一种杂交兰‘黄金小神童’的组织培养高效繁殖育苗方法

摘要

本发明公开了一种杂交兰‘黄金小神童’的组织培养高效繁殖育苗方法。本发明采用杂交兰‘黄金小神童’的嫩芽为外植体，进行组织培养诱导出根状茎，只用一种培养基培养根状茎可同时完成根状茎的增殖以及苗的分化和生长，数量，出苗快，繁殖倍率高，稳定性强，植株具有苗壮、品质高、抗性强的特点，可成功地开展杂交兰种苗快速繁殖的工厂化生产，并为类似兰花的其他植物的组织培养提供方法。

说明书

技术领域：

本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种杂交兰‘黄金小神童’的组织培养高效繁殖 育苗方法。

背景技术：

黄金小神童(Cymbidium Golden Elf‘Sundust’)是我国台湾省10多年前用四季兰和虎头 兰杂交而得，开花物候及性状更接近建兰的生长特性，因此目前一般将其归为建兰品种。其 具有花色金黄素雅、花香醇正，叶姿洒脱等特点，入市以来因其“物美价廉”一直深受消费者 的青睐。

目前，国内已有杂交兰组织培养的论文报道，其采用原球茎途径和丛生芽途径再生成苗， 步骤为：原球茎和丛生芽经消毒处理后，再经初诱导培养、继代增殖培养和生根培养得到试 管苗，试管苗经移栽炼苗后得到幼苗，各个阶段的培养基是不同的。但未见杂交兰黄金小神 童通过根状茎途径繁殖种苗的报道。

发明内容：

本发明的目的是提供一种以黄金小神童(Cymbidium Golden Elf‘Sundust’)的嫩芽为外植 体，进行组织培养诱导出根状茎，只需要将根状茎接种到一种培养基就可以使其同时进行根 状茎的增殖和不定芽的分化，生根以及苗的生长，节省了大量的人力和物力的杂交兰‘黄金小 神童’的组织培养高效繁殖育苗方法。

本发明的杂交兰‘黄金小神童’的组织培养高效繁殖育苗方法，其特征在于，包括以下步 骤：

a、外植体及其处理：从黄金小神童(Cymbidium Golden Elf‘Sundust’)植株基部取下幼嫩 芽作为外植体，然后将外植体消毒处理后，剥去休眠芽的苞片后再进行消毒处理，得到表面 消毒处理后的嫩芽；

b、诱导根状茎：将表面消毒处理后的嫩芽于基部切切口，基部向下插入根状茎诱导培养 基中，先放置于26±2℃下黑暗培养7～10d，然后光照培养，光照强度1000～2000lx，光照时 间10h/d，培养温度26±2℃，诱导出根状茎，所述的根状茎诱导培养基每升含有6-BA 0.5mg、 NAA 1mg、椰汁100ml、活性炭2g、蔗糖20g、琼脂6g，余量为2/3MS培养基；15～20 d后开始萌动，培养90d后诱导出初代的根状茎，诱导率可达90％以上。

C、继代增殖、分化、生根、壮苗：将根状茎接种于增殖、分化、生根、壮苗四合一培 养基中，培养温度26±2℃，光照强度2000lx，光照时间10h/d；直到获得出瓶苗或者每80～90 d继代转接1次，转接的培养基是增殖、分化、生根、壮苗四合一培养基中，培养温度26±2℃， 光照强度2000lx，光照时间10h/d，直到获得出瓶苗；所述的增殖、分化、生根、壮苗四合 一培养基每升含有：6-BA 0.1mg、NAA 0.5mg、土豆40g、活性炭2g、蔗糖20g、琼脂6 g，余量为2/3MS培养基。

出瓶苗就可以移栽，其具体步骤可以为：将出瓶苗用清水清洗后阴凉条件下晾干至苗的 根露白即可进行移栽，移栽基质为干净水苔，移栽后用800倍多菌灵淋透，保持适当通风和 足够的湿度，移栽的成活率均可达95％以上。

所述的步骤a的将外植体消毒处理后，剥去休眠芽的苞片后再进行消毒处理，优选为： 在超净工作台上将外植体先用体积分数75％酒精水溶液浸泡30S，无菌水冲洗后放入质量分 数0.1％HgC1溶液中浸泡5min左右，无菌水冲洗2～3次，再用0.1％HgC1溶液重复两次， 消毒两次后在无菌接种盘上剥去休眠芽的苞片，再放入质量分数0.05％HgC1溶液中浸泡2～ 3min，无菌水冲洗5～8次，获得表面消毒处理后的嫩芽。

所述的MS培养基是现有技术中公知的培养基，所述的2/3MS培养基是指大量元素的量 为MS培养基的2/3，其他不变。

本发明中的6-BA为6-苄氨基腺嘌呤，NAA为萘乙酸，这属于本领域的公知常识。

本发明先诱导出杂交兰根状茎，然后将杂交兰根状茎只接种到一种培养基中就可以使其 同时进行根状茎的增殖和不定芽的分化，生根以及苗的生长，繁殖效率高，节省了大量的人 力和物力，所采用的培养基也与已有报道的杂交兰组织培养所用的培养基不同。

本发明采用杂交兰‘黄金小神童’的嫩芽为外植体，进行组织培养诱导出根状茎，只用一种 培养基培养根状茎可同时完成根状茎的增殖以及苗的分化和生长，数量，出苗快，繁殖倍率 高，稳定性强，植株具有苗壮、品质高、抗性强的特点，可成功地开展杂交兰种苗快速繁殖 的工厂化生产，并为类似兰花的其他植物的组织培养提供方法。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

(1)外植体及其处理

选用保护栽培已开花健壮的优良杂交兰‘黄金小神童’单株的幼嫩芽作为外植体，先用百 菌清、链霉素淋施植株2次，控水7d后用锋利的手术刀片从基部切下幼嫩芽，然后在超净工 作台上先用体积分数75％酒精水溶液浸泡30S，无菌水冲洗后放入质量分数0.1％HgC1溶液 中浸泡5min左右，无菌水冲洗2～3次，再用质量分数0.1％HgC1溶液重复两次，消毒两次后 在无菌接种盘上剥去休眠芽的苞片，再放入质量分数0.05％HgC1溶液中浸泡2～3min，无菌 水冲洗5～8次，得到表面消毒处理后的嫩芽。

(2)诱导根状茎

在表面消毒处理后的嫩芽于基部切一新切口，基部向下插入根状茎诱导培养基，先放置 于(26±2)℃黑暗培养7～10d，然后光照培养，光照强度1000～2000lx，光照时间10h/d，培养温 度(26±2)℃。15～20d后开始萌动，培养90d后诱导出初代的根状茎，诱导率可达90％以上。

所述的根状茎诱导培养基每升含有6-BA 0.5mg、NAA 1mg、椰汁100ml、活性炭2g、 蔗糖20g、琼脂6g，余量为2/3MS培养基，pH 5.4左右，具体配制方法是将6-BA 0.5mg、NAA 1mg、椰汁100ml、活性炭2g、蔗糖20g、琼脂6g，放入2/3MS培养基中，再用2/3MS培养 基定容至1L，调pH值至5.4，高温消毒灭菌备用。

(3)继代增殖、分化、生根、壮苗

将根状茎接种于增殖、分化、生根、壮苗四合一培养基中，培养温度(26±2)℃，光照强 度2000lx，光照时间10h/d。培养容器为550ml兰花瓶，每瓶灌装增殖、分化、生根、壮苗四 合一培养基100ml，每80～90d继代转接1次，每代每瓶可出苗高8～13cm，叶片3～4张，茎粗 3～5mm，根2～4条，根长2～5cm的可移栽出瓶苗20～25株，另有苗高4～8cm，叶片1～3张， 茎粗1～3mm，根2～4条，根长1～2cm的小苗25～30株，将此类小苗转接至增殖、分化、生 根、壮苗四合一培养基中培养45～60d即可达到出瓶苗的标准；另每瓶根状茎增殖倍数2～3 倍，将根状茎再接于增殖、分化、生根、壮苗四合一培养基中继续进行继代增殖、分化、生 根、壮苗培养循环。一年一瓶根状茎可出瓶苗1000株以上。传统的方法都是从不定芽分化、 增殖、生根壮苗这几个阶段分开进行，一瓶杂交兰不定芽一年可出瓶苗500株左右而已。

所述的增殖、分化、生根、壮苗四合一培养基每升含有：6-BA 0.1mg、NAA 0.5mg、土 豆40g、活性炭2g、蔗糖20g、琼脂6g，余量为2/3MS培养基。将6-BA 0.1mg、NAA 0.5mg、 土豆40g、活性炭2g、蔗糖20g、琼脂6g，加入到2/3MS培养基中，然后用2/3MS培养基 定容至1L，由此得到增殖、分化、生根、壮苗四合一培养基，灭菌备用。

(4)移栽

将出瓶苗用清水清洗后阴凉条件下晾干至苗的根露白即可进行移栽，移栽基质为干净水 苔，移栽后用800倍多菌灵淋透，保持适当通风和足够的湿度，移栽的成活率均可达95％以上。