大黄栀子素A及其制备方法和在药物上的应用

摘要

本发明提供一种新的具有药用价值的大黄栀子素A(式I化合物)，及从大黄栀子(Gardenia sootepensis)植物体中提取本发明化合物的方法，同时提供一种以式I化合物为活性成分的用于治疗和预防肿瘤的药物组合物，及该化合物及其药物组合物在制备治疗和预防肿瘤的药物方面的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的化合物大黄栀子素A，其制备方法，以该化合物为活性成分的药物 组合物，以及该化合物及其药物组合物在制备治疗和预防肿瘤的药物方面的应用。

背景技术

所有肿瘤的形成都是从机体的基本单元细胞开始的。机体由各种类型的细胞构成，细胞 通过受控的生长和分裂来维持机体的正常功能，当正常细胞衰老或功能受损时，就会诱发死 亡并被新生细胞替代。一旦细胞内的遗传物质遭到破坏或发生改变，形成基因突变，就可能 影响正常细胞的生长、分裂和凋亡程序，导致异常细胞在机体所不需要的地方持续生长，形 成肿瘤。

对肿瘤的治疗手段主要包括外科手术、放射疗法、化学疗法。近年随着纳米分子医学和 分子生物学技术的突飞猛进，肿瘤发生机制的阐述、抗肿瘤靶点的寻找、新型抗肿瘤药物的 开发以及治疗手段的创新和综合运用都有了长足的进步，肿瘤患者生存时间明显延长。但是， 严重威胁人类生命健康的占恶性肿瘤90％以上的实体瘤的治疗尚未达到满意的疗效，仍有大 量肿瘤患者因对治疗无反应或耐药而最终导致治疗失败。因此，发现并开发新型抗肿瘤药物 仍然是人类长期必须面对的重要问题。

迄今，现有技术中没有含有式(I)化合物大黄栀子素A作为有效成分在治疗和预防肿瘤 方面的报道，也没有该化合物具有抗肿瘤活性的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的具有药用价值的大黄栀子素A。

本发明的另一目的是提供一种从大黄栀子(Gardenia sootepensis)植物茎叶中提取本发明 化合物的方法。

本发明的进一步目的是提供一种以式(I)化合物为活性成分的用于治疗和预防肿瘤的药 物组合物，及该化合物和组合物在制备治疗和预防肿瘤的药物方面的应用。

为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

用于治疗和预防肿瘤的药物，其中含有治疗和预防肿瘤有效量的式(I)化合物及可药用 载体和/或赋形剂。

本发明化合物大黄栀子素A可以转化为药学上可接受的衍生物，如双键可以采用文献方 法还原，也可进行氢卤化。α,β-不饱和酮可通过麦克尔加成反应(Michael reaction)引入含4～10 个碳的链。

本发明化合物用作药物上时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物组 合物含有0.1～99％，优选为0.5～90％的本发明化合物，其余为药物学上可接受的盐，或对人 和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。

所述的药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物 制品辅剂。将所述的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经口服和注 射(静注、肌注)两种形式给药。

口服可用其固体或液体制剂，如粉剂、片剂、糖衣剂、胶囊、溶液、糖浆、滴丸剂等。

注射可用其固体或液体制剂，如粉针剂、溶液形注射剂等。

为了更好地理解本发明的实质，下面将用本发明的式(I)化合物的生物活性结果来说明 它在医药领域中的应用。

MTT法细胞活性检测：

MTT全称为3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，是一种黄颜色的 染料。活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT，同时在细胞色素C的作用下，生成 蓝色(或蓝紫色)不溶于水的甲臜(Formazan)，甲臜的含量可以用酶标仪在570nm处进行 测定。在通常情况下，甲臜生成量与活细胞数成正比，因此可根据光密度OD值推测出活细 胞的数目。

实验方法：

1.接种细胞：用含10％胎牛血清的培养液(DMEM或者RMPI1640)配成单个细胞悬液， 以每孔10000-20000个细胞接种到96孔板，每孔体积100μl，贴壁细胞提前12小时接种培养。

2.加入待测化合物溶液(固定浓度40μM初筛，在该浓度对肿瘤细胞生长抑制在50％附 近的化合物设5个浓度进入梯度复筛)，每孔终体积200μl，每种处理均设3个复孔。

3.显色：37摄氏度培养48小时后，每孔加MTT溶液20μl。继续孵育4小时，终止培 养，小心吸弃孔内培养上清液100μl以避免细胞丢失，每孔加20％的SDS100μl，过夜孵育 (温度37℃)，使结晶物充分融解。

4.比色：选择595nm波长，酶联免疫检测仪(Bio-Rad680)读取各孔光吸收值，记录 结果，以浓度为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制细胞生长曲线，应用两点法(Reed and  Muench法)计算化合物的IC₅₀值。

实验结果：

化合物对不同肿瘤细胞株的半数生长抑制浓度IC₅₀(μM)：

白血病：1.36   肝癌：3.35   肺癌：5.26

乳腺癌：7.87  结肠癌：3.50

上述试验结果表明大黄栀子素A具有显著的体外肿瘤细胞毒活性。

具体实施方式

下面结合实施例进一步对本发明的实质内容进行说明，但本发明的内容并不局限于此。

实施例1：

11.5kg大黄栀子干燥茎叶经粉碎后用乙醇溶剂室温下提取三次，溶剂回收至干，得到946 g浸膏，再经硅胶柱层析分离，以石油醚/丙酮溶剂体系进行梯度洗脱。在石油醚/丙酮(6:1) 洗脱段得一组分。该组分进一步经硅胶柱层析(氯仿洗脱)和Sephadex LH-20柱层析(氯仿 /甲醇1:1洗脱)分离得到大黄栀子素A纯品23mg。

该方法分离出的化合物大黄栀子素A的化学结构式为：

无色油状物；易溶于氯仿、吡啶；分子量为540；分子式为C₃₃H₄₈O₆；(c0.10, MeOH)。

大黄栀子素A的结构是基于它的质谱和核磁共振等波谱数据确定的。

质谱数据：ESIMS(pos.)：m/z563[M+Na]⁺；HRESIMS：m/z563.3348[M+Na]⁺(563.3349 calcd for C₃₃H₄₈O₆Na)。

红外光谱数据：IR(KBr)ν_max：3441，2947，2873，1765，1738，1631，1459，1438，1377， 1236，1169，1143，1024cm^-1。

核磁共振波谱数据见表1。

表1.NMR Spectroscopic Data in CDCl₃

实施例2：

按实施例1制得化合物大黄栀子素A，按化合物晶体与赋形剂重量比1:1的比例加入赋形 剂，制粒压片。

实施例3：

按实施例1制得化合物大黄栀子素A，按常规胶囊制剂方法制成胶囊。

实施例4：

按实施例1制得化合物大黄栀子素A，按化合物晶体与赋形剂重量比1:2的比例加入赋形 剂，制粒压片。

实施例5：

按实施例1制得化合物大黄栀子素A，按化合物晶体与赋形剂重量比1:3的比例加入赋形 剂，制粒压片。

实施例6：

胶囊剂：大黄栀子素A   100mg

        淀粉          100mg

        硬脂酸镁      适量

制备方法：将大黄栀子素A与助剂混合，过筛，在合适的容器中均匀混合，把得到的混 合物装入硬明胶胶囊。

实施例7：

安瓿剂：大黄栀子素A   50mg

制备方法：将大黄栀子素A溶解于2毫升丙二醇中，过滤所得溶液在无菌条件下装入安 瓿瓶中。