一种7-酮羰基苯并二氢呋喃型新木脂素及其制备方法、应用

摘要

本发明涉及从三白草科三白草属药用植物中分离全新7-酮羰基苯并二氢呋喃型新木脂素及其制备方法和用途，其结构式为

说明书

技术领域：

本发明涉及天然药物化学新化合物的分离提取及其在临床中的应用，涉及从三白草科 药用植物中分离新7-酮羰基苯并二氢呋喃型新木脂素及其制备方法和在预防、治疗心脑血 管疾病中的应用。

背景技术：

三白草Saururus chinensis(Lour.)Baill为三白草科(Saururaceae)三白草属植物，在我国中 南、西南地区均有分布，资源丰富。三白草收载于2010年版《中华人民共和国药典》(一部)， 具有清热解毒，利尿消肿之功效。用于小便不利，淋沥涩痛，白带，尿路感染，肾炎水肿； 外治疮疡肿毒，湿疹等(国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科 技出版社，2010：12)。三白草化学成分类型多样涉及木脂素，生物碱，萜类，黄酮等类型成 分，并具有抗炎，抗肿瘤，抗氧化和抗HIV等多种生物活性。

三白草的乙醇提取液对大鼠离体胸主动脉环舒张作用的研究表明三白草的乙醇提取物 具有抗高血压、舒张血管以及减弱心脏收缩力的作用(Shi Yong Ryu，Kwang Seok Oh，Young  Sup Kim，Byung Ho Lee.Antihypertensive，vasorelaxant and inotropic effects of an ethanolic  extract of the roots of Saururus chinensis[J].Journal of Ethnopharmacology 2008，118(2)： 284-289.)。木脂素为三白草中的代表性成分，目前已从该植物中分离出40余个木脂素类成 分，有研究表明，该植物中的木脂素三白草醇(saucerneol)、三白草醇D(saucerneol D)、红楠 素D(machilin D)对大鼠离体主动脉环具有明显的浓度相关松弛作用，且同时分离得到的三 白草醇E(saucerneol E)、马纳萨亭A及B(manassantins A and B)，三白草酮(sauchinone)，以及 三白脂素(saucernetin)也具有心血管松弛活性和负性肌力作用(Kwang-Seok Oh，Yeon Hee  Choi，Shi Yong Ryu，Byung Koo Oh，HoWon Seo，Gyu Hwan Yon，Young Sup Kim，Byung Ho  Lee.Cardiovascular Effects of Lignans Isolated from Saururus chinensis[J].2008，74(3)： 233-238.)。

本发明在深入研究三白草化学成分的过程中，分离纯化并鉴定了1个罕见的新7-酮羰基 苯并二氢呋喃型新木脂素三白草醇L(saucerneol L，化合物1)。大鼠离体胸主动脉环舒张作用 研究表明，化合物1具有显著的舒张血管作用。

发明内容：

本发明提供一种以药用植物三白草Saururus chinensis(Lour.)Baill全草为原料，提取分离 具有治疗和/或预防心脑血管疾病的7-酮羰基苯并二氢呋喃型新木脂素，其结构如下：

本发明还提供了含有化合物1作为活性成分的药物组合物，所述组合物含有生理有效量 的化合物1以及药学上可接受的载体。所述化合物1的重量比为0.1-99.9％，药物可接受的 载体在组合物中的重量比为0.1-99.9％。本发明的药物组合物以适合药用的药剂形式存在， 这些制剂形式是：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、缓释片剂、胶囊剂、硬胶囊 剂、软胶囊剂、缓释胶囊剂、口服液、合剂、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、 丹剂、混悬剂、溶液剂、注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、栓剂、软膏剂、便膏剂、霜剂、喷 雾剂、滴剂、贴剂。

本发明进一步提供了所述化合物1在制备治疗和/或预防心脑血管疾病药物中的应用。

附图说明

图1.化合物的制备流程图

图2.化合物1的(+)HR-ESI-MS图谱

图3.化合物1的¹H-NMR图谱(300MHz，CDCl₃)

图4.化合物1的¹³C NMR图谱(75MHz，CDCl₃)

图5.化合物1的HMBC图谱

图6化合物1对去内皮完整及去内皮大鼠离体胸主动脉环舒张作用研究

具体实施方式

下面所列实施例有助于本领域技术人员更好地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1 7-酮羰基苯并二氢呋喃型新木脂素(化合物1)的制备

以三白草的干燥全草29.5kg为原料，经95％乙醇浸泡24小时后热回流提取4次，每次 3小时，提取物浓缩至浸膏状，以适量蒸馏水混悬，依次用二氯甲烷、乙酸乙酯萃取。将所 得二氯甲烷部位(505g)用硅胶(100-200目)柱色谱，依次用不同比例石油醚-乙酸乙酯溶剂梯 度洗脱得到6个流分，流分5(28.3g)经反相ODS柱色谱以不同比例甲醇-水系统梯度洗脱得 到4个流分，流分5-1(4.3g)再经反相ODS柱色谱，以58％甲醇-水作为洗脱溶剂，冲至第 4-5个柱体积时接流分，回收溶剂，得到化合物1(30mg)，详细流程见图1；

结构鉴定

主要利用质谱法(HR-ESI-MS)，核磁共振波谱法(¹H NMR，¹³C NMR，2D NMR)鉴定其结 构。

化合物1为红棕色油状物，紫外下254nm有暗斑，365nm下无荧光，碘斑显色明显， 香草醛浓硫酸显棕红色，易溶于二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇等有机溶剂。

(+)HR-ESI-MS(见图2)：[M+H]⁺343.1551(C₂₀H₂₃O₅，Calc：343.1545)，提示其分子式为 C₂₀H₂₃O₅，不饱和度为10。¹H-NMR(CDCl₃)(见图3)中δ5.21(1H，d，J＝9.2Hz，H-7′)，3.51(1H， m，H-8′)，1.43(3H，d，J＝6.6Hz，H-9′)为反式-7-芳香基-8-甲基-7，8-苯并二氢呋喃型新木脂 素的特征峰。经与文献中结构类似化合物perseal F的NMR数据对比发现^[3]，与Perseal F 相比¹H-NMR中少了一个醛基质子信号9.85(1H，s，H-7)，低场处：δ7.38(1H，br.s，H-2)与7.34 (1H，br.s，H-6)分别向低场偏移至δ7.51(1H，br.s，H-2)与7.44(1H，br.s，H-6)；高场处：多出一 组乙基信号δ2.97(2H，q，J＝7.3Hz，H-8′)，1.23(3H，t，J＝7.2Hz，H-9′)。¹³C-NMR(见图4)中羰 基信号由190.6(C-7)向低场位移至199.3(C-7).以上信息提示化合物1与Perseal F相比， Perseal F中的醛基质子被乙基所取代，结构如Figure 2.5所示，从HMBC谱(见图5)中也得 到确证，可以明确观察到δ_H 1.23(3H，t，J＝7.2Hz，H-9′)，7.38(1H，br.s，H-2)与7.34(1H，br.s， H-6)到δ_C 190.6(C-7)远程相关。1((c 0.085，CHCl₃))的绝对构型通过与Perseal F 的旋光度(c 0.135，CHCl₃)对比最终确定1为(7′S，8′S)-3，4′-二羟基-3′-羟基-7-酮 -7′O-4，8′.5-新木脂素

经SCIFinder检索，确定该化合物为新化合物并命名为为三白草醇L(英文名saucerneol L)是一个罕见的7-酮羰基苯并二氢呋喃型新木脂素，结合HMBC谱确定其详细信号归属见 表1。

表1.化合物1的¹HNMR(300MHz)和¹³CNMR(75MHz)数据归属(溶剂CDCl₃)

实施例2 7-酮羰基苯并二氢呋喃型新木脂素(化合物1)对大鼠离体胸主动脉环舒张作用 胸主动脉血管环的制备：

大鼠颈椎脱臼处死之后，迅速打开大鼠胸腔，游离出胸主动脉，放置于4℃，通入95％ O₂和5％CO₂混合气体预饱和的K-H液中，剔除掉周围的结缔组织，然后剪成3～4mm 的胸主动脉血管环。将血管环悬挂于预置有5ml K-H液的浴槽内，37℃恒温，持续地通 入95％O₂和5％CO₂的混合气体。胸主动脉的每条血管均给予2.5g的基础张力，每15min 换液1次，平衡45min。用高K+液预收缩一次，以诱发血管的最大收缩幅度，之后再用 K-H液平衡三次至基础张力，待血管环稳定后，加入PE预收缩，待血管张力稳定达到坪 值后，加入梯度的乙酰胆碱(10^-5mol/L，10^-6mol/L，10^-7mol/L，10^-8mol/L，10^-9mol/L)， 观察大鼠主动脉血管环的舒张情况来检验内皮的完整性，引起的舒张反应大于80％则认 为内皮功能完整。制备去内皮血管环时，将已经修剪干净的大鼠胸主动脉血管环两端固 定，用与血管内径大小相适合的棉棒从管腔内部轻轻地擦过，连续轻擦两次之后，将血管 环悬挂于预置有5ml K-H液的浴槽内，用同样的方法来检测血管舒张幅度。当舒张幅度 不超过收缩幅度的5％时，可认为内皮去除完全。

化合物1的药物初筛部分研究--对内皮完整和去内皮的血管环的作用：

采用上述方法制备胸主动脉环，检验内皮完整性之后，取内皮完整(或去内皮)的 血管环进行实验，待血管稳定至基础张力后，加入PE预收缩，待血管张力稳定达到坪值 后，加入梯度浓度的化合物1.(化合物1浓度梯度是0.01μmol，0.1μmol，lμmol，10μmol， 100μmol)

实验结果--化合物1对内皮完整和去内皮血管环舒张作用研究：

表2 化合物1对去内皮完整及去内皮大鼠离体胸主动脉环舒张作用研究

，Rat abdominal aorta rings were precontracted with PE，and each point represents  the*P＜0.05，**P＜0.01vs Control.

如表2和图6所示，化合物1可以舒张内皮完整的血管环，但对去内皮的血管环儿乎没有 舒张作用，在化合物1的浓度为10μM和100μM的时候二者存在显著性差异，在浓度为100 μM时二者显著性差异P＜0.01。由此可以推测，其舒张血管作用是内皮依赖性的。

综上所述，从药用植物三白草Saururus chinensis(Lour.)Baill中分离得到的7-酮羰基苯 并二氢呋喃型新木脂素可用于治疗和/或预防心脑血管疾病，例如：高血压等。