8-氯腺苷抗肿瘤的应用

摘要

8-氯腺苷结构式如下：

说明书

本发明属于已知化合物新医疗用途专利范围。

发明背景：我们在研究已知化合物8-氯腺苷-3′5′环磷酸三脂（8-Cl-cAMP）（Free，C.A.and Paik，V.S.Endocrinology，100∶1287-1293，1977）的抗癌作用中证实，8-Cl-cAMP的酶解产物8-氯腺苷亦具有明显的抗肿瘤活性且优于8-Cl-cAMP，我们在中国首先合成了8-氯腺苷，并且首先采用体内和体外医学药理学方法，系统地研究了8-氯腺苷的抗肿瘤活性，证明了我们合成的8-氯腺苷对人的白血病细胞HL-60和K₅₆₂细胞系，小鼠白血病L₁₂₁₀细胞（腹水型），人胃癌MGc80-3细胞和小鼠肝癌实体瘤H₂₂等多种恶性肿瘤的治疗效果均达到中国卫生部新药审批法规的要求，证明了8-氯腺苷作为Ⅰ类抗肿瘤新药的应用价值，经中国专利局查新检索，未发现与本研究新颖性相关的文献。

8-氯腺苷特征如下：

1.分子式：C₁₀H₈N₅O₄Cl

2.分子量：301.75

3.结构式：

4.合成途径：

Adenosine        NCS        8-Cl-Adenosine

5.抗肿瘤活性：

（1）体外实验：

实验材料：细胞株：人白血病HL-60，人胃癌MGc80-3

培养基：RPMI        1640培养基，含10-15%小牛血清。

药物及配制：8-氯腺苷由北京医科大学药学院天然药物和仿生药物国家重点实验室合成（批号：930401）按不同浓度将药物溶于生理盐水，高温（100℃）灭菌或通过0.22μ混和纤维树脂滤膜过滤除菌。

实验方法：将细胞悬液按一定浓度（HL-60：6×10⁴/ml，K562：1.5×10⁵/ml，MGc80-3：1×10⁵/ml）接种于24孔板内，2.0ml/孔。置于CO₂培养箱（37℃）培养3h.后按不同浓度加药，于不同时间取材计数，计算细胞生长抑制率和半数抑制浓度（iC₅₀）。

实验结果：（表1-3）

表1.8-氯腺苷对人白血病细胞HL-60的生长抑制作用

药物浓度(μM)        生长抑制率%(48h.)

6.0        68

3.6        63

2.2        58

1.3        48

0.8        32

0.5        18

iC₅₀＝1.8μM

表2.8-氯腺苷对人白血病细胞K₅₆₂的生长抑制作用

药物浓度(μM)        生长抑制率%(48h)

16.6        65.5

10.0        61.5

6.0        56.1

3.6        48.0

2.2        45.5

1.3        42.2

iC₅₀＝4.2μM

表3.8-氯腺苷对人胃癌细胞MGc80-3的生长抑制作用

药物浓度(μM)        生长抑制率%(48h)

8.0        82

4.0        64

2.0        55

1.0        41

0.5        32

0.25        12

iC₅₀＝1.56μM

（2）体内实验：

实验材料：

瘤株：小鼠白血病L₁₂₁₀和小鼠肝癌H₂₂

动物：DBA/2纯系小鼠（L₁₂₁₀宿主）和昆明种小白鼠（H₂₂宿主），体重18-22g，♀、♂各半。

药物及配制：8-氯腺苷（同前，批号：930721），按不同浓度将药物溶于生理盐水中，高温（100℃）灭菌。

实验方法：

瘤株接种：将L₁₂₁₀细胞（1.5×10⁴/0.2ml/只）接种于DBA/2小鼠腹腔内;H₂₂细胞（3×10⁶/0.2ml/只）接种于昆明种小白鼠右前腋窝皮下。接种后24h，称体重并随机分组，按不同浓度给药（i.p.或i.v.），1次/日，共7次，H₂₂荷瘤鼠于末次给药次日剥离肿瘤，称瘤重，计算抑瘤率;L₁₂₁₀荷瘤鼠观察小鼠生存期（至60天止）计算生命延长率。

实验结果：（表4-5）

表4. 8-氯腺苷对小鼠肝癌实体瘤H₂₂的疗效

剂量        给药途径        动物数        动物体重(g)        瘤重(g)        抑制率%        P值

(mg/kg/日)        及次数        开始        结束        开始        结束        治疗        对照

100        i.p.×7        10        10        21.0        28.7        0.68        1.56        56.4        <0.05

i.v.×7        8        8        19.6        22.7        0.42        1.08        61.1        <0.01

60        i.p.×7        10        10        20.1        28.7        0.81        1.56        48.1        <0.01

i.v.×7        8        8        19.4        24.3        0.73        1.08        32.4        <0.05

36        i.p.×7        10        10        21.0        29.5        1.03        1.56        34.0        <0.01

i.v.×7        8        8        20.2        25.5        0.82        1.08        24.1        >0.05

EC₅₀＝63.6mg/kg（i.p.）和70.8mg/kg（i.v.）

表5.8-氯腺苷对小鼠白血病L₁₂₁₀的序效

剂量        给药途径        动物数        平均        生命延长率        P值

(mg/kg/天)        及次数        生存天数

100        i.p.×7        6        41.2        122.7        <0.01

i.v.×7        6        40.0        119.8        <0.01

60        i.p.×7        6        41.0        121.6        <0.01

i.v.×7        6        23.8        30.8        <0.01

36        i.p.×7        6        38.0        105.4        <0.01

i.v.×7        6        21.5        18.1        >0.05

6.        8-氯腺苷对小鼠的急性毒性实验

实验材料：

动物：昆明种小白鼠，体重18-22g，每组10只（♂，♀各半）。

药物及配制：同体内实验。

实验方法：将不同浓度药物（共设10个剂量组）一次腹腔注射，观察动物急性反应并记录死亡时间和死亡动物数，共观察7天，计算死亡率和半数致死剂量（LD₅₀）。

实验结果：（表6）

表6. 8-氯腺苷对小鼠的急性毒性及LD₅₀

剂量(mg/kg)        动物数(只)        死亡率%

2000        10        100

1800        10        100

1620        10        100

1458        10        95

1312        10        80

1181        10        65

1063        10        60

957        10        45

861        10        20

775        10        10

LD₅₀＝1025mg/kg

表7. 8-氯腺苷与已知有效抗肿瘤化疗药的LD₅₀比较

药物 LD₅₀(mg/kg)>

8-氯腺苷        1025.0        本资料

MTX        13.3        中国科学院

5-Fu        92.6        上海药物研

CYT        540.0        究所

TSPA        23.3        "

A-130        15.0        "

PCB        430.0        "

BUS        27.1        "

亚硝脲氮芥        31.6        "

COLC        2.02        "

VLB        3.6        "

VCR        2.21        "

CPT        59.0        "

DACT        0.703        "

MC        10.38        "

7.        8-氯腺苷与8-Cl-cAMP抗肿瘤活性比较

实验材料：细胞：人白血病HL-60

药物：8-氯腺苷和8-Cl-cAMP均为北京医科大学药学院天然药物和仿生药物国家重点实验室合成（批号：930401）。

培养基：RPMI1640，含15%小牛血清。

实验方法：细胞常规接种后分别加入相同浓度的8-氯腺苷和8-Cl-cAMP，逐日取材计算细胞数和细胞生长抑制率。

实验结果：

药物        细胞生长抑制率%

8-氯腺苷(10μM)        76.

8-Cl-cAMP(10μM)        57.5

结果表明，8-氯腺苷比相同浓度的8-Cl-cAMP对白血病HL-60细胞抑制率大33.4%。

从以上药效学和毒理学实验结果说明，8-氯腺苷对多种肿瘤有较好疗效，其抗瘤谱广，抗肿瘤活性高于8-ClcAMP，并且毒性远低于很多用于临床的化疗药。

本发明实施方法：8-氯腺苷可与相应药用载体结合制备成各种剂型用于肿瘤治疗。其实施例子如下表：

剂型        规格        辅料        给药途径        备注

注射剂        250mg        注射用水或        肌内注射,        包括粉针剂及

-1000mg        其他溶媒        静脉注射或滴注,        溶液注射剂

及局部注射

片剂        100mg,        药用淀粉或        内服        包括糖衣片,

250mg,        其他辅料        薄膜衣片等。

500mg.

胶囊剂        100mg,        药用胶囊        内服        包括普通胶囊

250mg,        及微型胶囊

500mg.

糖浆及        50mg/ml        糖浆,纯水        内服        包括其他口服

溶液剂        液

栓剂        100mg,        脂肪性,水溶        肛门        包括阴道栓

250mg,        性及亲水性

500mg/        基质

3g