000单位的毒霉素和2000单位的链霉素后即形成为一免鸭瘟抗原，并将其放入冰箱中在-4℃条件下储藏备用。

2、将a中所述方法制取的鸭病毒性肝炎种毒放入浓度为0.8％的生理盐水中稀释100倍，形成鸭病毒性肝炎种毒稀释液，用0.1毫升剂量的鸭病毒性肝炎种毒稀释液接种于9-12日龄的鸭胚尿囊中，接种后选取在48-120小时之间具有出血、水肿等特征死亡的鸭胚，取其尿囊液，在其每毫升尿囊液中加入2000单位的青霉素和2000单位的链霉素后即形成为一免鸭病毒性肝炎抗原，并将其放入冰箱中在-4℃条件下储藏备用。

d、二免抗原的制取

取一免抗原的制取方法中经接种鸭瘟种毒后死亡的鸭胚体放入组织捣碎机中捣碎，按总重量为100计算，取占总重量为10-20％的被捣碎的鸭胚体组织与占总重量为80-90％的浓度为0.8％的生理盐水混合，形成混合组织悬液，将混合组织悬液放入离心机中，在4000转/分条件下离心20-40分钟后取其上清液，在其上清液中按每毫升上清液各加入2000单位青霉素和2000单位链霉素的配比加入青霉素和链霉素，并按总重量的0.4％的配比加入福尔马林液做成灭活苗，即成为二免鸭瘟抗原，并在室温下保存备用。采取一免抗原的制取方法中经接种鸭病毒性肝炎种毒死亡的鸭胚体用同样的办法可获得二免鸭病毒性肝炎抗原，并在室温下保存备用。

e、异源动物血清的制取

1、异源动物二联高免血清的制取

选健康无病的异源动物(如马、牛、猪、羊、兔等)，按所选异源动物体重每10公斤在其颈部、腹部两侧多点(5-10点)皮下注射一免鸭瘟抗原和一免鸭病毒性肝炎抗原各1毫升，7天后进行二免，即对一免后的异源动物，按其体重每10公斤在其皮下多点(5-10点)各注射1毫升二免鸭瘟抗原和1毫升二免鸭病毒性肝炎抗原，再经7天后进行三免，即对二免后的异源动物，按其体重每10公斤在颈、腹部多点(5-10点)注射3.5毫升一免鸭瘟抗原和3.5毫升一免鸭病毒性肝炎抗原。三免注射后每隔5天采血一次，进行抗体效价检测，30天后当抗体效价在1∶16-1∶128范围时，对该异源动物在无菌条件下进行采血，将被采集的血放入无菌容器中进行自然分离后吸取其血清，在其血清中按每毫升血清加入2000单位青霉素和2000单位链霉素后，再按其总重量的1/10000量加入硫柳汞后即成为二联高免血清，对其高免血清分装、封口，并置于一18℃条件下保存。

2、异源动物单一高免血清的制取

在健康无病的异源动物(如马、牛、猪、羊、兔等)上单一注射鸭瘟抗原或鸭病毒性肝炎抗原，其它方法完全和异源动物二联高免血清制取方法相同，即可分别制取单一功能的高免血清，即抗鸭瘟异源动物高免血清或抗鸭病毒性肝炎异源动物高免血清。

以下将根据实施例对本发明抗鸭瘟及鸭病毒性肝炎的异源动物高免血清的制备方法作进一步说明：

实施例1

在无菌条件下取因患鸭瘟病死亡的鸭内脏(包括心、肝、脾、肺、脑)放入组织捣碎机中捣碎，取占总重量的10％的被捣碎的鸭组织，占总重量的90％浓度为0.8％的生理盐水混合，形成混合组织悬液，并将其放入离心机中在4000转/分条件下离心20分钟，取其上清液，在上清液中按每毫升上清液各加入2000单位青霉素和2000单位链霉素后即形成鸭瘟种毒。在无菌条件下取因患鸭病毒性肝炎死亡鸭的内脏后采用上述方法即可获鸭病毒性肝炎种毒。将鸭瘟种毒或鸭病毒性肝炎种毒放入浓度为0.8％的生理盐水中稀释100倍，形成鸭瘟或鸭病毒性肝炎种毒稀释液，用0.1毫升剂量的鸭瘟或鸭病毒性肝炎稀释液接种于9日龄的鸭胚尿囊中，接种后选取在48小时出血、水肿等特征死亡的鸭胚，取其尿囊液，在每毫升尿囊液中各加入2000单位的青霉素和2000单位的链霉素，即形成一免鸭瘟抗原或鸭病毒性肝炎抗原。取接种鸭瘟种毒或鸭病毒性肝炎种毒后死亡的鸭胚体放入组织捣碎机中捣碎，取占总量为10％的被捣碎的鸭胚体组织与占总量为90％浓度为0.8％的生理盐水混合，形成混合组织悬液，并将其放入离心机中，在4000转/分条件下离心20分钟后，取其上清液，在其上清液中按每毫升各加入2000单位青霉素和2000单位链霉素，并按总量的0.4％的配比加入福尔马林液做成灭活苗、即成为二免鸭瘟或鸭病毒性肝炎抗原。选健康无病的猪，按其体重每10公斤在其腹部两侧5点皮下注射一免鸭瘟和鸭病毒性肝炎抗原各1毫升，7天后对其按体重每10公斤在皮下5点各注射二免鸭瘟和二免鸭病毒性肝炎抗原各1毫升，再经7天后对其体重每10公斤在皮下5点注射一免鸭瘟抗原和一免鸭病毒性肝炎抗原各3.5毫升，注射后每隔5天采血一次进行抗体效价检测，30天后当抗体效价在1∶16时，对该异源动物在无菌条件下采血，将被采集的血放入无菌容器中实行自然分离后吸取其血清，在血清中按每毫升血清加入2000单位青霉素和2000单位链霉素后再按其总重量的1/10000量加入硫柳汞后即为本发明所述的二联高免血清。

实施例2

在无菌条件下取因患鸭瘟病死亡的鸭内脏(包括心、肝、脾、肺、脑)放入组织捣碎机中捣碎，取占总重量的15％的被捣碎的鸭组织，占总重量的85％浓度为0.8％的生理盐水混合，形成混合组织悬液，并将其放入离心机中在4000转/分条件下离心30分钟，取其上清液，在上清液中按每毫升上清液各加入2000单位青霉素和2000单位链霉素后即形成鸭瘟种毒。在无菌条件下取因患鸭病毒性肝炎死亡鸭的内脏后采用上述方法即可获鸭病毒性肝炎种毒。将鸭瘟种毒或鸭病毒性肝炎种毒放入浓度为0.8％的生理盐水中稀释100倍，形成鸭瘟或鸭病毒性肝炎种毒稀释液，用0.1毫升剂量的鸭瘟或鸭病毒性肝炎稀释液接种于11日龄的鸭胚尿囊中，接种后选取在80小时出血、水肿等特征死亡的鸭胚，取其尿囊液，在每毫升尿囊液中各加入2000单位的青霉素和2000单位的链霉素，即形成一免鸭瘟或鸭病毒性肝炎抗原。取接种鸭瘟种毒或鸭病毒性肝炎种毒死亡的鸭胚体放入组织捣碎机中捣碎，取占总量为15％的被捣碎的鸭胚体组织与占总量为85％浓度为0.8％的生理盐水混合，形成混合组织悬液，并将其放入离心机中，在4000转/分条件下离心30分钟后，取其上清液，在其上清液中按每毫升各加入2000单位青霉素和2000单位链霉素，并按总量的0.4％的配比加入福尔马林液做成灭活苗、即成为二免鸭瘟或鸭病毒性肝炎抗原。选健康无病的牛，按其体重每10公斤在其颈部两侧8点皮下注射一免鸭瘟和鸭病毒性肝炎抗原各1毫升，7天后对其按体重每10公斤在皮下8点各注射二免鸭瘟和二免鸭病毒性肝炎抗原各1毫升，再经7天后对其体重每10公斤在皮下5点注射一免鸭瘟抗原和一免鸭病毒性肝炎抗原各3.5毫升，注射后每隔5天采血一次进行抗体效价检测，30天后当抗体效价在1∶64时，对该异源动物在无菌条件下采血，将被采集的血放入无菌容器中实行自然分离后吸取其血清，在血清中按每毫升血清加入2000单位青霉素和2000单位链霉素后再按其总重量的1/10000量加入硫柳汞后即为本发明所述的二联高免血清。

实施例3

在无菌条件下取因患鸭瘟病死亡的鸭内脏(包括心、肝、脾、肺、脑)放入组织捣碎机中捣碎，取占总重量的20％的被捣碎的鸭组织，占总重量的80％浓度为0.8％的生理盐水混合，形成混合组织悬液，并将其放入离心机中在4000转/分条件下离心40分钟，取其上清液，在上清液中按每毫升上清液各加入2000单位青霉素和2000单位链霉素后即形成鸭瘟种毒。在无菌条件下取因患鸭病毒性肝炎死亡鸭的内脏后采用上述方法即可获鸭病毒性肝炎种毒。将鸭瘟种毒或鸭病毒性肝炎种毒放入浓度为0.8％的生理盐水中稀释100倍，形成鸭瘟或鸭病毒性肝炎种毒稀释液，用0.1毫升剂量的鸭瘟或鸭病毒性肝炎稀释液接种于12日龄的鸭胚尿囊中，接种后选取在48小时出血、水肿等特征死亡的鸭胚，取其尿囊液，在每毫升尿囊液中各加入2000单位的青霉素和2000单位的链霉素，即形成一免鸭瘟或鸭病毒性肝炎抗原。取接种鸭瘟种毒或鸭病毒性肝炎种毒死亡的鸭胚体放入组织捣碎机中捣碎，取占总量为20％的被捣碎的鸭胚体组织与占总量为80％浓度为0.8％的生理盐水混合，形成混合组织悬液，并其放入离心机中，在4000转/分条件下离心40分钟后，取其上清液，在其上清液中按每毫升各加入2000单位青霉素和2000单位链霉素，并按总量的0.4％的配比加入福尔马林液做成灭活苗、即成为二免鸭瘟或鸭病毒性肝炎抗原。选健康无病的羊，按其体重每10公斤在其腹部两侧10点皮下注射一免鸭瘟和鸭病毒性肝炎抗原各1毫升，7天后对其按体重每10公斤在皮下10点各注射二免鸭瘟和二免鸭病毒性肝炎抗原各1毫升，再经7天后对其体重每10公斤在皮下10点注射一免鸭瘟抗原和一免鸭病毒性肝炎抗原各3.5毫升，注射后每隔5天采血一次进行抗体效价检测，30天后当抗体效价在1∶128时，对该异源动物在无菌条件下采血，将被采集的血放入无菌容器中实行自然分离后吸取其血清，在血清中按每毫升血清加入2000单位青霉素和2000单位链霉素后再按其总重量的1/10000量加入硫柳汞后即为本发明所述的二联高免血清。

实施例2为本发明最佳实施例。

本发明抗鸭瘟及鸭病毒性肝炎的异源动物高免血清的使用方法为：

1、如同时预防鸭瘟和鸭病毒性肝炎，每只鸭皮下注射0.5-1毫升二联高免血清；

2、如单一预防鸭瘟或鸭病毒性肝炎，每只鸭皮下注射0.25-0.5毫升的抗鸭瘟高免血清或鸭病毒性肝炎高免血清；

3、如同时治疗鸭瘟和鸭病毒性肝炎，每只鸭皮下注射1-3毫升二联高免血清；

4、如单一治疗鸭瘟或鸭病毒性肝炎，每只鸭皮下注射0.5-1.5毫升的抗鸭瘟高免血清或鸭病毒性肝炎高免血清。

用本发明所述的抗鸭瘟及鸭病毒性肝炎的异源动物高免血清的制备方法制成的高免血清对于预防和治疗鸭瘟和鸭病毒性肝炎具有显著疗效，其预防率为95％，治愈率87％，可有效的实现本发明的任务，为社会提供一种专用预防和治疗鸭瘟和鸭病毒性肝炎的特效药物的制备方法。