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一种唐松草属植物提取物的制备方法及其制备的唐松草属植物提取物和用途

摘要

本发明提供一种唐松草属植物提取物的制备方法,包括超声波辅助乙醇提取唐松草属植物。优选的,所述唐松草属植物为水黄连和/或马尾连。本发明还提供所述制备方法得到唐松草属植物提取物,以及该唐松草属植物提取物在制备抑制柑橘采后病原菌的药物组合物中的用途。唐松草属植物提取物对柑橘采后病原菌具有较强的抑制作用,用于柑橘保鲜后无化学残留,对人体无健康危害,对环境无污染,不易产生抗药性。

著录项

  • 公开/公告号CN104605013A

    专利类型发明专利

  • 公开/公告日2015-05-13

    原文格式PDF

  • 申请/专利权人 江西农业大学;

    申请/专利号CN201510002789.9

  • 发明设计人 陈金印;陈楚英;万春鹏;

    申请日2015-01-05

  • 分类号A23B7/154(20060101);A01N65/32(20090101);A01P3/00(20060101);

  • 代理机构36115 南昌新天下专利商标代理有限公司;

  • 代理人施秀瑾

  • 地址 330045 江西省南昌市昌北经开区志敏大道1101号

  • 入库时间 2023-12-17 03:57:53

法律信息

  • 法律状态公告日

    法律状态信息

    法律状态

  • 2017-12-01

    授权

    授权

  • 2015-08-26

    实质审查的生效 IPC(主分类):A23B7/154 申请日:20150105

    实质审查的生效

  • 2015-05-13

    公开

    公开

说明书

技术领域

本发明属于水果病害防治和保鲜领域,具体涉及一种具有抑制柑橘采后病原 菌作用的唐松草属植物提取物及其制备方法和新用途。

背景技术

柑橘是世界第一大贸易水果,也是第三大贸易农产品。我国柑橘资源丰富、 种植历史悠久。目前我国柑橘的种植面积和产量均居世界第一位,2013年柑橘 种植面积达3600多万亩,总产量约为3200多万吨,柑橘产业在我国农业经济中 占有非常重要的地位。

柑橘果实组织细嫩多汁且富含糖分,在采摘、贮运和销售等过程中容易发生 机械损伤,果皮损伤后易受多种病原真菌的侵染而产生采后病害。柑橘采后发生 的病理性病害种类多达20余种,主要有意大利青霉(Penicillium italicum)引起的 青霉病和指状青霉(Penicillium digitatum)引起的绿霉病,这些病害易造成果实腐 烂变质,腐烂率一般为10%~30%,严重时可高达40%~50%以上,造成巨大的经 济损失。柑橘其它的病理性病害还包括黑腐病、酸腐病、褐腐病、褐色帝腐病、 炭疽病和焦腐病等。

长期以来,人们主要采用化学合成物质作为保鲜剂对柑橘进行保鲜,不同时 期使用的化学杀菌剂有所不同。硼砂、山梨酸及其盐类等是最早使用的柑橘防腐 剂;包括苯菌灵(Benomyl)、托布津(Thiophanate)、甲基托布津(Thiophanate  methyl)、多菌灵(Carbendazim)、噻菌灵(Thiabendazole)等的苯并咪唑类杀菌剂是 70年代应用的第二代柑橘防腐剂;目前使用的第三代柑橘防腐剂包括抑霉唑 (Imazalil)、双胍盐(Guazatine)、咪鲜胺(Prochloraz)等。这些化学杀菌剂能杀死或 抑制病原微生物的生长,有较好的防腐保鲜效果。由于化学杀菌剂会造成药剂残 留、污染环境,以及长期使用导致柑橘采后病菌产生抗药性等原因使得化学杀菌 剂的使用安全性日益得到人们的关注。另外,随着科技的发展、检测分析手段的 完善和化学杀菌剂毒理的深入研究,发现一些化学防腐剂有致癌或潜在致癌、致 突变、致畸的可能性。目前一些化学杀菌剂已被欧美等发达国家禁止或限制使用, 如苯菌灵和双胍盐类杀菌剂等己被美国环保局明令禁止使用或在部分果实产品 上限制使用。

近年来,人们开始转向天然植物源保鲜剂的研发。天然植物源保鲜剂具有高 效、低毒、低残留、无污染、使用安全等优点,采用其处理柑橘进行防腐保鲜将 受到消费者的普遍欢迎。另外,植物源药剂是通过多成分,多靶点发挥抑菌作用, 不易产生抗药性。因此,有必要从天然植物中寻找、开发天然植物源防腐剂对柑 橘进行保鲜以减少对化学药剂的依赖。

唐松草属为毛茛科下的一个属,为多年生草本植物,多分布在我国西南,作 为观赏或药用。我国本属植物约有29种可供药用,不少种类均有清热、治湿、 发汗、止痢、治目赤等作用。其中,水黄连是唐松草属植物箭头唐松草(Thalictrum  simplex L.var.brevipes Hara)的根,以全草入药,性寒,味苦,可用于黄疸、腹 水,小便不利等症;外用煎水洗眼可治眼结膜炎。马尾连为唐松草属植物金丝马 尾连(Thalictrum glandulosissimum)、多叶唐松草(Thalictrum foliolosum DC.)、昭通 唐松草(Thalictrum glandulosissimum var.chaotungense)及高原唐松草(Thalictrum  cultratum Wall.T.deciternatum Boivin)等的根及根茎,性寒,味苦。马尾连具有清 热燥湿、泻火解毒的功效,主治湿热泄泻、痢疾黄疸、感冒发热、麻疹、痈肿疮 疖、目赤肿痛等症。

化学成分及药理活性研究证明,生物碱为唐松草属植物的主要活性成分,包 括唐松西宁、唐松西明定、尖刺碱、箭头唐松草碱、高车前苷等生物碱类成分, 具有抗病毒、抑制肿瘤、免疫调节等作用。(李圣各,苏钰清,等;唐松草属植物中 生物碱类化学成分和药理作用的研究进展,《现代药物与临床》,2014, 20(3):312-321)。文献报道唐松草属植物还具有治疗急性细菌性痢疾的作用(邓 晓冬,杨昭;唐松草属植物治疗细菌性痢疾30例临床分析,《中国现代医学杂志》, 1996,6(8):65;田华泳;唐松草属植物治疗急性菌痢300例疗效观察,《湖南医学》, 1986,3(1):20-21)。王海坤等人报道了马尾连对金黄色葡萄球菌、表皮球菌、乙 型溶血性链球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌等六种病原菌的抑菌作用(王 海坤,李淑仪;马尾连的抗菌作用,《中国民族民间医药杂志》,1999,8(5):289-290, 310)。发明名称“马尾连提取物在制备抗肿瘤药物中的应用”(公开号 CN101306094A)的中国发明专利申请,公开了马尾连水或有机溶剂提取物在制 备抗肿瘤药物中的应用。

中国发明专利申请“一种从硬唐松草属植物中提取箭头唐松草碱的方法(公 开号CN102516257A)”,公开了采用超临界二氧化碳萃取从硬唐松草属植物中提 取箭头唐松草碱的方法。

分析上述文献检索内容,发现唐松草属植物提取物的用途主要在抗肿瘤和抑 制一些人感染病原菌;对植物病原真菌的抑菌作用未见报道,尤其在抑制柑橘采 后病原真菌方面的系统研究未见报道。基于上述研究背景,发明人开展了唐松草 属植物提取物的制备及其制备物抑制柑橘采后青霉病菌、黑腐病菌和酸腐病菌的 研究。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足,提供一种唐松草属植物提取物的制备 方法及其制备的唐松草属植物提取物新用途。本发明以天然的中草药植物为原 料,制备的唐松草属植物提取物对柑橘采后病原真菌的抑菌效果明显且无化学残 留,对人体无健康危害,对环境无污染,预示着很好的应用前景。

为解决上述技术问题,本发明采用如下的技术方案:

一种唐松草属植物提取物的制备方法,采用超声波辅助提取,以乙醇为提取 溶剂,包括如下步骤:

所述唐松草属植物中加入唐松草属植物重量10~40倍的质量百分比浓度为 40%~100%的乙醇,在提取温度为40~60℃,提取时间为30min~120min,超声 频率为30~40KHz的条件下提取;过滤,回收乙醇,浓缩,即得。

在本发明所述制备方法中,优选的,乙醇的重量为所述唐松草属植物重量 的10~30倍;更优选为20~30倍。

优选的,乙醇的质量百分比浓度优选为40%~70%;更优选为50%~60%。

优选的,超声波辅助提取时间优选为60~120min,更优选为60~90min。

优选的,超声波辅助提取的温度为45℃。

还优选的,乙醇提取前,所述唐松草属植物40~50℃烘干,粉碎后过40目 筛,取筛下粉末进行超声波辅助提取。

作为一个优选的具体实施方式,本发明提供一种唐松草属植物提取物的制备 方法,包括如下步骤:

I.将唐松草属植物40~50℃烘干,粉碎后过40目筛,取筛下粉末;

II.步骤I得到的粉末中加入所述唐松草属植物重量20~30倍的质量百分比 浓度为40%~70%的乙醇进行超声波辅助提取,提取温度为40℃~60℃,提取时 间为60min~120min,超声频率为30~40KHz;过滤,得到醇提取液;

III.步骤II得到的醇提取液,减压回收乙醇至无醇味,即得。

作为一个更优选的具体实施方式,本发明提供一种唐松草属植物提取物的制 备方法,包括如下步骤:

I.将唐松草属植物40~50℃烘干,粉碎后过40目筛,取筛下粉末;

II.步骤I得到的粉末中加入所述唐松草属植物重量20~30倍的质量百分比 浓度为50%~60%的乙醇进行超声波辅助提取,提取温度为45℃,提取时间为 60~90min,超声频率为30~40KHz;过滤,得到醇提取液;

III.步骤II得到的醇提取液,减压回收乙醇至无醇味,即得。

优选的,本发明所述唐松草属植物选自水黄连和/或马尾连。

作为一个优选的实施方式,本发明提供一种水黄连提取物的制备方法,包括 如下步骤:

I.将水黄连40~50℃烘干,粉碎后过40目筛,取筛下粉末;

II.步骤I得到的粉末中加入所述水黄连重量20倍的质量百分比浓度为60% 的乙醇进行超声波辅助提取,提取温度为45℃,提取时间为60min,超声频率 为30~40KHz;过滤,得到醇提取液;

III.步骤II得到的醇提取液,减压回收乙醇至无醇味,即得。

作为另一个优选的实施方法,本发明提供一种马尾连提取物的制备方法,具 体包括如下步骤:

I.将马尾连40~50℃烘干,粉碎后过40目筛,取筛下粉末;

II.步骤I得到的粉末中加入所述马尾连重量30倍的质量百分比浓度为50% 的乙醇进行超声波辅助提取,提取温度为45℃,提取时间为90min,超声频率 为30~40KHz;过滤,得到醇提取液;

III.步骤II得到的醇提取液,减压回收乙醇至无醇味,即得。

本发明的另一个目的,在于提供上述制备方法制备得到的唐松草属植物提取 物;特别是水黄连提取物和马尾连提取物。

本发明还有一个目的,在于提供唐松草属植物或唐松草属植物提取物在制备 用于防治柑橘采后病原菌的药物组合物和/或柑橘采后保鲜剂中的用途;优选的, 所述唐松草属植物提取物通过本发明所述制备方法制备得到。

所述柑橘采后病原菌选自意大利青霉(Penicillium italicum),柑橘酸腐病菌 (Geotrichum candidum)和柑橘黑腐病菌(Alternaria citri)中的一种或几种。

由此,本发明提供一种防治柑橘采后病原菌的药物组合物,包括本发明所述 制备方法制备得到的唐松草属植物提取物。

另外,本发明还提供一种柑橘采后保鲜剂,包括本发明所述制备方法制备得 到的所述唐松草属植物提取物。

本发明所述的药物组合物或柑橘采后保鲜剂,除所述唐松草属植物提取物 外,还可以包括可以接受的辅料,例如选自羧甲基纤维素、壳聚糖等成膜剂,选 自甘油、蔗糖酯、吐温等的助溶剂,选自柠檬酸、丙酸钙、山梨酸钾或苯甲酸钠 等的防腐剂,以及适当的溶剂,如水。

超声波具有“空化效应”,“机械振动”以及“热效应”等特性,“空化效 应”可瞬间产生几千个大气压力,使提取介质的微小气泡压缩、爆裂、破碎提取 原料的细胞壁,加速天然药用成份的溶出,“机械振动”和“热效应”进一步强 化了溶出成份的扩散,使药用成份在提取介质中快速达到浓度平衡,可大大缩短 提取成本。而且提取温度较低,避免了长时间高温水煎煮对唐松草属植物化学成 分的破坏,提高产品质量。

本发明以天然的唐松草属植物为原料得到的提取物,具有很强的抑制意大利 青霉、柑橘黑腐病菌和酸腐病菌的作用,特别是水黄连提取物和马尾连提取物。 本发明所述含有唐松草属植物提取物的药物组合物和柑橘保鲜剂,无化学残留, 对人体无健康危害,对环境无污染,具有很好的应用前景。

附图说明

图1的照片显示的是试验例1中唐松草属植物提取物对柑橘采后病原菌的抑 菌效果,箭头指示的是抑菌环的边缘;其中图1A-1C显示水黄连提取物对意大 利青霉、柑橘黑腐病菌和酸腐病菌的抑菌效果,图1D-1F显示马尾连提取物对 意大利青霉、柑橘黑腐病菌和酸腐病菌的抑菌效果。

图2的照片显示的是试验例1中唐松草属植物提取物对赣南脐橙接种意大利 青霉的生防效果;其中图2A显示水黄连提取物对赣南脐橙接种意大利青霉的生 防效果,图2B显示了马尾连提取物对赣南脐橙接种意大利青霉的生防效果。

具体实施方式

通过下面给出的具体的实例对本发明作进一步说明,但它不能理解为对本发 明的限定。

下述实施例所用的药材、试剂、生物材料,如无特殊说明,均来源于商业途 径。

实施例1一种水黄连提取物

所述水黄连提取物通过如下步骤制备:

I.将水黄连40℃烘干,粉碎后过40目筛,取筛下粉末;

II.步骤I得到的粉末中加入所述水黄连重量20倍的重量百分比浓度为60% 的乙醇进行超声波辅助提取,提取温度为45℃,提取时间为1小时,超声频率 为30KHz;过滤,得到醇提取液;

III.步骤II得到的醇提取液,减压回收乙醇至无醇味,即得所述水黄连提取 物。

实施例2一种马尾连提取物

通过如下步骤制备:

I.将马尾连40℃烘干,粉碎后过40目筛,取筛下粉末;

II.步骤I得到的粉末中加入所述马尾连重量30倍的重量百分比浓度为50% 的乙醇进行超声波辅助提取,提取温度为45℃,提取时间为1小时,超声频率 为30KHz;过滤,得到醇提取液;

III.步骤II得到的醇提取液,减压回收乙醇至无醇味,即所述马尾连提取物。

试验例1唐松草属植物提取物对柑橘采后病原真菌的抑菌作用

实验材料:

①唐松草属植物提取物:

实施例1制备的水黄连提取物,用蒸馏水配制成浓度为1g药材/mL的溶液;

实施例2制备的马尾连提取物,用蒸馏水配制成浓度为1g药材/mL的溶液。

②供试菌株:意大利青霉(Penicillium italicum,ACCC30399)来自中国农业微 生物菌种保藏中心(ACCC);柑橘酸腐病菌(Geotrichum candidum)和柑橘黑腐病 菌(Alternaria citri)实验室从赣南脐橙病果分离得到。

实验方法:

1、琼脂扩散法测定唐松草属植物提取物对意大利青霉的抑菌作用

取供试菌接种于试管斜面培养基,30℃培养2-3d,将试管培养基中的供试菌 用PDB培养液将孢子洗入三角瓶中,摇匀,玻璃珠打散,制成孢子悬液,用血 球计数板计数,使菌液浓度达106-107cfu/mL备用。

吸取上述孢子菌悬液5mL混入冷却至50℃左右PDA培养基,制备带菌培养 基。然后放置无菌牛津杯,分别于牛津杯中加入200μL所述唐松草属植物提取 物溶液,置于28℃恒温箱中培养48h,十字交叉法测量抑菌圈的大小。重复测 定三次,计算抑菌环直径平均值。

2、生长速率法测定唐松草属植物提取物对柑橘酸腐病菌和黑腐病菌的抑菌 作用

无菌条件下,以纯PDA培养基为对照,用直径6mm打孔器打取活化好的 各供试菌的菌落边缘菌块,分别将其转接到含所述唐松草属植物提取物的PDA 培养基及对照培养基中,每个处理重复三次,并将其置于28℃恒温培养箱中培 养,5d后记录各菌落生长情况,并用十字交叉法测量菌落直径,计算抑制率。

抑制率(%)=100×(对照菌落直径-处理菌落直径)/对照菌落直径

3、二倍稀释法测定唐松草属植物提取物的最低抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓 度(MFC)

将所述唐松草属植物提取物溶液二倍稀释至1.95mg药材/mL~1000mg药材 /mL之间的十个浓度梯度,然后吸取10mL不同浓度的唐松草属植物提取物溶液 于含90mL未融化的PDA培养基中,摇匀后倒入平板中,制成含药培养基,待 培养基凝固后,用平板涂布法将意大利青霉孢子菌悬液均匀涂于含药PDA培养 基上,每个浓度重复三次。并设置空白对照组(培养基不接种菌)、菌液对照组 (培养基接种菌但不含唐松草属植物醇提物)。将试验组和对照组置于28℃的培 养箱中培养2d,试验组中以无菌生长的培养皿的最低含药浓度为其MIC,将所 有无菌生长的培养皿继续培养7d后观察,以无菌生长的培养皿的最低含药浓度 为其MFC。

4、唐松草属植物提取物对赣南脐橙的生防效果

将赣南脐橙果实用2%NaClO溶液消毒处理后,再用流水冲洗干净,晾干备 用。用接种针在果实腰部刺伤一个直径4mm,深度3mm的伤口,用微量移液 器接种20μL不同浓度的唐松草属植物提取物和20μL 1×106CFU/mL意大利青 霉孢子悬浮液,试验分3个处理:①柑橘果实接种意大利青霉孢子悬浮液,作为 试验空白对照;②唐松草属植物提取物处理柑橘果实伤口后再接种意大利青霉孢 子悬浮液;③咪鲜胺阳性对照组。

果实置于托盘上,套上薄膜袋,各处理9个果实,重复3次。保持相对湿度 在95%左右,27℃培养培养7d后,调查柑橘果实病斑直径,根据下述公式计算 防治效果。

防治效果(%)=100×(对照组病斑直径-处理组病斑直径)/对照组病斑直径

实验结果

1、唐松草属植物提取物对供试病原菌的抑制作用

结果参见表1和图1。水黄连和马尾连提取物在1g药材/mL的浓度下对意 大利青霉有显著的抑菌作用(分别参见图1A和1D),水黄连的抑菌圈直径的大 小为47.4±1.1mm,马尾连的抑菌圈直径的大小为53.1±0.7mm。水黄连和马 尾连提取物对柑橘黑腐病菌和柑橘酸腐病菌的抑制率均达到100%(分别参见图 1B、图1C、图1E和图1F)。同时以1000倍稀释的咪鲜胺为阳性对照,发现水 黄连和马尾连提取物的抑菌能力与1000倍稀释的咪鲜胺相当。

表1 唐松草属植物提取物对意大利青霉的抑菌作用

2、唐松草属植物醇提物抑制意大利青霉的MIC和MFC

水黄连对意大利青霉最低抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MFC)分别为6.25 mg药材/mL和50mg药材/mL,马尾连提取物对意大利青霉的MIC和MFC分别 为6.25mg药材/mL和25mg药材/mL。

3、唐松草属植物醇提物对赣南脐橙的生防效果

结果参见图2和表2。

表2 唐松草属植物醇提物对赣南脐橙的生防效果

100mg药材/mL的水黄连提取物和马尾连提取物对意大利青霉引起的赣南 脐橙病害防治效果分别为56.86%和68.62%。同时以500倍稀释和1000倍稀释 的咪鲜胺为阳性对照,发现上述浓度的两种提取物的防治效果比1000倍稀释的 咪鲜胺强(37.5%),水黄连提取物作用弱于500倍稀释的咪鲜胺(68.1%)的防 治效果,马尾连的作用与之相当。唐松草属植物提取物浓度的对数值与防治效果 之间表现为线性关系,水黄连提取物的线性方程为Y=7.0159+1.8797X,经计算 EC50为84.6mg/mL;马尾连提取物的线性方程为Y=6.7202+1.5029X,经计算EC50为45.8mg/mL。

以水黄连和马尾连为代表的唐松草属植物,其提取物对柑橘采后多种病原菌 具有很强的抑制作用,可以有效防治这些病原菌引起的柑橘采后病害。

实施例3一种柑橘采后保鲜剂

处方:实施例1制备的水黄连提取物100mg,羧甲基纤维素10g,柠檬酸 钾0.6g,蔗糖酯5g,甘油5g,丙酸钙10g,余量为蒸馏水,共制成1000mL。

制备方法:称取处方量的羧甲基纤维素,加入适量蒸馏水溶胀8h,再加入 蒸馏水搅拌配制羧甲基纤维素溶液。然后依次加入柠檬酸、蔗糖酯、甘油、丙 酸钙及水黄连提取物,用蒸馏水稀释至1000mL,搅拌均匀,即得。

实施例4一种柑橘采后保鲜剂

处方:实施例2制备的马尾连提取物100mg,羧甲基纤维素10g,柠檬酸 钾0.6g,蔗糖酯5g,甘油5g,丙酸钙10g,余量为蒸馏水,共制成1000mL。

制备方法:称取处方量的羧甲基纤维素,加入适量蒸馏水溶胀8h,再加入 蒸馏水搅拌配制羧甲基纤维素溶液。然后依次加入柠檬酸、蔗糖酯、甘油、丙 酸钙及马尾连提取物,用蒸馏水稀释至1000mL,搅拌均匀,即得。

实施例5-19一种水黄连提取物

通过如下方法制备:

步骤I~III与实施例1同,但是步骤II中除提取温度外,各个工艺参数都与 实施例1不同,各个实施例的工艺参数详见表3。

表3 实施例5-19超声提取的工艺条件

试验例2水黄连提取物对柑橘采后病原真菌的抑菌作用

实验材料:

①供试药物:实施例5-19制备的水黄连提取物,用蒸馏水配制浓度为1g 药材/mL的溶液。

②供试菌株:意大利青霉(Penicillium italicum,ACCC30399)。

实验方法:

1、琼脂扩散法测定水黄连提取物对意大利青霉的抑菌作用

同试验例1。

实验结果:见表4。

表4 水黄连提取物对意大利青霉的抑菌作用

实施例 抑菌圈直径 实施例 抑菌圈直径 实施例 抑菌圈直径 5 36.17±0.55 10 40.17±0.55 15 47.67±0.52 6 38.83±0.41 11 37.50±0.41 16 43.27±0.75 7 37.00±0.98 12 36.50±0.98 17 40.17±0.82 8 34.17±0.52 13 44.17±0.52 18 38.67±0.52 9 39.00±0.52 14 45.83±0.63 19 37.00±0.52

试验结果表明,本发明实施例5-19所述的提取工艺条件提取得到的水黄连 提取物都有抑菌效果,但是以实施例15的乙醇提取物作用最强,其次是实施例 14、13和16。

实施例20-34一种马尾连提取物

通过如下方法制备:

步骤I~III与实施例2同,但是步骤II中除提取温度外,其它工艺参数都与 实施例2不同,每个实施例具体的工艺参数见表5。

表5 实施例20-34超声提取的工艺条件

试验例3马尾连提取物对柑橘采后病原真菌的抑菌作用

实验材料:

①供试药物:实施例20-34制备的马尾连提取物,浓度为1g药材/mL的溶 液。

②供试菌株:意大利青霉(Penicillium italicum,ACCC30399)。

实验方法:

1、琼脂扩散法测定马尾连提取物对意大利青霉的抑菌作用

同试验例1。

实验结果:见表6。

表6 马尾连提取物对意大利青霉的抑菌作用

实施例 抑菌圈直径 实施例 抑菌圈直径 实施例 抑菌圈直径 20 38.33±0.89 25 41.17±1.03 30 53.83±0.89 21 40.67±0.82 26 43.50±1.05 31 53.17±0.82 22 41.00±0.98 27 41.33±1.03 32 47.67±0.75 23 41.67±1.03 28 52.67±0.75 33 45.00±0.89 24 40.50±0.89 29 55.50±1.36 34 41.67±0.75

试验结果表明,本发明实施例20-34所述的提取工艺条件提取得到的马尾连 提取物都有抑菌效果,但是以实施例29的乙醇提取物作用最强,其次是实施例 30、31和28。

综合试验例2和3的结果,优选出一种唐松草属植物提取物的制备方法,包 括如下步骤:

I.将唐松草属植物40~50℃烘干,粉碎后过40目筛,取筛下粉末;

II.步骤I得到的粉末中加入所述唐松草属植物重量20~30倍的质量百分比 浓度为40%~70%的乙醇进行超声波辅助提取,提取温度为40℃~60℃,提取时 间为60min~120min,超声频率为30~40KHz;过滤,得到醇提取液;

III.步骤II得到的醇提取液,减压回收乙醇至无醇味,即得。

本发明更优选的唐松草属植物提取物的制备方法,包括如下步骤:

I.将唐松草属植物40~50℃烘干,粉碎后过40目筛,取筛下粉末;

II.步骤I得到的粉末中加入所述唐松草属植物重量20~30倍的质量百分比 浓度为50%~60%的乙醇进行超声波辅助提取,提取温度为45℃,提取时间为 60min~90min,超声频率为30~40KHz;过滤,得到醇提取液;

III.步骤II得到的醇提取液,减压回收乙醇至无醇味,即得。

总之,本发明提供一种对柑橘采后多种病原菌具有很强的抑制作用的唐松草 属植物提取物,可以有效防治这些病原菌引起的柑橘采后病害。

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