一种新的质粒载体构建方法

摘要

本发明公开了一种新的质粒载体构建方法。本发明首先公开了利用CRISPR/Cpf1或CRISPR/Cas9构建含有外源目的DNA分子的重组载体的方法；进一步公开了包括crRNA和Cpf1蛋白或gRNA和Cas9蛋白的成套试剂。本发明利用crRNA和Cpf1蛋白或gRNA和Cas9蛋白替代限制性内切酶对载体进行线性化，得到线性化载体；运用PCR方法得到两端含同源臂的插入片段，该两端同源臂分别与所述线性化载体两端序列同源；运用同源重组克隆的方法将插入片段重组到线性化载体上，最终构建得到新的载体，整个构建过程中未使用任何限制性内切酶及连接酶，构建方法方便、灵活、通用、简单、高效。