一种利用CRISPR-Cas9技术敲除大肠杆菌中胞苷脱氨酶基因cdd的方法及应用

摘要

本发明公开了一种利用CRISPR‑Cas9技术敲除大肠杆菌中胞苷脱氨酶基因cdd的方法及应用。包括以下步骤：1制作含有Cas9质粒的大肠杆菌BL21（DE3）感受态；2、设计合成突变sgRNA；3、构建Donor DNA；4、将sgRNA质粒与Donor DNA采用电转化法转化至携带Cas9质粒的大肠杆菌感受态中，敲除cdd基因；5、将目标质粒pET28a‑UCK导入敲除菌株生产胞苷酸；本发明具有操作简便、cdd基因敲除成功率高且敲除菌株对底物转化率提高，适合工业化生产胞苷酸等优点。敲除菌株生产胞苷酸相较于未敲除菌株，其对底物胞苷以及ATP的转化率提高了15%，达到99%。