建鲤原代肝细胞的分离培养方法

摘要

本发明公开了建鲤原代肝细胞的分离培养方法，选取健康无伤的建鲤，从建鲤尾静脉处采血，完毕后对鱼体表面消毒，放入超净台内无菌采集建鲤肝脏；用含双抗的PBS溶液漂洗，加入胰酶消化液，消化处理温度为26~28℃，时间为15-20min；消化结束后加入培养基A终止消化，消化液经过200目过滤网进行过滤，收集滤液；分别用50g和30g各离心5min，然后用培养基B进行洗涤2次，去除上清液，得到沉淀即为提取的肝细胞，制成细胞悬液，铺板培养。本实验方法简单快捷，能很大程度上节约分离时间，本实验所用分离时间大约为40min，且获得的肝细胞生长状况良好，红细胞数量少，细胞存活率在95%左右。