一种自杀他杀式质粒、利用其的酿酒酵母无痕基因编辑方法及应用

摘要

本发明提供一种自杀他杀式质粒、利用其的酿酒酵母无痕基因编辑方法及应用。所述自杀他杀式质粒包括复制起点、筛选标记、Cas9蛋白表达框和sgRNA1表达框；所述sgRNA1表达框包含启动子、针对基因编辑载体和所述自杀他杀式质粒的共同序列设计的sgRNA1、scaffold和终止序列。将基因编辑载体转入酿酒酵母中，再转入所述自杀他杀式质粒，即可得到无痕编辑后的酿酒酵母菌株。利用所述自杀他杀式质粒编辑酿酒酵母，既不影响基因编辑后对成功转化基因编辑质粒的菌株进行选择，又显著提高了消除质粒成功率；同时，经过两轮质粒转化即可达到无痕编辑的效果，进一步加快了酿酒酵母无痕编辑的速率。