含有重组人生长激素的鼻腔给药制剂及其制备方法

摘要

本发明公开了一种含有重组人生长激素的鼻腔给药制剂及其制备方法，所述含有重组人生长激素的鼻腔给药制剂，以重量百分比计，含有：黏膜吸收促进剂0.1～30%，生物粘附材料0.1～50%，重组人生长激素1～30%。本发明的优点在于：简便易行，适合工业化生产。制备过程不使用有机溶剂，对重组人生长激素的活性破坏较小，本发明的载药微粒可显著增加鼻腔滞留时间，增加人生长激素的经鼻吸收，提高生物利用度。

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，具体为一种用于治疗内源性生长激素缺乏症、 慢性肾衰、特纳氏综合症所致儿童生长缓慢及重度烧伤等疾病，含有重组 人生长激素的鼻腔给药制剂及其制备方法。

背景技术

重组人生长激素（rhGH）自1985年问世以来，彻底解决了尸源性人 GH来源稀少和潜在脘病毒感染而致Creutzfeldt－Jakob病的问题，为生长 激素缺乏症（GHD）患者提供了治疗途径。它具有与人体内源生长激素同等 的作用，能使摘除垂体大鼠的体重增加，促进胫骨和软骨生长。同时还有 促进全身蛋白质合成，纠正手术等创伤后的负氨平衡状态，刺激免疫球蛋 白合成，刺激淋巴样组织，巨噬细胞和淋巴细胞的增殖，增强抗感染能力； 刺激烧伤创面及切口胶原细胞、巨噬细胞分裂增殖，加速伤口愈合的作用。

迄今为止rhGH在人体的应用已经通过20多年的临床验证，其有效性 和安全性得到了医生及患者的普遍认可。同时rhGH的应用人群也在逐渐扩 大，FDA已经批准了儿童GHD、慢性肾功能不全、HIV感染相关衰竭综合症、 成人GHD、Turner综合征、小于胎龄儿（SGA）、特发性矮身材（ISS）、短 肠综合征、Prader－Willi综合征等10余个rhGH适应症。

长期、规则使用rhGH是rhGH治疗达到最佳疗效的基础。目前全球范 围内正式上市使用的rhGH需要每天注射给药，儿童GHD疗程长达3个月至 3年，使患者不但要承受因注射带来的痛苦，还得承担由此带来的诸多生活 不便和额外的经济负担，降低了患者依从性，影响了rhGH治疗的长期疗效。 某儿童医院内分泌门诊部资料显示，因咨询rhGH需要每日注射后而放弃治 疗的约5～10％。国外已经发表的研究显示，接受rhGH注射治疗的儿童患 者，23％每月会漏打至少3次，在2年的治疗期里，13％的患儿会因漏打 而导致实际使用剂量减少50％以上。另一项统计显示，注射剂依从性仅36～ 49%,70%患者感到不快，30%考虑停止治疗(Frost & Sullivan)。

国内外一些制药企业和研发机构致力于rhGH长效制剂的开发，通过 缓控释技术或化学修饰方法改善rhGH的药代动力学特征，增加患者依从性。 但是rhGH长效制剂的应用面临一些潜在的问题，如注射后的血GH浓度变 化与生理分泌模式不同是否会影响GH长效制剂的疗效？持续高水平的GH 浓度是否会导致安全性问题？缓释制剂注射部位局部反应如何解决？第一 个经FDA批准的PLGA缓释微球Nutropin因为疗效不佳和局部副反 应等原因停止销售。

开发非注射的短效GH给药系统是符合治疗要求和相对更安全的给药方 式，具有长效注射给药系统无法比拟的优势。如经鼻、肺、眼、口腔、直 肠等粘膜给药，其中鼻腔给药研究较多。

迄今为止，关于重组人生长激素的鼻腔给药研究表明，尽管鼻腔具有 较大的吸收面积和丰富的血液供应,但蛋白质类大分子药物仍难透过鼻腔 黏膜。(1)蛋白穿透黏膜能力差,蛋白由于分子量太大,因此穿透鼻腔黏膜 的能力较低;(2)鼻粘膜纤毛具有快速清除机制,缩短了药物在鼻腔吸收 部位的滞留时间,影响药物的生物利用度;(3)鼻腔中可能存在酶的降解作 用。

为解决重组人生长激素的经鼻吸收问题，有很多通过在制剂中加入各 种吸收促进剂来提高人生长激素生物利用度的研究，但是大多数不能超过 皮下注射的30%，也就意味着药效达不到注射给药的效果。如Pharm  Res,1990,7(7):772报道生长激素经大鼠鼻腔给予，采用溶血卵磷脂为促 进剂时相对生物利用度为25.8％，用盐酸氨肽酶抑制剂为促进剂时的相对 生物利用度为28.9％。Eur.J.Pharm.Sci.26(2005)9-15的研究表明， 羊鼻腔给予生长激素和壳聚糖的干粉混合物，与皮下注射比，生物利用度 大约15%.

综上所述，尽管已进行了多种尝试来提高人生长激素经鼻给药的吸收， 但目前仍未能达到与皮下注射相当的效果，仍然需要进一步提高人生长激 素经鼻给药的生物利用度。

发明内容

本发明的目的在于提供一种含有重组人生长激素的鼻腔给药制剂及其 制备方法，以克服现有技术存在的缺陷，满足临床应用的需要。

所述的含有重组人生长激素的鼻腔给药制剂，以重量百分比计，含有：

黏膜吸收促进剂     0.1～30%

生物粘附材料       0.1～50%

重组人生长激素     1～30%

优选的，以重量百分比计，含有：

黏膜吸收促进剂     2～23%

生物粘附材料       1～7%

重组人生长激素     6～12%

所述黏膜吸收促进剂选自环糊精或其衍生物、烷基糖苷类表面活性剂、 胆酸盐类、氨肽酶抑制剂、磷脂或其衍生物中的一种以上；

优选的黏膜吸收促进剂为烷基糖苷类表面活性剂，更优选的为八/十/十 二/十四烷基麦芽糖苷、蔗糖苷或葡萄糖苷；

生物粘附材料选自壳聚糖、结冷胶、氨基化明胶、纤维素或其衍生物、 卡波姆或透明质酸等中的一种以上；

优选的生物粘附材料为壳聚糖，分子量50,000～1,000,000，脱乙酰度 >85％。

所述重组人生长激素的分子量为～22,000Da，可以是有191个氨基酸残 基的、与天然人生长激素结构和氨基酸序列完全一致的蛋白，也可以是N －端增加一个甲硫氨酸的192个氨基酸残基组成的蛋白。所述重组人生长 激素也可以是分子量为20KD，176个氨基酸残基，缺失天然人生长激素 32～46位15个氨基酸残基的重组人生长激素。

优选的，所述的含有重组人生长激素的鼻腔给药制剂，还包括保护剂， 所述保护剂选自乳糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇或葡聚糖等中的一种以上， 用于干燥过程中生长激素的活性保护；

进一步优选的，所述的含有重组人生长激素的鼻腔给药制剂，还包括稳 定剂，所述稳定剂选自甘氨酸、赖氨酸、醋酸锌或波洛沙姆等中的一种以 上，用于提高生长激素的稳定性；

优选的，所述的含有重组人生长激素的鼻腔给药制剂，还包括pH=5～ 8的缓冲盐，所述pH=5～8的缓冲液选自醋酸-醋酸钠、柠檬酸-柠檬酸钠或 磷酸二氢钠-磷酸氢二钠等；

特别优选的，所述的含有重组人生长激素的鼻腔给药制剂，包括如下 重量百分比的组分：

特别优选的，所述的含有重组人生长激素的鼻腔给药制剂，包括如下 重量百分比的组分：

本发明的制备方法，包括如下步骤：

（1）将生物粘附材料溶解于pH缓冲液，然后加入重组人生长激素；

（2）在上述的溶液中，加入黏膜吸收促进剂、保护剂和稳定剂，采用 本领域常规的方法，干燥，获得所述的含有重组人生长激素的鼻腔给药制 剂；

所述干燥方法为常规的，包括冷冻干燥或喷雾干燥等方法；

（3）将干燥后的固体过100目筛，得30－150μm粉末，按剂量分装于 鼻用粉雾剂装置中。

本发明的含有重组人生长激素的鼻腔给药制剂，可以通过鼻腔给药，剂 量一般为0.1－0.15IU/kg/天，具体可根据患者的病情、年龄，由医师决定；

本发明的优点在于：简便易行，适合工业化生产。制备过程不使用有 机溶剂，对重组人生长激素的活性破坏较小，本发明的载药微粒可显著增 加鼻腔滞留时间，增加人生长激素的经鼻吸收，提高生物利用度。

附图说明

图1为大鼠鼻腔及皮下注射给予rhGH后的药时曲线。

其中：in代表鼻腔给药，sc代表皮下注射；

图2为兔鼻腔及皮下注射给予rhGH后的药时曲线。

其中：in代表实施例2鼻腔给药，sc代表皮下注射。

具体实施方式

实施例1

处方：（重量百分比）

将生物粘附材料壳聚糖（脱乙酰度大于85％）溶解于醋酸-醋酸钠溶液， 获得溶液A。

将重组人生长激素加入A溶液中；

加入甘露醇、十二烷基麦芽糖苷、波洛沙姆F68，混合均匀，冷冻干燥， 100目过筛得到30－150μm粉末，分装于鼻用粉雾装置中，即得。

重组人生长激素为191个氨基酸残基的、与天然人生长激素结构和氨 基酸序列完全一致的蛋白。

实施例2

处方：（重量百分比）

重组人生长激素为N－端增加一个甲硫氨酸的192个氨基酸残基组成 的蛋白。

制备方法同实施例1。

实施例3

处方：（重量百分比）

重组人生长激素为分子量20KD，176个氨基酸残基，缺失天然人生长 激素32～46位15个氨基酸残基的重组人生长激素。

制备方法同实施例1。

实施例4

处方：(重量百分比)

重组人生长激素为N－端增加一个甲硫氨酸的192个氨基酸残基组成 的蛋白。

同例1方法配制溶液，均匀混合后喷雾干燥，100目过筛得到30－150μm 粉末。将含有0.2～3mg重组人生长激素的干粉分装于鼻用粉雾装置中，即 得。

实施例5

大约300g大鼠戊巴比妥钠麻醉后，分别鼻腔给予实施例1的rhGH粉雾 剂（含rhGH1.5mg）和颈部皮下注射1.5mg rhGH溶液（n=2）。0、10、30、 45、60、90、120、180min采颈静脉血，低温离心分离血清，hGH ELISA试 剂盒测定血药浓度。结果见附图1。

图1可见，大鼠鼻腔给予实施例1的rhGH粉雾剂，30min可达吸收峰 值，峰浓度与皮下注射给药相近。给药后3小时鼻腔给药生物利用度可达 皮下注射的50%以上。

实施例6

2.5kg新西兰大白兔分别鼻腔给予实施例2的rhGH粉雾剂（含rhGH 2.5mg）、2.5mg rhGH溶液，颈部皮下注射2.5mg rhGH溶液（n=2）。0、10、 30、45、60、90、120min耳缘静脉采血，低温离心分离血清，hGH ELISA 试剂盒测定血药浓度。结果见附图2。

图2可见，兔鼻腔给予实施例2的rhGH粉雾剂，30min可达吸收峰值， 峰浓度略低于相同剂量皮下注射给药，给药后2小时鼻腔给药生物利用度 可达皮下注射的50%以上。而兔鼻腔给予rhGH溶液几乎没有吸收。证实本 发明的粉雾剂可以显著增加人生长激素的经鼻吸收，提高生物利用度。