N-取代的吲哚啉-2-酮-3-肼基二硫代甲酸酯及其制备方法和用途

摘要

本发明公开了通式(I)所示的N-取代的吲哚啉-2-酮-3-肼基二硫代甲酸酯，其中，各取代基的定义详见说明书。此外，还公开了上述化合物的制备方法、其药用组合物。该通式(I)所示的化合物对人乳腺癌(MFC-7)、人结肠癌(HCT-116)细胞的增殖具有抑制作用，可用作抗肿瘤药物。

说明书

技术领域

本发明涉及药物化学领域，更具体地说涉及N-取代的吲哚啉-2-酮-3- 肼基二硫代甲酸酯类化合物，及其制备方法和和它们在抗肿瘤药物中的应 用。

背景技术

吲哚啉-2-酮是一种重要的杂环母体，对其苯环、C3位进行结构修饰， 有可能获得具有显著抗肿瘤活性的衍生物。例如，Sunitinib(SU-11248)(舒 尼替尼)是一种5-氟-3-取代的吲哚啉-2-酮衍生物，已被美国FDA批准用于 治疗晚期肾癌和胃肠道间质瘤[Prakash,C.R.；Raja,S.Indolinones as  promising scaffold as kinase inhibitors:A Review.Mini-Rev.Med.Chem.2012, 12,98–119]。

研究发现，在吲哚啉-2-酮的N1位引入取代基，也可以得到具有良好 抗肿瘤活性的化合物。例如，Lv等[Lv,K.；Wang,L.L.；Liu,M.L.；Zhou,X. B.；Fan,S.Y.；Liu,H.Y.；Zheng,Z.B.；Li,S.Synthesis and antitumor activity  of 5-[1-(3-(dimethylamino)propyl)-5-halogenated-2-oxoindolin-(3Z)- ylidenemethyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxamides.Bioorg.Med.Chem. Lett.2011,21,3062–3065]将3-(二甲基氨基)丙基引入吲哚啉-2-酮的N1位， 合成了16个吲哚酮衍生物。用MTT法测试了其对IM-9、A549、HL-60、 K-562和MDA-MB-231细胞系的体外抗肿瘤活性，结果表明，化合物Ia-d (IC₅₀值为0.45-5.08μM)的抗肿瘤活性强于舒尼替尼(IC₅₀值为1.35-6.61 μM)。

从十字花科植物(crucifers)分离出的植物抗毒素Brassinin，在吲哚环上 连有氨基二硫代甲酸酯的侧链(结构如下式所示)[Pedras,M.S.C.,Okanga, F.I.,Zaharia,I.L.,Khan,A.Q.Phytoalexins from crucifers:synthesis, biosynthesis,and biotransformation.Phytochemistry 2000,53,161–176]。研究 表明，Brassinin对癌症具有化学预防作用[Metha,R.G.,Liu,J.,Constantinou, A.,Thomas,C.F.,Hawthorne,M.,You,M.,C.,Pezutto,J.M., Moon,R.C.,Moriarty,M.R.Cancer chemopreventive activity of brassinin,a  phytoalexin from cabbage.Carcinogenesis 1995,16,399–404]，对小鼠白血病 L1210和黑色素瘤B16细胞[Sabol,M.,Kutschy,P.,Siegfried,L.,A., M.,Hrbková,H.Dzurilla,M.,Maruskova,R..Starkova,J.,Paulikova,E. Cytotoxic effect of cruciferous phytoalexins against murine L1210leukemia  and B16melanoma.Biologia 2000,55,701–707]、人白血病T-Jurkat细胞的 增殖具有抑制作用[Pilátová,M.,M.,Kutschy,P.,A, Mezencev,R.,Z.,M.,Monde,K.,Mirossay,L.,J. Cruciferous phytoalexins:antiproliferative effects in T-Jurkat leukemic cells. Leuk.Res.2005,29,415–421.]。构效关系研究表明，氨基二硫代甲酸酯是 Brassinin发挥肿瘤预防和抑制作用的关键基团[Gaspari,P.,Banerjee,T., Malachowski,W.P.,Muller,A.J.,Prendergast,G.C.,DuHadaway,J.,Bennett, S.,Donovan,A.M.Structure-activity study of brassinin derivatives as  indoleamine 2,3-dioxygenase inhibitors.J.Med.Chem.2006,49(2),684–692]。

发明内容

本发明人通过亚胺键将肼基二硫代甲酸酯结构片段引入到吲哚啉-2- 酮的3位，同时在N1位引入取代基，所合成的化合物对人乳腺癌MCF-7、 结肠癌HCT-116细胞具有抗增殖作用。

本发明的目的是提供一种N-取代的吲哚啉-2-酮-3-肼基二硫代甲酸酯。

本发明的另一个目的是提供上述N-取代的吲哚啉-2-酮-3-肼基二硫代 甲酸酯的制备方法。

本发明的另一个目的是提供包含上述N-取代的吲哚啉-2-酮-3-肼基二 硫代甲酸酯的药用组合物。

本发明的另一个目的是提供上述N-取代的吲哚啉-2-酮-3-肼基二硫代 甲酸酯或包含其的药用组合物在制备抗癌药物中的用途。

具体地说，本发明提供了一种N-取代的吲哚啉-2-酮-3-肼基二硫代甲 酸酯，如通式(I)所示：

其中，式(I)中

R₁为-NR₂(R₃)，R₂和R₃各自独立地选自氢或C1-C4烷基，或R₂和R₃及其所连接氮原子一起形成含至少一个氮原子的未取代的四至七元杂环、 或取代的四至七元杂环，这里，所述取代的四至七元杂环是指该杂环被任 意个C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、或C1-C4烷氧羰酰基所取代；这里，所 述的C1-C4烷基选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔 丁基；所述的C1-C4烷氧基选自甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、 正丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基；所述C1-C4烷氧羰酰基选自甲氧羰酰基、 乙氧羰酰基、正丙氧羰酰基、异丙氧羰酰基、正丁氧羰酰基、异丁氧羰酰 基或叔丁氧羰酰基；

R₄、R₅、R₆和R₇各自独立地选自氢、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、卤 素、硝基、或羟基；这里，所述的C1-C4烷基选自甲基、乙基、正丙基、 异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基；所述的C1-C4烷氧基选自甲氧基、乙 氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基；所述卤素 选自氟、氯、溴或碘；

优选地，R₄、R₅、R₆和R₇各自独立地选自氢、甲基、甲氧基、氟、 氯、溴、碘、硝基、或羟基；更优选地，R₄、R₅和R₆其中一个为甲基、 甲氧基、氟、氯、溴、碘、硝基、或羟基，而R₄、R₅和R₆中其余两个以 及R₇都为氢；或者，R₅和R₇各自独立地为甲基、甲氧基、氟、氯、溴、 碘、硝基、或羟基，而R₄和R₆都为氢；

这里，所述含至少一个氮原子的未取代的四至七元杂环选自四氢吡咯 烷、吗啉、哌啶、或哌嗪；所述取代的四至七元杂环选自2-甲基哌啶、4- 甲基哌啶、4-甲基哌嗪、或4-叔丁氧羰酰基哌嗪。

作为一种优选地实施方案，本发明提供的式(I)化合物为下列式(II) 化合物：

其中，式(II)中R¹的定义如式(I)化合物。

作为一种优选地实施方案，本发明提供的式(I)化合物为下列式(III) 化合物：

其中，式(III)中R₄、R₅、R₆和R₇的定义如式(I)化合物。

在本发明的一种实施方案中，本发明提供的一种上述通式(I)化合物， 其选自下列化合物：

N’-(1-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代 甲酸甲酯(化合物5a)；

4-(2-(5-甲基-3-(N’-(甲基巯基硫代羰基)腙基)-2-氧代吲哚-1-基)乙基) 哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物5b)；

N’-(5-甲基-1-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二 硫代甲酸甲酯(化合物5c)；

N’-(5-甲基-1-(2-(4-甲基哌啶-1-基)乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二 硫代甲酸甲酯(化合物5d)；

N’-(5-甲基-1-(2-(2-甲基哌啶-1-基)乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二 硫代甲酸甲酯(化合物5e)；

N’-(5-甲基-2-氧代-1-(2-(哌啶-1-基)乙基)吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲 酸甲酯(化合物5f)；

N’-(5-甲基-1-(2-吗啉乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸甲酯 (化合物5g)；

N’-(5-甲基-2-氧代-1-(2-(吡咯-1-基)乙基)吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲 酸甲酯(化合物5h)；

N’-(1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸甲酯(化 合物7a)；

N’-(4-溴-1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸甲酯 (化合物7b)；

N’-(4-氯-1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸甲酯 (化合物7c)；

N’-(5-甲氧基-1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸 甲酯(化合物7d)；

N’-(5-溴-1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸甲酯 (化合物7e)；

N’-(5-氯-1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸甲酯 (化合物7f)；

N’-(5-氟-1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸甲酯 (化合物7g)；

N’-(1-(2-吗啉基乙基)-5-硝基-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸 甲酯(化合物7h)；

N’-(6-溴-1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸甲酯 (化合物7i)；

N’-(6-氯-1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸甲 酯(化合物7j)；或

N’-(5,7-二溴-1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸 甲酯(化合物7k)。

另一方面，本发明提供了如通式(I)所示N-取代的吲哚啉-2-酮-3-肼 基二硫代甲酸酯的制备方法，包括如下步骤：

式(IV)化合物与式(V)化合物反应，得到式(I)化合物

这里，式(IV)化合物中的取代基R₁、R₄、R₅、R₆和R₇的定义如式 (I)化合物。

本发明提供的如通式(I)所示N-取代的吲哚啉-2-酮-3-肼基二硫代甲 酸酯的制备方法，其中，式(I)化合物为式(II)化合物时，可以通过下 列工艺来制备：

如路线1所示，按照Shibinskaya等[Shibinskaya,M.O.；Lyakhov,S.A.； Mazepa,A.V.；Andronati,S.A.；Turov,A.V.；Zholobak,N.M.；Spivak,N.Y. Synthesis,cytotoxicity,antiviral activity and interferon inducing ability of  6-(2-aminoethyl)-6H-indolo[2,3-b]quinoxalines.Eur.J.Med.Chem.2010,45, 1237–1243]报道的方法，在碳酸钾存在下，将5-甲基-吲哚啉-2,3-二酮(1e) 与1,2-二溴乙烷在DMF中反应，得到1-(2-溴乙基)-5-甲基吲哚啉-2,3-二酮 (2e)。2e与不同的开链及环状仲胺在DMF中反应，得到中间体3a-h。同 时，按照Klayman等[Klayman,D.L.；Bartosevich,J.F.；Griffin,T.S.； Mason,C.J.；Scovill,J.P.2-Acetylpyridine thiosemicarbazones.1.a new  class of potential antimalarial agents.J.Med.Chem.1979,22(7),855–862]报 道的方法，制备肼基二硫代甲酸甲酯(4)。最后，以无水甲醇为溶剂，将中 间体3a-h分别与4在室温下反应，得到目标化合物5a-h。

路线1.化合物5a-h的合成路线

试剂及反应条件:(a)BrCH₂CH₂Br,DMF,K₂CO₃,回流,13h.(b)R₁H,DMF, rt,6-48h.(c)肼基二硫代甲酸甲酯(4),MeOH,rt,24h；

这里，式(VI)化合物和R₁H中R₁的定义如上式(II)化合物。

本发明提供的如通式(I)所示N-取代的吲哚啉-2-酮-3-肼基二硫代甲 酸酯的制备方法，其中，式(I)化合物为式(III)化合物时，式(III)化 合物可以通过下列工艺来制备：

如路线2所示，将不同的吲哚啉-2,3-二酮(1a-d,f-h,j-l)与1,2-二溴乙 烷在DMF中反应，得到1-(2-溴乙基)-吲哚啉-2,3-二酮(2a-d,f-h,j-l)。参 考Vine等[Vine,K.L.；Locke,J.M.；Ranson,M.；Pyne,S.G.；Bremner,J.B.； In vitro cytotoxicity evaluation of some substituted isatin derivatives.Bioorg. Med.Chem.2007,15,931–938]报道的方法，将1-(2-溴乙基)吲哚啉-2,3-二酮 (2a)与浓硫酸的混合液滴加到硝酸钾的浓硫酸溶液中，在0-4℃反应3h， 得到中间体2i。然后，将中间体2a-d,f-l与吗啉在DMF中反应，得到中 间体6a-k。最后，以无水乙醇为溶剂，通过6a-k与肼基二硫代甲酸甲 酯(4)的缩合反应，得到化合物7a-k。

路线2.化合物7a-k的合成路线.

试剂和反应条件:(a)BrCH₂CH₂Br,DMF,K₂CO₃,回流,8-16h.(b)H₂SO₄, KNO₃,0-4℃,3h.(c)吗啉,DMF,rt,24h.(d)肼基二硫代甲酸甲酯.(4) EtOH,rt,24-28h.

第三方面，本发明提供了一种包含上述N-取代的吲哚啉-2-酮-3-肼基 二硫代甲酸酯的药用组合物。该药用组合物包括药理学上有效量的式(I) 化合物和药学上可接受的辅料。对于本领域技术人员而言，这些辅料都是 已知的，例如，生理盐水，明胶，阿拉伯树胶，乳糖，微晶纤维素，淀粉， 改性淀粉，纤维素，改性纤维素，羟乙酸钠，磷酸氢钙，硬脂酸镁，滑石， 胶体二氧化硅等。此外，这些组合物还可进一步地包含：稳定剂，润湿剂， 乳化剂，甜味剂，香味剂，缓冲剂等。

本发明提供的包含上述N-取代的吲哚啉-2-酮-3-肼基二硫代甲酸酯的 药用组合物，根据需要，能够配制成用于口服给药的固体或液体形式，如 片剂、丸剂、口服液等；用于非肠道给药的无菌溶液、悬浮液或乳液形式， 喷雾剂等。

例如，片剂配方：

制备方法为：将原辅料过100目筛，然后混合均匀；用90％的乙醇制 软材，制粒，整粒，加入硬脂酸镁混匀，压片即得。

注射剂配方：

制备方法：

将甘露醇加入1600mL注射用水中，搅拌溶解；将本发明实施例化合 物加入上述溶液，搅拌溶解；4％的磷酸氢二钠溶液调pH值为4.15；加注 射用水至2000mL，加入活性炭，50℃保温搅拌20min，过滤脱炭；用0.22 μm的微孔滤膜过滤，灌封。121℃，15min高温湿热灭菌。

另一方面，本发明提供了式(I)化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。 本发明的化合物可用于治疗乳腺癌，结肠癌等。

实验证明，本发明的式(I)的化合物具有抗肿瘤活性，对人乳腺癌 (MCF-7)、结肠癌(HCT-116)细胞的增殖具有抑制作用，可作为抗肿瘤 药物或作为抗肿瘤活性成分用于抗肿瘤药物组合物。用药的参考剂量为 0.1-10mg/kg体重，使用方法为口服或静脉注射。

具体实施方式

以下通过实施例来示例性说明本发明的实施方案，对于本领域的普通 技术人员而言，在本发明的教导下，根据现有技术，对本发明实施方案进 行的改进，仍属于本发明的保护范围内。

实施例中使用的化合物原料的来源是：4-溴吲哚啉-2,3-二酮、4-氯吲 哚啉-2,3-二酮、6-溴吲哚啉-2,3-二酮、6-氯吲哚啉-2,3-二酮和5-甲氧基吲 哚啉-2,3-二酮购买于TCI公司，其它试剂和原料为国产分析纯或化学纯试 剂。

实施例中使用的人乳腺癌(MCF-7)和结肠癌(HCT-116)细胞来自 首都师范大学DNA损伤应答北京市重点实验室。

熔点用XT5B或X-4型精密显微熔点仪(控温型)测定(北京福凯仪器有 限公司)，温度未校正。核磁共振氢谱(¹H NMR)用Varian NMR system 600 MHz超导核磁共振谱仪测定，TMS为内标。电子轰击质谱(EI-MS)用岛津 公司的GCMS-QP2010Plus气相色谱质谱联用仪测定。电喷雾高分辨质谱 (ESI-HRMS)用Thermo Scientific LTQ Orbitrap Discovery质谱仪测定。

准备例1

1-(2-溴乙基)吲哚啉-2,3-二酮(化合物2a-h,j-l)的合成通法

将不同的吲哚啉-2,3-二酮(化合物1a-h,j-l)(5mmol)溶于N,N-二甲基 甲酰胺(5mL)，加入研细的碳酸钾粉末(1.00g,7.2mmol)和1,2-二溴乙烷 (2.82g,15mmol)，加热回流反应8-16h(TLC监测，至原料点消失)。反应 液冷却至室温，倾入冰水中，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相， 无水硫酸钠干燥过夜。旋转蒸发除去溶剂，残余物上样至硅胶柱色谱，用 二氯甲烷洗脱，得中间体2a-h,j-l。

1-(2-溴乙基)吲哚啉-2,3-二酮(2a)

收率:44％,红色固体,m.p.122-125℃(文献值m.p.126-128℃),¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ:3.72(t,J＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br),4.12(t,J ＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br),7.16(t,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮5-H), 7.31(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮7-H),7.58(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚 啉-2,3-二酮4-H),7.68(t,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮6-H). ESI-HRMS m/z:C₁₀H₉BrNO₂([M+H]⁺)计算值:253.9817,255.9796；实测值: 253.9814,255.9792.

4-溴-1-(2-溴乙基)吲哚啉-2,3-二酮(2b)

收率:55％,黄色固体,m.p.190-193℃,¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆) δ:3.69(t,J＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br),4.12(t,J＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br), 7.32(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮5-H),7.33(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚 啉-2,3-二酮7-H),7.55(t,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮6-H). ESI-HRMS m/z:C₁₀H₈Br₂NO₂([M+H]⁺)计算值:331.8922,333.8901, 335.8881；实测值:331.8919,333.8910,335.8882.

1-(2-溴乙基)-4-氯吲哚啉-2,3-二酮(2c)

收率:38％,红色固体,m.p.145-149℃,¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆) δ:3.69(t,J＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br),4.12(t,J＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br), 7.16(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮5-H),7.29(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚 啉-2,3-二酮7-H),7.65(t,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮6-H). ESI-HRMS m/z:C₁₀H₈BrClNO₂([M+H]⁺)计算值:287.9427,289.9406；实测 值:287.9423,289.9403.

1-(2-溴乙基)-5-甲氧基吲哚啉-2,3-二酮(2d)

收率:40％,红褐色固体,m.p.138-141℃,¹H NMR(600MHz, DMSO-d₆)δ:3.71(t,J＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br),3.78(s,3H,OCH₃),4.09(t, J＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br),7.16(d,J＝1.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮4-H), 7.24-7.28(m,2H,吲哚啉-2,3-二酮6-H,7-H).ESI-HRMS m/z:C₁₁H₁₁BrNO₃([M+H]⁺)计算值:283.9922,285.9902；实测值:283.9916,285.9896.

1-(2-溴乙基)-5-甲基吲哚啉-2,3-二酮(2e)

收率:63％,红色固体红色固体,m.p.128.4-129.2℃,¹H NMR(600 MHz,DMSO-d₆)δ:2.29(s,3H,CH₃),3.71(t,J＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br), 4.09(t,J＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br),7.20(dd,J＝7.8,2.4Hz,1H,吲哚啉 -2,3-二酮6-H),7.39(d,J＝2.4Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮4-H),7.49(d,J＝ 7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮7-H).ESI-HRMS m/z:C₁₁H₁₁BrNO₂([M+H]⁺) 计算值:267.9973,269.9953；实测值:267.9969,269.9951.

5-溴-1-(2-溴乙基)吲哚啉-2,3-二酮(2f)

收率:48％,红色固体,m.p.112-115℃,¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆) δ:3.69(t,J＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br),4.12(t,J＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br), 7.31(d,J＝8.4Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮7-H),7.74(s,1H,吲哚啉-2,3-二酮 4-H),7.85(d,J＝8.4Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮6-H).ESI-HRMS m/z: C₁₀H₈Br₂NO₂([M+H]⁺)计算值:331.8922,333.8901,335.8881；实测值: 331.8918,333.8903,335.8880.

1-(2-溴乙基)-5-氯吲哚啉-2,3-二酮(2g)

收率:35％,红色固体,m.p.116-118℃,¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆) δ:3.69(t,J＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br),4.12(t,J＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br), 7.36(d,J＝8.4Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮7-H),7.64(s,1H,吲哚啉-2,3-二酮 4-H),7.73(d,J＝8.4Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮6-H).ESI-HRMS m/z: C₁₀H₈BrClNO₂([M+H]⁺)计算值:287.9427,289.9406；实测值:287.9421, 289.9402.

1-(2-溴乙基)-5-氟吲哚啉-2,3-二酮(2h)

收率:67％,红色固体,m.p.105-107℃(Lit.[Feng,L.S.；Liu,M.L.； Wang,B.；Chai,Y.；Hao,X.Q.；Meng,S.；Guo,H.Y.Synthesis and in vitro  antimycobacterial activity of balofloxacin ethylene isatin derivatives.Eur.J. Med.Chem.2010,45,3407-3412.]m.p.109-110℃),¹H NMR(600MHz, DMSO-d₆)δ:3.70(t,J＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br),4.12(t,J＝6.6Hz,2H, NCH₂CH₂Br),7.36(dd,J＝9.0,3.6Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮7-H),7.49(dd, J＝7.2,2.4Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮4-H),7.56(td,J＝9.0,2.4Hz,1H,吲 哚啉-2,3-二酮6-H).ESI-HRMS m/z:C₁₀H₈BrFNO₂([M+H]⁺)计算值: 271.9722,273.9702；实测值:271.9719,273.9700.

6-溴-1-(2-溴乙基)吲哚啉-2,3-二酮(2j)

收率:34％,黄色固体,m.p.155-158℃,¹H NMR(600MHz, DMSO-d₆)δ:3.70(t,J＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br),4.13(t,J＝6.6Hz,2H, NCH₂CH₂Br),7.35(dd,J＝7.8,1.2Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮5-H),7.50(d,J ＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮4-H),7.68(s,1H,吲哚啉-2,3-二酮7-H). ESI-HRMS m/z:C₁₀H₈Br₂NO₂([M+H]⁺)计算值:331.8922,333.8901, 335.8881；实测值:331.8916,333.8900,335.8878.

1-(2-溴乙基)-6-氯吲哚啉-2,3-二酮(2k)

收率:45％,黄色固体,m.p.132-135℃,¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆) δ:3.70(t,J＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br),4.13(t,J＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br), 7.20(dd,J＝7.8,1.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮5-H),7.55(d,J＝1.8Hz,1H, 吲哚啉-2,3-二酮7-H),7.59(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮4-H). ESI-HRMS m/z:C₁₀H₈BrClNO₂([M+H]⁺)计算值:287.9427,289.9406；实测 值:287.9422,289.9403.

5,7-二溴-1-(2-溴乙基)吲哚啉-2,3-二酮(2l)

收率:78％,黄色固体,m.p.103-106℃,¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ: 3.60(t,J＝7.2Hz,2H,NCH₂CH₂Br),4.56(t,J＝7.2Hz,2H,NCH₂CH₂Br), 7.72(d,J＝1.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮6-H),7.90(d,J＝1.8Hz,1H,吲哚 啉-2,3-二酮4-H).ESI-HRMS m/z:C₁₀H₆Br₃NNaO₂([M+Na]⁺)计算值: 431.7846,433.7826,435.7805,437.7785；实测值:431.7845,433.7817, 435.7791,437.7768.

1-(2-溴乙基)-5-硝基吲哚啉-2,3-二酮(2i)的制备

在冰水浴冷却的硝酸钾(0.81g,8.0mmol)和浓硫酸(16mL)的混合液 中，分批加入1-(2-溴乙基)吲哚啉-2,3-二酮(2a)(2.03g,8.0mmol)，保持温 度在0-4℃。加毕，缓慢升至室温，继续反应3h。将反应液倾入冰水中， 滤集析出的固体，晾干，乙醇重结晶，得黄色固体0.77g，收率37％，m.p. 130-132℃。¹H NMR(600MHz,CDCl₃):3.69(t,J＝6.6Hz,2H, NCH₂CH₂Br),4.26(t,J＝6.6Hz,2H,NCH₂CH₂Br),7.21(d,J＝9.0Hz,1H, 吲哚啉-2,3-二酮7-H),8.50(d,J＝2.4Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮4-H),8.56 (dd,J＝9.0,2.4Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮6-H).ESI-HRMS m/z: C₁₀H₈BrN₂O₄([M+H]⁺)计算值:298.9667,300.9647；实测值:298.9664, 300.9646.

N-取代的吲哚啉-2,3-二酮3a-h和6a-k的合成通法

将不同的1-(2-溴乙基)吲哚啉-2,3-二酮2a-l(1mmol)溶于DMF(5 mL)，加入二乙胺或不同的含氮杂环化合物(对于3a-h)，或吗啉(对于6a-k) (4mmol)，室温搅拌6-48h。将反应液倾入水中，乙酸乙酯萃取(20mL×3)， 合并有机相，无水硫酸钠干燥。旋转蒸发除去溶剂，残余物用硅胶柱色谱 法(洗脱液:CH₂Cl₂/CH₃OH＝99:1,v/v)提纯，得中间体3a-h和6a-k。

5-甲基-1-(2-(二乙基氨基)乙基)吲哚啉-2,3-二酮(3a)

未经提纯，直接用于下步反应。

4-(2-(5-甲基-2,3-二氧代吲哚啉-1-基)乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3b)

收率:50％,红色油状物.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ:1.45(s,9H, (CH₃)₃CO),2.34(s,3H,CH₃),2.46(t,J＝5.4Hz,4H,哌嗪-H),2.64(t,J＝6.6 Hz,2H,哌嗪-CH₂),3.37(br s,4H,哌嗪-H),3.83(t,J＝6.6Hz,2H,吲哚啉 -2,3-二酮-CH₂),6.81(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮7-H),7.38(d,J＝ 7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮6-H),7.41(s,1H,吲哚啉-2,3-二酮4-H). ESI-HRMS m/z:C₂₀H₂₈N₃O₄([M+H]⁺)计算值:374.2080；实测值:374.2071.

5-甲基-1-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)吲哚啉-2,3-二酮(3c)

收率:52％,红色油状物.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ:2.29(s,3H, NCH₃),2.34(s,3H,CH₃),2.41(br s,4H,哌嗪-H),2.57(br s,4H,哌嗪-H), 2.63(t,J＝6.6Hz,2H,哌嗪-CH₂),3.83(t,J＝6.6Hz,2H,吲哚啉-2,3-二酮 -CH₂),6.82(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮7-H),7.38(d,J＝7.8Hz,1H, 吲哚啉-2,3-二酮6-H),7.41(s,1H,吲哚啉-2,3-二酮4-H).ESI-HRMS m/z: C₁₆H₂₂N₃O2([M+H]⁺)计算值:288.1712；实测值:288.1704.

5-甲基-1-(2-(4-甲基哌啶-1-基)乙基)吲哚啉-2,3-二酮(3d)

收率:60％,红色油状物.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ:0.91(d,J＝6.6 Hz,3H,哌啶-CH₃),1.18(m,2H,哌啶-H),1.35(br s,1H,哌啶-H),1.60(d,J ＝13.2Hz,2H,哌啶-H),2.05(t,J＝11.4Hz,2H,哌啶-H),2.33(s,3H, CH₃),2.60(t,J＝6.6Hz,2H,哌啶-CH₂),2.91(d,J＝10.2Hz,2H,哌啶-H), 3.83(t,J＝6.6Hz,2H,吲哚啉-2,3-二酮-CH₂),6.85(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚 啉-2,3-二酮7-H),7.37(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮6-H),7.40(s, 1H,吲哚啉-2,3-二酮4-H).ESI-HRMS m/z:C₁₇H₂₃N₂O₂([M+H]⁺)计算值: 287.1760；实测值:287.1755.

4.3.4.5-甲基-1-(2-(2-甲基哌啶-1-基)乙基)吲哚啉-2,3-二酮(3e)

收率:45％,红色油状物.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ:1.02(br s,3H, CH₃),1.26-1.69(m,8H,哌啶-H),2.33(s,3H,CH₃),2.54(br s,1H,哌啶-H), 2.96(br s,2H,哌啶-CH₂),3.81(br s,吲哚啉-2,3-二酮-CH₂),6.86(d,J＝8.4 Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮7-H),7.38(d,J＝8.4Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮 6-H),7.40(s,1H,吲哚啉-2,3-二酮4-H).ESI-HRMS m/z:C₁₇H₂₃N₂O₂([M+H]⁺)计算值:287.1760；实测值:287.1684.

5-甲基-1-(2-(哌啶-1-基)乙基)吲哚啉-2,3-二酮(3f)

收率:47％,红色油状物.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ:1.42(m,2H,哌 啶-H),1.55(m,4H,哌啶-H),2.33(s,3H,CH₃),2.46(br s,4H,哌啶-H),2.58 (t,J＝6.6Hz,2H,哌啶-CH₂),3.82(t,J＝6.6Hz,2H,吲哚啉-2,3-二酮-CH₂), 6.85(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮7-H),7.37(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚 啉-2,3-二酮6-H),7.40(s,1H,吲哚啉-2,3-二酮4-H).ESI-HRMS m/z: C₁₆H₂₁N₂O₂([M+H]⁺)计算值:273.1603；实测值:273.1601.

5-甲基-1-(2-吗啉基乙基)吲哚啉-2,3-二酮(3g)

收率:52％,红色油状物.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ:2.36(s,3H, CH₃),2.55(t,J＝6.0Hz,2H,吗啉-CH₂),2.64(br s,4H,吗啉-H),3.61(br s, 4H,吗啉-H),3.80(t,J＝6.0Hz,2H,吲哚啉-2,3-二酮-CH₂),6.72(d,J＝7.8 Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮7-H),7.09(s,1H,吲哚啉-2,3-二酮4-H),7.10(d, J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮6-H).EI-MS m/z:274[M]⁺.

5-甲基-1-(2-(四氢吡咯-1-基)乙基)吲哚啉-2,3-二酮(3h)

收率:45％,红色油状物.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ:1.81(br s,4H, 四氢吡咯-H),2.33(s,3H,CH₃),2.65(br s,4H,四氢吡咯-H),2.80(br s,2H, 四氢吡咯-CH₂),3.88(t,J＝7.2Hz,2H,吲哚啉-2,3-二酮-CH₂),6.88(d,J＝ 7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮7-H),7.39(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮 6-H),7.40(s,1H,吲哚啉-2,3-二酮4-H).ESI-HRMS m/z:C₁₅H₁₉N₂O₂([M+H]⁺)计算值:259.1447；实测值:259.1438.

1-(2-吗啉基乙基)吲哚啉-2,3-二酮(6a)

收率:89％,红色固体,m.p.98-100℃(Lit.Mazzoni,O.；Diurno,M.V.； Bosco,A.M.；Novellino,E.；Grieco,P.；Esposito,G.；Bertamino,A.；Calignano, A.；Russo,R.Synthesis and pharmacological evaluation of analogs of  indole-based cannabimimetic agents.Chem.Biol.Drug.Des.2010,75, 106-114.m.p.172-174℃).¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ:2.53(br s,4H,吗 啉-H),2.64(t,J＝6.6Hz,2H,吗啉-CH₂),3.66(br s,4H,吗啉-H),3.86(t,J ＝6.6Hz,2H,吲哚啉-2,3-二酮-CH₂),6.93(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二 酮7-H),7.12(td,J＝7.8,1.2Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮5-H),7.59(td,J＝ 7.8,1.2Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮6-H),7.61(dd,J＝7.8,1.2Hz,1H,吲哚啉 -2,3-二酮4-H).ESI-HRMS m/z:C₁₄H₁₇N₂O₃([M+H]⁺)计算值:261.1239；实 测值:261.1238.

4-溴-1-(2-吗啉基乙基)吲哚啉-2,3-二酮(6b)

收率:76％,红色固体,m.p.117-119℃.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ: 2.52(br s,4H,吗啉-H),2.63(t,J＝6.6Hz,2H,吗啉-CH₂),3.65(t,J＝4.2 Hz,4H,吗啉-H),3.86(t,J＝6.6Hz,2H,吲哚啉-2,3-二酮-CH₂),6.88(d,J＝ 7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮7-H),7.25(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮 5-H),7.40(t,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮6-H).ESI-HRMS m/z: C₁₄H₁₆BrN₂O₃([M+H]⁺)计算值:339.0344,341.0324；实测值:339.0342, 341.0324.

4-氯-1-(2-吗啉基乙基)吲哚啉-2,3-二酮(6c)

收率:62％,红色油状物.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ:2.52(br s,4H, 吗啉-H),2.62(t,J＝6.0Hz,2H,吗啉-CH₂),3.65(t,J＝4.2Hz,4H,吗啉-H), 3.86(t,J＝6.0Hz,2H,吲哚啉-2,3-二酮-CH₂),6.83(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚 啉-2,3-二酮7-H),7.06(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮5-H),7.49(t,J＝ 7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮6-H).ESI-HRMS m/z:C₁₄H₁₆ClN₂O₃([M+H]⁺) 计算值:295.0849,297.0820；实测值:295.0846,297.0827.

5-甲氧基-1-(2-吗啉基乙基)吲哚啉-2,3-二酮(6d)

收率:75％,浅红棕色固体,m.p.42-45℃.¹H NMR(600MHz,CDCl₃) δ:2.57(br s,4H,吗啉-H),2.66(t,J＝6.6Hz,2H,吗啉-CH₂),3.69(br s,4H, 吗啉-H),3.81(s,3H,OCH₃),3.86(t,J＝6.6Hz,2H,吲哚啉-2,3-二酮-CH₂), 6.90(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮7-H),7.13-7.16(m,2H,吲哚啉 -2,3-二酮4-H,6-H).ESI-HRMS m/z:C₁₅H₁₉N₂O₄([M+H]⁺)计算值:291.1345； 实测值:291.1342.

5-溴-1-(2-吗啉基乙基)吲哚啉-2,3-二酮(6e)

收率:69％,红色油状物.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ:2.52(br s,4H, 吗啉-H),2.62(t,J＝5.4Hz,2H,吗啉-CH₂),3.65(br s,4H,吗啉-H),3.85(t, J＝5.4Hz,2H,吲哚啉-2,3-二酮-CH₂),6.85(d,J＝8.4Hz,1H,吲哚啉-2,3- 二酮7-H),7.70(dd,J＝8.4,1.2Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮6-H),7.72(d,J＝ 1.2Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮4-H).ESI-HRMS m/z:C₁₄H₁₆BrN₂O₃([M+H]⁺) 计算值:339.0344,341.0324；实测值:339.0341,341.0321.

5-氯-1-(2-吗啉基乙基)吲哚啉-2,3-二酮(6f)

收率:55％,红色固体,m.p.47-45℃(Lit.Mazzoni,O.；Diurno,M.V.； Bosco,A.M.；Novellino,E.；Grieco,P.；Esposito,G.；Bertamino,A.； Calignano,A.；Russo,R.Synthesis and pharmacological evaluation of analogs  of indole-based cannabimimetic agents.Chem.Biol.Drug.Des.2010,75, 106-114.m.p.120-121℃).¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ:2.52(br s,4H,吗 啉-H),2.63(t,J＝6.6Hz,2H,吗啉-CH₂),3.65(t,J＝4.2Hz,4H,吗啉-H), 3.85(t,J＝6.6Hz,2H,吲哚啉-2,3-二酮-CH₂),6.90(d,J＝8.4Hz,1H,吲哚 啉-2,3-二酮7-H),7.55(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮6-H),7.58 (d,J＝2.4Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮4-H).ESI-HRMS m/z:C₁₄H₁₆ClN₂O₃([M+H]⁺)计算值:295.0849,297.0820；实测值:295.0848,297.0851.

5-氟-1-(2-吗啉基乙基)吲哚啉-2,3-二酮(6g)

收率:56％,红色油状物.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ:2.52(br s,4H, 吗啉-H),2.63(t,J＝6.6Hz,2H,吗啉-CH₂),3.65(br s,4H,吗啉-H),3.85(t, J＝6.6Hz,2H,吲哚啉-2,3-二酮-CH₂),6.90(dd,J＝8.4,3.0Hz,1H,吲哚啉 -2,3-二酮7-H),7.31(td,J＝8.4,3.0Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮6-H),7.33(dd, J＝8.4,3.0Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮4-H).ESI-HRMS m/z:C₁₄H₁₆FN₂O₃([M+H]⁺)计算值:279.1145；实测值:279.1143.

1-(2-吗啉基乙基)-5-硝基吲哚啉-2,3-二酮(6h)

未经提纯，直接用于下步反应(2步反应的总收率32％)。

6-溴-1-(2-吗啉基乙基)吲哚啉-2,3-二酮(6i)

收率:55％,黄色油状物.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ:2.53(br s,4H, 吗啉-H),2.63(t,J＝6.0Hz,2H,吗啉-CH₂),3.66(t,J＝4.8Hz,4H,吗啉-H), 3.83(t,J＝6.0Hz,2H,吲哚啉-2,3-二酮-CH₂),7.16(s,1H,吲哚啉-2,3-二酮 7-H),7.28(dd,J＝7.8,1.2Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮5-H),7.47(d,J＝7.8Hz, 1H,吲哚啉-2,3-二酮4-H).ESI-HRMS m/z:C₁₄H₁₆BrN₂O₃([M+H]⁺)计算值: 339.0344,341.0324；实测值:339.0337,341.0322.

6-氯-1-(2-吗啉基乙基)吲哚啉-2,3-二酮(6j)

收率:50％,黄色油状物.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ:2.53(br s,4H, 吗啉-H),2.64(br s,2H,吗啉-CH₂),3.67(br s,4H,吗啉-H),3.84(br s,2H, 吲哚啉-2,3-二酮-CH₂),6.98(s,1H,吲哚啉-2,3-二酮7-H),7.10(d,J＝7.8 Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮5-H),7.55(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮 4-H).ESI-HRMS m/z:C₁₄H₁₆ClN₂O₃([M+H]⁺)计算值:295.0849,297.0820； 实测值:295.0845,297.0820.

5,7-二溴-1-(2-吗啉基乙基)吲哚啉-2,3-二酮(6k)

收率:57％,红色油状物.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ:2.47(br s,4H, 吗啉-H),2.63(t,J＝6.6Hz,2H,吗啉-CH₂),3.58(br s,4H,吗啉-H),4.30(t, J＝6.6Hz,2H,吲哚啉-2,3-二酮-CH₂),7.70(d,J＝1.8Hz,1H,吲哚啉-2,3- 二酮6-H),7.87(d,J＝1.8Hz,1H,吲哚啉-2,3-二酮4-H).ESI-HRMS m/z: C₁₄H₁₅Br₂N₂O₃([M+H]⁺)计算值:416.9449,418.9429,420.9408；实测值: 416.9444,418.9433,420.9413.

肼基二硫代甲酸甲酯(4)的制备

在50mL圆底烧瓶中加入氢氧化钾(2.8g,50mmol)，蒸馏水(100mL)， 异丙醇(3.3mL)，冰水浴冷却下加入85％水合肼(VI)(2.85mL,50mmol)，

搅拌片刻，得无色透明溶液。保持温度在10℃以下，逐滴加入二硫化碳 (3mL,3.8g,50mmol)。滴加完毕，继续搅拌1h，反应液逐渐变为淡黄色。 然后在冰水浴冷却下，将碘甲烷(3mL,7.1g,50mmol)逐滴加到上述溶液 中，反应液颜色逐渐变浅，产生大量白色沉淀。滴加完毕后，继续搅拌1.5 h，滤集固体，干燥，用二氯甲烷重结晶，得白色固体2.75g，收率45％， m.p.83-85℃.(文献m.p.81-83℃).¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ:2.39(s, 3H,SCH₃),5.06(br s,2H,NH₂),10.78(br s,1H,NH).EI-MS m/z:122[M⁺].

目标化合物5a-h和7a-k的合成通法

将中间体3a-h或6a-k(0.5mmol)用乙醇或甲醇(5mL)溶解，加入肼 基二硫代甲酸甲酯(4)(0.06g,0.5mmol)，室温搅拌过夜。滤集析出的固体， 晾干，用乙醇或甲醇重结晶，得目标化合物5a-h，7a-k。

实施例1

N’-(1-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-甲基-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代 甲酸甲酯(5a)

收率:76％,黄色固体,m.p.119-122℃(from MeOH).¹H NMR(600 MHz,DMSO-d₆)δ:0.95(br s,3H,CH₃),1.12(br s,3H,CH₃),2.29(s,2H, CH₂),2.34(s,2H,CH₂),2.43(s,2H,CH₂NEt₂),2.64(s,3H,SCH₃),3.87(br s, 1H,吲哚啉-2-酮-CH₂),3.99(br s,1H,吲哚啉-2-酮-CH₂),6.95(d,J＝7.8Hz, 1/2H,吲哚啉-2-酮7-H),7.08(d,J＝7.8Hz,1/2H,吲哚啉-2-酮6-H),7.14 (d,J＝7.8Hz,1/2H,吲哚啉-2-酮7-H),7.32(d,J＝7.8Hz,1/2H,吲哚啉-2- 酮6-H),7.42(s,1/2H,吲哚啉-2-酮4-H),8.19(s,1/2H,吲哚啉-2-酮4-H), 13.89(s,1H,NH).ESI-HRMS m/z:C₁₇H₂₅N₄OS₂([M+H]⁺)计算值:365.1470； 实测值:365.1462.

实施例2

4-(2-(5-甲基-3-(N’-(甲基巯基硫代羰基)亚肼基)-2-氧代吲哚-1-基)乙基) 哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5b)

收率:65％,黄色固体,m.p.147-149℃(from MeOH).¹H NMR(600 MHz,DMSO-d₆)δ:1.38(s,9H,C(CH₃)₃),2.33(s,3H,CH₃),2.42(br s,4H, 哌嗪-H),2.60(br s,2H,哌嗪-CH₂),2.63(s,3H,SCH₃),3.24(br s,4H,哌嗪 -H),3.85(t,J＝6.0Hz,2H,吲哚啉-2-酮-CH₂),7.13(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚 啉-2-酮7-H),7.30(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2-酮6-H),7.39(s,1H,吲哚 啉-2-酮4-H),13.91(s,1H,NH).ESI-HRMS m/z:C₂₂H₃₂N₅O₃S₂([M+H]⁺)计 算值:478.1947；实测值:478.1936.

实施例3

N’-(5-甲基-1-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二 硫代甲酸甲酯(5c)

收率:50％,黄色固体,m.p.161-163℃(from MeOH).¹H NMR(600 MHz,CDCl₃)δ:2.28(s,3H,NCH₃),2.37(s,3H,CH₃),2.42(br s,4H,哌嗪 -H),2.56(br s,4H,哌嗪-H),2.63(t,J＝6.6Hz,2H,哌嗪-CH₂),2.68(s,3H, SCH₃),3.84(t,J＝6.6Hz,2H,吲哚啉-2-酮-CH₂),6.80(d,J＝8.4Hz,1H,吲 哚啉-2-酮7-H),7.19(d,J＝8.4Hz,1H,吲哚啉-2-酮6-H),7.51(s,1H,吲 哚啉-2-酮4-H),13.86(s,1H,NH).ESI-HRMS m/z:C₁₈H₂₆N5OS₂([M+H]⁺) 计算值:392.1579；实测值:392.1574.

实施例4

N’-(5-甲基-1-(2-(4-甲基哌啶-1-基)乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二 硫代甲酸甲酯(5d)

收率:62％,黄色固体,m.p.167-169℃(from MeOH).¹H NMR(600 MHz,DMSO-d₆)δ:0.87(d,J＝6.6,3/2H,CHCH₃),0.91(d,3/2H,J＝6.6, CHCH₃),1.10(br s,2H,哌啶-H),1.24(br s,2H,哌啶-H),1.38(br s,1/2H, CH),1.53(br s,1/2H,CH),1.61(d,2H,J＝9.0,哌啶-H),1.73(d,2H,J＝9.0, 哌啶-H),2.29(s,3/2H,CH₃),2.34(s,3/2H,CH₃),2.43(s,3/2H,SCH₃),2.64(s, 3/2H,SCH₃),3.07(br s,2H,哌啶-CH₂),3.91(br s,1H,吲哚啉-2-酮-CH₂), 4.00(br s,1H,吲哚啉-2-酮-CH₂),6.94(d,J＝7.8Hz,1/2H,吲哚啉-2-酮 7-H),7.08(d,J＝7.8Hz,1/2H,吲哚啉-2-酮6-H),7.14(d,J＝7.8Hz,1/2H, 吲哚啉-2-酮7-H),7.32(d,J＝7.8Hz,1/2H,吲哚啉-2-酮6-H),7.42(s, 1/2H,吲哚啉-2-酮4-H),8.19(s,1/2H,吲哚啉-2-酮4-H).ESI-HRMS m/z: C₁₉H₂₇N₄OS₂([M+H]⁺)计算值:391.1626；实测值:391.1620.

实施例5

N’-(5-甲基-1-(2-(2-甲基哌啶-1-基)乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二 硫代甲酸甲酯(5e)

收率:62％,黄色固体,m.p.137-139℃(from MeOH).¹H NMR(600 MHz,DMSO-d₆)δ:0.98(s,3/2H,CH₃),1.18(s,3/2H,CH₃),1.29-1.75(m,9H, 哌啶-H),2.29(s,3/2H,CH₃),2.34(s,3/2H,CH₃),2.44(s,3/2H,SCH₃),2.64(s, 3/2H,SCH₃),3.05(br s,2H,哌啶-CH₂),3.90(br s,1H,吲哚啉-2-酮-CH₂), 3.99(br s,1H,吲哚啉-2-酮-CH₂),6.95(d,J＝7.8Hz,1/2H,吲哚啉-2-酮 7-H),7.08(d,J＝7.8Hz,1/2H,吲哚啉-2-酮6-H),7.14(d,J＝7.8Hz,1/2H, 吲哚啉-2-酮7-H),7.32(d,J＝7.8Hz,1/2H,吲哚啉-2-酮6-H),7.41(s, 1/2H,吲哚啉-2-酮4-H),8.19(s,1/2H,吲哚啉-2-酮4-H).ESI-HRMS m/z: C₁₉H₂₇N₄OS₂([M+H]⁺)计算值:391.1626；实测值:391.1620.

实施例6

N’-(5-甲基-2-氧代-1-(2-(哌啶-1-基)乙基)吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲 酸甲酯(5f)

收率:62％,黄色固体,m.p.167-169℃(from MeOH).¹H NMR(600 MHz,DMSO-d₆)δ:1.39-1.66(m,8H,哌啶-H),2.29(s,3/2H,CH₃),2.31-2.41 (m,2H,哌啶-H),2.34(s,3/2H,CH₃),2.43(s,3/2H,SCH₃),2.62(m,2H,哌 啶-CH₂),2.64(s,3/2H,SCH₃),3.96(m,2H,吲哚啉-2-酮-CH₂),6.94(d,J＝ 7.8Hz,1/2H,吲哚啉-2-酮7-H),7.08(d,J＝7.8Hz,1/2H,吲哚啉-2-酮 6-H),7.14(d,J＝7.8Hz,1/2H,吲哚啉-2-酮7-H),7.32(d,J＝7.8Hz,1/2H, 吲哚啉-2-酮6-H),7.42(s,1/2H,吲哚啉-2-酮4-H),8.19(s,1/2H,吲哚啉 -2-酮4-H).ESI-HRMS m/z:C₁₈H₂₅N₄OS₂([M+H]⁺)计算值:377.1470；实测 值:377.1464.

实施例7

N’-(5-甲基-1-(2-吗啉乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸甲酯 (5g)

收率:71％,黄色固体,m.p.161-163℃(from MeOH).¹H NMR(600 MHz,DMSO-d₆)δ:2.33(s,3H,CH₃),2.46(br s,4H,吗啉-H),2.60(br s,2H, 吗啉-CH₂),2.63(s,3H,SCH₃),3.52(br s,4H,吗啉-H),3.86(t,J＝6.0Hz, 2H,吲哚啉-2-酮-CH₂),7.13(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2-酮7-H),7.30(d,J ＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2-酮6-H),7.40(s,1H,吲哚啉-2-酮4-H),13.91(s, 1H,NH).ESI-HRMS m/z:C₁₇H₂₃N₄O₂S₂([M+H]⁺)计算值:379.1262；实测值: 379.1257.

实施例8

N’-(5-甲基-2-氧代-1-(2-(四氢吡咯-1-基)乙基)吲哚啉-3-亚基)肼基二硫 代甲酸甲酯(5h)

收率:57％,黄色固体,m.p.154-156℃(from MeOH).¹H NMR(600 MHz,DMSO-d₆)δ:2.33(s,3H,CH₃),2.42(br s,4H,四氢吡咯-H),2.60(br s, 2H,四氢吡咯-CH₂),2.63(s,3H,SCH₃),3.24(br s,4H,四氢吡咯-H),3.85(t, J＝6.0Hz,2H,吲哚啉-2-酮-CH₂),7.13(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2-酮 7-H),7.30(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2-酮6-H),7.40(s,1H,吲哚啉-2-酮 4-H),13.92(s,1H,NH).ESI-HRMS m/z:C₁₇H₂₃N₄OS₂([M+H]⁺)计算值: 363.1313；实测值:363.1299.

实施例9

N’-(1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸甲酯(7a)

收率:32％,黄色固体,m.p.145-147℃(from EtOH).¹H NMR(600 MHz,CDCl₃)δ:2.51(br s,4H,吗啉-H),2.62(t,J＝6.6Hz,2H,吗啉-CH₂), 2.65(s,3H,SCH₃),3.65(t,J＝4.2Hz,4H,吗啉-H),3.85(t,J＝6.6Hz,2H, 吲哚啉-2-酮-CH₂),6.89(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2-酮7-H),7.10(t,J＝7.8 Hz,1H,吲哚啉-2-酮5-H),7.37(t,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2-酮6-H),7.67 (d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2-酮4-H),13.80(s,1H,NH).ESI-HRMS m/z: C₁₆H₂₁N₄O₂S₂([M+H]⁺)计算值:365.1106；实测值:365.1101.

实施例10

N’-(4-溴-1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸甲酯 (7b)

收率:43％,黄色固体,m.p.149-151℃(from EtOH).¹H NMR(600 MHz,DMSO-d₆)δ:2.44(br s,4H,吗啉-H),2.56(t,J＝6.6Hz,2H,吗啉 -CH₂),2.63(s,3H,SCH₃),3.51(t,J＝3.6Hz,4H,吗啉-H),3.88(t,J＝6.6Hz, 2H,吲哚啉-2-酮-CH₂),7.28(d,J＝7.2Hz,1H,吲哚啉-2-酮7-H),7.36(d,J ＝7.2Hz,1H,吲哚啉-2-酮5-H),7.39(t,J＝7.2Hz,1H,吲哚啉-2-酮6-H), 13.98(s,1H,NH).ESI-HRMS m/z:C₁₆H₂₀BrN₄O₂S₂([M+H]⁺)计算值: 443.0211,445.0191；实测值:443.0204,445.0177.

实施例11

N’-(4-氯-1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸甲酯 (7c)

收率:30％,黄色固体,m.p.137-138℃(from EtOH).¹H NMR(600 MHz,CDCl₃)δ:2.51(br s,4H,吗啉-H),2.63(t,J＝6.6Hz,2H,吗啉-CH₂), 2.67(s,3H,SCH₃),3.66(t,J＝4.2Hz,4H,吗啉-H),3.89(t,J＝6.6Hz,2H, 吲哚啉-2-酮-CH₂),6.83(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2-酮7-H),7.12(d,J＝ 7.8Hz,1H,吲哚啉-2-酮5-H),7.30(t,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2-酮6-H), 13.88(s,1H,NH).ESI-HRMS m/z:C₁₆H₂₀ClN₄O₂S₂([M+H]⁺)计算值: 399.0716,401.0687；实测值:399.0711,401.0676.

实施例12

N’-(5-甲氧基-1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸 甲酯(7d)

收率:34％,红色固体,m.p.147-149℃(from MeOH).¹H NMR(600 MHz,CDCl₃)δ:2.56(br s,4H,吗啉-H),2.62(br s,2H,吗啉-CH₂),2.68(s, 3H,SCH₃),3.70(br s,4H,吗啉-H),3.84(s,3H,OCH₃),3.88(br s,2H,吲哚 啉-2-酮-CH₂),6.85(br s,1H,吲哚啉-2-酮7-H),6.94(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H, 吲哚啉-2-酮6-H),7.24(d,J＝2.4Hz,1H,吲哚啉-2-酮4-H),13.86(s,1H, NH).ESI-HRMS m/z:C₁₇H₂₃N₄O₃S₂([M+H]⁺)计算值:395.1212；实测值: 395.1206.

实施例13

N’-(5-溴-1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸甲酯 (7e)

收率:49％,黄色固体,m.p.161-165℃(from MeOH).¹H NMR(600 MHz,CDCl₃)δ:2.53(br s,4H,吗啉-H),2.64(t,J＝5.4Hz,2H,吗啉-CH₂), 2.68(s,3H,SCH₃),3.67(br s,4H,吗啉-H),3.88(t,J＝5.4Hz,2H,吲哚啉 -2-酮-CH₂),6.83(d,J＝8.4Hz,1H,吲哚啉-2-酮7-H),7.50(dd,J＝8.4,1.2 Hz,1H,吲哚啉-2-酮6-H),7.81(d,J＝1.2Hz,1H,吲哚啉-2-酮4-H),13.73 (s,1H,NH).ESI-HRMS m/z:C₁₆H₂₀BrN₄O₂S₂([M+H]⁺)计算值:443.0211, 445.0191；实测值:443.0206,445.0179.

实施例14

N’-(5-氯-1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸甲酯 (7f)

收率:44％,黄色固体,m.p.170-173℃(from MeOH).¹H NMR(600 MHz,CDCl₃)δ:2.53(br s,4H,吗啉-H),2.63(br s,2H,吗啉-CH₂),2.68(s, 3H,SCH₃),3.67(br s,4H,吗啉-H),3.88(br s,2H,吲哚啉-2-酮-CH₂),6.87 (br s,1H,吲哚啉-2-酮7-H),7.36(dd,J＝8.4,1.8Hz,1H,吲哚啉-2-酮 6-H),7.67(d,J＝1.8Hz,1H,吲哚啉-2-酮4-H),13.74(s,1H,NH). ESI-HRMS m/z:C₁₆H₂₀ClN₄O₂S₂([M+H]⁺)计算值:399.0716,401.0687；实测 值:399.0711,401.0677.

实施例15

N’-(5-氟-1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸甲酯 (7g)

收率:52％,黄色固体,m.p.183-185℃(from EtOH).¹H NMR(600 MHz,CDCl₃)δ:2.52(br s,4H,吗啉-H),2.63(t,J＝6.6Hz,2H,吗啉-CH₂), 2.68(s,3H,SCH₃),3.66(t,J＝4.2Hz,4H,吗啉-H),3.87(t,J＝6.6Hz,2H, 吲哚啉-2-酮-CH₂),6.85(dd,J＝9.0,3.0Hz,1H,吲哚啉-2-酮7-H),7.10(td, J＝9.0,3.0Hz,1H,吲哚啉-2-酮6-H),7.42(dd,J＝7.2,3.0Hz,1H,吲哚啉 -2-酮4-H),13.80(s,1H,NH).ESI-HRMS m/z:C₁₆H₂₀FN₄O₂S₂([M+H]⁺)计算 值:383.1012；实测值:383.1007.

实施例16

N’-(1-(2-吗啉基乙基)-5-硝基-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸 甲酯(7h)

收率:35％,红色固体,m.p.213-215℃(from MeOH).¹H NMR(600 MHz,DMSO-d₆)δ:2.48(br s,4H,吗啉-H),2.67(s,3H,SCH₃),3.57(br s,4H, 吗啉-H),4.05(br s,2H,吗啉-CH₂),4.16(br s,2H,吲哚啉-2-酮-CH₂),7.32 (d,J＝7.2Hz,1/2H,吲哚啉-2-酮7-H),7.52(d,J＝7.2Hz,1/2H,吲哚啉-2- 酮6-H),8.22(d,J＝7.2Hz,1/2H,吲哚啉-2-酮7-H),8.27(s,1/2H,吲哚啉 -2-酮4-H),8.43(d,J＝7.2Hz,1/2H,吲哚啉-2-酮6-H),9.13(s,1/2H,吲哚 啉-2-酮4-H),13.74(s,1H,NH).ESI-HRMS m/z:C₁₆H₂₀N₅O₄S₂([M+H]⁺)计 算值:410.0957；实测值:410.0949.

实施例17

N’-(6-溴-1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸甲酯 (7i)

收率:36％,黄色固体,m.p.149-151℃(from MeOH).¹H NMR(600 MHz,CDCl₃)δ:2.53(br s,4H,吗啉-H),2.63(t,J＝6.0Hz,2H,吗啉-CH₂), 2.67(s,3H,SCH₃),3.67(br s,4H,吗啉-H),3.85(t,J＝6.0Hz,2H,吲哚啉 -2-酮-CH₂),7.12(s,1H,吲哚啉-2-酮7-H),7.27(dd,J＝7.8,1.2Hz,1H,吲 哚啉-2-酮5-H),7.56(d,J＝7.8Hz,1H,吲哚啉-2-酮4-H),13.75(s,1H, NH).ESI-HRMS m/z:C₁₆H₂₀BrN₄O₂S₂([M+H]⁺)计算值:443.0211,445.0191； 实测值:443.0205,445.0179.

实施例18

N’-(6-氯-1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸甲 酯(7j)

收率:32％,黄色固体,m.p.153-155℃(from MeOH).¹H NMR(600 MHz,CDCl₃)δ:2.53(br s,4H,吗啉-H),2.63(t,J＝6.0Hz,2H,吗啉-CH₂), 2.68(s,3H,SCH₃),3.66(br s,4H,吗啉-H),3.86(t,J＝6.0Hz,2H,吲哚啉 -2-酮-CH₂),6.95(br s,1H,吲哚啉-2-酮7-H),7.10(dd,J＝8.4,1.8Hz,1/3H, 吲哚啉-2-酮5-H),7.11(dd,J＝8.4,1.8Hz,2/3H,吲哚啉-2-酮5-H),7.61(d, J＝8.4Hz,1/3H,吲哚啉-2-酮4-H),7.62(d,J＝8.4Hz,2/3H,吲哚啉-2-酮 4-H),13.74(s,1H,NH).ESI-HRMS m/z:C₁₆H₂₀ClN₄O₂S₂([M+H]⁺)计算值: 399.0716,401.0687；实测值:399.0710,401.0676.

实施例19

N’-(5,7-二溴-1-(2-吗啉基乙基)-2-氧代吲哚啉-3-亚基)肼基二硫代甲酸 甲酯(7k)

收率:50％,黄色固体,m.p.200-202℃(from DMF/EtOH).¹H NMR (600MHz,CDCl₃)δ:2.50(t,J＝4.2Hz,4H,吗啉-H),2.65(t,J＝6.6Hz,2H, 吗啉-CH₂),2.68(s,3H,SCH₃),3.62(t,J＝4.2Hz,4H,吗啉-H),4.29(t,J＝ 6.6Hz,2H,吲哚啉-2-酮-CH₂),7.66(d,J＝1.8Hz,1H,吲哚啉-2-酮6-H), 7.78(d,J＝1.8Hz,1H,吲哚啉-2-酮4-H),13.70(s,1H,NH).ESI-HRMS  m/z:C₁₆H₁₉Br₂N₄O₂S₂([M+H]⁺)计算值:520.9316,522.9296,524.9275；实测 值:520.9309,522.9285,524.9261.

试验例

抗增殖活性

采用MTT法测定了目标化合物对人乳腺癌MCF-7、结肠癌HCT-116 细胞增殖的半抑制浓度(IC₅₀)，结果见表1、2。用舒尼替尼(Sunitinib)做为 阳性对照。

选用指数生长期的贴壁肿瘤细胞，经胰蛋白酶消化后，用含10％小牛 血清的RPMI1640培养液配成5×10⁴～10×10⁴个细胞/mL的细胞悬液，接种 在96孔培养板所设的实验孔中，每孔加入90μL，同时设置本底孔(即加 入90μL培养液)。于37℃，5％CO₂环境下培养24h。配制样品溶液时， 将各化合物用培养液配制为不同浓度的溶液，对照组为含2％DMSO的培 养液。于样品孔中加入10μL样品溶液，对照孔中加入10μL含2％DMSO 的培养液，本底孔中加入10μL培养液，每孔设置3个复孔，于37℃，5％ CO₂下培养72h。向各孔中加入20μL MTT溶液(Promega公司的CellTiter AQ_ueous单溶液细胞增殖检测试剂盒)，37℃继续培养2h。用酶联免疫 检测仪测定各孔在波长492nm处的光密度(OD)值。按如下公式计算细 胞增殖抑制率(Inhibition Rate，IR％)，然后用SPSS数理统计软件求出半 数抑制浓度(IC₅₀值)，结果见表1和表2。以同样方法获得5-氟尿嘧啶的 IC₅₀值，数值列在表1和表2中。

IR％＝[1－(OD_样品组－OD_本底组)/(OD_对照组－OD_本底组)]×100％

表1.化合物5a-h对MCF-7和HCT-116细胞的抗增殖活性(IC₅₀,μM)

表2.化合物7a-k对MCF-7和HCT-116细胞的抗增殖活性(IC₅₀,μM)

综上所述，以上仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明 的保护范围，因此，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同 替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。