含有环孢菌素的无刺激性的纳米乳剂眼用组合物

摘要

本发明提供了一种含有环孢菌素作为活性成分并包含聚乙氧基化蓖麻油或聚乙氧基化氢化蓖麻油的眼用组合物，及制备所述组合物的方法。特别地，不使用高速搅拌或剪切机器，仅简单地混合并搅拌油相和水相将眼用组合物制备为理解小于或等于100nm的纳米乳剂，以使其物理化学的稳定性强且可长时间储藏。此外，所述眼用组合物对眼睛无刺激。

说明书

技术领域

本发明涉及含有环孢菌素的眼用乳剂，更特别地，涉及稳定的眼用组合 物及制备所述组合物的方法，当所述乳剂用于眼睛时不产生刺激且所述乳剂 粒径小于或等于100nm。

背景技术

含有免疫抑制剂的眼用制剂可能包含环孢菌素、西罗莫司、他克莫司或 其衍生物。其中，已知环孢菌素可有效地治疗干眼症，其包括环孢菌素A、 环孢菌素B、环孢菌素C和环孢菌素D，但是环孢菌素A及其衍生物是研 究最广泛的。

然而，通常已知的是，由于环孢菌素具有大约20至30μg/ml的很低的 水溶解度，很难制备含有溶于水介质中的环孢菌素的药物化合物，这种药物 化合物是市售的(环孢菌素眼用乳剂0.05％)。

乳剂涉及液-液分散系统，其中至少一种液体分散于另一种与其不融合 的液体中，且乳剂通常的粒径分布为0.1微米至数十微米。微乳剂在热力学 上是不稳定的，最终通过不同路径分离，例如，絮凝、沉淀、乳化、奥斯特 瓦尔德熟化、聚结等。关于这个方面，当分散相乳剂颗粒的大小减小到纳米 级时，根据颗粒间的布朗运动，在动力学方面，乳剂的稳定性能够显著增强， 市售的是通过将分散相的粒径减小到纳米级而制备的纳米乳剂。

同时，在制备已知的含有的纳米乳剂的过程中，使用能够向乳 剂施加高物理功率的高压均化器，或高速搅拌或剪切机器如微流化器。该制 备方法需要大型制备仪器，消耗高额成本，且对乳剂施加高能，以至于乳化 过程中的温度被大大提高，且难以应用到遇热受损的组分。此外，通过上述 方法制备的的乳剂中的粒径不均匀，因此发生更多絮凝及快速乳化 过程，其导致长期储藏的问题。此外，当使用高压均化器时，由于高温下磷 脂的不稳定性(例如，油分离、乳状液分层等)，气味改变或高温稳定性变 差，且尤其地，因为分散相颗粒的分布相对较宽，很难保证每制剂批次的产 品质量均匀。

关于上述问题，本发明者研发了通过简单地混合并搅拌乳剂制剂中油和 水组分制备纳米乳剂眼用组合物的技术，所述组合物的平均粒径小于或等于 200nm(韩国专利号1008189)。然而，当该专利组合物施用于眼睛时，对 眼睛刺激很大。

发明内容

技术问题

本发明提供了含有环孢菌素的纳米乳剂眼用组合物，其通过混合环孢菌 素和增溶剂而简单地制备，其粒径小于或等于100nm，并能长期保持物理 化学稳定性，且施用于眼睛时无刺激产生。

然而，在本发明中要解决的技术问题不限于上述描述，且本领域普通技 术人员通过以下描述将更清楚的理解其他未说明的问题。

技术方案

本发明的一方面提供了一种纳米乳剂眼用组合物，其包含0.01～1wt％的 环孢菌素；0.5～9.79wt％的聚乙氧基化蓖麻油或聚乙氧基化氢化蓖麻油；及 90～99.29wt％的磷酸盐缓冲液，由于所述组合物使用聚乙氧基化蓖麻油或聚 乙氧基化氢化蓖麻油作为环孢菌素的增溶剂，所以在纳米乳剂眼用组合物中 单独的油或乳化剂不是必需的，且所述组合物可以通过简单混合制备。

在本发明的一个示例性实施例中，所述纳米乳剂的平均粒径小于或等于 100nm的，且优选地小于或等于50nm。

在本发明的另一个示例性实施例中，所述环孢菌素是环孢菌素A。

本发明的眼用组合物还进一步包括增稠剂。本发明中使用的增稠剂可以 是，但不限于，至少一种选自由透明质酸及其盐、壳聚糖、羟丙基甲基纤维 素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羟甲基纤维素、卡波 姆、甘油和聚氧化乙烯组成的组的物质。优选地，所述增稠剂是透明质酸及 其盐。所述增稠剂相对于本发明眼用组合物的总重包含有0.1～5wt％。

在还一本发明的示例性实施方案中，本发明的眼用组合物可进一步包括 乙醇作为子溶剂。所述乙醇相对于眼用组合物的总重包含有0.1～3wt％。

本发明的另一方面提供了一种制备无刺激性的含有环孢菌素的纳米乳 剂眼用组合物的方法，其包含以下操作：通过在增溶剂中溶解环孢菌素A 制备第一溶液；通过在磷酸盐缓冲液中溶解增稠剂制备第二溶液；以及混合 第一溶液与第二溶液，且进行简单地搅拌所得的混合液，而并不使用高速搅 拌或剪切机器。

作为增溶剂，可以使用聚乙氧基化蓖麻油或聚乙氧基化氢化蓖麻油，且 乙醇可进一步包含于增溶剂中。此外，作为增稠剂，可以使用甘油和/或透 明质酸钠。

有益效果

本发明可有利地提供对眼睛无刺激的含有环孢菌素的纳米乳剂眼用组 合物。此外，本发明的眼用组合物可制备为比传统眼用乳剂的粒径更小的纳 米乳剂，且不使用高压均化器简单地混合环孢菌素和增溶剂可示出均匀分 布，并具有增强的物理化学稳定性，因此可长时间储藏。此外，由于所述乳 剂的粒径小于或等于100nm且均匀分布，当用作滴眼剂时不存在模糊视野 或对眼睛无刺激。

附图说明

图1是通过测量根据本发明的一个示例性实施方案制备的纳米乳剂的 粒径获得的结果。

图2是通过测量市售的的粒径获得的结果。

图3是对根据本发明的一个示例性实施方案的眼用组合物和对照滴眼 剂(对照)进行的刺激性试验的结果。

图4是通过泪液分泌的泪液试验对根据本发明的一个示例性实施方案 的眼用组合物和对照滴眼剂(对照)进行的药效试验的结果。

具体实施方式

本发明者研发了通过简单地混合和搅拌环孢菌素与增溶剂制备的纳米 乳剂而完成了本发明，所述纳米溶剂的粒径小于或等于100nm并具有持久 的物理化学稳定性，且不产生刺激。

本发明的含有环孢菌素的纳米乳剂眼用组合物是纳米乳剂眼用组合物， 其包含0.01～1wt％的环孢菌素；0.5～9.79wt％的聚乙氧基化蓖麻油或聚乙氧 基化氢化蓖麻油；及90～99.29wt％的磷酸盐缓冲液，且由于所述组合物使用 聚乙氧基化蓖麻油或聚乙氧基化氢化蓖麻油作为环孢菌素的增溶剂，因此不 需要单独地使用油和乳化剂，且可以通过混合简单地制备。

作为本发明环孢菌素的活性成分，可以包括环孢菌素A、环孢菌素A衍 生物、环孢菌素B、环孢菌素C或环孢菌素D等。优选地，本发明包括环 孢菌素A。

作为环孢菌素的增溶剂，本发明的眼用组合物的活性成分可以使用聚乙 氧基化蓖麻油或聚乙氧基化氢化蓖麻油。

蓖麻油或氢化蓖麻油具有良好的环孢菌素溶解性，市售的眼 用组合物也使用蓖麻油作为增溶剂。然而，蓖麻油或氢化蓖麻油是通过蓖麻 油酸或硬脂酸与甘油结合制备的甘油三酸酯，且将蓖麻油或氢化蓖麻油分散 于水中时需要乳剂。此外，为了分散于水中的油相的稳定性，乳剂颗粒需要 通过高压均化器研磨成几百纳米的单位。

在这方面，在本发明中，与传统的纳米乳剂眼用组合物不同，因为聚乙 氧基化蓖麻油或聚乙氧基化氢化蓖麻油替代蓖麻油或氢化蓖麻油用作环孢 菌素的增溶剂，其中的亲水性基团，即环氧乙烷，被直接修饰为蓖麻油或氢 化蓖麻油的脂肪酸，所以可以提供含有环孢菌素眼用纳米乳剂组合物，其中 保持了环孢菌素的溶解度且环孢菌素容易地分散于水溶液中。即，使用聚乙 氧基化蓖麻油或聚乙氧基化氢化蓖麻油，与常规技术不同，不需要加入单独 的油或乳化剂，且可以制备平均粒径小于或等于100nm的纳米乳剂组合物， 因此提供了一种当实际施用于眼睛时无刺激或无视野模糊的眼用组合物。

在本发明的一示例性实施方案中，本发明的眼用组合物可进一步包括作 为环孢菌素的辅助溶剂的乙醇。

在本发明的另一示例性实施方案中，本发明的眼用组合物可进一步包括 增稠剂。增稠剂可以是相对全部眼用组合物的重量的0.5～5wt％。在本发明 中使用的增稠剂不限制，可使用本领域中通常使用的药物或食物的增稠剂。 例如，所述增稠剂可以是至少一种选自由透明质酸或其盐、甘油、壳聚糖、 羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、羟乙基纤维素(HEC)、聚 乙烯吡咯烷酮(PVP)、羟甲基纤维素(CMC)、卡波姆(卡波姆)及聚氧化乙烯 (PEO)组成的组的物质。

此外，本发明提供了一种制备含有环孢菌素的纳米乳剂眼用组合物的方 法，且所述方法可能包括以下操作：

通过在增溶剂中溶解环孢菌素A制备第一溶液；

通过在磷酸盐缓冲液中溶解增稠剂制备第二溶液；以及

混合并简单地搅拌第一溶液与第二溶液。

作为增溶剂，可以使用聚乙氧基化蓖麻油或聚乙氧基化氢化蓖麻油，且 乙醇可以进一步包含于增溶剂中。

本发明的方法，必要时，还可以加入pH控制剂和/或等渗剂以控制滴眼 剂的pH及渗透压。

在下文中，为了帮助理解本发明，提供了以下实施例。然而，以下实施 例仅用于使本发明更容易理解，而本发明的范围并不限制于在以下实例中。

实施例

实施例1.根据增溶剂的种类制备纳米乳剂

将环孢菌素混合到根据表1的1-A至1-J的组分比例的各增溶剂中(第 一溶液)。根据每种组合物，将甘油和聚羟亚烃188混合到pH值7.2的磷 酸盐缓冲液中，并且将第一溶液分散到获得的溶液中，从而制备乳剂。使用 作为等渗剂的NaCl，并将克分子渗透压浓度调整到300mOsmol。

【表1】

含有不同增溶剂的乳剂组合物

实施例2.根据增溶剂/乙醇的组分比的变化制备乳剂组合物

使用在实施例1中制备组合物1-A相同的方法，通过如表2所示调控聚 乙氧基化蓖麻油和乙醇的量来制备组合物2-A至2-I。

【表2】

根据增溶剂/乙醇的组分比变化制备的乳剂组合物

实施例3.含有不同增稠剂的乳剂组合物的制备

使用在实施例1中制备组合物1-A相同的方法，通过如表3所示调控增 稠剂的种类和量来制备组合物3-A至3-F。

【表3】

含有不同增稠剂的乳剂组合物

实施例4.根据环孢菌素A的浓度制备乳剂组合物

如表4所示，通过改变环孢菌素A的浓度制备组合物4-A至4-E。

【表4】

根据不同浓度的环孢菌素A的乳剂组合物

实验实施例1.乳剂的粒径尺寸的测量

使用激光散射粒径分析仪测量实施例1-4中制备的乳剂的平均粒径尺 寸，并且结果在表6中示出。此处，使用市售的由Samil Allergan(货号：69297) 公司制造的0.05％滴眼液作为对照(对照组合物)1，使用韩国专利 号1008189的实施例中公开的6-G制剂作为对照2。

【表5】对照2的组合物的组分和含量

组分 6-G 环孢菌素A 0.05％ 油酰基聚乙二醇甘 2.5％

油酯   聚羟亚烃188 3.3％ 甘油 1.6％ 壳聚糖 0％ NaOH 适量 蒸馏水 适量

如表6所示，如在实施例1中制备的乳剂制剂，使用聚乙氧基化蓖麻油 或聚乙氧基化氢化蓖麻油作为增溶剂的组合物1-A至1-B能够提供具有小于 或等于100nm粒径的纳米乳剂，而不需要使用单独的乳化剂。

作为比较，组合物1-C至1-F在不使用乳化剂时不能形成乳剂，组合物 1-G至1-J使用乳化剂，从而具有数微米的非常大的平均粒径。

同时，可以看出根据本发明的所有的组合物2-A至4-E都能够制备具有 小于或等于100nm粒径的纳米乳剂，其具有比使用高压均化器制备的对照1 的更小的粒径。

此外，如图1所示，可以看出本发明的组合物2-C具有17.4nm的小粒 径，甚至是单颗粒的分布，然而如图2所示，对照1的平均粒径为328.4nm， 以及由于小颗粒的聚集而导致的增加的颗粒分布。

一般地，基于关于乳剂稳定性的斯托克斯定律，随着乳剂的粒径的减小， 沉淀的可能性也将被降低。

从该结果来看，由于本发明的组合物包括环孢菌素且被均匀地制备，所 述环孢菌素作为细微颗粒存在于溶于水中的脂质体的剂型中，所以所述组合 物预期能够用作为滴眼液，而不会引起刺激。

【表6】

根据本发明的乳剂和对照组合物的粒径的比较

组合物 粒径(nm) 组合物 粒径(nm) 1-A 17.5±1.4 2-G 17.2±3.3

1-B 18.3±2.4 2-H 17.7±1.1 1-C - 2-I 17.3±2.7 1-D - 3-A 16.9±1.1 1-E - 3-B 24.5±4.4 1-F - 3-C 19.2±2.9 1-G 4219±54 3-D 33.7±3.9 1-H 6529±43 3-E 18.4±3.3 1-I 1759±86 3-F 41.4±5.9 1-J 4391±131 4-A 17.2±2.5 2-A 16.9±1.1 4-B 17.7±1.9 2-B 17.5±1.9 4-C 16.9±1.1 2-C 17.4±3.1 4-D 16.7±2.9 2-D 17.5±2.2 4-E 17.5±3.3 2-E 17.7±0.7 对照1 328.4±12 2-F 17.3±2.9 对照2 92.6±11.3

实验实施例2.本发明的乳剂的稳定性试验

在室温下，测试随着时间的推移本发明的组合物1-A、1-B、3-A、3-C 和3-E的粒径和pH值的变化，结果在表7和8中示出。如表7和8所示， 可以看出随着时间的推移，本发明的组合物的粒径和乳剂pH值并没有显著 变化。

这些结果意味着本发明的组合物能够被长时间储存，由于它们是物理化 学稳定的。

【表7】

随着时间的推移乳剂的粒径(nm)变化

【表8】

随着时间的推移乳剂的pH值变化

实验实施例3.滴眼液的透明度评价

通过对于滴眼液的透明度测试，评价了根据本发明制备的眼用组合物 4C至4E和对照1的透明度，以观察当事先在体外对眼睛施用滴 眼液时的透明度和目眩感。

特别地，使用盐溶液(0.9％NaCl)替代眼泪，使用2 ml的每种眼用组合 物，将盐溶液加入其中，用裸眼评估透明度。结果在表9中示出。

【表9】

透明度测试

  组合物4-C 组合物4-D 组合物4-E 对照1 原始状态 透明的 透明的 透明的 不透明的 多达50 ml的盐溶液 透明的 透明的 透明的 不透明的 50 ml的盐溶液 透明的 透明的 透明的 略微乳状半透明的

50ml或更多的盐溶液 透明的 透明的 透明的 半透明的到透明的

如表9所示，在常规的市售产品的情况中，当施用到眼睛时， 从不透明变为透明，需要滴眼液的大约25倍量的盐溶液(2ml的滴眼液需 要50ml盐溶液)。也就是说，当0.4ml的常规产品被应用到眼睛上时，在 滴眼液被10ml的泪流稀释后，视野预期变得更清楚。

然而，可以看出根据本发明的眼用组合物4-C到4-E从开始就是透明的， 并保持其透明度，从而它们不会引起不良的反应，例如模糊的视野。

实验实施例4.滴眼液的刺激性试验

3个受试组以每组4个来进行3x3交叉试验的刺激性试验，如表10所 示。该试验共进行3个阶段。在根据本发明的组合物2-C、对照1和对照2 被应用到受试者后，对刺激度进行打分，结果在表11中示出。

如表11和图13所示，根据本发明制备的组合物2-C具有几乎没有刺激 的极佳效果，对照2引起了非常严重的刺激，并且对照3引发了轻微和中度 刺激。

【表10】

3x3拉丁方交叉测试模型

【表11】

刺激性试验的结果

实验实施例5.希尔默(Schimer)泪液分泌试验

为了评价根据本发明的眼用组合物的疗效，对白化兔进行了以下试验。

具体地，将兔子分为两组，每组6只，每天使用3次50μl的0.1％的硫 酸阿托品溶液(分别在上午9点，下午2点和下午7点)(当0.1％的硫酸 阿托品溶液应用到兔子的眼睛中时，能够诱发暂时的干眼症)。5分钟后， 每组动物的右眼用盐溶液进行测试，每组动物的左眼用根据本发明的组合物 2-C或进行测试(参见表12)。

【表12】

希尔默泪液分泌试验的方法

在试验后的第2、3、4和5天，通过使用希尔默泪液分泌试验试纸在上 午9点测量眼泪的量进行希尔默泪液分泌试验5天。

【表13】

希尔默泪液分泌试验的结果(泪液量(mm))

通过个体的右眼(干眼症诱导组)和左眼(用治疗剂组合物2-C或 处理的干眼症诱导组)之间的泪液量差来评价本发明的眼用组合物 的效果，结果在图4中示出。

如图4所示，可以看出，相比于对照1的处理组，组合物2-C的处理组 在测试后的第2、3、4和5天，泪液量分别增加3.1、1.1、4.3和2.0倍。

该结果意味着根据本发明的组合物对于干眼症具有极佳的疗效。

虽然本发明已经参照某些典型的实施方式示出并描述，但是应当理解的 是本领域技术人员在不背离本发明的由附属的权利要求书所限定的精神和 范围内，可以在形式和细节上作出各种变化。

【工业实用性】

根据本发明，当施用滴眼液时，含有环孢菌素的纳米乳剂眼用组合物不 造成对眼睛的刺激，例如模糊的视野，由于其增强的物理化学稳定性，该组 合物能够长期储存，并且由于其不使用高压均浆器，该组合物是稳定的，因 此其作为含有环孢菌素的滴眼液是有用的。