一种1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备方法

摘要

本发明公开了1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备方法：将腺苷蛋氨酸产生菌的发酵液酸化、过滤后得湿菌体，干燥，冻融处理，将无机强酸的水溶液和湿菌体混合均匀；将含破壁菌体的酸液于陶瓷膜中过滤，并添加无机强酸的水溶液，收集滤液；将滤液过纳滤膜，得浓缩液A；过中等极性大孔吸附树脂柱，水洗后得流出液B；过H

说明书

技术领域

本发明涉及一种1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备方法。

背景技术

1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸(S-adenosyl-L-methionnine1,4-butanedisulfonate) 是S-腺苷蛋氨酸（S-adenosyl-L-methionine，简称SAM，SAMe）的1,4— 丁二磺酸盐，在临床上用于治疗抑郁症、关节炎、肝功能紊乱等疾患，适 用于肝硬化前和肝硬化所致肝内胆汁淤积；适用于妊娠期肝内胆汁淤积。

其化学名称：（±）-5’-[（R*）-[（R*）-3-氨基-3-羧丙基]甲磺基]-5’ -脱氧腺苷1,4—丁烷二磺酸盐。其分子式为：C₁₅H₂₃N₆O₅S⁺·C₄H₉O₆S₂· 0.65C₄H₁₀O₆S₂；其分子量为748.24。具体结构式可参考中国专利申请 CN201210126839.0。

中国专利CN200510019206.x，美国专利USP4990606、USP5128249和 欧洲专利EP0162323均阐明了SAM的分离纯化及成盐工艺，其中也包括 SAM的1,4—丁二磺酸盐。最近，中国专利申请CN201210126839.0又将制 备工艺中的超滤膜过滤步骤置于柱分离过程步骤之后，同时提高了1,4-丁二 磺酸的比例。同时CN201210126839.0还对上述专利的缺点进行了描述，然 而，其制备方法仍然存在操作步骤繁琐，丁二磺酸含量偏高等缺点，且未说 明其中（S）-S-腺苷蛋氨酸与（R）-S-腺苷蛋氨酸的比例是否达到国家进口 药品注册标准JX20000239要求。

在注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸标准（国家进口药品注册标准 JX20000239）中，对于1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸而言，要求其中的（S）-S- 腺苷蛋氨酸占腺苷蛋氨酸总比例为60-75%，现有的制备方法很难制得符合 要求的1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸，因此往往在分离纯化后还要额外添加（R） -S-腺苷蛋氨酸至相关比例，并且无法确保产品能够达到原料药标准的要求。

发明内容

本发明所解决的技术问题在于克服了现有技术中1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨 酸的制备方法复杂，产品质量不稳定，纯度低，无法保障制得的产品符合相 关原料药标准等缺陷，提供一种1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备方法。本发 明的制备方法操作简单，产品收率较高，色泽白，纯度高，制得产品中的（S） -S-腺苷蛋氨酸和（R）-S-腺苷蛋氨酸的比例、1,4-丁二磺酸和腺苷蛋氨酸的 比例符合国家进口药品注册标准JX20000239的要求。

本发明通过以下技术方案解决上述技术问题。

本发明提供了一种1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备方法，其包括下述步 骤：

（1）调节腺苷蛋氨酸产生菌的发酵液的pH值至2.5～3.0，过滤后得湿 菌体，将所述湿菌体干燥至含水量在5～20wt%后，进行冻融处理，所述冻 融处理的方法为：将所述湿菌体于-20～-80℃冷冻12～24h，再于20～25℃ 融化2～4h；所述冻融处理进行的次数为1～3次；将pH值为2～4的无机 强酸的水溶液和所述湿菌体混合均匀，于0～10℃下放置1～3h，得含破壁 菌体的酸液；其中，所述湿菌体和所述无机强酸的水溶液的体积比为1:3～ 1:8；

（2）在0～10℃下，将所述含破壁菌体的酸液于陶瓷膜中过滤，过滤的 同时向所述陶瓷膜中添加pH值为2～4的无机强酸的水溶液，至滤液中的腺 苷蛋氨酸的含量在0.05g/L以下，收集所述滤液；其中，所述陶瓷膜的孔径 为20～300nm；

（3）将所述滤液过纳滤膜，浓缩所述滤液至腺苷蛋氨酸的浓度为4～ 5g/L，得浓缩液A；所述纳滤膜的截留分子量为100～200；

（4）调节所述浓缩液A的pH值至2～5，过中等极性大孔吸附树脂柱， 水洗后得流出液B；所述的中等极性大孔吸附树脂柱中的大孔吸附树脂为聚 苯乙烯-二乙烯苯树脂；

（5）将所述流出液B的pH值调节至4.5～6.0后，过H⁺型大孔弱酸性 阳离子交换树脂柱，用水洗脱除盐，用0.01～0.02mol/L的醋酸水溶液洗脱 除杂，再用水洗脱除醋酸，用pH值为3～5的1,4-丁二磺酸洗脱所述的H⁺型大孔酸性阳离子交换树脂柱，分布收集并将流出液C合并，得收集液；所 述流出液C中腺苷蛋氨酸的HPLC纯度在97%以上；

（6）将所述收集液依次过超滤膜和纳滤膜；所述的超滤膜的截留分子 量为5000～10000，所述纳滤膜的截留分子量为100～200，得浓缩液D；将 所述浓缩液D和1,4-丁二磺酸混合，调节1,4-丁二磺酸与腺苷蛋氨酸的摩尔 比为1.55～1.65，干燥后即得。

步骤（1）中，所述腺苷蛋氨酸产生菌为本领域常规使用的可以产生腺 苷蛋氨酸的菌种，较佳地为酿酒酵母，更佳地为酿酒酵母CPCC340488。

步骤（1）中，所述腺苷蛋氨酸产生菌的发酵液可采用本领域常规的发 酵培养方法进行制备。在本发明的一较佳实施方式中，所述腺苷蛋氨酸产生 菌的发酵液由下述制备方法制得：

1）将所述腺苷蛋氨酸产生菌接种于斜面培养基进行斜面培养，于29～ 31℃下培养3d，再于3～5℃下冷藏5d以上，得生长好的斜面；其中，所述 斜面培养基含有：大豆蛋白胨2.0wt%、酵母膏0.5wt%、葡萄糖2.0wt%和琼 脂条2.0wt%，所述斜面培养基的pH值为6.0；

2）将所述生长好的斜面接种于种子培养基进行种子培养，于27～29℃ 下以220～250rpm的转速摇床培养20～24h；其中，所述种子培养基含有： 葡萄糖2.0wt%、酵母膏1.0wt%和大豆蛋白胨2.0wt%，所述种子培养基的pH 值为6.0；

3）发酵罐培养，于发酵罐中通气发酵65～72h，发酵过程中补加D,L- 蛋氨酸，即得所述腺苷蛋氨酸产生菌的发酵液；发酵罐培养基中含有：蔗糖 10wt%、酵母膏1.0wt%、硫酸铵0.3wt%、磷酸二氢钾0.5wt%和D,L-蛋氨酸 1.5wt%，所述发酵罐培养基的pH值为5.0。

其中，按本领域常识，所述冷藏的时间不超过1个月。

其中，所述培养后的斜面接种于种子培养基的方法为本领域常规的方 法，较佳地按照下述操作进行：将无菌水加入到所述生长好的斜面，所述无 菌水和所述生长好的斜面的体积比较佳地为1:10，用无菌接种棒刮下，置于 振荡器中振荡均匀后以0.5mL/250mL瓶或1.5mL/750mL瓶的接种量接入所 述的种子培养基，即可。

步骤（1）中，所述调节腺苷蛋氨酸产生菌的发酵液的pH值的方法可为 本领域常规的方法，一般用酸性调节剂进行。所述酸性调节剂较佳地为盐酸、 硫酸和草酸中的一种或多种。

步骤（1）中，所述过滤的方法和条件可为本领域常规的方法和条件。 所述过滤较佳地为板框过滤。

步骤（1）中，所述干燥的方法和条件可为本领域常规的方法和条件。 所述干燥较佳地为晾干或冷风吹干。

步骤（1）中，所述无机强酸可为本领域常规使用的无机强酸，较佳地 为盐酸、硫酸和磷酸中的一种或多种。

步骤（2）中，所述过滤的方法和条件可为本领域常规的方法和条件。 所述过滤的压力较佳地在6bar以下。所述陶瓷膜的规格可为本领域常规使 用的规格，所述陶瓷膜的面积较佳地为0.1～1m²。所述的陶瓷膜更佳地为江 苏久吾高科技股份有限公司生产的陶瓷膜。

步骤（2）中，所述无机强酸可为本领域常规使用的无机强酸，较佳地 为盐酸、硫酸和磷酸中的一种或多种。

步骤（4）中，所述调节所述浓缩液A的pH值的方法可为本领域常规 的方法，一般用酸性调节剂进行。所述酸性调节剂较佳地为盐酸、硫酸和草 酸中的一种或多种。

步骤（4）中，所述中等极性大孔吸附树脂可为本领域常规使用的中等 极性的大孔吸附树脂，所述的大孔吸附树脂的表面积较佳地在300m²/g以上， 所述大孔吸附树脂的特征孔径较佳地为所述大孔吸附树脂的调 和平均粒径较佳地为250～840μm。所述中等极性大孔吸附树脂更佳地为上 海华震科技有限公司生产的HZ系列大孔吸附树脂或苏州纳微生物科技有限 公司生产的NM-100大孔吸附树脂。

步骤（5）中，所述将所述流出液B的pH值调节至4.5～6.0的方法可 为本领域常规的方法，一般用碱性调节剂进行。所述碱性调节剂较佳地为 NaOH和/或氨水。

步骤（5）中，所述的H⁺型大孔酸性阳离子交换树脂柱的高径比较佳地 为2～5。所述H⁺型大孔弱酸性阳离子交换树脂柱较佳地为D152离子交换 树脂柱、FPC3500离子交换树脂柱、IRC50离子交换树脂柱或CG50离子交 换树脂柱。

步骤（5）中，所述腺苷蛋氨酸的HPLC纯度可由本领域常规的HPLC 检测方法测得。本发明中，腺苷蛋氨酸的HPLC的检测条件和方法较佳地为： 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；取 甲酸铵6.3g，辛烷磺酸钠1.0g，加水700ml溶解，用甲酸调节pH值至2.8， 加水稀释至1000ml，混合均匀，得溶液E，将溶液E和甲醇以体积比4:1的 比例混合均匀，得流动相；流速为1.25ml/min；检测波长为260nm，柱温为 30℃。

步骤（6）中，调节1,4-丁二磺酸与腺苷蛋氨酸摩尔比的方法和条件为 本领域常规的方法和条件。所述调节1,4-丁二磺酸与腺苷蛋氨酸摩尔比较佳 地为1.59～1.63，更佳地为1.62。

步骤（6）中，所述干燥的方法和条件可为本领域常规的方法和条件。 所述干燥较佳地为喷雾干燥或冷冻干燥。

按本领域常识，本发明中，所述的水均为纯水和/或无菌水。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发 明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：

本发明的制备方法操作简单，产品收率高，色泽白，纯度高，制得产品 中的（S）-S-腺苷蛋氨酸和（R）-S-腺苷蛋氨酸的比例、1,4-丁二磺酸和腺苷 蛋氨酸的比例符合相关原料药标准要求。

附图说明

图1为实施例5所制得的1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸的HPLC检测图谱。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在 所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常 规方法和条件，或按照商品说明书选择。

下述实施例中，腺苷蛋氨酸的HPLC的检测条件和方法为：以十八烷基 硅烷键合硅胶为填充剂；取甲酸铵6.3g，辛烷磺酸钠1.0g，加水700ml溶解， 用甲酸调节pH值至2.8，加水稀释至1000ml，摇匀，取此溶液800ml加甲 醇200ml，摇匀，作为流动相；流速为1.25ml/min；检测波长为260nm，柱 温30℃。

下述实施例中，采用的酿酒酵母CPCC340488菌种购自中国药用微生物 菌种保藏管理中心（CPCC），该菌种公开对外销售。

实施例1

一种1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备方法，其包括下述步骤：

（1）对腺苷蛋氨酸产生菌进行发酵培养，具体步骤按下述操作进行：

1）将酿酒酵母CPCC340488菌种接种于斜面培养基进行斜面培养，于 30℃下培养3d，再于4℃下冷藏5d，得生长好的斜面；其中，斜面培养基含 有：大豆蛋白胨2.0wt%、酵母膏0.5wt%、葡萄糖2.0wt%和琼脂条2.0wt%， 斜面培养基的pH值为6.0；

2）将20mL无菌水加入到生长好的斜面，用无菌接种棒刮下，置于振 荡器中振荡均匀后以0.5mL/250mL瓶的接种量接入种子培养基，进行种子 培养，于28℃下以250rpm的转速摇床培养24h；其中，种子培养基含有： 葡萄糖2.0wt%、酵母膏1.0wt%和大豆蛋白胨2.0wt%，种子培养基的pH值 为6.0；

3）发酵罐培养，于10L发酵罐中通气发酵72h，发酵过程中补加1.6wt% 相对于发酵罐培养基重量的D,L-蛋氨酸，即得发酵液；发酵罐培养基中含有： 蔗糖10wt%、酵母膏1.0wt%、硫酸铵0.3wt%、磷酸二氢钾0.5wt%和D,L- 蛋氨酸1.5wt%，发酵罐培养基的pH值为5.0；

用硫酸调节发酵液的pH值至3.0，板框过滤后得1.8L湿菌体，湿菌体 经冷风吹干至含水量在5wt%后，进行冻融处理2次，冻融处理的方法为： 将湿菌体于-20℃冷冻24h，再于20～25℃融化4h；将5.4L的pH值为2的 盐酸水溶液和冻融后的湿菌体混合均匀，于0～10℃下放置1h，得含破壁菌 体的酸液；

（2）在0～10℃下，将含破壁菌体的酸液于陶瓷膜中过滤，过滤的同时 向陶瓷膜中添加pH值为2的盐酸水溶液，至滤液中的腺苷蛋氨酸的含量在 0.05g/L以下，收集澄清滤液；其中，陶瓷膜的孔径为200nm，陶瓷膜的面 积为0.1m²，过滤时的压力在6bar以下；

（3）将滤液过纳滤膜，浓缩滤液至腺苷蛋氨酸的浓度为4～5g/L，得 8.5L浓缩液A；纳滤膜的截留分子量为100～200；

（4）用盐酸调节浓缩液A的pH值至3，过高径比为5:1且柱体积为3L 的HZ-816大孔吸附树脂柱，并用2.5L纯水洗出，得流出液B；

（5）用NaOH将流出液B的pH值调节至5.5后，过高径比为3:1且柱 体积为5L的H⁺型FPC3500离子交换树脂柱，用纯水洗脱除盐，用0.02mol/L 的醋酸水溶液洗脱除杂，再用纯水洗脱除醋酸，用pH值为3的1,4-丁二磺 酸洗脱H⁺型FPC3500离子交换树脂柱，分布收集并将流出液C合并，得收 集液；流出液C中腺苷蛋氨酸的HPLC纯度在97%以上；

（6）将收集液依次过超滤膜和纳滤膜；超滤膜的截留分子量为5000～ 10000，纳滤膜的截留分子量为100～200，得浓缩液D；将浓缩液D和1,4- 丁二磺酸混合，调节1,4-丁二磺酸与腺苷蛋氨酸的摩尔比为1.63:1，冷冻干 燥后即得。

所制得的1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸冻干粉末32.5g，色泽白，HPLC纯度 为97.1%，其中（S）-S-腺苷蛋氨酸占总腺苷蛋氨酸的比例为72%，总收率 为85%。

实施例2

一种1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备方法，其包括下述步骤：

（1）对腺苷蛋氨酸产生菌进行发酵培养，具体步骤按下述操作进行：

1）将酿酒酵母CPCC340488菌种接种于斜面培养基进行斜面培养，于 30℃下培养3d，再于4℃下冷藏5d，得生长好的斜面；其中，斜面培养基含 有：大豆蛋白胨2.0wt%、酵母膏0.5wt%、葡萄糖2.0wt%和琼脂条2.0wt%， 斜面培养基的pH值为6.0；

2）将20mL无菌水加入到生长好的斜面，用无菌接种棒刮下，置于振 荡器中振荡均匀后以1.5mL/750mL瓶的接种量接入种子培养基，进行种子 培养，于28℃下以250rpm的转速摇床培养24h；其中，种子培养基含有： 葡萄糖2.0wt%、酵母膏1.0wt%和大豆蛋白胨2.0wt%，种子培养基的pH值 为6.0；

3）发酵罐培养，于100L发酵罐中通气发酵72h，发酵过程中补加1.6wt% 相对于发酵罐培养基重量的D,L-蛋氨酸，即得发酵液；发酵罐培养基中含有： 蔗糖10wt%、酵母膏1.0wt%、硫酸铵0.3wt%、磷酸二氢钾0.5wt%和D,L- 蛋氨酸1.5wt%，发酵罐培养基的pH值为5.0；

用硫酸调节发酵液的pH值至3.0，板框过滤后得16L湿菌体，湿菌体 经冷风吹干至含水量在20wt%后，进行冻融处理2次，冻融处理的方法为： 将湿菌体于-80℃冷冻24h，再于20～25℃融化4h；将64L的pH值为2的 硫酸水溶液和冻融后的湿菌体混合均匀，于0～10℃下放置1h，得含破壁菌 体的酸液；

（2）在0～10℃下，将含破壁菌体的酸液于陶瓷膜中过滤，过滤的同时 向陶瓷膜中添加pH值为2的硫酸水溶液，至滤液中的腺苷蛋氨酸的含量在 0.05g/L以下，收集澄清滤液；其中，陶瓷膜的孔径为20nm，陶瓷膜的面积 为1.0m²，过滤时的压力在6bar以下；

（3）将滤液过纳滤膜，浓缩滤液至腺苷蛋氨酸的浓度为4～5g/L，得 80L浓缩液A；纳滤膜的截留分子量为100～200；

（4）用硫酸调节浓缩液A的pH值至4，过高径比为5:1且柱体积为30L 的HZ-803大孔吸附树脂柱，并用25L纯水洗出，得流出液B；

（5）用氨水将流出液B的pH值调节至5.0后，过高径比为3:1且柱体 积为30L的H⁺型D152离子交换树脂柱，用纯水洗脱除盐，用0.02mol/L的 醋酸水溶液洗脱除杂，再用纯水洗脱除醋酸，用pH值为4的1,4-丁二磺酸 洗脱H⁺型D152离子交换树脂柱，分布收集并将流出液C合并，得收集液； 流出液C中腺苷蛋氨酸的HPLC纯度在97%以上；

（6）将收集液依次过超滤膜和纳滤膜；超滤膜的截留分子量为5000～ 10000，纳滤膜的截留分子量为100～200，得浓缩液D；将浓缩液D和1,4- 丁二磺酸混合，调节1,4-丁二磺酸与腺苷蛋氨酸的摩尔比为1.59:1，喷雾干 燥后即得。

所制得的1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸粉末385.8g，色泽白，HPLC纯度为 97.5%，其中（S）-S-腺苷蛋氨酸占总腺苷蛋氨酸的比例为73%，总收率为 80%。

实施例3

一种1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备方法，其包括下述步骤：

（1）对腺苷蛋氨酸产生菌进行发酵培养，具体操作步骤同实施例2；

用草酸调节发酵液的pH值至3.0，板框过滤后得15L湿菌体，湿菌体 经冷风吹干至含水量在10wt%后，进行冻融处理2次，冻融处理的方法为： 将湿菌体于-80℃冷冻24h，再于20～25℃融化4h；将75L的pH值为4的 硫酸水溶液和冻融后的湿菌体混合均匀，于0～10℃下放置3h，得含破壁菌 体的酸液；

（2）在0～10℃下，将含破壁菌体的酸液于陶瓷膜中过滤，过滤的同时 向陶瓷膜中添加pH值为2的草酸水溶液，至滤液中的腺苷蛋氨酸的含量在 0.05g/L以下，收集澄清滤液；其中，陶瓷膜的孔径为200nm，陶瓷膜的面 积为1.0m²，过滤时的压力在6bar以下；

（3）将滤液过纳滤膜，浓缩滤液至腺苷蛋氨酸的浓度为4～5g/L，得 76L浓缩液A；纳滤膜的截留分子量为100～200；

（4）用草酸调节浓缩液A的pH值至2，过高径比为5:1且柱体积为30L 的NM-100大孔吸附树脂柱，并用25L纯水洗出，得流出液B；

（5）用NaOH将流出液B的pH值调节至6.0后，过高径比为3:1且柱 体积为30L的H⁺型IRC50离子交换树脂柱，用纯水洗脱除盐，用0.01mol/L 的醋酸水溶液洗脱除杂，再用纯水洗脱除醋酸，用pH值为3的1,4-丁二磺 酸洗脱H⁺型IRC50离子交换树脂柱，分布收集并将流出液C合并，得收集 液；流出液C中腺苷蛋氨酸的HPLC纯度在97%以上；

（6）将收集液依次过超滤膜和纳滤膜；超滤膜的截留分子量为5000～ 10000，纳滤膜的截留分子量为100～200，得浓缩液D；将浓缩液D和1,4- 丁二磺酸混合，调节1,4-丁二磺酸与腺苷蛋氨酸的摩尔比为1.65:1，喷雾干 燥后即得。

所制得的1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸粉末280.5g，色泽白，HPLC纯度为 98.1%，其中（S）-S-腺苷蛋氨酸占总腺苷蛋氨酸的比例为71%，总收率为 78%。

实施例4

一种1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备方法，其包括下述步骤：

（1）对腺苷蛋氨酸产生菌进行发酵培养，具体操作步骤同实施例2；

用硫酸调节发酵液的pH值至3.0，板框过滤后得17L湿菌体，湿菌体 经冷风吹干至含水量在20wt%后，进行冻融处理3次，冻融处理的方法为： 将湿菌体于-50℃冷冻12h，再于20～25℃融化4h；将130L的pH值为3的 磷酸水溶液和冻融后的湿菌体混合均匀，于0～10℃下放置1h，得含破壁菌 体的酸液；

（2）在0～10℃下，将含破壁菌体的酸液于陶瓷膜中过滤，过滤的同时 向陶瓷膜中添加pH值为2的磷酸水溶液，至滤液中的腺苷蛋氨酸的含量在 0.05g/L以下，收集澄清滤液；其中，陶瓷膜的孔径为160nm，陶瓷膜的面 积为1.0m²，过滤时的压力在6bar以下；

（3）将滤液过纳滤膜，浓缩滤液至腺苷蛋氨酸的浓度为4～5g/L，得 70L浓缩液A；纳滤膜的截留分子量为100～200；

（4）用磷酸调节浓缩液A的pH值至3，过高径比为4:1且柱体积为30L 的HZ-806大孔吸附树脂柱，并用25L纯水洗出，得流出液B；

（5）用氨水将流出液B的pH值调节至4.5后，过高径比为5:1且柱体 积为30L的H⁺型FPC3500离子交换树脂柱，用纯水洗脱除盐，用0.01mol/L 的醋酸水溶液洗脱除杂，再用纯水洗脱除醋酸，用pH值为4.5的1,4-丁二 磺酸洗脱H⁺型FPC3500离子交换树脂柱，分布收集并将流出液C合并，得 收集液；流出液C中腺苷蛋氨酸的HPLC纯度在97%以上；

（6）将收集液依次过超滤膜和纳滤膜；超滤膜的截留分子量为5000～ 10000，纳滤膜的截留分子量为100～200，得浓缩液D；将浓缩液D和1,4- 丁二磺酸混合，调节1,4-丁二磺酸与腺苷蛋氨酸的摩尔比为1.55:1，冷冻干 燥后即得。

所制得的1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸粉末292.7g，色泽白，HPLC纯度为 97.2%，其中（S）-S-腺苷蛋氨酸占总腺苷蛋氨酸的比例为72%，总收率为 82%。

实施例5

一种1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸的制备方法，其包括下述步骤：

（1）对腺苷蛋氨酸产生菌进行发酵培养，具体操作步骤同实施例2；

用硫酸调节发酵液的pH值至3.0，板框过滤后得15L湿菌体，湿菌体 经晾干至含水量在15wt%后，进行冻融处理1次，冻融处理的方法为：将湿 菌体于-80℃冷冻12h，再于20～25℃融化4h；将45L的pH值为3的硫酸 水溶液和冻融后的湿菌体混合均匀，于0～10℃下放置2h，得含破壁菌体的 酸液；

（2）在0～10℃下，将含破壁菌体的酸液于陶瓷膜中过滤，过滤的同时 向陶瓷膜中添加pH值为3的硫酸水溶液，至滤液中的腺苷蛋氨酸的含量在 0.05g/L以下，收集澄清滤液；其中，陶瓷膜的孔径为300nm，陶瓷膜的面 积为1.0m²，过滤时的压力在6bar以下；

（3）将滤液过纳滤膜，浓缩滤液至腺苷蛋氨酸的浓度为4～5g/L，得 70L浓缩液A；纳滤膜的截留分子量为100～200；

（4）用硫酸调节浓缩液A的pH值至2，过高径比为4:1且柱体积为30L 的HZ-812大孔吸附树脂柱，并用25L纯水洗出，得流出液B；

（5）用NaOH将流出液B的pH值调节至5.5后，过高径比为4:1且柱 体积为30L的H⁺型FPC3500离子交换树脂柱，用纯水洗脱除盐，用0.02mol/L 的醋酸水溶液洗脱除杂，再用纯水洗脱除醋酸，用pH值为5的1,4-丁二磺 酸洗脱H⁺型FPC3500离子交换树脂柱，分布收集并将流出液C合并，得收 集液；流出液C中腺苷蛋氨酸的HPLC纯度在97%以上；

（6）将收集液依次过超滤膜和纳滤膜；超滤膜的截留分子量为5000～ 10000，纳滤膜的截留分子量为100～200，得浓缩液D；将浓缩液D和1,4- 丁二磺酸混合，调节1,4-丁二磺酸与腺苷蛋氨酸之比为1.62:1，冷冻干燥后 即得。

所制得的1,4-丁二磺酸腺苷蛋氨酸粉末232.6g，色泽白，HPLC纯度为 97.3%，其HPLC图谱见图1，其中（S）-S-腺苷蛋氨酸占总腺苷蛋氨酸的比 例为72%，总收率为82%。