基于膜表面融合表达策略纯化蛋白的方法及其应用

摘要

本发明公开一种基于膜表面融合表达策略纯化蛋白的方法，通过基因工程构建两种工程菌，使SUMO标签N端与一种菌的膜锚定蛋白融合，SUMO标签C端与目的蛋白融合，同时将Ulp1蛋白酶融合到另外一种菌的膜锚定蛋白上，再将两种工程菌诱导表达后离心，重悬到缓冲液并混合孵育，Ulp1蛋白酶会将目的蛋白从SUMO标签上切割下来并溶于缓冲液中，菌体及其表面锚定的SUMO和Ulp1可通过离心去除，而上清中即为纯化的目的蛋白。该纯化方法不需要破碎菌体以及层析步骤，仅通过“菌体孵育‑离心”两步就可以达到提纯蛋白的目的，该方法具有快速、简便的特点，还能得到不含任何冗余序列的天然蛋白分子，具有广泛的推广价值和应用前景。