OsHox32在促进水稻叶片形态建成方面的应用

摘要

本发明涉及HD-ZipIII家族成员OsHox32在促进水稻叶片形态建成方面的应用。其中OsHox32基因的核苷酸序列为SEQIDNo.1所示，OsHox32编码一个859个氨基酸的蛋白质序列为SEQIDNo.2所示。本发明公开的OsHox32基因的核苷酸序列对于建立水稻叶片卷曲及直立形态促进水稻增产方面具有重要的意义。

说明书

OsHox32在促进水稻叶片形态建成方面的应用

本研究得到国家自然科学基金项目 (No. 31171515)及天津市应用基础及前沿技术研究计划重点项目（No.）的资助。

技术领域

本发明属于水稻整体生长发育情况改进技术领域，涉及对于水稻叶片形态的研究工作，更具体地说是OsHox32在水稻叶片形态建成方面的应用。

背景技术

水稻是世界上最重要的粮食作物之一，全世界约有三分之二的人口以水稻为主要的食物。其种植面积占我国粮食面积27%，产量却占粮食总产的39%。我国是世界上最大的稻米生产国和消费国，水稻产量直接关系到我国粮食安全，因此提高水稻产量对确保我国农业持续稳定发展和社会稳定有十分重要的战略意义。

水稻叶片的形态是水稻重要的农艺性状之一，叶片是水稻最主要的同化器官，是植物形态建成的重要指标之一，其形态对水稻产量的提高具有重要作用。尤其是上位的三片叶，对水稻群体的受光效率有着重要意义（Govaerts et al., 1996; Zhang et al., 2009）。20世纪后期，松岛省三等人提出了“理想稻”的概念，认为水稻叶片（尤其是上位三叶）的形态应该以直立、宽、厚为最佳（松岛省三和杨春和，1978）。因此，水稻叶片的直立与否，是筛选理想株型的重要指标之一。许多株型方面的研究也证明了叶片直立对株型的重要影响（Sakagami et al., 1981）。

水稻叶片的适度卷曲，可以减小水稻的叶基角，从而使得水稻叶片较为直立，直立的水稻叶片，不仅可以增加叶片正反面的受光面积，而且还能避免上位叶片对下位叶片的遮挡，增加植株整体的光合作用（沈年伟等，2009）。另外，水稻叶片的直立，可以增加单位土地面积里的秧苗密度，保证植株间的空气流通，而适当的通风度对水稻的抗病性有重要影响（袁隆平，1997）。因此，卷叶性状的研究对水稻的增产具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供水稻HD－ZipIII家族成员OsHox32基因及其应用。

本发明的上述目的是通过如下的方法予以实现：

HD－ZipIII家族成员OsHox32基因的核苷酸序列，其特征在于OsHox32基因的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示，OsHox32编码一个859个氨基酸的蛋白质序列为SEQ ID No.2所示。

本发明所述HD－ZipIII家族成员OsHox32基因在制备促进水稻叶片形态建成方面的应用。本发明所述的水稻叶片形态建成指的是：水稻叶片的卷曲及直立形态的建成，从而促进水稻增产。

本发明的实验结果表明：

（1）HD－ZipIII家族成员OsHox32基因可以调控水稻叶片的形态，OsHox32基因功能上调（过表达）减小了叶片与茎杆之间的夹角，使叶片挺直；另外，叶片卷曲使各分蘖叶片之间互不遮光，增强了光照利用率。

（2）HD－ZipIII家族成员OsHox32基因可以促进水稻叶片的直立，使叶片之间互不遮挡，从而接受到更多的阳光，更有利于水稻光合作用的增强，进而使水稻的颗粒饱满，对水稻产量的提高具有重要作用。

（3）本发明公开的HD－ZipIII家族成员OsHox32基因可以调控水稻叶片的建成，为水稻完美株型的建成提供保证，为水稻分子育种设计及改良提供自主产权的基因来源。

OsHox32基因序列（SEQ ID No.1所示）编码的序列为：

ATGGCGGCGGCGATGGTGGCGGCGGTGCATGGAGTGGGGAGGCAGGACAGGTCGTCGCCTGGCGGCGGAGGGGCGCCGCAAGTGGACACGGGCAAGTACGTGCGCTACACCCCGGAGCAGGTGGAGGCGCTGGAGCGGGTCTACGGCGAGTGCCCCAAGCCCAGCTCGCTCCGCCGCCAGCAGCTCATCCGCGAGTGCCCCATACTCAGCAACATCGAGCCCAAGCAGATCAAGGTCTGGTTCCAGAACCGCAGGTGCCGCGAGAAGCAGCGCAAGGAGGCATCTCGCCTGCAAACTGTGAACCGGAAGTTGACTGCGATGAACAAGCTGTTGATGGAGGAGAATGACAGGCTGCAGAAGCAGGTGTCCCGCCTCGTTTACGAGAACGGGTACATGCGGCAGCAGCTCCATAATCCTTCTGTGGCAACTACAGACACGAGCTGTGAGTCTGTGGTTACAAGTGGTCAACACCACCAACAGCAAAACCCAGCAGCCACGCGTCCGCAAAGGGACGCGAACAACCCAGCTGGTCTACTCGCTATAGCTGAGGAGACCTTGGCAGAGTTCCTGTCGAAAGCGACGGGTACTGCTGTCGATTGGGTGCAAATGGTTGGGATGAAGCCTGGTCCGGATTCCATTGGAATCATCGCTGTTTCGCACAATTGTAGTGGCGTAGCAGCACGAGCTTGCGGCCTTGTGAGCCTTGAGCCCACAAAGGTTGCTGAGATCCTTAAGGATCGCCCATCTTGGTATCGCGATTGCCGGTGTGTGGATGTGCTCCATGTTATCCCTACGGGTAATGGTGGAACTATTGAGCTTATCTACATGCAGACTTATGCACCGACAACTTTGGCGGCACCACGTGACTTCTGGATACTCCGTTACACTAGTGGTCTTGAGGATGGAAGTCTTGTGATCTGTGAGAGATCATTGACTCAATCCACTGGTGGCCCATCAGGACCTAACACTCCAAACTTTGTCAGAGCCGAGGTGCTTCCTAGCGGCTATTTGATCCGCCCATGTGAGGGGGGTGGTTCCATGATTCACATTGTGGATCATGTTGATTTGGATGCTTGGAGTGTGCCTGAGGTCCTTAGACCACTTTATGAATCTCCTAAGATCCTTGCGCAGAAGATGACAATTGCTGCACTGCGTCACATTAGGCAAATTGCACATGAATCAAGTGGGGAAATGCCCTATGGAGGGGGCCGTCAGCCAGCAGTTCTGAGAACATTTAGTCAGAGGCTAAGCAGAGGCTTCAATGATGCTGTCAATGGATTCCCGGATGATGGCTGGTCACTGATGAGCAGCGATGGTGCTGAGGATGTGACAATTGCTTTTAACTCATCTCCAAACAAGCTTGTTGGATCTCATGTCAACTCCTCCCAGCTGTTTTCTGCAATTGGAGGCGGCATCTTGTGTGCAAAGGCATCTATGCTGTTACAGAATGTACCACCTGCTCTCCTAGTGCGATTTTTGAGGGAGCACCGCTCTGAATGGGCTGATCCTGGTGTTGATGCTTATTCTGCTGCTGCGTTGAGGGCTAGTCCATATGCAGTTCCTGGTCTGCGAGCTGGTGGTTTTATGGGCAGTCAGGTTATATTGCCACTTGCGCACACCTTAGAGCATGAAGAGTTCCTGGAGGTCATTAGGCTTGAGGGACACAGCCTCTGCCATGATGAGGTCGTTCTATCAAGAGATATGTACCTTCTGCAGCTGTGCAGCGGTGTAGATGAAAATGCTGCGGGTGCATGTGCCCAGCTTGTCTTTGCACCCATTGACGAATCTTTTGCTGATGATGCACCACTGCTACCCTCAGGCTTCCGTGTGATACCACTGGATGGCAAGACGGATGCACCATCTGCGACACGCACACTTGACCTGGCATCTACTCTTGAGGTTGGATCGGGTGGGACTACACGGGCTTCTAGTGACACCTCGAGCACCTGCAACACAAGATCGGTCCTGACCATAGCTTTCCAATTCTCATATGAAAACCACCTTCGTGAAAGCGTAGCGGCAATGGCCAGGCAGTATGTCCGGACCGTGGTGGCATCAGTGCAGAGAGTGGCCATGGCAATAGCTCCTTCACGTCTTGGTGGACAGATTGAAACAAAGAACCCTCCAGGATCTCCTGAGGCCCATACGCTTGCAAGGTGGATTGGGAGGAGCTACCGATTCCACACTGGAGCGGATCTCCTTCGCACAGACTCACAAAGCACGGATTCTTCCTTGAAAGCAATGTGGCAACACTCTGATTCAATCATGTGCTGCTCCCTGAAGGCTGCTCCTGTGTTCACCTTCGCCAACCAAGCCGGCCTCGACATGCTGGAGACGACGCTGATTGCTCTCCAGGACATCTCGCTCGAGAAGATCCTTGATGATGATGGCCGGAAGGCACTATGTACAGAGTTCCCCAAGATCATGCAGCAGGGTTTCGCCTACCTCCCGGGCGGCGTGTGCGTGTCGAGCATGGGGCGGCCGGTGTCGTACGAGCAGGCGGTGGCGTGGAAGGTCCTGAGCGACGACGACACGCCGCACTGCCTCGCCTTCATGTTCGTCAACTGGTCATTCGTCTGA。

OsHox32基因编码序列所编码的氨基酸序列为：

MAAAMVAAVHGVGRQDRSSPGGGGAPQVDTGKYVRYTPEQVEALERVYGECPKPSSLRRQQLIRECPILSNIEPKQIKVWFQNRRCREKQRKEASRLQTVNRKLTAMNKLLMEENDRLQKQVSRLVYENGYMRQQLHNPSVATTDTSCESVVTSGQHHQQQNPAATRPQRDANNPAGLLAIAEETLAEFLSKATGTAVDWVQMVGMKPGPDSIGIIAVSHNCSGVAARACGLVSLEPTKVAEILKDRPSWYRDCRCVDVLHVIPTGNGGTIELIYMQTYAPTTLAAPRDFWILRYTSGLEDGSLVICERSLTQSTGGPSGPNTPNFVRAEVLPSGYLIRPCEGGGSMIHIVDHVDLDAWSVPEVLRPLYESPKILAQKMTIAALRHIRQIAHESSGEMPYGGGRQPAVLRTFSQRLSRGFNDAVNGFPDDGWSLMSSDGAEDVTIAFNSSPNKLVGSHVNSSQLFSAIGGGILCAKASMLLQNVPPALLVRFLREHRSEWADPGVDAYSAAALRASPYAVPGLRAGGFMGSQVILPLAHTLEHEEFLEVIRLEGHSLCHDEVVLSRDMYLLQLCSGVDENAAGACAQLVFAPIDESFADDAPLLPSGFRVIPLDGKTDAPSATRTLDLASTLEVGSGGTTRASSDTSSTCNTRSVLTIAFQFSYENHLRESVAAMARQYVRTVVASVQRVAMAIAPSRLGGQIETKNPPGSPEAHTLARWIGRSYRFHTGADLLRTDSQSTDSSLKAMWQHSDSIMCCSLKAAPVFTFANQAGLDMLETTLIALQDISLEKILDDDGRKALCTEFPKIMQQGFAYLPGGVCVSSMGRPVSYEQAVAWKVLSDDDTPHCLAFMFVNWSFV

附图说明: 

图1-1：过表达转基因植株的表型分析(A-D)；其中：A,过表达转基因植株的表型；B,过表达转基因植株叶片表型；C,野生型植株叶片横切面图；  D,过表达植株叶片横切面图；

WT代表野生型日本晴，OsHox32-OV代表OsHox32过表达转基因植株，

*表示差异具有统计学意义（p≤0.05），方框所示区域为次脉维管束结构，椭圆区域为泡状细胞，标尺长度为100μm；

图1-2：过表达转基因植株的表型分析(E-G)；其中： E,过表达植株中OsHox32基因的表达分析；F,野生型植株和过表达转基因植株的株高与穗长对比；G,野生型植株和过表达植株的剑叶和倒二叶叶宽对比；

图1-3：过表达转基因植株的表型分析(H-N)；其中： H,野生型植株叶片主脉结构；

I,过表达转基因植株叶片主脉结构；J,野生型植株叶片次脉结构；

K,过表达转基因植株叶片次脉结构；L,野生型植株叶片次脉维管束结构；

M,过表达转基因植株叶片次脉维管束结构；N,过表达植株中叶片的卷曲度；

图2为OsHox32基因在不同组织中的表达；注：Panicle1表示8cm的水稻幼穗，Panicle2表示16cm的水稻幼穗，Panicle3表示25cm的水稻幼穗；其中：root: 根；stem: 茎；leaf: 叶片；sheath: 叶鞘；shoot apical meristem: 茎顶端分生组织；panicle: 幼穗；

图3为生长素NAA处理条件下OsHox32的表达。

具体实施方式：

为了更充分的解释本发明的实施，提供HD-Zip III家族成员OsDLS1基因的制备实施实例。这些实施实例仅仅是解释、而不是限制本发明的范围。其中所用的试剂均有市售。

名称解释及来源：

实施例1

本发明的详细研究如下：

1、本发明的研究价值：

水稻叶片的直立，可以增加单位土地面积里的秧苗密度，保证植株间的空气流通，而适当的通风度对水稻的抗病性有重要影响。因此，卷叶性状的研究对水稻的增产具有重要的意义。

2．1植物材料

　　粳稻品种日本晴（Oryza sativa L. ssp. Japonica）及其过表达转基因植株（一个基因过量表达）用于本实验中。

2．2 方法

2．2．1 过表达载体的构建

带有完整ORF的OsHox32基因的cDAN从15天大小的水稻幼苗（日本晴）中通过RT-PCR方法获得，在引物设计中引入KpnI和XbaI两个酶切位点用于与载体中相应酶切位点连接。扩增的引物序列为：

OSHox32F: 5’-TTAAGGTACCGAGAAGAAGGAGAAGGGTCG-3’和 

OSHox32R: 5’-GAGCTCTAGACTCAGACGAATGACCAGTTG-3’。

扩增的目的片段与空载体pCAMBIA2300连接，转化大肠杆菌（DH5α），通过酶切鉴定和PCR鉴定后，阳性克隆进行测序分析，测序正确的载体用农杆菌介导的方法转化水稻品种日本晴。

PCR扩增条件为：1 min/98℃； 35cycles (10sec/98℃, 15 sec/62℃, 2min /72℃)； 5min/72℃。反应体系如下(总体积50μL)：

cDNA　　　　　　　                         1μL 

5×PCR　Buffer(含20 mM Mg²⁺)          10μL

dNTP（2.5mM）                  　　 　   4μL

OSHOX32F                                        0.2μM

OSHOX32R                                         0.2μM

Phusion Taq（NEB）                    　       1 U

ddH₂O补至　　　　　　　　　　　　50μL

2．2．3 OsHox32在不同组织器官中的表达

为了分析OsHox32在水稻不同组织器官中的表达情况，水稻叶片、 根、茎、叶鞘、不同时期的幼穗及幼嫩分生组织被收集，总RNA用TRIzol(Invitrogen, USA)试剂提取后用DNase I (Invitrogen, USA)处理消化基因组DNA。1μg的总 RNA用M-MLV 反转录酶 (TaKaRa, Dalian, China)反转录合成cDNA。合成的cDNA用OsHox32基因的特异引物进行PCR反应扩增，以水稻OsActin1做内参相对分析OsHox32基因的表达。

基因表达特异引物序列为：Hox32F: 5’-GGAGACGACGCTGATTGCT-3’和

Hox32R: 5’- TAGGACAGACAAACAAGAGGG -3’。 扩增程序为1 min/95℃； 30 cycles (30 sec/94℃, 30sec/56℃, 30sec/72℃)；5min/72℃。OsActin1的序列和扩增程序同第一部分材料与方法所述。

．2．4 OsHox32在过表达转基因植株中的表达分析

为了检测过表达转基因植株的过表达效果，总RNA从40天大小的转基因植株及其对照的叶片中提取后用DNase I (Invitrogen, USA)处理消化基因组DNA。1 μg的总 RNA用M-MLV 反转录酶 (TaKaRa, Dalian, China)反转录合成cDNA。所用引物序列及扩增程序同2．2．3所用的序列。每个反应进行3次重复，并用水稻OsActin1作为内参相对分析。

3.结果分析

3．1 OsHox32过表达转基因植株获得及其表型分析

为了探索该转录因子的功能，我们采用反向遗传学方法构建了过表达载体，将其导入到中花11中。过表达植株一共获得14个独立株系，共98株，其中有86株扩增出了目的片段，阳性率为88%；为了验证转基因植株中的过表达载体是否正常工作，目的基因是否得到过表达，在获得的T₀代过表达植株中随机选取了两个独立的株系，每个株系选取了两株植株进行检测，结果显示4株过表达植株与野生型相比，表达量均有不同程度的提高（图1-2 E）。通过对T₀代过表达转基因植株与野生型对比发现，过表达植株发生了明显的表型变化，首先，过表达植株的株高比野生型略有降低，穗长略短（图1-2 F），其次，通过对剑叶和倒二叶叶宽的测量发现，野生型植株的剑叶和倒二叶的平均叶宽分别为1.31cm和1.22cm，而过表达植株的剑叶和倒二叶叶宽分别为1.17cm和1.08cm，叶片的宽度明显窄于野生型，并且叶片与茎秆间夹角较小（图1-1 A，图1-2 G）；再次，一个非常明显的表型是叶片向近轴面（adaxial axis）即面向茎的一面卷曲成圆柱状（图1-1A,B）。通过对剑叶和倒二叶叶片卷曲度的测量发现，倒二叶的卷曲更为明显，达到55%，而剑叶的卷曲度为47%（图1-3 N）。

为了进一步研究过表达转基因植株叶片卷曲的组织形态学特征，分别对野生型和过表达植株进行了石蜡组织切片观察。结果显示，与野生型相比，过表达转基因植株叶片的主脉与侧脉间夹角较小，且主脉中靠近侧脉的气腔要明显变小（如1-3 H,I）；主脉和侧脉中都分布有维管束，维管束周围有薄壁细胞环绕，在野生型中，维管束在靠近远轴端的薄壁细胞较少，厚壁组织较多；而在过表达转基因植株中，远轴端则分布有较多的薄壁细胞（如图1-3 J,K,L,M）。另外，通过对野生型和过表达植株侧脉结构中的泡状细胞数目进行统计发现，过表达植株中的泡状细胞数目有所减少，由此推测，过表达植株叶片的卷曲可能与远轴端薄壁细胞的分布和近轴端泡状细胞的数目减少有关。

3．2 OsHox32在不同组织中的表达分析

为了检测OsHox32在水稻不同组织中的表达情况，收集野生型不同组织材料，分离RNA，反转录后用RT-PCR分析目的基因在水稻不同组织中的时空表达特性，结果表明OsHox32在水稻不同组织中均有表达，但在水稻的茎顶端分生组织中较高的表达，其他组织中表达量一般（如图2），表明OsHox32主要在幼嫩的分生组织中有较高表达。

3．3 生长素对OsHox32基因表达的调控

为了探索OsHox32过表达引起的卷叶性状是否与生长素有关，我们用1μmol的生长素NAA对野生型水稻幼苗进行12h连续处理，分别在0h，3h，6h，12h进行取样，提取RNA并反转录，对OsHox32基因进行表达分析，对照组用无菌水做连续处理，经过Real-Time PCR分析结果显示，OsHox32基因的表达量在0h~3h过程中，随着NAA处理时间的延长，表达量有所上升，但在3h~6h期间，随着NAA处理时间的延长，OsHox32的表达量出现了反常的降低，在6h~12h期间，OsHox32的表达又重新恢复上升，而对照组中OsHox32的表达量随着时间的延长，几乎没有变化（如图3）。这一结果暗示了该基因的功能可能与生长素有关。

SEQUENCE LISTING

 

<110>  天津师范大学

<120>  OsHox32在促进水稻叶片形态建成方面的应用

<160>  2    

<170>  PatentIn version 3.5

<210>  1

<211>  2580

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  1

atggcggcgg cgatggtggc ggcggtgcat ggagtgggga ggcaggacag gtcgtcgcct       60 

 

ggcggcggag gggcgccgca agtggacacg ggcaagtacg tgcgctacac cccggagcag      120

 

gtggaggcgc tggagcgggt ctacggcgag tgccccaagc ccagctcgct ccgccgccag      180

 

cagctcatcc gcgagtgccc catactcagc aacatcgagc ccaagcagat caaggtctgg      240

 

ttccagaacc gcaggtgccg cgagaagcag cgcaaggagg catctcgcct gcaaactgtg      300

 

aaccggaagt tgactgcgat gaacaagctg ttgatggagg agaatgacag gctgcagaag      360

 

caggtgtccc gcctcgttta cgagaacggg tacatgcggc agcagctcca taatccttct      420

 

gtggcaacta cagacacgag ctgtgagtct gtggttacaa gtggtcaaca ccaccaacag      480

 

caaaacccag cagccacgcg tccgcaaagg gacgcgaaca acccagctgg tctactcgct      540

 

atagctgagg agaccttggc agagttcctg tcgaaagcga cgggtactgc tgtcgattgg      600

 

gtgcaaatgg ttgggatgaa gcctggtccg gattccattg gaatcatcgc tgtttcgcac      660

 

aattgtagtg gcgtagcagc acgagcttgc ggccttgtga gccttgagcc cacaaaggtt      720

 

gctgagatcc ttaaggatcg cccatcttgg tatcgcgatt gccggtgtgt ggatgtgctc      780

 

catgttatcc ctacgggtaa tggtggaact attgagctta tctacatgca gacttatgca      840

 

ccgacaactt tggcggcacc acgtgacttc tggatactcc gttacactag tggtcttgag      900

 

gatggaagtc ttgtgatctg tgagagatca ttgactcaat ccactggtgg cccatcagga      960

 

cctaacactc caaactttgt cagagccgag gtgcttccta gcggctattt gatccgccca     1020

 

tgtgaggggg gtggttccat gattcacatt gtggatcatg ttgatttgga tgcttggagt     1080

 

gtgcctgagg tccttagacc actttatgaa tctcctaaga tccttgcgca gaagatgaca     1140

 

attgctgcac tgcgtcacat taggcaaatt gcacatgaat caagtgggga aatgccctat     1200

 

ggagggggcc gtcagccagc agttctgaga acatttagtc agaggctaag cagaggcttc     1260

 

aatgatgctg tcaatggatt cccggatgat ggctggtcac tgatgagcag cgatggtgct     1320

 

gaggatgtga caattgcttt taactcatct ccaaacaagc ttgttggatc tcatgtcaac     1380

 

tcctcccagc tgttttctgc aattggaggc ggcatcttgt gtgcaaaggc atctatgctg     1440

 

ttacagaatg taccacctgc tctcctagtg cgatttttga gggagcaccg ctctgaatgg     1500

 

gctgatcctg gtgttgatgc ttattctgct gctgcgttga gggctagtcc atatgcagtt     1560

 

cctggtctgc gagctggtgg ttttatgggc agtcaggtta tattgccact tgcgcacacc     1620

 

ttagagcatg aagagttcct ggaggtcatt aggcttgagg gacacagcct ctgccatgat     1680

 

gaggtcgttc tatcaagaga tatgtacctt ctgcagctgt gcagcggtgt agatgaaaat     1740

 

gctgcgggtg catgtgccca gcttgtcttt gcacccattg acgaatcttt tgctgatgat     1800

 

gcaccactgc taccctcagg cttccgtgtg ataccactgg atggcaagac ggatgcacca     1860

 

tctgcgacac gcacacttga cctggcatct actcttgagg ttggatcggg tgggactaca     1920

 

cgggcttcta gtgacacctc gagcacctgc aacacaagat cggtcctgac catagctttc     1980

 

caattctcat atgaaaacca ccttcgtgaa agcgtagcgg caatggccag gcagtatgtc     2040

 

cggaccgtgg tggcatcagt gcagagagtg gccatggcaa tagctccttc acgtcttggt     2100

 

ggacagattg aaacaaagaa ccctccagga tctcctgagg cccatacgct tgcaaggtgg     2160

 

attgggagga gctaccgatt ccacactgga gcggatctcc ttcgcacaga ctcacaaagc     2220

 

acggattctt ccttgaaagc aatgtggcaa cactctgatt caatcatgtg ctgctccctg     2280

 

aaggctgctc ctgtgttcac cttcgccaac caagccggcc tcgacatgct ggagacgacg     2340

 

ctgattgctc tccaggacat ctcgctcgag aagatccttg atgatgatgg ccggaaggca     2400

 

ctatgtacag agttccccaa gatcatgcag cagggtttcg cctacctccc gggcggcgtg     2460

 

tgcgtgtcga gcatggggcg gccggtgtcg tacgagcagg cggtggcgtg gaaggtcctg     2520

 

agcgacgacg acacgccgca ctgcctcgcc ttcatgttcg tcaactggtc attcgtctga     2580 

 

<210>  2

<211>  859

<212>  PRT

<213>  OsHox32氨基酸

 

<400>  2

 

Met Ala Ala Ala Met Val Ala Ala Val His Gly Val Gly Arg Gln Asp

1               5                   10                  15     

Arg Ser Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ala Pro Gln Val Asp Thr Gly Lys

            20                  25                  30         

Tyr Val Arg Tyr Thr Pro Glu Gln Val Glu Ala Leu Glu Arg Val Tyr

        35                  40                  45             

Gly Glu Cys Pro Lys Pro Ser Ser Leu Arg Arg Gln Gln Leu Ile Arg

    50                  55                  60                 

Glu Cys Pro Ile Leu Ser Asn Ile Glu Pro Lys Gln Ile Lys Val Trp

65                  70                  75                  80 

Phe Gln Asn Arg Arg Cys Arg Glu Lys Gln Arg Lys Glu Ala Ser Arg

                85                  90                  95     

Leu Gln Thr Val Asn Arg Lys Leu Thr Ala Met Asn Lys Leu Leu Met

            100                 105                 110        

Glu Glu Asn Asp Arg Leu Gln Lys Gln Val Ser Arg Leu Val Tyr Glu

        115                 120                 125            

Asn Gly Tyr Met Arg Gln Gln Leu His Asn Pro Ser Val Ala Thr Thr

    130                 135                 140                

Asp Thr Ser Cys Glu Ser Val Val Thr Ser Gly Gln His His Gln Gln

145                 150                 155                 160

Gln Asn Pro Ala Ala Thr Arg Pro Gln Arg Asp Ala Asn Asn Pro Ala

                165                 170                 175    

Gly Leu Leu Ala Ile Ala Glu Glu Thr Leu Ala Glu Phe Leu Ser Lys

            180                 185                 190        

Ala Thr Gly Thr Ala Val Asp Trp Val Gln Met Val Gly Met Lys Pro

        195                 200                 205            

Gly Pro Asp Ser Ile Gly Ile Ile Ala Val Ser His Asn Cys Ser Gly

    210                 215                 220                

Val Ala Ala Arg Ala Cys Gly Leu Val Ser Leu Glu Pro Thr Lys Val

225                 230                 235                 240

Ala Glu Ile Leu Lys Asp Arg Pro Ser Trp Tyr Arg Asp Cys Arg Cys

                245                 250                 255    

Val Asp Val Leu His Val Ile Pro Thr Gly Asn Gly Gly Thr Ile Glu

            260                 265                 270        

Leu Ile Tyr Met Gln Thr Tyr Ala Pro Thr Thr Leu Ala Ala Pro Arg

        275                 280                 285            

Asp Phe Trp Ile Leu Arg Tyr Thr Ser Gly Leu Glu Asp Gly Ser Leu

    290                 295                 300                

Val Ile Cys Glu Arg Ser Leu Thr Gln Ser Thr Gly Gly Pro Ser Gly

305                 310                 315                 320

Pro Asn Thr Pro Asn Phe Val Arg Ala Glu Val Leu Pro Ser Gly Tyr

                325                 330                 335    

Leu Ile Arg Pro Cys Glu Gly Gly Gly Ser Met Ile His Ile Val Asp

            340                 345                 350        

His Val Asp Leu Asp Ala Trp Ser Val Pro Glu Val Leu Arg Pro Leu

        355                 360                 365            

Tyr Glu Ser Pro Lys Ile Leu Ala Gln Lys Met Thr Ile Ala Ala Leu

    370                 375                 380                

Arg His Ile Arg Gln Ile Ala His Glu Ser Ser Gly Glu Met Pro Tyr

385                 390                 395                 400

Gly Gly Gly Arg Gln Pro Ala Val Leu Arg Thr Phe Ser Gln Arg Leu

                405                 410                 415    

Ser Arg Gly Phe Asn Asp Ala Val Asn Gly Phe Pro Asp Asp Gly Trp

            420                 425                 430        

Ser Leu Met Ser Ser Asp Gly Ala Glu Asp Val Thr Ile Ala Phe Asn

        435                 440                 445            

Ser Ser Pro Asn Lys Leu Val Gly Ser His Val Asn Ser Ser Gln Leu

    450                 455                 460                

Phe Ser Ala Ile Gly Gly Gly Ile Leu Cys Ala Lys Ala Ser Met Leu

465                 470                 475                 480

Leu Gln Asn Val Pro Pro Ala Leu Leu Val Arg Phe Leu Arg Glu His

                485                 490                 495    

Arg Ser Glu Trp Ala Asp Pro Gly Val Asp Ala Tyr Ser Ala Ala Ala

            500                 505                 510        

Leu Arg Ala Ser Pro Tyr Ala Val Pro Gly Leu Arg Ala Gly Gly Phe

        515                 520                 525            

Met Gly Ser Gln Val Ile Leu Pro Leu Ala His Thr Leu Glu His Glu

    530                 535                 540                

Glu Phe Leu Glu Val Ile Arg Leu Glu Gly His Ser Leu Cys His Asp

545                 550                 555                 560

Glu Val Val Leu Ser Arg Asp Met Tyr Leu Leu Gln Leu Cys Ser Gly

                565                 570                 575    

Val Asp Glu Asn Ala Ala Gly Ala Cys Ala Gln Leu Val Phe Ala Pro

            580                 585                 590        

Ile Asp Glu Ser Phe Ala Asp Asp Ala Pro Leu Leu Pro Ser Gly Phe

        595                 600                 605            

Arg Val Ile Pro Leu Asp Gly Lys Thr Asp Ala Pro Ser Ala Thr Arg

    610                 615                 620                

Thr Leu Asp Leu Ala Ser Thr Leu Glu Val Gly Ser Gly Gly Thr Thr

625                 630                 635                 640

Arg Ala Ser Ser Asp Thr Ser Ser Thr Cys Asn Thr Arg Ser Val Leu

                645                 650                 655    

Thr Ile Ala Phe Gln Phe Ser Tyr Glu Asn His Leu Arg Glu Ser Val

            660                 665                 670        

Ala Ala Met Ala Arg Gln Tyr Val Arg Thr Val Val Ala Ser Val Gln

        675                 680                 685            

Arg Val Ala Met Ala Ile Ala Pro Ser Arg Leu Gly Gly Gln Ile Glu

    690                 695                 700                

Thr Lys Asn Pro Pro Gly Ser Pro Glu Ala His Thr Leu Ala Arg Trp

705                 710                 715                 720

Ile Gly Arg Ser Tyr Arg Phe His Thr Gly Ala Asp Leu Leu Arg Thr

                725                 730                 735    

Asp Ser Gln Ser Thr Asp Ser Ser Leu Lys Ala Met Trp Gln His Ser

            740                 745                 750        

Asp Ser Ile Met Cys Cys Ser Leu Lys Ala Ala Pro Val Phe Thr Phe

        755                 760                 765             

Ala Asn Gln Ala Gly Leu Asp Met Leu Glu Thr Thr Leu Ile Ala Leu

    770                 775                 780                

Gln Asp Ile Ser Leu Glu Lys Ile Leu Asp Asp Asp Gly Arg Lys Ala

785                 790                 795                 800

Leu Cys Thr Glu Phe Pro Lys Ile Met Gln Gln Gly Phe Ala Tyr Leu

                805                 810                 815    

Pro Gly Gly Val Cys Val Ser Ser Met Gly Arg Pro Val Ser Tyr Glu

            820                 825                 830        

Gln Ala Val Ala Trp Lys Val Leu Ser Asp Asp Asp Thr Pro His Cys

        835                 840                 845            

Leu Ala Phe Met Phe Val Asn Trp Ser Phe Val

 

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