利用切芽后的花梗茎段诱导丛生芽快速繁殖蝴蝶兰的方法

摘要

本发明公开了一种植物快速繁殖的方法，它是用开过花的蝴蝶兰花梗腋芽诱导出营养芽切芽后的废弃花梗茎段作为外植体，直接接种到诱导培养基中进行丛生芽的诱导，将诱导出的新芽切下接种到增殖培养基中进行继代增殖培养，最后进行生根壮苗及组培苗的移栽。该方法使开过花的蝴蝶兰花梗上的腋芽及其切芽后的花梗废弃材料在人工配制的培养基中得以多次萌发产生新芽。其优点在于既不影响蝴蝶兰正常的花期又不用伤害蝴蝶兰母株，还能将蝴蝶兰花梗茎段反复利用2-3次，充分利用花梗材料，变废为宝，大大提高了蝴蝶兰组培苗的繁殖速率及生产量，生产出的种苗健壮、整齐，便于种苗工厂化管理。

说明书

技术领域

本发明属于蝴蝶兰繁殖技术领域，尤其是一种利用切芽后的花梗茎段诱导丛生芽快速繁殖蝴蝶兰的方法。

背景技术

蝴蝶兰(Phalaenopsis sp.)属兰科蝴蝶兰属植物，是在1750年发现的，大多数产于潮湿的亚洲地区，自然分布于阿隆姆、缅甸、印度洋各岛、马来半岛、南洋群岛、菲律宾以至中国台湾等低纬度热带海岛。原生种有70多种，杂交种更是数不胜数，其花朵色彩和花纹的变化层出不穷，有白花系、红花系、粉红系、黄花系、网纹系、虎斑系、点纹系等品种系列。其花型奇特，姿态优雅，花色绚丽，花期长久，素有“兰花皇后”之美誉，观赏价值极高，深受人们喜爱，市场需求量越来越大。

蝴蝶兰属于单茎性气生兰，极少发育侧枝，难以进行常规的无性繁殖；另外蝴蝶兰在自然条件下不能完成授粉，很难得到种子，即便进行人工授粉获得种子，其种子内不含胚乳，自然条件下也很难萌发，发芽率极低，因此蝴蝶兰也难以利用种子进行有性繁殖。目前主要利用组织培养方法进行蝴蝶兰的快速繁殖，属于蝴蝶兰的无性繁殖，也所谓克隆繁殖，蝴蝶兰的组织培养可以在短期内获得大量优质、整齐的蝴蝶兰幼小植株，具有增殖率高、速度快、不受季节限制、可周年生产和容易去除病毒等优点，适应市场的大量需求，也是工厂化育苗的重要途径。蝴蝶兰组织培养程序一般为：(1)选取外植体叶片、根、茎尖、花梗等；(2)诱导形成原球茎；(3)原球茎大量增殖；(4)分化出小植株；(5)生根壮苗；(6)温室移栽。从上述程序(1)中可以看出蝴蝶 兰组织培养选取的外植体可以为叶片、根、茎尖、花梗等，但上述外植体都对母株有一定的伤害或者影响母株正常的花期。目前蝴蝶兰的组织培养常用的有两种途径，一是常规的花梗诱导营养芽进行增殖，该方法如果采用已有花苞但未开花或者正在开花的花梗做为外植体，会影响蝴蝶兰正常的花期及观赏价值，而且繁殖系数每两个月一般为2.0-3.0左右，短时间内生产出的组培苗有限；二是利用种子无菌播种法进行蝴蝶兰组培苗生产，该方法繁殖出的种苗变异较多，种苗生长不一致。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用切芽后的花梗茎段诱导丛生芽快速繁殖蝴蝶兰的方法，解决蝴蝶兰分株较慢，种子自然条件下不易萌发、植株繁殖速率慢、商品苗生产量低、生长周期不一致、开花时间参差不齐，不能大批量控制花期及上市等问题。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案，以开过花的蝴蝶兰花梗腋芽诱导出营养芽切芽后的废弃花梗茎段作为外植体，直接接种到诱导培养基中进行芽的诱导，将诱导出的新芽切下接种到增殖培养基中进行继代增殖培养，最后进行生根壮苗及组培苗的移栽。

具体的步骤为：

(1)外植体的选择：选取无病虫害长势良好的蝴蝶兰品种，待其花朵凋谢，花期已过，用剪刀将整条花梗剪下，切取3-4cm长的花梗腋芽茎段(一段一芽)为外植体材料；

(2)培养基的配制：

芽诱导培养基：MS+6-BA2.5mg/L+NAA0.5mg/L，蔗糖20g/L，pH值为 5.6：

芽增殖培养基：MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L，蔗糖20g/L，pH值为5.6：

生根壮苗培养基：1/2MS+NAA1.0mg/L+香蕉泥100g/L，蔗糖20g/L，pH值为5.6；

(3)外植体消毒处理：将上述外植体材料，自来水下冲洗30-60min后，在超净工作台内，放入75％的酒精溶液中浸泡消毒45S，此后用无菌滤纸吸干酒精，放入7-10％的NaClO消毒液中消毒灭菌15-20min，然后在无菌滤纸上将腋芽的苞片小心剥去，再放入5％的NaClO消毒液中消毒5min，灭菌完毕后用无菌水冲洗3-5遍，滤纸吸干水分置于培养皿中备用；

(4)诱导培养及培养条件：将严格消毒后的带腋芽花梗，用无菌手术刀将茎段与消毒液接触的两端沿45℃角切掉，花梗芽点朝上与培养基平面成45℃角斜插入芽诱导培养基中，培养温度25±2℃，光照时间12-14h/d，光照强度为1600-2000Lx，诱导时间为30-45d左右；

(5)增殖培养及培养条件：将步骤(4)诱导出的新芽从花梗上切下，2-3株为一组，接种到增殖培养基中进行继代增殖，培养条件及培养时间同步骤(4)：

(6)将步骤(5)中初代切芽后的花梗茎段重新接种到诱导培养基中，置培养架培养，培养条件及培养时间同步骤(4)；

(7)将切芽后的花梗茎段二次诱导出的丛生芽从花梗上切下，2-3株为一组，接种到增殖培养基中进行继代增殖，培养条件及培养时间同步骤(4)；

(8)重复步骤(6)和步骤(7)2-3次；

(9)生根壮苗及培养条件：当增殖得到的芽体达到2-5cm高时，无菌条件下，将丛生芽分离成单株，接种在生根壮苗培养基中进行生根壮苗，培养条件同步骤(4)，生根壮苗时间为2-3个月；

(10)组培苗炼苗及移栽：当组培苗长至3-5cm高，有2-5条根，3-6片叶，叶长2-3cm时，即可进行炼苗，将组培瓶放在自然光照条件下炼苗5-7天，打开组培瓶盖继续炼苗2-3天，以增强瓶苗对室外环境的适应能力；再从瓶中小心取出组培苗，洗净根部培养基，用灭过菌的水苔轻裹根部植于36孔穴盘中，保持温度25℃左右，空气湿度80-85％，25-30天后，有新根新叶长出时，定期喷施多菌灵1000倍液。

本发明和现有技术相比其优点在于：

本发明公布了一种利用切芽后的花梗茎段诱导丛生芽快速繁殖蝴蝶兰的方法，使花朵已凋谢的蝴蝶兰花梗上的休眠芽及其切芽后的花梗茎段在人工配制的培养基中得以多次萌发，然后进行增殖及生根培养，最终获得完整的蝴蝶兰植株。常规的利用花梗诱导营养芽进行增殖，两个月内的增殖系数为2.0左右，而采用如上技术方案，使得每个蝴蝶兰花梗腋芽的增殖系数提高到14.0-26.0左右，相当于效率提高了20倍，极大的节约了生产成本。本方法的优点在于既不影响蝴蝶兰正常的花期又不用伤害蝴蝶兰母株，还能将蝴蝶兰花梗茎段反复利用2-3次，可以充分利用花梗材料，变废为宝，大大提高了蝴蝶兰组培苗的繁殖速率及生产量，生产出的种苗健壮、整齐，便于种苗工厂化管理。

具体实施方式

下面结合具体实施例1对本发明做进一步说明。

实施例1：

(1)外植体的选择：选取无病虫害的蝴蝶兰品种黑杰克植株，待花朵凋谢，花期已过，用剪刀将整条花梗剪下，切取3-4cm长的花梗腋芽茎段(一段一芽)为外植体材料；

(2)培养基的配制：

芽诱导培养基：MS+6-BA2.5mg/L+NAA0.5mg/L，蔗糖20g/L，pH值为5.6：

芽增殖培养基：MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L，蔗糖20g/L，pH值为5.6：

生根壮苗培养基：1/2MS+NAA1.0mg/L+香蕉泥100g/L，蔗糖20g/L，pH值为5.6；

(3)外植体消毒处理：将上述外植体材料，自来水下冲洗30-60min后，在超净工作台内，放入75％的酒精溶液中浸泡消毒45S，此后用无菌滤纸吸干酒精，放入7-10％的NaClO消毒液中消毒灭菌12-15min，老化材料灭菌15-20min，然后在无菌滤纸上将腋芽的苞片小心剥去，再放入5％的NaClO消毒液中消毒5min，灭菌完毕后用无菌水冲洗3-5遍，滤纸吸干水分置于培养皿中备用；

(4)诱导培养及培养条件：将严格消毒后的带腋芽花梗，用无菌手术刀将茎段与消毒液接触的两端沿45℃角切掉，花梗芽点朝上与培养基平面成45℃角斜插入芽诱导培养基中，培养温度25±2℃，光照时间12-14h/d，光照强度为1600-2000Lx，诱导时间为30-45d左右；

(5)增殖培养及培养条件：将步骤(4)诱导出的新芽从花梗上切下，2-3 株为一组，接种到增殖培养基中进行继代增殖，培养室条件及培养时间同步骤(4)；

(6)将步骤(5)中初代切芽后的花梗茎段重新接种到诱导培养基中，置培养架培养，培养条件及培养时间同步骤(4)；

(7)将切芽后的花梗茎段二次诱导出的丛生芽从花梗上切下，2-3株为一组，接种到增殖培养基中进行继代增殖，培养条件及培养时间同步骤(4)；

(8)重复步骤(6)和步骤(7)2-3次；

(9)生根壮苗及培养条件：当增殖得到的芽体达到2-5cm高时，无菌操作，将丛生芽分离成单株，接种在生根壮苗培养基中进行生根壮苗，培养室条件同步骤(4)，生根壮苗时间为2-3个月；

(10)组培苗炼苗及移栽：当组培苗长至3-5cm高时，有2-5条根，3-6片叶，叶长2-3cm时，即可进行炼苗，将组培瓶放在自然光照条件下炼苗5-7天，打开组培瓶盖炼苗2-3天，以增强瓶苗对室外环境的适应能力；再从瓶中小心取出组培苗，洗净根部培养基，用灭过菌的水苔轻裹根部植于36孔穴盘中，保持温度25℃左右，空气湿度80-85％，30天后，有新根新叶长出时，喷施多菌灵1000倍液，定期喷施，成活率达到95％。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依照本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，都应属本发明的涵盖范围。