斐济果果实提取物

摘要

本发明涉及斐济果果实提取物。具体而言，本发明涉及斐济果果实提取物的治疗用途、制备该提取物的方法和含有该提取物的组合物。本发明的斐济果果实提取物可被用于治疗和预防类风湿性关节炎和2型糖尿病。

说明书

1.技术领域

本发明涉及斐济果果实提取物。具体而言，本发明涉及斐济果果实 提取物的治疗用途、制备提取物的方法以及包含所述提取物的组合物。

2.发明背景

糖尿病和肥胖已经成为全球主要的健康困扰。大约7％的美国人群受 到糖尿病的影响，且在2010年估计有6亿人为肥胖。被这些状况影响的 人数在接下来的25年预计会大幅增加。

2型糖尿病是糖尿病的最常见类型，且占到所有糖尿病病例的90％。 由于长期暴露于高血糖的环境中对血管的不利影响，以及相关的心血管 危险因素：动脉粥样硬化、高血压和凝血异常的较高发病率，2型糖尿病 增加了心血管疾病的发病和死亡风险。

患者通常超重并患有高血压(高的血液压力)和高脂血症(升高或异常 的血脂水平)。这些状况对于患者的幸福感以及生活方式具有很大的影响。 高血糖持续较长的时间周期会引起眼睛、肾脏、神经的严重损害，且增 加进一步的并发症如心脏病、中风、下肢截肢和死亡的风险。糖尿病引 起的高脂血症风险可包括胰腺炎、斑块形成、动脉的硬化和患心血管疾 病的风险增加。

肥胖是2型糖尿病的关键因素。目前现有的肥胖疗法，除了组织的 手术移除外，均未能引起肥胖的持续减少。此外，用于治疗肥胖的药物 可能具有严重的副作用。

治疗首先包括生活方式的改变、饮食调节或给予口服药物。患者的 治疗通常为非特异性的，这会导致不希望的副作用如腹泻和恶心。寻找 新的治疗方法仍在进行。天然产品和提取物在市场上占有特殊的位置， 因为这种治疗方式被认为是低毒性的且相较于药物治疗更被大众所接 受。

类风湿性关节炎也已经成为全球主要的健康困扰。大约1％的美国人 受到类风湿性关节炎的影响。被这些状况影响的人数预计在接下来的25 年会大幅增加。

类风湿性关节炎是一类以慢性炎症以及关节和周围组织的损坏为特 征的系统性自身免疫性疾病。其与增加的死亡率相关。类风湿性关节炎 确切的发病起因仍旧未知。然而，类风湿性关节炎包括了促炎和抗炎细 胞因子的活动之间的系统失衡，造成慢性炎症和关节损伤的引发。因此， 大部分针对RA的治疗剂已经被设计用来调节细胞因子的水平；例如， 肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1(IL-1)受体拮抗剂已经在预防 RA引起的关节损伤方面显示了有前景的活性。然而，通过拮抗剂产生的 体液免疫抑制仅仅表现出了有限时间的治疗效果。类风湿性关节炎的治 疗是一个包含药物治疗和物理治疗的长期的过程。

一些研究表明了类风湿性关节炎和2型糖尿病之间的联系。具有类 风湿性关节炎的人表现出增加的胰岛素抵抗和2型糖尿病的风险(Wasko  M.C.；Kay,J.；Hsia,H.C.and Rahman,M.U.Arthritis Care Res(Hoboken) 2011,63(4):512-21)。

所述联系可能归结于伴随类风湿性关节炎发生的炎症，其可能引起 胰岛素抵抗。一些用于治疗类风湿性关节炎的药物也可能增加2型糖尿 病的风险。类固醇如强的松可诱导那些已经具有患2型糖尿病风险的患 者的2型糖尿病。类风湿性关节炎的症状也可能是贡献因素。关节疼痛 和一般性疲劳阻碍体育锻炼，使得患者更难保持心血管健康和控制体重 增加。

因此，需要可以帮助防止和控制这些状况的替代疗法。本发明的目 标是提供天然果实提取物，其至少在某种程度上可以满足这一需求，或 者至少提供给公众有用的选择。

3.发明概述

本发明主要提供斐济果果实提取物在与2型糖尿病和相关病况的治 疗以及类风湿性关节炎和其相关病况的治疗有关的药物应用中的用途。 本发明中的斐济果提取物可被用来同时治疗两种病况，或者可被用来缓 解患类风湿性关节炎的患者的症状，同时减少患者发展2型糖尿病的风 险。

在第一个方面，本发明提供了降低患者血清脂质的方法，包括向患 者给予有效量的斐济果果实提取物。患者可以是患有2型糖尿病的人类 患者。

在第二个方面，本发明提供了降低患者血清葡萄糖的方法，包括向 患者给予有效量的斐济果果实提取物。患者可以是患有2型糖尿病的人 类患者。

在第三个方面，本发明提供了降低患者血压的方法，包括向患者给 予有效量的斐济果果实提取物。患者可以是患有2型糖尿病的人类患者。

在第四个方面，本发明提供了预防或治疗需要降低血压的患有2型 糖尿病的人类患者疾病或病症的方法，包括向人类患者给予有效量的斐 济果果实提取物。所述疾病或病症可以是高血压或任何与升高的血压有 关的疾病或病症。

在第五个方面，本发明提供了预防或治疗需要降低血脂如胆固醇和 甘油三酯的患有2型糖尿病的人类患者疾病或病症的方法，包括向人类 患者给予有效量的斐济果果实提取物。所述疾病或病症可以是高血脂或 任何与升高的血脂有关的其他疾病或病症。

在第六个方面，本发明提供了预防或治疗需要降低血糖的患有2型 糖尿病的人类患者疾病或病症的方法，包括向人类患者给予有效量的斐 济果果实提取物。所述疾病或病症可能是高血糖或任何与升高的血糖水 平有关的其他疾病或病症。本发明还提供了降低患者HbA1c水平的方法， 包括向患者给予有效量的斐济果果实提取物。患者可以是患有2型糖尿 病的人类患者。

在第七个方面，本发明提供了改善与患有2型糖尿病的人类患者高 血糖、高血脂和/或高血压相关的糖尿病症状的方法，包括向人类患者给 予有效量的斐济果果实提取物。

在第八个方面，本发明提供了改善与人类患者高血糖、高血脂和/或 高血压相关的代谢综合征症状的方法，包括向人类患者给予有效量的斐 济果果实提取物。患者可以是患有2型糖尿病的人类患者。

在第九个方面，本发明提供了预防或减少患者肥胖的方法。患者可 以是人类患者。

在第十个方面，本发明提供了预防或治疗与肥胖相关的疾病或病症 的方法。

在第十一个方面，本发明提供了降低患者肝总胆固醇水平的方法。 患者可以是肥胖的人类患者。

在第十二个方面，本发明提供了改善与人类患者肥胖相关的高血糖、 高血脂和/或高血压症状的方法，包括向人类患者给予有效量的斐济果果 实提取物。患者可以是患有2型糖尿病的人类患者。

在上述方面，在一个实施方案中患者可能患有类风湿性关节炎。

在第十三个方面，本发明提供了调节患者免疫功能的方法，包括向 患者给予有效量的斐济果果实提取物。

在第十四个方面，本发明提供了治疗与患者免疫衰老相关的疾病或 病症的方法，包括向患者给予有效量的斐济果果实提取物。

在第十五个方面，本发明提供了预防或治疗类风湿性关节炎症状的 方法，包括向患者给予有效量的斐济果果实提取物。

在第十六个方面，本发明提供了降低与类风湿性关节炎相关的炎症 细胞因子水平的方法，包括向患者给予有效量的斐济果果实提取物。患 者可以是患有类风湿性关节炎的人类患者。

在第十七个方面，本发明提供了减少与类风湿性关节炎相关的滑膜 增生的方法，包括向患者给予有效量的斐济果果实提取物。患者可以是 患有类风湿性关节炎的人类患者。

另一方面，本发明提供了斐济果果实提取物在制备降低患者血清脂 质的药物中的用途。患者可以是患有2型糖尿病的人类患者。

另一方面，本发明提供了斐济果果实提取物在制备降低患者血清葡 萄糖的药物中的用途。患者可以是患有2型糖尿病的人类患者。

在另一方面，本发明提供了斐济果果实提取物在制备降低患者血压 的药物中的用途。患者可以是患有2型糖尿病的人类患者。

在另一方面，本发明提供了斐济果果实提取物在制备预防或治疗需 要降低血压的疾病或病症的药物中的用途。所述疾病或病症可以是高血 压或任何与升高的血压有关的疾病或病症。患者可以是患有2型糖尿病 的人类患者。

在另一方面，本发明提供了斐济果果实提取物在制备预防或治疗需 要降低血脂如胆固醇和甘油三酯的疾病或病症的药物中的用途。所述疾 病或病症可以是高血脂或任何与升高的血脂有关的其他疾病或病症。患 者可以是患有2型糖尿病的人类患者。

在另一方面，本发明提供了斐济果果实提取物在制备预防或治疗需 要降低血糖的疾病或病症的药物中的用途。所述疾病或症状可以是高血 糖或任何与升高的血糖水平有关的其他疾病或病症。本发明还提供了斐 济果果实提取物在制备降低患者HbA1c水平的药物中的用途。患者可以 是患有2型糖尿病的人类患者。

在另一方面，本发明提供了斐济果果实提取物在制备改善与人类患 者高血糖、高血脂和/或高血压相关的糖尿病症状的药物中的用途。

在另一方面，本发明提供了斐济果果实提取物在制备改善与人类患 者高血糖、高血脂和/或高血压相关的代谢综合征症状的药物中的用途。 患者可以是患有2型糖尿病的人类患者。

在另一方面，本发明提供了斐济果果实提取物在制备预防或减少患 者肥胖的药物中的用途。患者可以是人类患者。

在另一方面，本发明提供了斐济果果实提取物在制备预防或治疗与 肥胖相关的疾病或病症的药物中的用途。

在又一个方面，本发明提供了斐济果果实提取物在制备降低患者肝 总胆固醇水平的药物中的用途。患者可以是肥胖的人类患者。

在另一个方面，本发明提供了斐济果果实提取物在制备改善与人类 患者肥胖相关的高血糖、高血脂和/或高血压症状的药物中的用途。患者 可以是患有2型糖尿病的人类患者。

在又一个方面，本发明提供了用于降低患者血清脂质的斐济果果实 提取物。患者可以是患有2型糖尿病的人类患者。

在又一个方面，本发明提供了用于降低患者血清葡萄糖的斐济果果 实提取物。患者可以是患有2型糖尿病的人类患者。

在又一个方面，本发明提供了用于降低患者血压的斐济果果实提取 物。患者可以是患有2型糖尿病的人类患者。

在又一个方面，本发明提供了用于预防或治疗需要降低血压的疾病 或病症的斐济果果实提取物。所述疾病或病症可以是高血压或任何与升 高的血压有关的疾病或病症。患者可以是患有2型糖尿病的人类患者。

在又一个方面，本发明提供了用于预防或治疗需要降低血脂如胆固 醇和甘油三酯的疾病或病症的斐济果果实提取物。所述疾病或症状可以 是高血脂或任何与升高的血脂有关的其他疾病或病症。患者可以是患有2 型糖尿病的人类患者。

在又一个方面，本发明提供了用于预防或治疗需要降低血糖的疾病 或病症的斐济果果实提取物。所述疾病或病症可以是高血糖或任何与升 高的血糖水平有关的其他疾病或病症。本发明还提供了用于降低患者 HbA1c水平的斐济果果实提取物。患者可以是患有2型糖尿病的人类患 者。

在又一个方面，本发明提供了用于改善与人类患者2型糖尿病的人 类患者中高血糖、高血脂和/或高血压相关的糖尿病症状的斐济果果实提 取物。

在又一个方面，本发明提供了用于改善与人类患者高血糖、高血脂 和/或高血压相关的代谢综合征症状的斐济果果实提取物。患者可以是患 有2型糖尿病的人类患者。

在又一个方面，本发明提供了用于预防或治疗肥胖的斐济果果实提 取物。

在又一个方面，本发明提供了用于预防或治疗与肥胖相关的疾病或 病症的斐济果果实提取物。

在又一个方面，本发明提供了用于降低患者肝总胆固醇水平的斐济 果果实提取物。患者可以是肥胖的人类患者。

在又一个方面，本发明提供了用于改善与人类患者高血糖、高血脂 和/或高血压相关的肥胖症状的斐济果果实提取物。患者可以是患有2型 糖尿病的人类患者。

在又一个方面，本发明提供了用于调节患者免疫功能的斐济果果实 提取物。

在又一个方面，本发明提供了用于预防或治疗与患者免疫衰老相关 的疾病或病症的斐济果果实提取物。

在另一个方面，本发明提供了斐济果果实提取物在制备调节患者免 疫功能的药物中的用途。

在另一个方面，本发明提供了斐济果果实提取物在制备预防或治疗 类风湿性关节炎症状的药物中的用途。

在另一个方面，本发明提供了斐济果果实提取物用于降低与类风湿 性关节炎相关的炎症细胞因子水平的用途，包括向患者给予有效量的斐 济果果实提取物。患者可以是患有类风湿性关节炎的人类患者。

在另一个方面，本发明提供了斐济果果实提取物用于减少与类风湿 性关节炎相关的滑膜增生的用途，包括向患者给予有效量的斐济果果实 提取物。患者可以是患有类风湿性关节炎的人类患者。

在又一个方面，本发明提供了用于调节患者免疫功能的斐济果果实 提取物。

在另一个方面，本发明提供了用于预防或治疗类风湿性关节炎的斐 济果果实提取物。

在另一个方面，本发明提供了用于减少与类风湿性关节炎相关的炎 症细胞因子的斐济果果实提取物，包括向患者给予有效量的斐济果果实 提取物。患者可以是患有类风湿性关节炎的人类患者。

在另一个方面，本发明提供了用于减少与类风湿性关节炎相关的滑 膜增生的斐济果果实提取物，包括向患者给予有效量的斐济果果实提取 物。患者可以是患有类风湿性关节炎的人类患者。

再一方面，本发明提供了用于降低患者血清脂质的组合物，其包含 有效量的斐济果果实提取物。患者可以是患有2型糖尿病的人类患者。

再一方面，本发明提供了用于降低患者血清葡萄糖的组合物，其包 含有效量的斐济果果实提取物。患者可以是患有2型糖尿病的人类患者。

再一方面，本发明提供了用于降低患者血压的组合物，其包含有效 量的斐济果果实提取物。患者可以是患有2型糖尿病的人类患者。

再一方面，本发明提供了用于预防或治疗需要降低血压的疾病或病 症的组合物，其包含有效量的斐济果果实提取物。所述疾病或病症可以 是高血压或任何与升高的血压有关的疾病或病症。患者可以是患有2型 糖尿病的人类患者。

再一方面，本发明提供了用于预防或治疗需要降低血脂如胆固醇和 甘油三酯的疾病或病症的组合物，其包含有效量的斐济果果实提取物。 所述疾病或症状可以是高血脂或任何与升高的血脂有关的其他疾病或病 症。患者可以是患有2型糖尿病的人类患者。

再一方面，本发明提供了用于预防或治疗需要降低血糖的疾病或病 症的组合物，其包含有效量的斐济果果实提取物。所述疾病或症状可以 是高血糖或任何与升高的血糖水平有关的其他疾病或病症。本发明还提 供了用于降低患者HbA1c水平的组合物。患者可以是患有2型糖尿病的 人类患者。

再一方面，本发明提供了用于改善与人类患者高血糖、高血脂和/或 高血压相关的糖尿病症状的组合物，其包含有效量的斐济果果实提取物。

再一方面，本发明提供了用于改善与人类患者高血糖、高血脂和/或 高血压相关的代谢综合征症状的组合物，其包含有效量的斐济果果实提 取物。患者可以是患有2型糖尿病的人类患者。

再一方面，本发明提供了用于改善与人类患者肥胖相关的高血糖、 高血脂和/或高血压症状的组合物，其包含有效量的斐济果果实提取物。 患者可以是患有2型糖尿病的人类患者。

另一方面，本发明提供了用于预防或治疗肥胖的组合物，其包含有 效量的斐济果果实提取物。

另一方面，本发明提供了用于预防或治疗与肥胖相关的疾病或病症 的组合物，其包含有效量的斐济果果实提取物。

另一方面，本发明提供了减少患者肝总胆固醇的组合物，其包含有 效量的斐济果果实提取物。患者可以是肥胖的人类患者。

在又一个方面，本发明提供了用于调节患者免疫功能的组合物，其 包含有效量的斐济果果实提取物。

在又一个方面，本发明提供了预防或治疗与患者免疫衰老相关的疾 病或病症的组合物，其包含有效量的斐济果果实提取物。另一方面，本 发明提供了用于制备药物的斐济果果实提取物。

在又一个方面，本发明提供用于调节患者免疫功能的组合物，其包 含有效量的斐济果果实提取物。

另一方面，本发明提供了用于预防或治疗类风湿性关节炎的组合物， 其包含有效量的斐济果果实提取物。

另一方面，本发明提供了降低与类风湿性关节炎相关的炎症细胞因 子水平的组合物，其包含有效量的斐济果果实提取物。患者可以是患有 类风湿性关节炎的人类患者。

另一方面，本发明提供了减少与类风湿性关节炎相关的滑膜增生的 组合物，其包含有效量的斐济果果实提取物。患者可以是患有类风湿性 关节炎的人类患者。

另一方面，本发明提供了用于制备药物的斐济果果实提取物。

另一方面，本发明提供了斐济果果实提取物作为药物的用途。

在又一个方面，本发明提供了包含斐济果果实提取物的组合物。所 述组合物可以是食物或食物产品。可选地，所述组合物可以是膳食补充 剂，例如营养品或其他营养组合物。

在又一个方面，本发明提供了药物组合物，其包含斐济果果实提取 物，并混合有一种或多种药学可接受的赋形剂。

再其他方面，本发明提供了斐济果果实提取物作为营养品，例如膳 食补充剂，或作为制备药物或功能性食品和饮料的活性成分的用途。

优选地，用于任何以上描述的方法、用途和组合物中的斐济果果实 提取物，以药物组合物、营养品如膳食补充剂或者食品产品如药物或功 能性食品或饮料的形式提供。

在一个实施方案中，斐济果果实提取物包含至少一种选自以下的化 合物：儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、原花色素、鞣花酸、赤芍素、 木樨草素以及相关的鞣花单宁。更优选地，斐济果果实提取物包含两种 或更多种选自以下的化合物：儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、原花 色素、鞣花酸、赤芍素、木樨草素以及相关的鞣花单宁。

在一个实施方案中，斐济果果实提取物包含至少一种选自以下的化 合物：儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、原花色素、黄酮、黄烷酮、 鞣花酸、赤芍素以及相关的鞣花单宁。更优选地，斐济果果实提取物包 含两种或更多种选自以下的化合物：儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、 原花色素、黄酮、黄烷酮、鞣花酸、赤芍素以及相关的鞣花单宁。

在一个实施方案中，斐济果果实提取物包含：(a)至少一种低聚原花 色素；(b)至少一种鞣花单宁，和(c)黄酮。

在一个实施方案中，斐济果果实提取物包含：(a)约40wt％至约70 wt％的低聚原花色素；和(b)约10wt％至20wt％的鞣花单宁。

在一个实施方案中，斐济果果实提取物包含赤芍素。

在一个实施方案中，斐济果果实提取物包含至少约50、55、60、65、 70、75、80、85、90或95wt％的多酚类化合物。

在一个实施方案中，斐济果果实提取物通过包含以下限定的步骤(i) 至(vi)的方法来制备。

另一方面，本发明提供了制备斐济果果实提取物的方法，包括步骤：

i)将斐济果整果，和/或斐济果果皮，和/或斐济果果肉，和/或斐济 果榨汁后的斐济果余渣与有机溶剂、水或水性/有机溶剂接触，以提供水 提物、有机提取物或水性/有机提取物以及固体残渣；和

ii)将所述水提物、有机提取物或水性/有机提取物与固体残渣分离， 得到粗制的水提物、有机提取物或水性/有机斐济果果实提取物。

iii)蒸发步骤ii)中的粗制的水提物、有机提取物或水性/有机斐济果 果实提取物，得到基本上为水性的斐济果果实提物浓缩物和沉淀；和

iv)将所述基本上为水性的斐济果果实提物浓缩物与沉淀分离。

v)将步骤iv)中的基本上为水性的斐济果果实提取物与聚合树脂接 触，以从所述基本上为水性的斐济果果实提取物吸附至少一种组分；

vi)用有机溶剂或混合有机溶剂从所述树脂洗脱至少一种组分，得到 斐济果果实提取物。

4.附图说明

图1显示了实施例1中制备的并在实施例2中分析的斐济果果实提 取物的HPLC迹线。上方的色谱图是来自于二极管阵列检测器，下方的 色谱图是来自于质谱仪的总离子流(电喷雾，正模式)。

图2显示了胶原诱导的关节炎小鼠研究(实施例6)中(A)正常对照，(B) 关节炎对照，(C)甲氨蝶呤治疗，和(D)补充了斐济果果实提取物的小鼠的 脚爪的放射图像。

图3显示了胶原诱导的关节炎小鼠研究(实施例6)中(A)正常对照，(B) 关节炎对照，(C)补充了斐济果果实提取物，和(D)甲氨蝶呤治疗的小鼠的 脚爪的关节部位经苏木精和伊红(H&E)染色后的组织学图像。

5.发明详述

5.1缩写词

ACE      血管紧张素转换酶

BP       血压

CM       培养基

ConA     刀豆素A

CVD      心脑血管疾病

ERK      胞外信号调节激酶

FBS      胎牛血清

FITC     异硫氰酸荧光素

HbAlc    糖化血红蛋白A1c

HCl      盐酸

HDL      高密度脂蛋白

IL       白细胞介素

IFN      干扰素

IgG1     免疫球蛋白G1

IκBα   B细胞κ轻肽基因增强子核因子抑制因子α

kg       公斤

LDL      低密度脂蛋白

LPS      脂多糖

MDA      丙二醛

mAb      单克隆抗体

MI       有丝分裂指数

nM       纳摩尔

NO    一氧化氮

PBS   磷酸盐缓冲盐水

PE    藻红蛋白

PGE   前列腺素E2

PHA   植物血凝素

RPMI  1640 一种商业液体培养基

5.2定义

本文使用的术语“斐济果果实提取物”是指斐济果果实的提取物， 包含斐济果整果和/或斐济果果皮和/或斐济果果肉和/或斐济果榨汁后的 果实余渣(斐济果果渣)。果实或其部分可为新鲜的、冷冻的(然后解冻)或 干燥的。也可对从果实的任何处理回收的汁液进行处理回收斐济果果实 提取物。

本文使用的术语“斐济果果皮”是指果实的外部蜡壳。

本文使用的术语“斐济果果肉”是指斐济果的肉质部分。

本文使用的术语“斐济果果渣”是指果实榨汁之后获得的果实残渣。

术语“患者”包括人类和非人的动物。

术语“治疗(treatment/treating)”及类似表达包括与疾病或病症相关的 一种或多种症状的减少或缓解。例如，对于高血糖、高脂血症或高血压， 这分别可指血清葡萄糖水平、血清脂质水平或血压的降低。

术语“预防(preventing/prevention)”及类似表达包括与疾病或病症相 关的一种或多种症状的预防。

在本说明书和权利要求书中使用的术语“包含(comprising)”是指“至 少部分地由…组成”。当解释本说明书和权利要求书中包括术语“包含 (comprising)”的陈述时，每一陈述中也可存在除以该术语起始的特征外 的其它特征。相关术语如“包含(comprise/comprised)”都以类似的方式解 释。

6.详细描述

人类营养学的研究已经引起了对膳食补充剂的健康益处的认知。已 经认识到包含复合的数组天然存在的生物活性化合物的膳食补充剂可以 赋予明显的长期健康益处。

斐济果(Feijoa sellowiana Berg，同义词Acca sellowiana)，俗称菠萝番 石榴，是一种热带番石榴相近的结果的常绿灌木。斐济果植物原产于南 美洲，但在热带和亚热带干旱地区尤其是新西兰也可被发现。其因其果 实而被种植，主要用于生产甜酸风味的果汁。

该物种因其含有生物学和营养学上有趣的化合物，已经被认为具有 一定的药学意义。最近的综述表明还没有食用斐济果在健康、疾病预防 或治疗方面(包括人和动物糖尿病)的已知报道(M.C.,Watson, R.R.,Feijoa(pineapple-guava)fruit:A role in health promotion？In:R.R. Watson,V.Preedy,editors,Bioactive Foods and Extracts:Cancer Treatment  and Prevention,CRC Press,2010年12月发表,ISBW 1439816190))。然而， 对培养细胞的一些研究已经表明斐济果提取物的总酚含量和自由基清除 活性之间具有高的关联性(Yuka,I.,Yumiko,K.,Miyo,N.,Takashi K.,J. Home.Econ.Japan,2003,54,945-949)。因此，斐济果已经加入正在被探 索药用功效的可食用植物的不断增加的列表中。

本申请申请人已经发现斐济果果实提取物具有治疗和预防糖尿病和 类风湿性关节炎的功效。

6.1斐济果果实提取物

本发明的斐济果果实提取物通过提取斐济果，包括斐济果整果和/或 斐济果果皮和/或斐济果果肉和/或斐济果榨汁后的果实余渣来制备。

提取过程可以使用本领域已知的标准提取技术来完成。在一个实施 方案中，斐济果果实提取物通过包括下述限定的步骤(i)到(vi)的过程来制 备。

本发明的一个方面提供了制备斐济果果实提取物的方法，包括以下 步骤：

i)将斐济果果实，和/或斐济果果皮，和/或斐济果果肉，和/或斐济 果榨汁后的斐济果余渣与亲水性有机溶剂、水或水性/有机溶剂接触，以 提供水提物、有机提取物或水性/亲水性有机提取物以及固体残渣；和

ii)将所述水提物、有机提取物或水性/有机提取物与所述固体残渣分 离，得到粗制的水提物、有机提取物或水性/有机斐济果果实提取物；

iii)蒸发步骤ii)中的粗制的水提物、有机提取物或水性/有机斐济果 果实提取物，得到基本上为水性的斐济果果实提物浓缩物和沉淀；

iv)将所述基本上为水性的斐济果果实提物浓缩物与所述沉淀分离； 和

v)对步骤iv)中的基本上为水性的斐济果果实提物浓缩物进行分级 分离，以浓缩其中的至少一种组分。

在一个实施方案中，使用聚合物树脂吸附、色谱分离、溶剂分区或 选择性沉淀对步骤iv)中的基本上为水性的斐济果果实提物浓缩物进行分 级分离。

在另一个实施方案中，可将步骤iv)中的基本上为斐济果果实水提物 的浓缩物干燥并溶解在有机溶剂和水的混合液中，例如溶解在70:30的乙 醇：水中。糖类和其它极性物质在此溶剂中不溶。干燥有机溶剂和水的 混合液会提供更集中于多酚化合物的斐济果果实提取物。这一程序可以 重复多次。

在另一个实施方案中，可将步骤iv)中的基本上为斐济果果实水提物 的浓缩物溶解在非水的混溶性溶剂如乙酸乙酯或1-丁醇中，从而得到具 有高多酚水平的非水的斐济果果实提取物。

在另一方面，本发明提供了制备斐济果果实提取物的方法，包括以 下步骤：

i)将斐济果整果，和/或斐济果果皮，和/或斐济果果肉，和/或斐济 果榨汁后的斐济果余渣与有机溶剂、水或水性/有机溶剂接触，以提供水 提物、有机提取物或水性/有机提取物以及固体残渣；和

ii)将所述水提物、有机提取物或水性/有机提取物与所述固体残渣分 离，得到粗制的水提物、有机提取物或水性/有机斐济果果实提取物；

iii)蒸发步骤ii)中的粗制的水提物、有机提取物或水性/有机斐济果 果实提取物，得到基本上为水性的斐济果果实提物浓缩物和沉淀；和

iv)将所述基本上为水性的斐济果果实提物浓缩物与所述沉淀分离；

v)将步骤iv)中的基本上为水性的斐济果果实提取物与聚合树脂接 触，以从所述基本上为水性的斐济果果实提取物吸附至少一种组分；

vi)用有机溶剂或混合有机溶剂从所述树脂洗脱至少一种组分，得到 斐济果果实提取物。

可将通过本发明方法制备的斐济果果实提取物真空干燥、喷雾干燥 或冷冻干燥来产生自由流动的粉末。

在一个实施方案中，斐济果果实提取物是自由流动的粉末。

在步骤i)之前，可任选地将所述的斐济果整果，和/或斐济果果皮， 和/或斐济果果肉，和/或斐济果榨汁后的果实余渣切碎、捣碎、碾碎、混 合、切片或剁碎。可将果实或果实部分冷冻并在步骤i)之前解冻。也可以 在步骤i)之前将其干燥。

可以在步骤i)之前将斐济果榨汁(通过挤压或其它方法从果实中除去 汁液)，由此提供所述斐济果果实榨汁后余下的果实残渣，其可用于步骤 i)。榨汁可以使用离心机、螺旋压榨机或机械压力或本领域已知的其它方 法进行。榨汁操作可以与酶预处理结合来协助从果实或果实部分释放多 酚类化合物。

在一个实施方案中，有机溶剂是丙酮或醇，例如甲醇、乙醇、异丙 醇或1-丙醇。当使用水性/有机溶剂时，有机溶剂和水可以任何合适的比 例使用，例如约20％-90％的水。

在一个实施例中，步骤iv)中的基本上为斐济果果实水提物的浓缩物 通过与聚合树脂接触来分离。树脂吸附提取浓缩物中的至少一种组分。 然后可以使用有机溶剂或混合有机溶剂从树脂洗脱组分，从而得到本发 明的斐济果果实提取物。

在洗脱至少一种组分前，可任选地用蒸馏水洗涤聚合树脂。在一个 实施方案中，聚合树脂是非离子型聚合吸附树脂。优选地，聚合吸附树 脂是非离子型苯乙烯-二乙烯基苯的共聚物树脂，例如Mitsubishi HP-20、 Mitsubishi Sepabeads SP-70或Amberlite。实施例1提供了制备本发明的 斐济果果实提取物的方法的实例。

已知斐济果含有高水平的多酚类化合物。多酚类化合物是一大类生 物分子，其在植物中起保护作用。其一般特征在于存在多个且通常多羟 基化的酚单元，有许多不同类的多酚，每一类中均包含大量不同的化合 物。

每种植物都具有不同的和独特的多酚类特性，其随着植物生长环境 条件的不同也具有一定程度的差异。不同的加工方法也会得到具有不同 多酚特性的植物材料。因此，鉴定富含多酚类的植物提取物中的所有多 酚化合物是很困难的。然而，本发明的果实提取物的色谱分离方法导致 分离并鉴定出了以儿茶素(III)、表儿茶素(IV)、没食子儿茶素(V)、原花青 素B2(VI)、原花色素低聚物(VII)、鞣花酸、α和β赤芍素以及其它相关 的鞣花单宁为特征的化合物(参见以下的化合物(I)至(VII))。实施例1中制 备的斐济果果实提取物组分在实施例2中被分离和鉴定，参见表1和图1， 其涉及斐济果提取物的HPLC迹线。

在一个方面，斐济果果实提取物包含至少一种选自以下的化合物： 儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、原花色素、黄酮、黄烷酮、鞣花酸、 赤芍素以及相关的鞣花单宁。更优选地，斐济果果实提取物包含两种或 更多种选自以下的化合物：儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、原花色 素、黄酮、黄烷酮、鞣花酸、赤芍素以及相关的鞣花单宁。

具体而言，已表明本发明的斐济果果实提取物包含大量的两种大的 多酚类化合物-低聚原花色素(原花色素低聚体)和鞣花单宁。这两类多酚 类物质在本发明的提取物中共同起作用，提供了令人惊讶的治疗和预防2 型糖尿病和类风湿性关节炎的疗效。

在一个方面，本发明提供了斐济果果实提取物，包含：以干重计，

(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至约60wt％)的低聚原花 色素，和

(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

换言之，当提取物基本上不包含水时，约40wt％至约70wt％的提取 物由低聚原花色素组成。

另一方面，本发明提供了斐济果果实提取物，其包含：以总多酚的 量计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至约60wt％)的低聚原花 色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

换言之，低聚原花色素占提取物中存在的总多酚的约40wt％至约70 wt％。

优选地，斐济果果实提取物包含赤芍素和/或黄酮。

在一个实施方案中，斐济果果实提取物包含：以干重计，至少约50、 55、60、65、70、75、80、85、90或95wt％的多酚类化合物。优选地， 斐济果果实提取物包含以干重计约60％至约90％的多酚类化合物。

在一个实施方案中，斐济果果实提取物包含：以干重计，(a)约40wt％ 至约70wt％(优选约50wt％至约60wt％)的低聚原花色素，和(b)约10 wt％至约20wt％的鞣花单宁，其中，斐济果果实提取物包含约60wt％至 约90wt％(优选约70wt％至90wt％)的多酚类化合物。

在一个实施方案中，斐济果果实提取物包含：(a)约40wt％至约70 wt％(优选约50wt％至约60wt％)的低聚原花色素，和(b)约10wt％至约 20wt％的鞣花单宁，其中斐济果果实提取物包含约60wt％至约90wt％ (优选约70wt％至90wt％)的多酚类化合物。

有利的是，本发明的斐济果果实提取物可以不同的形式提供给患者。 例如，斐济果果实提取物可作为营养品如膳食补充剂来提供。可选地， 斐济果果实提取物可作为食品，例如作为功能性食品或饮料的一部分来 提供。本发明的斐济果果实提取物可作为常规治疗的辅助来提供。作为 天然食品组分，其几乎不产生不期望的副作用，例如干扰常规药物治疗 的效力。

可选择地，斐济果果实提取物可作为药物组合物提供。所述提取物 可以配置成固体或液体制剂，例如片剂、胶囊、栓剂、粉剂、溶液剂、 悬浮剂和分散体。在某些实施方案中，斐济果果实提取物被配置为固体 或液体制剂用于经口给药，例如片剂、胶囊、粉剂、溶液剂、悬浮剂或 分散体。此类制剂与其它在此未列出的经口给药方案一样是本领域熟知 的。片剂形式的斐济果果实提取物可以与常规的片剂基质如乳糖、蔗糖 和玉米淀粉，结合粘合剂、崩解剂和润滑剂一起来制片。所述粘合剂可 以是例如玉米淀粉或明胶，所述崩解剂可以是土豆淀粉或藻酸，且所述 润滑剂可以是硬脂酸镁。对于以胶囊形式的经口给药，也可采用稀释剂 如乳糖和干燥的玉米淀粉。也可添加其它组分如着色剂、增甜剂或调味 剂。

当需要经口使用含水悬浮剂时，斐济果果实提取物可与载体例如水 和乙醇，以及乳化剂、悬浮剂和/或表面活性剂结合使用。也可加入着色 剂、甜味剂或调味剂。

所述化合物可进一步通过缓释系统的方式来给予。例如，可将它们 掺入缓慢溶解的片剂或胶囊中。

液体形式包括载体，例如水和乙醇，其包含或不包含其它试剂例如 药学上可接受的表面活性剂或悬浮剂。

在一个方面，本发明提供了包含约150mg斐济果果实提取物的剂量 单元。

在另一方面，本发明包括基本上由150mg斐济果果实提取物组成的 剂量单元。

优选地，所述剂量单元是片剂。

6.2斐济果果实提取物在调节免疫功能方面的应用

衰老显然与免疫功能下降有关，且是老年人中高比例发病率和死亡 率的主要因素。本发明的斐济果果实提取物对调节患者的免疫功能和/或 预防或治疗患者的与免疫衰老相关的疾病或病症有作用。

本发明的斐济果果实提取物对小鼠免疫功能的效果在实施例3中得 到评价。通过评价细胞因子的产生、脾细胞的有丝分裂以及微生物E水 平评估了饲喂添加有斐济果果实提取物的食物的衰老小鼠的免疫功能的 变化。IL-2、IL-4、IL-6和IFN在B细胞抗体的生成方面是重要的炎症细 胞因子，且是适应性免疫系统的关键组成。衰老是糖尿病及其并发症发 展的主要危险因子，因而减少炎症细胞因子也帮助降低糖尿病风险。实 施例3表明了斐济果果实提取物以适量剂量添加可使年老小鼠的脾T细 胞免疫功能显著增加。所述斐济果果实提取物也增加肝维生素E水平以 及降低TNF-α水平。低等级的慢性炎症是发生在老年人中的惯常事件， 并且促炎症细胞因子调节的观察也显示了斐济果果实提取物能帮助治疗 慢性炎症，如通过细胞因子变化所测定的。炎症，通常是由具有提高的T 辅助细胞因子2的衰老或疾病的调节异常刺激引起的炎症，是关节炎和 糖尿病的诱因。衰老系统的免疫调节异常可加重炎症，从而能加重类风 湿性关节炎。

在一个方面，本发明提供了调节患者免疫功能的方法，包括向患者 给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济果果实提取物包含：以 干重计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至约60wt％)的低聚原 花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

在另一方面，本发明提供了治疗患者的与免疫衰老相关的疾病或病 症的方法，包括向患者给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济 果果实提取物包含：以干重计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％ 至约60wt％)的低聚原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

另一方面，本发明提供了降低患者炎症细胞因子水平的方法，包括 向患者给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济果果实提取物包 含：以干重计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至约60wt％)的 低聚原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

在一个方面，本发明提供了调节患者免疫功能的方法，包括向患者 给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济果果实提取物包含：以 总多酚的量计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至约60wt％)的 低聚原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

在另一方面，本发明提供了治疗患者的与免疫衰老相关的疾病或病 症的方法，包括向患者给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济 果果实提取物包含：以总多酚的量计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约 50wt％至约60wt％)的低聚原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花 单宁。

另一方面，本发明提供了降低患者炎症细胞因子水平的方法，包括 向患者给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济果果实提取物包 含：以总多酚的量计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至约60 wt％)的低聚原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

在上述方面中：

在一个实施方案中，斐济果果实提取物包含以干重计约60％至约 90％的多酚化合物。

在一个实施方案中，斐济果果实提取物包含约60％至约90％的多酚 化合物。

在一个实施方案中，向患者每天给予150mg的斐济果果实提取物。

在一个方面，本发明提供了调节患者免疫功能的剂量单元，其中所 述剂量单元包含约150mg的斐济果果实提取物。

在一个实施方案中，所述剂量单元是片剂。在一个实施方案中，每 天给予所述剂量单元一次。

6.3斐济果果实提取物在治疗和/或预防肥胖、2型糖尿病以及相关疾病 中的用途

本发明的斐济果果实提取物已经显示出在疾病和病症，如与肥胖、 代谢综合征和2型糖尿病相关的疾病和病症的治疗和/或预防中是有用处 的。疾病和病症包括那些与升高的血压、升高的血清葡萄糖水平和/或升 高的血清脂质水平相关的疾病和病症，例如，高血糖、高脂血症和高血 压。

申请人出乎意料地展示出2型糖尿病患者以斐济果果实提取物作为 饮食补充，会降低患者的血压并且引起提高的糖尿病控制。当与安慰剂 比较时，血浆空腹葡萄糖和HbA1c水平提高且达到统计学意义(见实施例 4)。

不希望受理论束缚，据认为斐济果的提取物的葡萄糖降低效应可能 通过α-葡糖苷酶的抑制而被介导，从而减少葡萄糖的肠道吸收。此外， 本发明的斐济果果实提取物通过抑制体重增加以及降低食物的利用率而 对于预防或减少肥胖有用。

还评估了本发明的斐济果果实提取物在小鼠中对于肥胖和相关脂质 驱动的危险因子的效果(参见实施例5)。这些接受斐济果果实提取物的小 鼠与对照组相比表现出较低的体重增长。

在一个方面，本发明提供了预防或治疗患者2型糖尿病的方法，包 括向患者给予有效量的斐济果果实提取物。在一个实施方案中，患者患 有类风湿性关节炎。

在另一个方面，本发明提供了降低患者血清脂质的方法，包括向患 者给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济果果实提取物包含： 以干重计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至约60wt％)的低聚 原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

在另一个方面，本发明提供了降低患者血清葡萄糖的方法，包括向 患者给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济果果实提取物包含： 以干重计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至约60wt％)的低聚 原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

在另一方面，本发明提供了一种降低患者血压的方法，包括向患者 给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济果果实提取物包含：以 干重计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至约60wt％)的低聚原 花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

在另一方面，本发明提供了治疗或预防患者代谢综合征的方法，包 括向患者给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济果果实提取物 包含：以干重计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至约60wt％) 的低聚原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

在另一个方面，本发明提供了降低患者血清脂质的方法，包括向患 者给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济果果实提取物包含： 以总多酚的量计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至约60wt％) 的低聚原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

在另一个方面，本发明提供了降低患者血清葡萄糖的方法，包括向 患者给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济果果实提取物包含： 以总多酚的量计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至约60％)的 低聚原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

在另一方面，本发明提供了降低患者血压的方法，包括向患者给予 有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济果果实提取物包含：以总多 酚的量计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至约60wt％)的低聚 原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

在另一方面，本发明提供了治疗或预防患者代谢综合征的方法，包 括向患者给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济果果实提取物 包含：以总多酚的量计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至约60 wt％)的低聚原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

在上述方面的一个实施方案中，所述患者是患有2型糖尿病的人类 患者。

在另一方面，本发明提供了治疗或预防患者2型糖尿病的方法，包 括向患者给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济果果实提取物 包含：以干重计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至约60wt％) 的低聚原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

在另一方面，本发明提供了一种治疗或预防患者2型糖尿病的方法， 包括向患者给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济果果实提取 物包含：以总多酚的量计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至约 60wt％)的低聚原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

在上述方面中：

在一个实施方案中，斐济果果实提取物包含以干重计约60％至约 90％的多酚化合物。

在一个实施方案中，斐济果果实提取物包含约60wt％至约90wt％的 多酚化合物。

在一个实施方案中，向患者每天给予150mg的斐济果果实提取物。

在一个方面，本发明产生了治疗或预防患者2型糖尿病的剂量单元， 其中所述剂量单元包含约150mg的斐济果果实提取物。

在一个实施方案中，所述剂量单元是片剂。在一个实施方案中，每 天给予所述剂量单元一次。

6.4斐济果果实提取物在治疗和/或预防类风湿性关节炎中的用途

本发明的斐济果果实提取物也可用在治疗和/或预防诸如与类风湿性 关节炎相关的那些的疾病和病症。

本发明的斐济果果实提取物在小鼠中诱导类风湿性关节炎的效果在 实施例6中得到评价。胶原诱导的关节炎(CIA)模型被广泛使用来阐明与 人类类风湿性关节炎有关的发病机制，并且被广泛用于潜在抗风湿制剂 的评价。CIA的急性期以关节中促炎性细胞因子如TNF-α、IL-1β和IFN-γ 的mRNA增加的水平为特征。在类风湿的滑膜中产生中的很多主要的促 炎症细胞因子，与网络相连或与其顶端的TNF-α级联。先前已证明了 IL-1β在软骨和骨破坏中的重要性。

组织学研究表明，斐济果果实提取物防止滑膜增生——滑液中促进 类风湿性关节炎的发病的破坏性细胞因子产生的增加。放射学研究表明， 斐济果果实提取物在CIA小鼠中防止关节畸形和软组织肿胀。与关节炎 对照组相比，斐济果果实提取物的添加也降低IL-2和IFN-γ的水平(参见 表9)。

在一个方面，本发明提供了预防或治疗类风湿性关节炎症状的方法， 包括向患者给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济果果实提取 物包含：以干重计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至约60wt％) 的低聚原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

在另一个方面，本发明提供了降低与类风湿性关节炎相关的炎症细 胞因子水平的方法，包括向患者给予有效量的斐济果果实提取物，其中 所述斐济果果实提取物包含：以干重计，(a)约40wt％至约70wt％(优选 约50wt％至约60wt％)的低聚原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的 鞣花单宁。

在另一方面，本发明提供了降低与类风湿性关节炎相关的滑膜增生 的方法，包括向患者给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济果 果实提取物包含：以干重计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至 约60wt％)的低聚原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

在一个方面，本发明提供了预防或治疗类风湿性关节炎症状的方法， 包括向患者给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济果果实提取 物包含：以总多酚的量计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50wt％至约 60wt％)的低聚原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单宁。

在另一个方面，本发明提供了降低与类风湿性关节炎相关的炎症细 胞因子水平的方法，包括向患者给予有效量的斐济果果实提取物，其中 所述斐济果果实提取物包含：以总多酚的量计，(a)约40wt％至约70wt％ (优选约50wt％至约60wt％)的低聚原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％ 的鞣花单宁。

在另一方面，本发明提供了降低与类风湿性关节炎相关的滑膜增生 的方法，包括向患者给予有效量的斐济果果实提取物，其中所述斐济果 果实提取物包含：以总多酚的量计，(a)约40wt％至约70wt％(优选约50 wt％至约60wt％)的低聚原花色素，和(b)约10wt％至约20wt％的鞣花单 宁。

在上述方面中：

在一个实施方案中，斐济果果实提取物包含以干重计约60％至约 90％的多酚化合物。

在一个实施方案中，斐济果果实提取物包含约60wt％至约90wt％的 多酚化合物。

在一个实施方案中，向患者每天给予150mg的斐济果果实提取物。

在一个方面，本发明提供了预防或治疗类风湿性关节炎的剂量单元， 其中所述剂量单元包含约150mg的斐济果果实提取物。

在一个实施方案中，所述剂量单元是片剂。在一个实施方案中，每 天给予所述剂量单元一次。

斐济果果实提取物可通过多种途径给予患者，包括经口、胃肠外、 通过吸入喷雾、局部、直肠、经鼻、经颊或通过植入储库(implanted  reservori)。优选的是，以片剂形式经口给予斐济果果实提取物。要给予 的斐济果果实提取物的量根据患者性质和待治疗病症的性质和程度而具 有较大差异。对于成人，斐济果果实提取物典型的的日剂量范围为约1 至约2000毫克，优选约0.1至约2000毫克，更优选约0.1至约1000毫 克，更优选约50至约500毫克，更优选约100至约500毫克，更优选约 150至约250毫克，最优选约150毫克。对于任何特定患者来说，所需的 特定剂量将取决于多种因素，包括患者的年龄、体重、一般健康状况、 性别等。

本发明将参考以下实施例作进一步描述。然而可以理解，本发明并 不限定于这些实施例。

7.实施例

实施例1：斐济果果实提取物的制备

从新鲜的斐济果果实制备和分离斐济果提取物。将斐济果整果、果 皮、肉、果实榨汁操作后的剩余的残渣以及这些的各种混合物在搅拌机 中切碎。向所得的浆液中加入大约等体积的水、乙醇、水混溶的有机溶 剂如丙酮或者醇或有机溶剂的含水混合物。在本实施例中，使用了食品 级乙醇。将混合物在第一个小时内偶尔搅拌，并浸泡过夜。在真空下于 40℃，将混合物过滤并将滤液浓缩。将浓缩物过滤除去任何沉淀的物质， 然后将其通过聚合树脂柱，在本实施例中为Mitsubish，HP20。将蒸馏水 通过该柱以除去糖类和其他极性物质。将被吸附的化合物用乙醇从柱上 洗脱，并在减压条件下浓缩得到深色的浓缩物。将浓缩物冷冻干燥，得 到浅棕色粉末状的斐济果果实提取物。将所述提取物通过高效液相色谱 法采用二极管阵列检测(图1和表1)和总离子电流检测(TOF-MS ES+)来表 征。40℃下，以0.3毫升/分钟的流率使用了Kinetex公司的2.6μ C18 (50×3.0mm)柱。

实施例2：斐济果果实提取物的成分鉴定

使用在Sephadex LH20和Mitsubishi HP20上进行的尺寸排阻色谱法， 通过重复制备柱层析法分离斐济果果实提取物的组分。通过使用核磁共 振波谱确定其成分鉴定，并在必要时通过质谱法证实所说明组分的化学 结构。使用Kinetex的2.6μC18(50×3.0mm)柱在40℃下以0.3毫升/分钟 的流速进行所述斐济果果实提取物的液相色谱-质谱化学组成图谱分析。 该溶剂混合物由溶剂A(水+0.1％甲酸)和溶剂B(乙腈+0.1％甲酸)以程序 0-30min,0-100％组成。通过二极管阵列和总离子电流(TIC)进行检测。斐 济果果实提取物的色谱分离造成儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、原 花青素B2、原花青素低聚物、鞣花酸、α-和β-赤芍素以及其他相关的鞣 花单宁的分离和鉴定(图1和表1)。

表1斐济果提取物的HPLC数据

使用下述技术进行各种组分的鉴定。

鞣花酸的测定

此测定通过斐济果果实提取物或浓缩物的酸水解以及随后通过 HPLC对所得的鞣花酸进行分析来进行。将80微升提取物转移到15毫升 的玻璃离心管中，并加入250微升的2.6N的HCl，并将该管用螺旋盖密 封。通过在90℃的水浴中加热2小时将样品水解。取出离心管并立即冷 却并储存在4℃温度下1小时。然后将水解产物用乙酸乙酯(1mL)抽提 2X。将合并的乙酸乙酯萃取液在氮气下干燥，并溶于1毫升甲醇来进行 HPLC分析。在360nm的色谱图(Waters UPLC，Kinetex柱，每个含有0.1％ 甲酸的乙腈：水梯度)中的主要峰是鞣花酸。将鞣花酸的水平与4毫克/ 毫升组成的原始提取物进行了比较。

HPLC法测定赤芍素、总鞣花酸化合物和黄酮

赤芍素存在为两种互变形式，并且通常可以看到其在色谱的前段为 两个主要的峰。当在水或90：10的水：乙醇中准备样品时，峰锐度增强。 从280nm色谱中的这两个峰的集合估计相对的赤芍素含量。

总鞣花酸化合物呈现为一组在色谱图的中间部分洗脱且具有360nm 处的最大吸光度的峰。由360nm色谱图中的该组峰的集合估计相对的鞣 花酸化合物含量。

黄酮是在色谱后段出现的带有特征性紫外光谱的单峰从280nm色谱 中的该峰的集合估计相对的黄酮含量。

HPLC法测定原花色素低聚物(PACO)

这组复杂的化合物作为跨越色谱图的多个部分的峰出现在大部分的 色谱中。然而，如果使用了特殊的梯度，所述PACO显示为色谱图后段 的孤峰。从此峰下峰面积估计的PACO含量与使用其他技术进行的测量 一致。从280nm色谱中的该峰的集合和比较来评估相对PACO含量。

比色法测定原花色素低聚物(PACO)

使用Prior RL,Fan E,Ji H,Howell A,Nio C,Payne MJ,Reed J. Multi-laboratory validation of a standard method for quantifying  proanthocyanidins in cranberry powders.J Sci Food Agric.201090(9): 1473-8描述的方法进行该测定。使样品与4-二甲基氨基肉桂醛(DMAC) 在酸性乙醇中反应，并通过吸收光谱检测有色产物。将样品的测试溶液 (70μL)置于96孔微量板的一列孔中，然后通过添加和混合等量的70:30 乙醇：水混合液在板上稀释。将DMAC试剂(在50毫升酸化乙醇溶液中 以210微升/50毫克)加入到每个孔中，并将该板立即放置在板读取器上。 板读取器被设置为摇动所述板，并持续30分钟每分钟读取640nm处的吸 光度。吸光度读数通常在约20分钟达到最大值。在30分钟时的最终读 数被用于计算。稀释曲线允许进行最合适的浓度和吸光度(0.2-1.2A.U.) 的比较。

实施例3：小鼠的免疫功能

评估了斐济果果实提取物对年老小鼠免疫功能的影响。年老的小鼠 是48周大小鼠，实验期间保持于20℃至22℃，50％的湿度。小鼠被分 为2组，并喂食以下饲料：基础饲料或添加斐济果果实提取物的基础饲 料，1.2mg/天/小鼠。斐济果果实提取物根据实施例1制备。由年轻小鼠 组成的第三组也包括在此作为对照(仅基础饲料)。食物摄取量和体重每周 记录一次。

喂养32周后，将所有小鼠在戊巴比妥(0.1毫克/100克体重)麻醉下 处死。分离脾并称重(表2)。

表2

补充了斐济果果实提取物的小鼠每天食用6克的食物，这相当于给予提取物1.8毫克 /天。所述斐济果果实提取物以300mg/kg的剂量加入到饮食中。数据表示每组6只小 鼠的平均值±SD。*表示通过非配对学生t检验确定，相比于年老的对照具有统计学意 义。在实验过程中水和食物的消耗量没有显著差异。

细胞因子的ELISA检测

按先前所述(Chouaib,S.；Welte,K.；Mertelsman,R.；Dupont,B.；J. Immunol.,1985,135,1172-1179)确定了从有丝分裂原刺激的脾细胞产生 的IL-2、IL-4、IL-6和IFN-γ。将脾脏在培养基中轻轻用镊子分解以制备 脾细胞的悬浮液(含有10％胎牛血清、2mM的L-谷氨酰胺、1×10⁵单位/L 的青霉素和链霉素的CM，RPMI 1640)。将红细胞在37℃下以3毫升裂 解缓冲液(0.16mol/L氯化铵的Tris缓冲液，pH7.2)裂解5分钟。然后将 细胞用CM洗涤两次。计算细胞浓度，并调节为2×10⁶个细胞/毫升。将 脾细胞(0.1/孔)以一式三份在96孔平底培养板上进行培养。将脾细胞(0.1 毫升/孔)用ConA(1×10^-2克/升，0.1毫升/孔)刺激以诱导IL-2、IL-4和IFN-γ 的产生。在其它板中，将脾细胞用脂多糖(1×10^-6克/升)培养，以诱导IL-6 的产生。将这些培养板在37℃、5％CO₂条件下孵育；IL-2、IL-4和IL-6 的培养时间是24小时(或对于IFN-γ是72小时)。孵育后，收集上清液并 储存于-70℃。使用商业试剂盒，按先前所述通过夹心ELISA测定细胞 因子。

脾细胞的有丝分裂

根据先前所述方法(Chouaib,S.；Welte,K.；Mertelsman,R.；Dupont,B.； J.Immunol.,1985,135,1172-1179)，通过3H-胸苷的结合确定脾T细胞和 B细胞增殖。将在CM中的0.1毫升脾细胞(2×10⁶细胞/mL)在具有ConA 或LPS(10微克/毫升)或无ConA或LPS(自发有丝分裂)的96孔平底培养 板中进行培养。将它们在37℃、5％CO₂条件下孵育48小时，然后与3H- 胸苷(0.5/孔)一起震动。24小时后，通过细胞样品收集器收获上清液。

维生素E测定

根据之前描述的方法(Lee,J.,Jiang,S.,Liang,B.,Inserra,P.,Zhang,Z., Solkoff,D.,Watson,R.R,Nutr.Res.,1998,18,327-339)通过HPLC测定小 鼠肝脏维生素E含量。将0.2克组织在1毫升水中均质化。加入丁基化羟 基甲苯以防止α-生育酚的氧化。使用戊烷、乙醇和十二烷基硫酸钠从匀 浆液中提取α-生育酚，并于20℃在稳定氮气流下浓缩。将浓缩物复溶 在0.5毫升甲醇中，并注射到C18柱(3.9×150毫米)上。使用了1.5mL/min 流速的由甲醇：1摩尔/升乙酸钠以97:3的比例(体积比)组成的流动相。α- 生育酚在22分钟时洗脱，并在290nm激发和320nm发射波长下，通过 荧光检测器(Millipore)来监控。

结果表明，以每只年老小鼠1.8毫克/天的剂量经口摄入斐济果果实 提取物，减少了脾T细胞产生的IL-4、TNF-α和TNF-β。IL-2和IFN-γ 的产生无论在对照组还是在给予1.8mg/天剂量的补充剂的组中均没有显 著的影响。当通过ConA以2微克/mL的浓度刺激时，脾细胞增殖也减少。 以适当剂量的斐济果果实提取物添加引起年老小鼠脾T细胞免疫功能的 显著增加(表3)。

表3

数据表示每组6只小鼠的平均值±标准偏差。*表示通过非配对学生t检验确定，相比 于年老的对照具有统计学意义。

以1.8毫克/天的剂量补充斐济果果实提取物的年老小鼠与年老的未 补充组相比，显示了其IL-4产生的44％(P<0.01)的降低。

添加斐济果果实提取物的年老小鼠与未饲喂斐济果果实提取物的年 老小鼠相比，表现出ConA刺激的脾脏T细胞有丝分裂20％的下降。同 样，添加斐济果果实提取物的年老小鼠表现出LPS刺激的脾脏B细胞有 丝分裂14％的下降。年老动物经常有自发刺激的B细胞，其不像年轻动 物中的那些一样运行良好，并且也抑制T细胞。因此，通过B细胞降低 有丝分裂或细胞分裂应当有利于宿主防御。

在人类和动物中，免疫衰老(随年龄提升的免疫系统退化)是存活到老 年过早死亡的主要贡献因素。一些不利影响包括具有改变的细胞因子产 生的体外分裂素或体内病原体刺激后，T-淋巴细胞和B-淋巴细胞的失调 的细胞分裂。在本研究中，年老小鼠B和T淋巴细胞分裂少于年轻小鼠， 且小于喂养斐济果果实提取物的年老小鼠。对调节性细胞因子关键的观 察包括由衰老中的免疫衰老导致的INF-γ、TNF-α、β和γ以及IL-4的积 累。由于摄食斐济果果实提取物而引起的这些细胞因子的降低，表明了 更好的整体免疫调节，其可以提供改善的疾病抗性。

免疫衰老T细胞免疫功能紊乱期间的免疫调节似乎部分与维生素E 的水平相关。维生素E逆转T细胞中年龄相关的缺陷，特别是初始T细 胞中的缺陷，其水平随着年龄增大极大减少。维生素E直接影响T细胞 以及PGE2的抑制作用。不希望受理论的束缚，申请人假定观察到的斐 济果果实提取物的添加对引起T细胞的免疫功能紊乱的免疫衰老的有益 效果，可能部分是由于其保持细胞维生素E水平的能力。补充有斐济果 果实提取物的年老小鼠相比于未补充的年老测试组，显示出肝维生素E 的水平的77％的增加(表3)。斐济果果实提取物也降低了TNF-α，其已知 随衰老而升高。因此，斐济果果实提取物对调节年老者的免疫功能具有 有益的影响。

实施例4：测定高血压、高脂血症和高血糖的人临床试验

研究人群由40-75岁龄的患有非胰岛素依赖性2型糖尿病的男性和女 性组成。排除标准包括1-型糖尿病；使用除单纯的每日多种维生素外的 任何补充；患有任何重大疾病，如癌症、哮喘或心脏衰竭；任何先前的 心脏事件；怀孕或正在哺乳的母亲。该12周的、随机的、双盲的、安慰 剂对照的试验方案得到了马什哈德大学审查委员会的批准，并按照赫尔 辛基宣言进行。研究对象由大学糖尿病门诊招募。所有受试者在参与这 项研究试验前均签署了知情同意书。将受试者随机分配以接受丸剂形式 的斐济果果实提取物(150毫克，每天一次)或匹配的安慰剂，它们在整个 研究期间都保持不变。所述斐济果提取物根据实施例1所示的方法制备。

表4斐济果果实提取物：参与人的研究。

  安慰剂 斐济果果实提取物 参与者数目 14 20 男性：女性比例 7:7 4:16 年龄(岁) 52.6 55.0 体重(kg) 77.6 77.2 身高(cm) 164.4 158.6

参加者接受150毫克/人/天的斐济果果实提取物。如以上表4所示，人口统计和临床 特征是相似的。平均糖尿病治疗年数在两个组是相同的。补充了斐济果提取物的20 名对象中的19名使用了另外的药物：95％的人使用了二甲双胍和格列本脲的组合， 其中两名参与者使用了胰岛素。安慰剂组中的14名对象中的13名使用了另外的药物： 55％的人使用了二甲双胍和格列本脲、胰岛素(1名对象)或氨酰心安。

血压和心率在开始时和第12周后记录。血压和心率在休息10分钟 后在左臂测量。柯氏音I和V分别被采用为收缩压和舒张压。以2分钟 的间隔总共采集3次坐着测量的重复读数，并记录平均值。所有的治疗 包括抗糖尿病药物治疗在整个研究期间均保持恒定。在每月的随访时收 集未使用的片剂并计数，以评估参与者的依从性。在随访时通过询问参 与者研究同时用药的变化和临床不良影响，未收到其报告。

根据治疗原则的意向进行分析。因此，分析了所有接受了至少一个 剂量的研究治疗以及具有基线和至少一个基线后测量的随机患者。数据 表示为平均值±SEM。统计分析使用SPSS 11.5版本(SPSS Institute，芝加 哥，伊利诺斯州)(Sprinthall R.C.,Basic statistical analysis,Boston:Allyn  and Bacon；2003,550-565)进行。卡方检验与耶茨校正被用于患病率研究 的非连续变量。学生t-检验被用来评估连续变量的统计意义。当正态性和 方差齐性的检验失败时，代替使用可比的非参数检验(曼-惠特尼U检验)。 值P<0.05被用作统计学显著的标准。试验参与者由于斐济果果实提取 物没有表现出标准肝脏酶谱特性的显著改变。此外，由于斐济果果实提 取物，血清肌酸酐、白蛋白和尿素无显著差异(数据未示出)。这些数据表 明无毒性产生。

安慰剂组和添加有斐济果果实提取物的组的初始收缩压是可比较 的。未观察到HDL胆固醇和舒张压的显著差异。与显示增加的安慰剂组 相比，斐济果果实提取物的摄入引起了收缩压的降低(P<0.0776)。这表 明与安慰剂组相比时，在12周的试验期结束时，斐济果果实提取物组具 有收缩压控制的改善(表5)。相比之下，接受斐济果果实提取物组的舒张 压水平趋于降低，而安慰剂组升高(P<0.35)。

表5斐济果果实提取物对患有2型糖尿病的人类对象的效果。

通过学生t检验分析，^*P<0.001与基线相比，与安慰剂组相比。在基线禁 食8小时后和治疗12周后对血清样品进行测量。值是平均值±SEM(除对于LDL-胆 固醇(此时两组均为6)外，斐济果果实提取物组n＝20名对象，安慰剂组n＝14名对 象)。

斐济果果实提取物的添加也降低了被用来评估糖尿病患者的健康状 况的几个血清变量的值。接受斐济果果实提取物的受试者显示出空腹血 清葡萄糖的降低，而在安慰剂组则显示增加(P<0.0001)(表5)。HbA1c 水平的显著改变也在实验的第12周时被观察到。平均HbA1c水平在斐 济果果实提取物治疗组下降，而该水平在安慰剂组升高(P<0.0001)(表 5)。此外，在12周的试验期结束时，补充了斐济果果实提取物的患者显 示出血清甘油三酯(P<0.0127)、血清总胆固醇(P<0.0887)和LDL-胆固醇 (P<0.157)的显著降低(表5)。总之，这些数据表明，斐济果果实提取物 可改善糖尿病控制，减少抗高血压药物的使用，并可帮助患有2型糖尿 病的个体降低心血管疾病的风险。

实施例5：使用肥胖小鼠的肥胖研究

雄性瘦素缺陷(ob/ob)型肥胖小鼠(5周龄，26～33克)和瘦的C57BL/6J 野生型(WT)小鼠购自SLC,Inc.(Hamamtsu，日本)。将小鼠关养在温度(22 ±2℃)、湿度(50±5％)和光(12小时光照/黑暗循环)受控条件下。让动物 在实验前适应环境1周。然后将小鼠随机分成三组，每组6只小鼠。阴 性对照组(遗传正常的对照组，C57BL/6J)和阳性对照组(ob/ob对照)饲喂 正常的美国营养研究所(American Institute of Nutrition,AIN)93M饲料，且 其他组饲喂含300毫克/千克斐济果提取物饲料的AIN93M饲料16周。 将按照实施例1制备的斐济果果实提取物均匀混合入粉末状的饲料中， 并将此饲料以固体形式喂食。在实验开始时测量体重，并在16周的研究 期中以每周的间隔进行测量。每天记录由每个组所消耗的食物的量。

16周的实验饮食后，将小鼠处死并收集组织用于分析。采集血液， 分装到血清试管，并在1600转下离心20分钟。血清甘油三酯和总胆固 醇水平通过商业试剂盒(Cayman Chemical，Ann Arbor，MI，USA)进行分 析，并使用定量试剂盒(BioVision Research Products，Mountain View，CA， USA)荧光测定高密度脂蛋白-胆固醇。

实验期间由于斐济果果实提取物引起的体重的变化示于表6中。相 比ob/ob小鼠对照，斐济果果实提取物的添加显著降低了重量的增加，重 量增加降低了24％。在整个实验中，肥胖对照组的食物摄入量较对照组 更高。然而，在对照组和斐济果果实提取物添加组中的肥胖小鼠消耗了 近似量的食物。与肥胖对照组相比，斐济果果实提取物添加组的食物效 率比显著降低。

表6肥胖小鼠的体重变化。

值为6只小鼠/组的均值±SD。带有*的均值是指与阴性对照相比，p<0.05的显著性 差异。

在斐济果果实添加组中，心脏、肾脏和脾脏的重量与对照组相比时 并无显著性差异(表6)。在补充了斐济果果实提取物的小鼠中，肝脏的重 量比对照组少10.6％。为了检测斐济果添加对身体脂肪蓄积的效果，测量 了ob/ob小鼠的脂肪组织重量。当相比正常对照小鼠时，ob/ob对照组的 腹膜后和附睾脂肪组织的重量要明显更好。斐济果果实提取物组的附睾 脂肪组织的重量显著低于ob/ob对照组。然而，当与肥胖小鼠相比时，斐 济果果实提取物的添加似乎并未对斐济果提取物添加组的腹膜后脂肪组 织产生效果。

同时还发现，当与正常对照组相比时，ob/ob对照组具有显著增加的 血清总胆固醇和甘油三酯水平。然而，发现添加斐济果果实提取物并未 影响血清总胆固醇和甘油三酯的水平。此外，与ob/ob对照组相比，补充 斐济果果实提取物并未使HDL-胆固醇水平发生变化。发现与ob/ob对照 小鼠相比，在肥胖小鼠的食物中添加斐济果果实提取物降低了肝脏总胆 固醇水平；然而肝甘油三酯水平并没有受到影响。

饲喂添加了斐济果果实提取物的饲料的肥胖小鼠没有获得同样多的 体重，表现出较低的食物效率比，并表现出肝总胆固醇水平的显著有益 的变化。这种倾向被认为与脂肪组织中的脂肪积累的抑制有关。因此， 饮食补充斐济果果实提取物可在身体上影响体重增加并减少脂肪组织蓄 积。

实施例6使用胶原诱导的关节炎小鼠的关节炎研究。

雄性的DBA/1J小鼠(6周龄，20～22克)购自日本SLC,Inc.(Shizoka， 日本)。将小鼠分为4组，每组5只小鼠，并在25℃的温度和55％的相 对湿度下，以自由采食的方式喂食美国营养研究所的93G食物和水。根 据韩国庆熙大学的机构指导，以12小时光照/黑暗循环将小鼠保持在特定 的无病原体条件下。所有的动物实验均依照由首尔国立大学(首尔，韩国) 的医学院动物护理和使用委员会发布的道德准则来进行。4组分别为正常 对照组(无胶原诱导的关节炎，没有饮食补充剂)、阴性对照组(胶原诱导 的关节炎，未接受饮食补充剂)、阳性对照组(胶原诱导的关节炎，饮食补 充有10毫克/千克甲氨蝶呤)和斐济果果实提取物添加组(胶原诱导的关节 炎，饮食补充有斐济果果实提取物粉末)。小鼠组之间的体重没有显示出 任何显著差异。各组之间食物和水的消耗量没有显著差异。这表明，实 验数据的变化不是由于体重或水和食物消耗。平均25克的小鼠每天消耗 大约6克的饲料，消耗1.8毫克的斐济果果实提取物。关节炎通过注射 0.1毫升的牛II型胶原(Chondrex,Inc.,Redmond,WA,USA)来诱导，所述 胶原通过4℃搅拌过夜以2毫克/毫升的浓度溶解在10mM乙酸中。在冰 水浴条件下，在等体积的包含结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis) 的完全弗氏佐剂中，将胶原乳化。在小鼠的尾巴底部经皮下注射0.1毫升 的乳液。在第21天使用0.1毫升的乳液的不完全弗氏佐剂向小鼠给予强 化的胶原注射。小鼠爪上的炎症的临床评估以目视进行，在第56日至第 79日每周进行3次评估，对每个爪使用4分的等级(0-4)(表1)。临床评 估的总得分通过测量每只小鼠来进行(每爪4分，最高得分为16分)。使 用Columbus Instruments(USA)制造的具有10英寸跑步表面的小鼠模块化 跑步机。将速度调节为每分钟6-100米，以评估小鼠的最大速度能力。奔 跑速度和脚压测量从第56日至第79天每周进行3次。在试验结束时处 死小鼠。除去小鼠的膝盖、冷冻，并稍后切片。将其用苏木精和曙红染 色，并拍照，如图2所示。使用发炎关节内的X射线微计算机化断层成 像从结构上评估后爪，并拍照，其强度以颜色显示。它们被灌注了不透 射线的硅橡胶，硅的吸收是通过X射线微型CT在21μm分辨率下测量， 图像以3-D形式使用定制软件和实验室微型CT扫描仪进行分析，所述扫 描仪由具有相对小的焦斑(～10μm)的钨阳极型X射线管组成，其结合到 高分辨率X射线检测器系统(～50μm像素间距)。不透射线的硅橡胶的吸 收减少了X射线穿透并改变了颜色强度。

通过使小鼠接受跑步机测试并通过比较各组之间的炎症水平评估关 节炎的进展(表7和表8)。较慢的跑步速度和较轻的脚压指示炎症以及小 鼠试图减少任何的疼痛。如表7所示，用斐济果果实提取物处理的对象 相比关节炎对照组表现出有利的临床分数，并且与甲氨蝶呤治疗组相比 表现出类似的值。正如所预期的，跑步速度最高为正常对照组，最低为 诱发了关节炎的对照组(表8)。令人惊讶和有利的是，甲氨蝶呤和斐济果 果实提取物处理组之间没有显著性差异。

表7斐济果果实提取物对诱导了关节炎的小鼠脚爪肿胀的评价

*是指通过学生t-检验测定，与关节炎对照组相比具有统计学意义。

表8斐济果果实提取物对奔跑速度和足压的影响

跑步机结果 跑步速度(mm/s) 足压 正常对照 133.05±3.72* 148.54±2.39* 关节炎对照 91.24±2.59 136.89±0.85

甲氨蝶呤处理的 121.36±1.69* 141.23±5.28* 斐济果果实提取物 120.54±5.42* 143.97±3.69*

值为5只小鼠/组的均值±SD。*是指与关节炎对照相比，p<0.05的显著差异。

在试验期结束时处死小鼠，并检查关节的关节炎进展。CIA小鼠的 关节部分的组织学评价显示滑膜增生(滑液中破坏性细胞因子产生的增加) 降低(图3)。与此相反，斐济果果实提取物组和甲氨蝶呤处理组具有相对 正常的具有很少软组织肿胀的关节结构(图2、3)，而正常对照显示没有 滑膜增厚或炎症细胞浸润，且关节结构得到良好的维持。由于滑膜增生 导致骨和软骨侵蚀，这能促进类风湿性关节炎的发病，与关节炎对照相 比，在添加了斐济果提取物的小鼠中观察到的减少表明，该提取物在减 少类风湿关节炎的效果和发病方面是有益处的。

放射学研究表明在正常对照中没有关节畸形或软组织肿胀的证据。 在关节炎对照组中观察到严重的关节损坏连同软组织肿胀；然而，斐济 果处理组的成员具有相对正常的具很少软组织肿胀的关节结构，这与小 鼠的甲氨蝶呤组相当。

为了确定斐济果果实提取物的保护作用是否与在CIA小鼠中观察到 的抗炎症反应有关，使用实施例3中描述的ELISA测定法对促炎性细胞 因子(TNF-α、IL-2和INF-γ)进行了研究(表9)。众所周知的是，此类细胞 因子通过损伤关节中的滑膜细胞在关节损伤方面具有关键作用。因此， 关节内滑膜细胞的减少导致了增加的摩擦，进而，导致炎症和可能的关 节炎发展。如表9所示，相对于关节炎对照组，斐济果果实提取物处理 组具有显著更低水平的促炎性细胞因子，并且与甲氨蝶呤处理的小鼠相 比显示出可比值。与关节炎对照组相比，斐济果果实提取物的添加导致 IL-2和IFN-γ水平分别显著减少48％和40％，表明关节损伤减少。

表9CIA小鼠的细胞因子数据

值为5只小鼠/组的均值±SD。带有*的均值是指与关节炎对照相比，p<0.05的显著 差异。

虽然已经通过实例的方式描述了本发明，但应当理解，在不脱离本 发明范围情况下可以作出改变和修饰。此外，如果特定的特征存在已知 的等同物，则该等同物包括在本文中，如同在本说明书中特别提及一样。