PP2A拮抗剂在制备治疗急性肝损伤药物中的应用

摘要

本发明公开了PP2A在急性肝损伤药物治疗中的应用，尤其提供了PP2A拮抗剂在制备治疗急性肝损伤药物中的应用。本发明首次公开了PP2A基因和蛋白的拮抗剂可以用于制备治疗急性肝损伤的药物，在肝脏保护药物领域具有潜在、良好的应用前景。

说明书

技术领域

.本发明涉及PP2A在急性肝损伤药物治疗中的应用，尤其涉及PP2A拮抗 剂在制备治疗急性肝损伤药物中的用途。

背景技术

.肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，起着解毒，去氧化，储存肝 糖元，分泌性蛋白质的合成等作用。在体内有大概70%的血液流经肝脏，因 此肝脏是口服类药物、酒精等经肠道吸收的外源性物质的必经场所，从而 使得肝脏成为对化学性损害极其敏感的器官。

.药物诱导型肝损伤导致的疾病范围很广，包括肝中毒，肝细胞病变，急 性脂肪病变，肝炎，胆汁郁积，肝性肉芽肿，脂肪性肝炎，肝癌等。药物 诱导型肝损伤的程度也不一而足。由于环境污染的加剧，饮酒过多等因素， 在我国，化学性肝损伤患病人数最为广泛。而肝损伤若任其恶化发展，最 终会转变为肝硬化，甚至恶化为肝癌，最终无法挽救。因此，尽量避免接 触生活中的化学性毒物、医源性药物和过量喝酒，尽早开展相关治疗，对 于防范与治疗肝损伤相关疾病意义重大。

.肝脏在应对急性化学性肝损伤时，表现的肝再生、细胞外基质积累、炎 症细胞侵润等均是是由多细胞共同参与调控的。在急性肝损伤后，肝星状 细胞受到刺激因子后激活为肌成纤维细胞样细胞，分泌肝细胞生长因子 （HGF）促进肝实质细胞的再生，同时产生大量的细胞外基质不仅可以作 为肝实质细胞生长的支架，当损伤得到控制后，多余累积的细胞外基质会 被吸收，而激活的肝星状细胞则会重新回到静息期或是凋亡清除，否则会 引起肝纤维化，若不加控制最终会形成肝硬化，乃至肝癌。静止期的肝细 胞受到刺激通过代偿性增生的方式进行一到两次复制使肝脏恢复到原始大 小，这一过程也称为肝再生。而在分子水平上，肝星状细胞激活的标志主 要为α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）与胶原（Collagen1）等基因的上调与表达。

.PP2A是一种在进化上高度保守的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶，由PP2A基因所 表达调控。在细胞中，蛋白质动态的磷酸化与去磷酸化是信号转导的基本 机制，PP2A正是通过去磷酸化的功能使底物蛋白失活或激活，从而引起细 胞中的一系列变化。PP2A全酶是由65-kDa的结构亚基（A亚基）、36-kDa的 催化亚基（C亚基）和多样性的调节亚基（B亚基）构成。

.敲除PP2A全酶当中的催化亚基（C亚基）的Cα亚基会使得整个PP2A失去 其去磷酸化的酶活作用。PP2A主要与细胞周期调控，细胞凋亡等生化进程 相关，但经发明人研究其亦可对急性肝损伤过程产生调控作用。

发明内容

.有鉴于此，本发明的目的在于通过构建Ade-PP2Acα/siRNA重组腺病毒， 考察PP2A基因在急性肝损伤细胞模型、构建PP2A基因敲除动物模型和临床 肝损伤病人肝脏中的表达状况与功能活性，确认PP2A能否作为急性肝损伤 治疗的药物靶点。以及通过急性肝损伤细胞模型和PP2A基因敲除动物模型 来检测其拮抗剂是否是有效的治疗药物，提出利用Ade-PP2Acα/siRNA重组 腺病毒来进行急性肝损伤的治疗，从而提高急性肝损伤患者的治疗效果及 生命质量。

.为达上述目的，发明人考察了PP2A在CCL4损伤肝细胞模型、急性化学 性肝损伤动物模型与肝损伤患者组织检测表达变化，同时调查了Ade- PP2Acα/siRNA重组腺病毒对肝损伤的影响以及对肝细胞增殖影响。结果发 现PP2A在化学性肝损伤模型以及肝硬化患者组织中表达量都有显著上调。 干扰PP2Acα（PP2A的催化亚基，决定PP2A的功能）后，肝实质细胞中与 增殖相关的细胞周期蛋白（cyclin D）表达量显著增加，这代表着损伤的修 复和损伤程度的减轻。同时在急性性肝损伤动物模型中，发现敲除PP2A有 助于减降低Collagen1的表达，这代表着损伤程度的减轻。以上结果均提示 我们，Ade-PP2Acα/siRNA重组腺病毒可以用来进行急性肝损伤的治疗。

.本发明治疗急性肝损伤的药物施用方式可以是口服、特定组织器官施用、 全身施用（例如，透过皮肤、鼻吸入或者用栓剂）或肠胃外施用（例如， 肌肉内、静脉内或皮下）。

.本发明的药物也可被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其 他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物，可 通过常规方法进行制备。针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。

.本发明中，所述的小干扰RNA是对应的靶标序列为序列表中SEQ ID  NO:1或2的DNA靶序列的小干扰RNA（SEQ ID NO:3或4），对照组序列为序 列表中SEQ ID NO:11的RNA序列。

.PP2Acα的siRNA基因重组表达载体例如本申请构建的Ade-PP2Acα/siRNA 重组腺病毒可以单独或与其他有功能活性基因重组表达载体联合，再辅以 药学上可接受的载体，用以制备治疗急性肝损伤的增敏药物。

.进一步，根据本发明的记载和本领域的公知常识，任何在转录和/或翻译 水平上，能够抑制PP2Acα基因的表达，可以单独或者与其他具有活性的多 肽、蛋白、融合蛋白等联合，再辅以药学上可接受的载体，均用于制备治 疗急性肝损伤的药物。

.本发明的有益效果在于：本发明首次公开了PP2A基因和蛋白的拮抗剂可 以用于制备治疗急性肝损伤，有助于提高急性肝损伤恢复过程，增强受损 后肝细胞的增殖，提高急性肝损伤患者的生命质量，在急性肝损伤治疗领 域具有潜在、良好的应用前景。

附图说明

.图1为CCl₄损伤肝细胞模型的成功建立。CCl₄刺激之后使得肝细胞受损。 肝细胞数量减少。

.图2为CCl₄损伤肝细胞模型的成功建立。CCl₄刺激之后使得肝细胞数量减 少。

.图3显示Ade-PP2Acα/siRNA重组腺病毒的效价验证。

.图4显示在CCL4造成的肝损伤细胞模型中PP2Acα表达量显著上升。

.图5显示Ade-PP2Acα/siRNA重组腺病毒对肝细胞增殖的促进作用，肝 细胞经过Ade-PP2Acα/siRNA重组腺病毒作用之后与阴性对照组的cyclin D 表达量比较，显著升高。

.图6显示肝硬化病人组织中PP2Acα的表达量明显高于正常组织。

.图7显示PP2Acα肝实质细胞特异性敲除小鼠的肝重、肝重体重比相较 对照组，在非损伤情况下（Olive组）两组肝重体重比没有差别，在CCL₄诱导肝损伤后增加更多，反映了更好的恢复力。

.图8显示PP2Acα肝实质细胞特异性敲除小鼠Collagen1蛋白与基因表达 量均显著低于对照组。

.图9显示HE切片上，PP2Acα肝实质细胞特异性敲除小鼠的坏死面积显 著低于对照组。

具体实施方式

.下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。

.以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明范围。实施例中未注 明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人著，分子 克隆实验指南（New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989）中 所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

.材料与方法

.材料

293A细胞系购自武汉大学细胞保藏中心；LO-2细胞系由南京师范大学刘畅 教授惠赠；CCL₄为市售分析纯，；PP2Acα与Collagen1抗体购自美国BD公司；反 转录试剂盒Traverse-Ace以及荧光定量PCR试剂盒购自TOYOBO公司； PP2Acα、Collagen1、cyclin D1、18s引物由上海生工生物工程技术服务有限公 司合成（见SEQ ID NO:5-10）；野生型及PP2Acα肝实质细胞特异性敲除小鼠由 南京大学模式动物研究所惠赠；病人组织标本由南京市鼓楼医院提供。

.细胞培养

LO-2培养于含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、100mg/L链霉素的DMEM培养 基中，于37℃、5%CO2浓度条件下的细胞培养箱中培养。

.制备肝细胞损伤模型

LO-2肝细胞培养12h后，将上清吸弃，更换培养液并加入CCL₄2mM（事先用 DMSO溶解，DMSO终浓度1％），对照组仅加入DMSO，作用6h后收集24孔板 中培养上清检测GOT活性，同时进行细胞计数评价损伤程度。

.制备动物肝损伤模型

对8～12周大的野生鼠与PP2Acα肝实质细胞特异性敲除小鼠分别行腹腔注射 CCL4（1:5溶于橄榄油中，1ul/g）,对照组注射相同剂量橄榄油，注射后的小鼠 按照SPF级条件饲养72小时后，处死，完整取肝脏称重，取肝组织进行相关分 子生物学检测。

.提取细胞RNA

将用来提取RNA的试剂，枪头和容器用0.1%的DEPC水预先处理，高压湿热

灭菌。具体的RNA提取步骤如下：

1）吸尽六孔板中培养基，在冰上用PBS清洗两次，加入1mL Trizol （Invitrogen），冰上静置5min,刮取细胞，用枪头吸入无RNA酶的EP管中

2）加1/5体积三氯甲烷（200μL），混匀，室温静置3-5分钟后，12000rpm， 离心15分钟；

3）将上层水相转移至一新的1.5mL离心管中，加入等体积的异丙醇，混匀， 室温10～15分钟，12000rpm，离心10分钟；

4）弃上清，加1mL预冷的75%乙醇，将沉淀悬浮，7500g，离心5分钟；

5）吸取上清，室温干燥5～10分钟，加20μL DEPC（焦碳酸二乙脂）溶液 溶解RNA，用紫外分光光度计进行RNA定量及纯度的分析。

.提取组织标本RNA

取1mg组织标本，悬浮于1ml Trizol(Invitrogen)，用组织匀浆器匀浆3-5分钟， 加1/5体积酚氯仿抽提蛋白，12000rpm，离心10分钟，抽取上清，加等体积的 异丙醇，-20度，20分钟沉淀RNA，12000rpm，离心10分钟，弃上清，沉淀 溶于20ul DEPC(焦碳酸二乙脂)溶液，测定浓度。

.免疫印迹分析

细胞培养至可以进行蛋白抽提时，吸去培养基，用冰预冷的PBS洗两遍，加入 300ul裂解缓冲液(50.0mmol/L Tris,150.0mmol/L NaCl,0.1%SDS,1.0%NP-40, 1.0mmol/L Na₃VO₄,2.0mmol/L NaF,100.0μg/ml PMSF,1.0μg/ml leupeptin,and 1.0μg/ml aprotinin)，冰浴30min，期间每隔5分钟混匀一次，刮取细胞，12 000g离心10分钟，收集上清。（或取自动物组织，提取蛋白）采用Bradford法 测定蛋白质浓度。取50μg的总蛋白进行SDS-PAGE胶电泳分离，按常规方法 转印至PVDF膜上，一抗4℃孵育过夜，（antiPP2Acα1:1000）（anti-GAPDH 1:1000)，用AP标记的二抗与NBT和BCIP显色或者采用BM  chemiluminescence Western Blotting Kit(购自Roche公司)检测结果。

.石蜡切片制作

肝脏离体后立即以4%多聚甲醛固定过夜。

（1）脱水

（2）透明

二甲苯20min×2。

（3）浸蜡≥3小时；

包埋过夜后，制成5μm切片。

.H&E染色

中性树脂封片；

奥林巴斯光学显微镜拍摄。

.免疫组化

（1）脱蜡水化

（2）去除内源性过氧化物酶

将玻片置于3%双氧水中（去离子水配置），室温10min后，去离子水洗5 min×3。

（3）抗原修复

1）切片置于柠檬酸钠缓冲液中，微波修复：中高火2.5min，中低火1min， 低火7min；

2）自然冷却至室温；

3）PBS洗5min×3。

（4）封闭

每个样品滴加30μL3%的BSA（PBS配置），室温1h。

（5）滴加一抗

直接吸取封闭液，滴加一抗（anti-collagen11:100，1%BSA稀释），4℃过夜， PBST洗5min×4。

（6）滴加二抗

辣根过氧化物酶偶联的IgG（马抗兔1:200，1%BSA稀释），PBST洗5min×6

（7）DAB显色

显色液需新鲜配制，每1mL显色液中各滴加显色液A，B，C一滴，震荡混匀， 显色时需要避光，显色时间需要根据光学显微镜下显现出黄色的时间和深度而 定。

.反转录PCR

通过Tranverse-Ace反转录试剂盒(TOYOBO)，采用oligo-dT进行逆转录。取 800ng总RNA反转录合成单链cDNA，流程如下：800ng总RNA，加入1ul  mol/L OligodT引物1ul，补DEPC水至10ul。65℃，反应5min后，迅速置于 冰上，再加入反应缓冲液4ul，10mmol/L dNTP2ul，20U/ul的RNA酶抑制剂 1ul。在37℃反应5min后，加入1ul10U/ul逆转录酶，42℃反应1h后在 90℃处理10min。

.实时荧光定量PCR

采用实时荧光定量PCR试剂盒（TOYOBO），具体体系如下：

20ul体系，SYBR(2*):10ul，primer(up)(10*):2ul，primer(down)(10*):2ul，cDNA 模板：2ul，加双蒸水至20ul。

PP2Acα实时定量PCR引物序列：

PP2Acα(Mus)forward:5’-GAACAATAGCCAGTTATTCAGG-3’

PP2Acα(Mus)reverse:5’-TAATGAGCAATGGTAAGGAGC-3’

其他引物序列详见序列表

扩增条件：

95℃预变性5分钟，95℃变性15秒，60℃退火15秒，72℃延伸，收集荧光信 号45秒，共40个循环，数据分析。

.谷草转氨酶（GOT）表达水平检测

采用南京建成科技公司GOT活性检测试剂盒，具体操作如下：

分别在测定孔与对照孔中加入37℃预热的基质液25ul，测定孔中还需加入待测 样本5ul(对照组加入含DMSO的正常培养基5ul)，37℃水浴30分钟，分别在测 定孔与对照孔中加入2，4—二硝基苯肼液，对照孔中还需加入待测样本 5ul(对照组加入含DMSO的正常培养基5ul)，37℃水浴20分钟，分别在测定孔 与对照孔中加入0.4mol/L氢氧化钠液250ul，轻轻水平摇动96孔板混匀，室温 放置15分钟，510nm波长，酶标仪测各孔OD值，以（绝对OD=测定孔OD减 去对照孔OD），查标准曲线，求得相应的AST/GOT活力单位。

.PP2A小干扰RNA构建：

根据siRNA设计的一般原则设计siRNA,所选取靶序列如下：

5'GCAGACAGATCACACAAGTTT-3'/5'-ACTTGTGTGATCTGTCTGCTT-3' (sense),设计好PP2A小干扰RNA序列由上海生工生物技术有限公司合成。

.Ade-PP2Acα/siRNA重组腺病毒的构建

重组质粒pATC-PP2Acα/siRNA经Pme I酶切线性化后，用电穿孔法将其与质 粒pAdEasy-1共同转化感受态菌BJ5183(条件：电脉冲25μF，电压2.5kV,电阻 200Ω)，进行同源重组。用Pac I酶切鉴定同源重组的质粒，以电穿孔法将重组 子转化入大肠杆菌DH10α内，大量制备重组腺病毒质粒DNA备用转染。

.重组腺病毒的包装和收获

将重组质粒用磷酸钙法转染HEK-293A细胞。转染后7-10天，出现细胞病变效 应(cytopathiceffects,CPE)，表现为贴壁细胞变圆、核浓缩、脱落，出现病毒空 斑。收集细胞，反复冻融3次，离心，收集上清于-70℃保存备用。

.病毒颗粒浓度的测定

在24孔细胞培养皿中，待培养的4孔293细胞生长至90%汇合时，吸去培养 液，加入0.5mL无血清DMEM培养液，分别滴加入5、10、30及40ul的病毒 稀释液（稀释约500倍），小心混匀，置于含5％CO2培养箱中培养。1h后， 小心加入0.5mL含100mL/L小牛血清的DMEM培养液，混匀、培养，观察 CPE；3d后，待加入5ul病毒稀释液的孔完全出现CPE现象时，计数细胞并计 算病毒颗粒的浓度。病毒颗粒的浓度=（细胞数×20/病毒稀释液的体积）×病毒 稀释倍数。

.细胞计数

1、将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。2.将细胞悬液吸出少许， 滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要 有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。3.计算板四大格细胞总数，压线细胞只 计左侧和上方的。然后按公式计算：细胞数/mL=四大格细胞总数/4×10⁴个/

实施例1CCl₄损伤肝细胞模型的建立

采用[0027-0029]、[0039]以及[0044]等部分的实验方法，成功建立了CCl₄损伤肝细胞模型。如图1和图2所示，CCl₄刺激之后使得肝细胞受损。肝细胞 数量减少。如图1所示，在LO-2细胞培养基中加入2mmolCCl₄（预先溶于 DMSO溶液）处理6h，对照组加入等量DMSO溶液，分别取培养基进行GOT 检测，观察到CCl4处理组LO-2细胞受损，谷草转氨酶（GOT）活力升高；*， 与对照组比p﹤0.05；**，与对照组比p﹤0.01，n≥5。如图2所示,在LO-2 细胞培养基中加入2mmolCCl4（预先溶于DMSO溶液）分别于处理后0h2h6h 10h进行细胞计数，每个时间点重复三次，发现加入2mmolCCl₄后LO-2细胞数 目0到6h显著减少，10h后略有恢复。以上结果说明，已经成功建立CCl4损 伤肝细胞模型。

实施例2Ade-PP2Acα/siRNA重组腺病毒的效价验证

采用[0027-0029][0037-0038]以及[0040-0043]等部分的实验方法,验证了 Ade-PP2Acα/siRNA重组腺病毒的效价。如图3所示，在LO-2细胞培养基中加 入Ade-PP2Acα/siRNA重组腺病毒(对照组施以空载病毒)，48h后，提取LO-2 细胞RNA，检测PP2Acα的表达量，可见合成的Ade-PP2Acα/siRNA重组腺病 毒对PP2Acα的效率较高；*，与对照组比p﹤0.05；**，与对照组比p﹤0.01， n≥5。以上结果说明，Ade-PP2Acα/siRNA重组腺病毒的效价高，能够显著抑制 PP2Acα的mRNA表达量。

实施例3CCL4造成的肝损伤细胞模型中PP2Acα表达量显著上升

采用[0027-0029]以及[0033]等部分的实验方法，检测了CCL₄造成的肝损伤 细胞模型中PP2Acα的表达情况。如图4所示，在LO-2细胞培养基中加入2mmol 的CCl₄（预先溶于DMSO溶液）分别于处理后0h（ctr）2h6h10h提取细胞蛋白， 利用westernblot检测PP2A表达量随着损伤进展而变化，发现加入CCl₄后LO-2表 达PP2Acα蛋白显著增加。以上结果说明，CCL₄造成的肝损伤细胞模型中 PP2Acα表达量显著上升，PP2Acα表达量与肝损伤存在正相关关系，PP2Acα是 治疗肝损伤的一个潜在靶点。

实施例4Ade-PP2Acα/siRNA重组腺病毒对肝细胞增殖具有促进作用

采用[0027-0029][0037-0038]以及[0040-0043]的实验方法，如图5所示，在 LO-2细胞培养基中加入Ade-PP2Acα/siRNA重组腺病毒(对照组施以空载病毒)， 48h后，提取LO-2细胞RNA，检测CyclinD1的表达量，发现敲除组cyclinD1 表达量较高，提示更多肝实质细胞处于增殖状态，肝细胞正在修复当中。*，与 对照组比p﹤0.05；**，与对照组比p﹤0.01，n≥5。肝细胞经过Ade- PP2Acα/siRNA重组腺病毒作用之后与阴性对照组的cyclin D表达量比较，显著 升高。以上结果说明，抑制PP2A之后可以促进正常肝细胞的增值，促进肝细 胞的修复，再次说明和确认了PP2A是治疗肝损伤的靶点。

实施例5肝硬化病人组织中PP2Acα的表达量明显高于正常组织

采用[0030-0032][0037-0038]等部分的实验方法，检测了肝硬化病人组织中 PP2Acα的表达量。如图6所示，利用Q-PCR检测肝硬化病人样本组织中 CTGF、Collagen1、PP2Acα的表达量，发现肝硬化病人肝组织中肝纤维化标志 分子CTGF与Collagen1的表达量升高、同时PP2Acα的表达量也有升高。*， 与对照组比p﹤0.05；**，与对照组比p﹤0.01，n≥5。以上结果确认了PP2A 是治疗肝损伤的靶点。

实施例6CCL₄诱导肝损伤后，PP2Acα肝实质细胞特异性敲除小鼠的肝重、肝 重体重显著增加

采用[0030]等部分的实验方法，检测了CCL₄诱导肝损伤后，PP2Acα肝实 质细胞特异性敲除小鼠的肝重、肝重体重情况。如图7所示，PP2Acα肝实质 细胞特异性敲除小鼠的肝重、肝重体重比相较对照组，在非损伤情况下（Olive 组）两组肝重体重比没有差别，在CCL₄诱导肝损伤后增加更多，反映了更好 的恢复力。对8～12周大的野生鼠与PP2Acα肝实质细胞特异性敲除小鼠分别行 腹腔注射CCL₄（1:5溶于橄榄油中，1ul/g）,对照组注射相同剂量橄榄油，注射 后的小鼠按照SPF级条件饲养72小时后，称重，处死，取出肝脏称重，计算肝 重体重比，发现敲除组肝重以及肝重体重比在打油组中没有显著性差异，在 CCL₄诱导损伤后显著高于对照组，且图例8未显示显著性水肿改变，结合图例 5与图例9，说明肝重体重比增加反应了更多的肝实质细胞参与再生。*，与 CCl₄对照组比p﹤0.05；**，与对照组CCL₄比p﹤0.01，n≥5;##,与Olive对 照组比p<0.01。以上结果确认了PP2A是治疗肝损伤的靶点，也表明抑制PP2A 是治疗肝损伤的有效途径。

实施例7PP2Acα肝实质细胞特异性敲除小鼠Collagen1蛋白与基因表达量均 显著低于对照组

采用[0030][0034-0035]等部分的实验方法，检测了PP2Acα肝实质细胞特 异性敲除小鼠Collagen1蛋白与基因表达量。如图8所示，利用H.E染色，检测 敲除组与对照组小鼠坏死面积大小，利用imageJ统计坏死大面积后，可以发现 敲除PP2Acα后坏死面积小于对照组。同时，未发现敲除组与对照组肝细胞大 小有显著性改变。*，与CCl₄对照组比p﹤0.05；**，与对照组CCL4比p﹤ 0.01，n≥5。以上结果确认了PP2A是治疗肝损伤的靶点，也表明抑制PP2A是 治疗肝损伤的有效途径。

实施例8PP2Acα肝实质细胞特异性敲除小鼠的坏死面积显著低于对照组

采用[0030][0034-0035]等部分的实验方法，检测了PP2Acα肝实质细胞特 异性敲除小鼠的坏死面积。如图9所示，利用免疫组化检测敲除组与对照组小 鼠Collagen1表达情况（见A图），利用imageJ统计collagen1表达大面积后， 可以发现敲除PP2Acα后Collagen1表达状况要低于对照组（见B图），利用Q- PCR对collagen1基因进行检测，敲除组在CCL4刺激后Collagen1表达量要显 著低于对照组（见C图）。*，与CCl₄对照组比p﹤0.05；**，与对照组CCL4 比p﹤0.01，n≥5。以上结果确认了PP2A是治疗肝损伤的靶点，也表明抑制 PP2A是治疗肝损伤的有效途径。