适用于PacBio平台的全长扩增子快速建库方法、引物及测序方法

摘要

本发明涉及一种适用于PacBio平台的全长扩增子快速建库方法、引物及基于该建库方法的全长扩增子测序方法。本发明针对全长扩增子测序需要进行PCR的特性，结合PacBio测序平台的哑铃型文库接头结构，设计了具有通用结合序列的扩增子引物、具有与通用结合序列匹配的哑铃型引物，并基于这两种特殊结构的引物提出一种适用于PacBio平台的全长扩增子快速建库方法，通过该方法建库，仅需在进行常规扩增后增加2个循环的环形引物扩增，即可实现测序接头的添加，同时，通过损伤修复酶的作用，使PCR产物成为适用于PacBio测序平台的标准文库。该方法将原有的PacBio标准建库流程优化为仅需一步扩增与修复，极大的简化了全长扩增子的文库构建流程，显著降低了测序成本。