基于反向扩增全长质粒和In-fusion连接的快速克隆方法

摘要

本发明提供了一种快速克隆方法，包括以下步骤：设计用于扩增目的基因的第一引物对和用于扩增载体模板的第二引物对；其中，所述第一引物对包括第一上游引物和第一下游引物，第一上游引物包括末端重叠序列A，第一下游引物包括末端重叠序列B；所述第二引物对包括第二上游引物和第二下游引物，第二上游引物包括末端重叠序列B’，第一下游引物包括末端重叠序列A’，且所述末端重叠序列A与所述末端重叠序列A’反向互补，所述末端重叠序列B与所述末端重叠序列B’反向互补；采用PCR反向扩增技术扩增线性化载体以及目的基因；采用连接酶将所述线性化载体与所述目的基因连接，得到环状克隆载体；将所述环状克隆载体导入宿主细胞，进行表达。