虫草头孢菌连续发酵工艺

摘要

虫草头孢菌是从冬虫夏草中分离得到的一株药用菌和食用菌，具有治病和保健之功能。该菌体一般是用间歇性发酵工艺生产而得，本发明是用发酵罐发酵、补料、出罐的反复循环连续发酵工艺进行生产，取消了清罐、空消、进料、实消的工艺，延长了实际生产时间，能较大幅度的提高产量，而且，连续发酵工艺能够达到管道化生产，减少了污染的机会，从而提高了产品的质量。

说明书

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本发明是一种不经过代谢产物提取工艺的微生物发酵工程，特别是用于灵芝、密环菌、虫草菌等有效组分与菌体不需要分离的发酵技术。

目前虫草头孢菌是采用间歇性发酵工艺生产的，工艺环节多，中间间歇时间长，效率低，能耗大，尚不能满足我国医药工业发展的需要。

本发明的目的是为克服老式的间歇性发酵工艺的缺点，减少工艺环节，提高工作效率，减少成本，提高产品质量和产量，用虫草头孢菌连续发酵工艺代替原来的间歇性发酵工艺来满足我国医药工业发展的需要。

虫草头孢菌是从冬虫夏草新鲜样本中分离出来的一株药用真菌，与天然虫草成份相比，二者具有相同的成份。本连续发酵工艺是去掉了间歇式发酵工艺中的清缸、上料、灭菌、冷却等准备性工艺环节，全过程在密闭的管道化设备中进行，减少了污染，提高了产品质量和产量。

1、虫草头孢菌的分离

采冬虫夏草产区新鲜样本，去泥、清洗，经表面消毒，去虫体的表皮避开肠道，把白色菌核切成小块排列于盛有培养基的培养皿中，一周后长出白色菌丝，在P、D、A培养基进行纯培养。

2、虫草头孢菌的培养

经过培养基的筛选，培养成份的组合和培养基配方，采用蛋白胨2～8g，酵母粉2～10g，花生粉10～20g，蔗糖10～20g，MgSo₄0.2～0.5g，KH₂PO₄0.3～1g，水1000ml，培养温度25℃～30℃，经过4天的培养基培养，在整个斜面上长满白色茸毛状菌丝。

3、虫草头孢菌的深层培养

虫草头孢菌经摇床振荡扩大培养，接种到种子罐扩大深层培养，培养基配方为花生0.5%～1%，酵母粉0.3%～0.5%，蔗糖1.5～2.0%，MgSo₄0.2～0.5g，KH₂PO₄0.3～1g。然后经过管道，压入经过培养料灭菌的发酵罐内发酵生产，经过该菌的生长，对数生长期，在菌丝衰老前，代谢产物达到最高峰时进行出罐。但从生长到生长盛期，时间较长，占整个生长期的>

该工艺的主要特点是，除第一次需从外界接入种子外，以后就利用发酵罐内的发酵液作为种子，间隔一定时间进行补料，发酵一定时间后就出罐，为此反复循环，完全在密闭的管道内进行。

用原来的间歇性发酵工艺，是采用二级发酵工艺，工艺流程是：摇床液体振荡→种子罐扩大→发酵罐生产→出罐→干燥→包装。摇床培养要48小时，种子罐发酵36小时，发酵罐经48小时发酵后出罐，再经清罐、上料，灭菌，冷却等工序需12小时，共计要148小时，而连续发酵工艺是不断补料，不断出罐，周期是8小时，减少了工艺环节，缩短了时间。另外，用连续发酵工艺去掉了清罐，上料，灭菌，冷却等准备性工艺环节，全过程在密闭的管道化设备中进行，减少了污染机会，降低了成本，提高了产品的质量和产量。另外，虫草头孢菌体是治疗难治性心律失常的新的有效药物，对治疗缓慢性心律失常，该药有独到之处。经专家鉴定，该药具有保健，滋补之作用。因天然虫草价格昂贵，分离出虫草菌进行发酵生产，可以满足社会的治疗用药，保健用药的需要，同时不断地改进生产方式，可以不断地提高产品质量和产量。可见，大量生产该药的系列产品，对发展我国医药工业，确保广大人民群众的身体健康，具有重要意义。

实施例：

采冬虫夏草产区新鲜样本，去泥，清洗，经表面消毒，去虫体的表皮避开肠道，把白色菌核切成小块排列于盛有培养基的培养皿中，一周后长出白色菌丝，在P、D、A培养基进行纯培养。虫草头孢菌在马铃薯，葡萄糖，琼脂上，在28℃中培养5天，菌落圆形，边缘整齐，平坦，较紧密，白色，茸毛呈短绒状，无扩散于培养基的色素。分生孢子梗透明，直或稍弯，单生或2～3个聚生，但不呈轮状，末端或基端无明显膨大，15-40×1.5-2μm，分子孢子头呈假头状，直径20×35μm，由大约20个分生孢子粘聚而成，分生孢子无色，单孢，椭圆形2.5～6（8）×1.5～1.8（2）μm。

虫草头孢菌发酵培养基配方：花生粉5g，酵母10g，蔗糖15g，MgSo₄0.5g，KH₂Po₄1g，PH6.5～6.0，水1000ml，在上述培养基经发酵一定时间后，开始产生孢梗及孢子，由于发酵过程中不断搅拌，所以孢子梗上产生的分生孢子头仅存一个孢子，即一个孢子梗上一个分生孢子。随着发酵时间增长，菌丝密度增大，PH值下降，大量产生代谢产物，经还原糖和氨态氚等测试，到发酵完成后进行出罐。

虫草头孢菌深层培养的培养基配方：花生粉5g，酵母10g，蔗糖15g，MgSo₄0.5g，KH₂Po₄1g，PH6.5～6.0，水1000ml，从种子罐内发酵成熟的种子移入发酵罐内，当发酵完成后，取出一定量的发酵液，补入同量的培养液，继续发酵，为此反复，不断补料，不断出罐，整个发酵工艺过程是连续的。