一种从苦丁茶中提取苦丁茶皂甙的方法

摘要

本发明公开了一种从苦丁茶中提取苦丁茶皂甙的方法，包括下述步骤:原料处理、高压微射流超微粉碎处理、高压提取，收集提取完后得到的提取液，离心，上清液进行AB-8树脂柱层析，再用50-60％的乙醇溶液洗脱，经浓缩、喷雾干燥，得到苦丁茶皂甙。具有含量高，提取率高，工艺简单，适合生产，生产成本低等优点。

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域的提取方法，具体说是一种从苦丁茶中提取苦丁茶皂甙的方法。

背景技术

苦丁茶(Ilex kudingcha C.J.Tseng)，英文名：Leaf of ChineseHolly,leaf of Broadleaf Holly，是冬青科冬青属苦丁茶种常绿乔木，俗称茶丁、富丁茶、皋卢茶，主要分布在西南地区(四川、重庆、贵州、湖南、湖北)及华南地区(江西、云南、广东、福建、海南)等地，是我国一种传统的纯天然保健饮料佳品。苦丁茶中含有苦丁皂甙、氨基酸、维生素C、多酚类、黄酮类、咖啡碱、蛋白质等200多种成分。其成品茶清香有苦味、而后甘凉，具有清热消暑、明目益智、生津止渴、利尿强心、润喉止咳、降压减肥、抑癌防癌、抗衰老、活血脉等多种功效，素有“保健茶”、“美容茶”、“减肥茶”、“降压茶”、“益寿茶”等美称。袋泡苦丁茶、苦丁茶冲剂、苦丁茶含片、复合型苦丁茶等多种保健食品。

但苦丁茶中的某种生物碱成分具有苦寒特性，因此不是人人都适宜饮用苦丁茶，患了风寒感冒的人、虚寒体质的人、慢性胃肠炎患者不能饮用，经期女性和新产妇也不适宜饮用。并且苦丁茶成分复杂，其有效成分含量有限，作为药物使用时的使用量较大，但苦丁茶苦味浓，口感不好，不宜被接受。为了去除苦丁茶中苦寒物质，保留其活性成分，需要对苦丁茶中进行提纯处理，作为植物活性成分的提取多采用溶剂萃取法、大孔树脂吸附法、溶剂沉淀法、溶剂沉淀法、胆甾醇沉淀法、铅盐沉淀法、层析法等方法。但这些方法存在一些缺陷，例如：溶剂萃取法耗时长，易出现乳化层，严重影响总甙的萃取效果和纯度，此法不宜对大量样品的处理；大孔树脂吸附法：植物中的油脂、亲脂成分或者低极性成分易于与大孔树脂结合，在树脂表面涂上一层油脂层，并且在大孔树脂的溶剂洗脱为水或亲水溶剂时，就会大大降低大孔树脂的吸附载量，严重影响分离效果；溶剂沉淀法需要加入高倍量的有机溶剂，有机溶剂用量大，对环境有污染，且浓缩较为困难，提取物纯度也低，还存在有机溶剂残留问题；胆甾醇沉淀法:苦丁茶甙与甾醇形成的分子复合物不太稳定，不适合用胆甾醇沉淀法提纯；铅盐沉淀法：工艺较复杂，除铅工艺难，重金属铅含量高，产品颜色很深，很难达到食品和药品标准要求；层析法：此法与树脂法工艺类似，也有和大孔树脂吸附法一样的缺陷，另外层析用氧化铝的粒度太大分离效果差，粒度太小溶剂流速慢，容易使谱带扩散。

发明内容

本发明的目的是提供一种从苦丁茶中提取苦丁茶皂甙的方法，具有工艺简单，适合生产，生产成本低等优点，由该方法提取所得的产品中苦丁茶皂甙含量在95％以上，提取率85％以上。

本发明通过以下技术方案实现，具体包括如下步骤：

1)原料处理：将苦丁茶的叶片粉碎；

2)高压微射流超微粉碎处理：将粉碎后的苦丁茶按照1:8-10的重量比加入纯净水，用高速剪切乳化机处理10-20min，转速为8000-12000r/min，然后用高压微射流超微粉碎设备于25℃进行处理，处理压力为80-120MPa，处理次数为2-4次，得到膏状浆液；

3)高压提取：将步骤1)得到的膏状浆液，放入高压罐中，加入相同重量的纯净水，加压至4kgf/cm²，使其压力均匀，并保持10-15min，恢复常压，得到提取液；

4)收集高压提取后得到的提取液，离心，上清液进行AB-8树脂柱层析，再用50-60％的乙醇溶液洗脱，经浓缩、喷雾干燥，得到苦丁茶皂甙。

本发明步骤1)所述的苦丁茶为冬青科植物枸骨或/和大叶冬青或/和苦丁茶冬青的叶。

步骤4)所述的AB-8树脂柱，树脂用量为上清液重量的40-60倍。

本发明得到的苦丁茶皂甙，经HPLC检测，含量在95％以上。

与现有技术相比，本发明的优点：

1、现有技术在进行苦丁茶皂甙等成分的提取时，前处理一般都是以水或乙醇等为溶剂，通过加热提取来将有效成分溶出，而本发明采用高压微射流超微粉碎来处理苦丁茶原料，结合高压提取，相比加热提取，经过高压超微粉碎作用，使得苦丁茶中含有的咖啡碱、皂甙、鞣质、苦味质等成分能充分溶出，利于后续工艺的处理，利于提高活性成分的收率，而且，避免了高温对苦丁茶有效成分的破坏。

2、现有技术得到的苦丁茶皂甙含量一般不超过95％，本发明采用高压微射流超微粉碎技术、高压提取和柱层析吸附技术的结合，随着高压微射流超微粉碎技术的加入，使得本发明的技术结合出现质的提高，相比水提或醇提后柱层析，本发明时间短，苦丁茶皂甙含量高；相比超临界CO₂流体萃取加柱层析，本发明提取率85％以上。

3、本发明避免了无水乙醇、甲醇等大量有机溶剂的使用，更加环保。

具体实施方式

下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。

实施例1：

一种从苦丁茶中提取苦丁茶皂甙的方法，具体包括如下步骤：

1)原料处理：将大叶冬青的叶片100kg粉碎；

2)高压微射流超微粉碎处理：将粉碎后的苦丁茶加入800kg纯净水，用高速剪切乳化机处理10min，转速为12000r/min，然后用高压微射流超微粉碎设备于25℃进行处理，处理压力为100MPa，处理次数为3次，得到膏状浆液；

3)高压提取：将步骤1)得到的膏状浆液，放入高压罐中，加入相同重量的纯净水，加压至4kgf/cm²，使其压力均匀，并保持10min，恢复常压，得到提取液；

4)收集高压提取后得到的提取液，离心，上清液进行AB-8树脂柱层析，再用50-60％的乙醇溶液洗脱，经浓缩、喷雾干燥，得到苦丁茶皂甙。

实施例2：

一种从苦丁茶中提取苦丁茶皂甙的方法，具体包括如下步骤：

1)原料处理：将苦丁茶冬青的叶片100kg粉碎；

2)高压微射流超微粉碎处理：将粉碎后的苦丁茶加入纯净水1000kg，用高速剪切乳化机处理15min，转速为10000r/min，然后用高压微射流超微粉碎设备于25℃进行处理，处理压力为80MPa，处理次数为4次，得到膏状浆液；

3)高压提取：将步骤1)得到的膏状浆液，放入高压罐中，加入相同重量的纯净水，加压至4kgf/cm²，使其压力均匀，并保持12min，恢复常压，得到提取液；

4)收集高压提取后得到的提取液，离心，上清液进行AB-8树脂柱层析，再用50-60％的乙醇溶液洗脱，经浓缩、喷雾干燥，得到苦丁茶皂甙。

实施例3：

1)原料处理：将枸骨和大叶冬青的叶片100kg粉碎；

2)高压微射流超微粉碎处理：将粉碎后的苦丁茶加入纯净水900kg，用高速剪切乳化机处理20min，转速为8000r/min，然后用高压微射流超微粉碎设备于25℃进行处理，处理压力为120MPa，处理次数为2次，得到膏状浆液；

3)高压提取：将步骤1)得到的膏状浆液，放入高压罐中，加入相同重量的纯净水，加压至4kgf/cm²，使其压力均匀，并保持15min，恢复常压，得到提取液；

4)收集高压提取后得到的提取液，离心，上清液进行AB-8树脂柱层析，再用50-60％的乙醇溶液洗脱，经浓缩、喷雾干燥，得到苦丁茶皂甙。

结果：