喹啉基吡咯并嘧啶基稠环化合物或其盐

摘要

本发明提供具有EGFR抑制活性并且具有细胞生长抑制效果的新化合物。还提供一种药剂，其具有EGFR抑制活性，因此可用于预防和/或治疗癌症。由通式(I)表示的化合物或其盐：

说明书

相关申请的交叉参考

本申请要求2012年2月23日提交的日本专利申请第2012-037565号的说明书的优先权(在本发明的说明书中将其公开内容全文并入作为参考)。

发明领域

本发明涉及对表皮生长因子受体(EGFR)具有抑制作用的喹啉基吡咯并嘧啶基稠环化合物以及含有这些化合物作为活性成分的药物组合物。

背景技术

EGFR是受体型酪氨酸激酶，当与作为配体的表皮生长因子(EGF)结合时在正常组织中发挥其生理功能，且在上皮组织中有助于生长、凋亡抑制等(非专利文献(NPL)1)。

此外，EGFR是致癌基因之一，并且在许多种癌症类型，例如头颈癌、乳腺癌、结肠直肠癌、食道癌、胰腺癌、肺癌、卵巢癌、肾癌、膀胱癌、皮肤癌和脑肿瘤中观察到EGFR基因的扩增以及其蛋白质的高度表达或突变(非专利文献(NPL)2)。在日本和西方国家，每年大约每100,000人中有170-375人死于癌症，并且癌症作为死亡原因排名靠前(非专利文献(NPL)3)。尤其是，在世界范围内每年肺癌造成的死亡人数达到大约1,400,000人，并且由于非小细胞肺癌占肺癌的80％或更多，因此对于开发对其有效的治疗一直有需求(非专利文献(NPL)4)。

近年来，正在识别出作为这些癌症原因的基因，EGFR基因中的突变也是其中之一，并导致活性突变EGFR蛋白质。活性突变EGFR蛋白质是，例如，746-750位氨基酸的缺失(EGFR(d746-750))、858位的氨基酸从亮氨酸突变成精氨酸(EGFR(L858R))等。这些突变，例如，在日本在20-40％的非小细胞肺癌病例中得到报道，且在西方国家在10-15％的非小细胞肺癌病例中得到报道。由于具有这些突变的非小细胞肺癌对于吉非替尼(gefitinib)(产品名称：Iressa(注册商标))和埃罗替尼(erlotinib)(产品名称：Tarceva(注册商标))高度易感，其是抑制EGFR激酶活性的化学药剂(EGFR抑制剂)，这些化学药剂在日本和西方国家中被用作治疗剂。但是，在从开始使用的6-12个月之后癌症获得了对吉非替尼和埃罗替尼的耐药性，治疗效果变弱。因此，该获得性耐药已经成为治疗具有高度易感的突变EGFR的非小细胞肺癌的严重问题。已经揭示了大约50％的获得性耐药是由于耐药性突变EGFR蛋白质(EGFR(d746-750/T790M)或EGFR(T790M/L858R))的出现，其在EGFR基因中具有第二突变，导致790位的氨基酸从苏氨酸变为甲硫氨酸。开发对具有该耐药性突变EGFR的非小细胞肺癌有效的治疗剂已成为重要任务(非专利文献(NPL)5)。

另一方面，据报道皮肤异常和消化道病症是目前临床上用作治疗剂的吉非替尼和埃罗替尼EGFR抑制剂以及处于临床试验中的EGFR抑制剂例如BIBW2992等的常见副作用。广泛认为，这些副作用原因如下：EGFR抑制剂不仅抑制非小细胞肺癌中表达的突变EGFR的活性，还抑制皮肤或消化道中表达的野生型EGFR(EGFR(WT))的活性(非专利文献(NPL)1)。就降低副作用的观点而言，认为优选的是对于正常组织中EGFR(WT)的抑制活性较弱。

因此，预期通过以其中对皮肤或消化道的副作用不强烈出现的给药剂量，施用相比较于对于790位的氨基酸突变成甲硫氨酸的耐药性突变EGFR的抑制活性，对于野生型EGFR的抑制活性更弱的化学药剂，可能抑制具有耐药性突变EGFR的非小细胞肺癌细胞的生长。预测这有助于治疗癌症，延长生命，并提高患者QOL。此外，如果化学药剂对于野生型EGFR的抑制活性弱，但不仅对于耐药性突变EGFR抑制活性强，而且也对于高度易感的突变EGFR例如EGFR(d746-750)和EGFR(L858R)等(其对于吉非替尼和埃罗替尼高度易感)的抑制活性强；预期以其中对皮肤或消化道的副作用不强烈出现的给药剂量，可能抑制表达高度易感的突变EGFR或耐药性突变EGFR的非小细胞肺癌细胞的生长，或者预期可能降低从表达高度易感的突变EGFR的非小细胞肺癌细胞中作为获得性耐药性出现耐药性突变EGFR的频率。预测这有助于治疗癌症，延长生命，并提高患者QOL。而且，由于高度易感的突变EGFR和耐药性突变EGFR的表达在实际的治疗场景中可以用作分层指数以便能够选择患者，它们就伦理角度而言贡献很大。

具有类似于本发明化合物的结构的化合物N-(3-(4-氨基-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-5-基)苯基)苯甲酰胺衍生物是已知的(专利文献(PTL)1)。尽管专利文献1描述了使用该酰胺化合物用于治疗特征在于B-RAF激酶的疾病，但该文献并未公开由其证实激酶抑制活性的具体测试和结果，因此这样的活性未予确认。

专利文献

PTL 1：国际公开号WO2006/102079的小册子

非专利文献：

NPL 1：Nature Rev.Cancer,vol.6,pp803-811(2006)

NPL2：J.Clin.Oncol.,vol.19,32s-40s(2001)

NPL3：Ministry of Internal Affairs and Communications StatisticsBureau homepage/statistical data/world statistics“World Statistics2011”Chapter 14People’s Life and Social Security,14-1Death Rates byCauses Death

NPL4：Lung Cancer,vol.69,pp1-12(2010)

NPL5：Nature Rev.Cancer,vol.10,pp760-774(2010)

发明内容

技术问题

如上所述，EGFR抑制剂尽管预期在癌症治疗中有效，但目前在临床上不够有效。

因此，本发明的目的在于提供强烈抑制EGFR的新化合物或其盐。本发明的进一步的目的在于提供：抑制EGFR(d746-750)、EGFR(L858R)、EGFR(d746-750/T790M)和EGFR(T790M/L858R)但是不抑制EGFR(WT)的新化合物；或其盐。

问题的解决方案

为实现上述目的，本发明的发明人进行了深入研究。结果，他们发现，本发明的一组喹啉基吡咯并嘧啶基稠环化合物对EGFR具有优异的抑制活性，并具有癌细胞生长抑制作用，可用作治疗癌症用的药物，因此实现了本发明。

因此，本发明提供以下数条。

第1条.一种由下式(I)表示的化合物或其盐：

(在上式中，m是1或2；

n是1或2；

R₁是氢原子或C₁-C₄烷基；并且

R₂、R₃和R₄相同或者不同，并且各自为氢原子、卤原子、C₁-C₄烷基或由式(a)表示的基团：

-CH₂-N(R₅)(R₆)   (a)

(在上式中，R₅和R₆相同或者不同，并且各自表示氢原子或C₁-C₄烷基，或者R₅和R₆可以与其上连接的氮原子一起形成具有4-6元环的杂环烷基))。

第2条.根据第1条所述的化合物或其盐，其中

m是1或2；

n是1或2；

R₁是氢原子或C₁-C₄烷基；并且

R₂、R₃和R₄相同或者不同，并且各自为氢原子、卤原子、C₁-C₄烷基或由式(a)表示的基团：

-CH₂-N(R₅)(R₆)   (a)

(在上式中，R₅和R₆相同或者不同，并且各自表示C₁-C₄烷基)。

第3条.根据第1条或第2条所述的化合物或其盐，其中

m是1或2；

n是1或2；

R₁是氢原子或甲基；并且

R₂、R₃和R₄相同或者不同，并且各自为氢原子、氯原子或二甲基氨基甲基。

第4条.根据第1条至第3条中任一条所述的化合物或其盐，其中m和n为(m,n)＝(1,1)、(1,2)或(2,1)。

第5条.根据第1条至第4条中任一条所述的化合物或其盐，其中化合物选自以下化合物：

(R)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺，

(S)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺，

N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-N-甲基丙烯酰胺，

(E)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-4-(二甲基氨基)-2-丁烯酰胺，

(S,E)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-3-氯丙烯酰胺，

(S,Z)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-3-氯丙烯酰胺，

(S)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-8-基)丙烯酰胺，

(S)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-9-基)丙烯酰胺，

(R)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-9-基)丙烯酰胺。

第6条.一种EGFR抑制剂，其包括根据第1条至第5条中任一条所述的化合物或其盐作为活性成分。

第7条.一种药物组合物，其包括根据第1条至第5条中任一条所述的化合物或其盐。

第8条.一种抗肿瘤剂，其包括根据第1条至第5条中任一条所述的化合物或其盐作为活性成分。

第9条.一种用于治疗或预防癌症的方法，该方法包括以有效治疗或预防癌症的剂量向哺乳动物施用根据第1条至第5条中任一条所述的化合物或其盐的步骤。

第10条.根据第1条至第5条中任一条所述的化合物或其盐在制造抗肿瘤剂中的用途。

第11条.根据第1条至第5条中任一条所述的化合物或其盐，其用于治疗或预防癌症。

本发明还提供以下条中详细说明的本发明的化合物的合成中间体的制造方法。

第12条.一种用于制造由式(VIII)表示的化合物或其盐的方法，该方法包括以下步骤：

[I]使有机硼烷试剂作用于由式(VII)表示的化合物或其盐：

(在上式中，P₁是羟基保护基，n是1或2，且m₁是0或1)；和

[II]使用钯(0)催化剂且在碱金属氢氧化物的存在下，使步骤[I]的反应产物中发生分子内环化。

(在上式中，m是1或2，且P₁和n如上所述)。

第13条.一种用于制造由式(XX)表示的化合物或其盐的方法，

(在上式中，R₁是氢原子或C₁-C₄烷基，P₂是氨基保护基，m是1或2，且n是1或2)，

该方法包括以下步骤：

[I]使有机硼烷试剂作用于由式(XIX)表示的化合物或其盐

(在上式中，R₁、P₂和n如上所述，且m₁是0或1)；和

[II]使用钯(0)催化剂且在碱金属氢氧化物的存在下，使步骤[I]的反应产物中发生分子内环化。

发明的有益效果

根据本发明，提供可用作EGFR抑制剂的由上述式(I)表示的新化合物或其盐。

很明显，本发明的化合物或其盐具有优异的EGFR抑制活性，并对于癌细胞系具有生长抑制作用。此外，由于对于EGFR具有优异的选择性，化合物或其盐具有副作用小的优势。因此，本发明的化合物或其盐可用作用于治疗和/或预防癌症的药剂。

具体实施方式

根据本发明的式(I)的化合物是具有喹啉结构和α,β-不饱和酰胺结构的喹啉基吡咯并嘧啶基稠环化合物，因此是前述现有技术文件等中的任意者中均未公开的新化合物。

具体地，PTL1中具体公开的化合物是N-(3-(4-氨基-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-5-基)苯基)苯甲酰胺衍生物。本发明的化合物与PTL 1中所公开的化合物的不同之处在于，本发明的化合物具有喹啉结构和α,β-不饱和酰胺结构。

在本说明书中，术语“C₁-C₄烷基”是指具有1-4个碳原子的直链或支链烷基。其具体例子包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基等。

在本说明书中，“卤素”的例子包括氯、溴、氟和碘。

在本说明书中，术语“4-6元杂环烷基”是指在环中具有1-2个氮原子的4-6元环烷基。其具体例子包括氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、咪唑烷基等。

式(I)中的m和n优选为(m,n)＝(1,1)、(1,2)或(2,1)。

式(I)中的R₁优选为氢或甲基。

式(I)中的R₂、R₃和R₄可以是相同或不同的，并且各自优选表示氢、卤素、C₁-C₄烷基或由上式(a)表示的基团。当式(I)中R₂、R₃和R₄中的至少一个是由式(a)表示的基团时，R₅和R₆中的每一个优选为C₁-C₄烷基，并且R₅和R₆二者均更优选为甲基。

式(I)中的R₂更优选为氢。

式(I)中的R₃更优选为氢、氯或二甲基氨基甲基。

式(I)中的R₄更优选为氢或氯。

在本发明中，优选在式(I)的化合物或其盐中，m是1或2；n是1或2；R₁是氢或甲基；R₂、R₃和R₄相同或者不同，并表示氢、氯或二甲基氨基甲基。

当m是1且n是1时，优选在式(I)的化合物或其盐中，R₁是氢或甲基；R₂是氢；R₃和R₄之一是氢、氯或二甲基氨基甲基，且另一个是氢。

当m＝1且n＝2或者m＝2且n＝1时，优选在式(I)的化合物或其盐中，所有的R₁、R₂、R₃和R₄均为氢。

本发明优选化合物的具体例子包括以下：

(R)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺；

(S)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺；

N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-N-甲基丙烯酰胺；

(E)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-4-(二甲基氨基)-2-丁烯酰胺；

(S,E)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-3-氯丙烯酰胺；

(S,Z)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-3-氯丙烯酰胺；

(S)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-8-基)丙烯酰胺；

(S)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-9-基)丙烯酰胺；和

(R)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-9-基)丙烯酰胺。

优选对于EGFR(T790M/L858R)具有潜在的酶抑制活性的化合物，更优选酶抑制活性为2nM或更低的化合物。优选对于EGFR(d746-750/T790M)具有潜在的酶抑制活性的化合物，更优选酶抑制活性为2nM或更低的化合物。

接下来，将解释根据本发明的用于制造化合物的方法：

例如，可以通过以下制造方法或实施例中所述的方法制造本发明的化合物(I)。但是，本发明的化合物(I)的制造方法并不限于这些反应实施例。

制造方法1

(其中，P₁是羟基保护基，L₁和L₂是离去基团，m₁是0至1；且R₂、R₃、R₄、m和n如上文所定义)。

(步骤a)

在该步骤中，在碱的存在下使用式(II)和(III)的化合物生成式(IV)的化合物。

由式(II)的化合物中的L₁表示的离去基团的例子包括溴或碘原子。式(II)的化合物可以是市售产品，或者可以通过已知方法制造。由式(III)中的P₁表示的羟基保护基的例子包括叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基等。由L₂表示的离去基团的例子包括溴、碘、甲磺酸酯、对甲苯磺酸酯等。式(III)的化合物可以是市售产品，或者可以根据已知方法制造。式(III)的化合物相对于每摩尔式(II)的化合物可以以1-10摩尔、且优选1-5摩尔的量使用。

可以使用的碱的例子包括无机碱，例如，碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢氧化铯、氢化钠和氢化钾；以及有机胺，例如，三甲胺、三乙胺、三丙胺、二异丙基乙基胺、N-甲基吗啉、吡啶、4-(N,N-二甲基氨基)吡啶、二甲基吡啶和三甲基吡啶。这样的碱相对于每摩尔式(II)的化合物可以以1-100摩尔、且优选1-10摩尔的量使用。

可使用的溶剂的例子包括N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜、四氢呋喃、1,4-二噁烷、N-甲基吡咯烷-2-酮、乙腈等。这些溶剂可以单独使用，或者作为混合物使用。反应时间为0.1-100小时，且优选0.5-24小时。反应温度为0℃至溶剂沸点，且优选0-100℃。

由此得到的式(IV)的化合物可以在经过或不经通过已知的分离和纯化方式，例如，浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析分离或纯化之后进行后续步骤。

(步骤b)

在该步骤中，使式(IV)的化合物与氨或其盐反应，生成式(V)的化合物。

该步骤中使用的氨或其盐的量相对于每摩尔式(IV)的化合物通常是等摩尔量或过量的摩尔量。

任何对反应没有不利影响的反应溶剂均可以使用。可使用的反应溶剂的例子包括水、甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇、四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、1,4-二噁烷、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷-2-酮、二甲亚砜或其混合溶剂。

反应温度通常为0-200℃，且优选室温至150℃。反应时间通常为5分钟至7天，且优选30分钟至24小时。

由此得到的式(V)的化合物可以在经过或不经通过已知的分离和纯化方式，例如，浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析分离和纯化之后进行后续步骤。

(步骤c)

在该步骤中，使式(V)的化合物与3-喹啉硼酸或3-喹啉硼酸酯进行偶联反应，生成式(VI)的化合物。

该步骤可以根据通常已知的方法进行(例如，Chemical Reviews,Vol.95,p.2457,1995)。例如，该步骤可以在对反应没有不利影响的溶剂中在过渡金属催化剂和碱的存在下进行。

所使用的3-喹啉硼酸或3-喹啉硼酸酯的量相对于每摩尔式(V)的化合物可以是1-10摩尔，且优选1-3摩尔。

过渡金属催化剂的例子包括钯催化剂(例如，乙酸钯、氯化钯、四三苯基膦钯、1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁-钯(II)二氯化物和三(二亚苄基丙酮)二钯(0))、镍催化剂(例如，氯化镍)等。如果需要，可以加入配体(例如，三苯基膦、三叔丁基膦或2-二环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯基)，并且可以使用金属氧化物(例如，氧化铜或氧化银)作为助催化剂。使用的过渡金属催化剂的量可以取决于催化剂类型而变化。过渡金属催化剂相对于每摩尔式(V)的化合物通常以0.0001-1摩尔、且优选0.01-0.5摩尔的量使用。使用的配体的量相对于每摩尔式(V)的化合物通常是0.0001-4摩尔，且优选0.01-2摩尔。使用的助催化剂的量相对于每摩尔式(V)的化合物通常是0.0001-4摩尔，且优选0.01-2摩尔。

可以使用的碱的例子包括有机胺(例如，三甲胺、三乙胺、二异丙基乙基胺、N-甲基吗啉、1,8-二氮杂二环[5,4,0]十一碳-7-烯、吡啶和N,N-二甲基苯胺)、碱金属盐(例如，碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、磷酸钠、磷酸钾、氢氧化钠和氢氧化钾)、金属氢化物(例如，氢化钾和氢化钠)、碱金属醇盐(例如，甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钠和叔丁醇钾)、碱金属二硅叠氮化物(disilazides)(例如，二硅叠氮化锂、二硅叠氮化钠和二硅叠氮化钾)等。其中，优选碱金属盐，例如碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、磷酸钠和磷酸钾；碱金属醇盐，例如叔丁醇钠和叔丁醇钾；以及有机胺，例如三乙胺和二异丙基乙基胺。使用的碱的量相对于每摩尔式(V)的化合物通常为0.1-10摩尔，且优选1-5摩尔。

任何对反应没有不利影响的溶剂均可以使用。可使用的溶剂的例子包括烃(例如，苯、甲苯和二甲苯)、卤代烃(例如，氯仿和1,2-二氯乙烷)、腈(例如，乙腈)、醚(例如，1,2-二甲氧基乙烷、四氢呋喃和1,4-二噁烷)、醇(例如，甲醇和乙醇)、质子惰性极性溶剂(例如，N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜和六甲基磷酰基酰胺)、水及其混合溶剂。反应时间为0.1-100小时，且优选0.5-24小时。反应温度为0℃至溶剂沸点，且优选20-150℃。

由此得到的式(VI)的化合物可以在经过或不经通过已知的分离和纯化方式，例如，浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析分离和纯化之后进行后续步骤。

(步骤d)

在该步骤中，将化合物(VI)用N-溴琥珀酰亚胺溴化，生成化合物(VII)。

卤化可以通过WO 2006/102079中公开的方法或通过与其类似的方法进行。

该步骤中使用的N-溴琥珀酰亚胺的量相对于每摩尔式(VI)的化合物为0.5-2.0摩尔，且优选0.9-1.2摩尔。

任何对反应没有不利影响的反应溶剂均可以使用。例如，可以优选使用四氢呋喃、1,4-二噁烷、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷-2-酮或其混合溶剂。

反应温度通常为-20至50℃，且优选0℃至室温。反应时间通常为1分钟至2天，且优选5分钟至12小时。

由此得到的式(VII)的化合物可以在经过或不经通过已知的分离和纯化方式，例如，浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析分离或纯化之后进行后续步骤。

步骤(e)

在该步骤中，使有机硼烷试剂作用于式(VII)的化合物，以在体系中制备烷基硼烷中间体，并在过渡金属催化剂和碱的存在下将中间体转化成式(VIII)的化合物。

该步骤可以根据通常已知的方法进行(例如，WO 2006/102079)。

有机硼烷试剂的例子包括9-BBN(9-硼二环[3.3.1]-壬烷)、9-BBN(9-硼二环[3.3.1]-壬烷)二聚体、二异戊基硼烷(disiamylborane)(双(1,2-二甲基丙基)硼烷)、异己基硼烷(thexylborane)(1,1,2-三甲基丙基)硼烷)等。有机硼烷试剂优选为9-BBN(9-硼二环[3.3.1]-壬烷)或9-BBN(9-硼二环[3.3.1]-壬烷)二聚体，特别优选9-BBN(9-硼二环[3.3.1]-壬烷)。使用的有机硼烷试剂的量不受具体限制，只要可以生成烷基硼烷中间体即可。有机硼烷试剂相对于每摩尔式(VII)的化合物可以以1-20摩尔的量使用；就促进反应进程而言，有机硼烷试剂的量优选为6-10摩尔。

作为过渡金属催化剂，例如，可以使用二价钯催化剂(例如，乙酸钯、氯化钯和1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁-钯(II)二氯化物)。如果需要，可以使用配体(例如，三苯基膦和三叔丁基膦)。使用的过渡金属催化剂的量可以取决于催化剂的类型而变化。过渡金属催化剂相对于每摩尔式(VII)的化合物通常以0.0001-1摩尔、且优选0.01-0.5摩尔的量使用。配体相对于每摩尔式(VII)的化合物通常以0.0001-4摩尔、且优选0.01-2摩尔的量使用。

或者，例如，可以使用零价钯催化剂。零价钯催化剂的例子包括四三苯基膦钯(0)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)、钯碳(0)等。优选四三苯基膦钯(0)或三(二亚苄基丙酮)二钯(0)，特别优选四三苯基膦钯(0)。使用的零价钯催化剂的量不受具体限制，只要可以进行分子内环化反应即可，且可以取决于催化剂的类型而变化。零价钯催化剂相对于每摩尔式(VII)的化合物可以以0.0001-1摩尔、且优选0.01-0.5摩尔的量使用。

如果需要，可以与零价钯催化剂一起加入配体。这样的配体的例子包括三苯基膦、1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁、三叔丁基膦、三环己基膦、2-二环己基膦基-2’,6’-二甲氧基联苯基、2-二环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯基、2-(二叔丁基膦基)联苯基、2-二环己基膦基-2’-(N,N-二甲基氨基)联苯基、4,5’-双(二苯基膦基)-9,9’-二甲基氧杂蒽等。当使用三(二亚苄基丙酮)二钯(0)作为零价钯催化剂时，可以加入三苯基膦作为配体。使用的配体的量不受具体限制，只要可以进行分子内环化反应即可。配体相对于每摩尔式(VII)的化合物可以以0.0001-4摩尔、且优选0.01-2摩尔的量使用。

碱的例子包括无机碱，例如碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯和碱金属氢氧化物。优选碱金属氢氧化物。碱金属氢氧化物的例子包括氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾和氢氧化铯。优选使用氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化铯。特别优选氢氧化锂或氢氧化钠。使用的碱的量不受具体限制，只要反应进行即可。碱相对于每摩尔式(VII)的化合物可以以1-100摩尔、且优选2-20摩尔的量使用。碱金属氢氧化物可以以碱金属氢氧化物水溶液的形式使用。

作为有机硼烷试剂、碱金属氢氧化物和零价钯催化剂的组合，优选的有机硼烷试剂、优选的碱金属氢氧化物和优选的零价钯催化剂的组合是优选的。特别优选的有机硼烷试剂、特别优选的碱金属氢氧化物和特别优选的零价钯催化剂的组合是特别优选的。

任何对反应没有不利影响的溶剂均可以使用。其例子包括烃(例如，苯、甲苯和二甲苯)、醚(例如，1,2-二甲氧基乙烷、四氢呋喃和1,4-二噁烷)、质子惰性极性溶剂(例如，N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜和六甲基磷酰基酰胺)、水及其混合物。优选使用1,2-二甲氧基乙烷或四氢呋喃。就有机硼烷试剂和生成的烷基硼烷中间体的稳定性的角度而言，特别优选四氢呋喃。使用的溶剂的量不受具体限制，只要反应进行即可。溶剂可以以式(VII)的化合物重量的1-300倍、且优选10-96倍的量使用。

反应时间不受具体限制，只要可以得到式(VIII)的化合物即可。反应时间可以为0.1-100小时，且优选0.5-24小时。

反应温度不受具体限制，只要最终可以得到式(VIII)的化合物即可。反应温度可以为-20℃至溶剂沸点，且优选0-150℃。在使用零价钯催化剂和碱金属氢氧化物水溶液的烷基硼烷中间体的分子内环化反应中，反应温度低倾向于引起副反应，导致收率低。因此，温度优选为61℃或更高。

由此得到的式(VIII)的化合物可以在经过或不经通过已知的分离和纯化方式，例如，浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析分离和纯化之后进行后续步骤。

在该步骤中，可以确认体系中烷基硼烷中间体的生成。例如，可以使用LCMS谱作为确认方法。

(步骤f)

在该步骤中，使式(VIII)的化合物的保护的羟基脱保护，生成式(IX)的化合物。

脱保护可以通过已知方法进行，例如，Protective Groups in OrganicSynthesis,T.W.Greene,John Wiley&Sons(1981)中所述的方法；或者与其类似的方法。

当使用叔丁基二甲基甲硅烷基作为保护基时，使用四丁基氟化铵作为脱保护试剂。使用的试剂的量相对于每摩尔化合物(VIII)优选为1-10摩尔。

任何对反应没有不利影响的溶剂均可以使用。可用的溶剂的例子包括醚(例如，1,2-二甲氧基乙烷和四氢呋喃)、质子惰性极性溶剂(例如，N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜和六甲基磷酰基酰胺)及其混合溶剂。反应时间为0.1-100小时，且优选0.5-24小时。反应温度为0-80℃，且优选0-50℃。

由此得到的式(IX)的化合物可以在经过或不经通过已知的分离和纯化方式，例如，浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析分离和纯化之后进行后续步骤。

(步骤g)

在该步骤中，使甲磺酰氯作用于式(IX)的化合物，以生成式(X)的化合物。

使用的甲磺酰氯的量相对于每摩尔式(IX)的化合物可以是1-5摩尔，且更优选1-2摩尔。

可用的碱的例子包括有机胺，例如三甲胺、三乙胺、三丙胺、二异丙基乙基胺、N-甲基吗啉、吡啶、4-(N,N-二甲基氨基)吡啶、二甲基吡啶和三甲基吡啶。这样的碱相对于每摩尔式(IX)的化合物可以以1-10摩尔、且优选1-5摩尔的量使用。

任何对反应没有不利影响的溶剂均可以使用。可使用的溶剂的例子包括烃(例如，苯、甲苯和二甲苯)、卤代烃(例如，氯仿和1,2-二氯乙烷)、腈(例如，乙腈)、醚(例如，1,2-二甲氧基乙烷、四氢呋喃和1,4-二噁烷)、醇(例如，甲醇和乙醇)、质子惰性极性溶剂(例如，N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜和六甲基磷酰胺)及其混合溶剂。反应时间为0.1-24小时，且优选0.1-12小时。反应温度为-20℃至溶剂沸点，且优选0℃至室温。

由此得到的式(X)的化合物可以在经过或不经通过已知的分离和纯化方式，例如，浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析分离或纯化之后进行后续步骤。

(步骤h)

在该步骤中，使叠氮化钠作用于式(X)的化合物，以生成式(XI)的化合物。

叠氮化钠相对于每摩尔式(X)的化合物可以以1-10摩尔、且优选1-5摩尔的量使用。

任何对反应没有不利影响的溶剂均可以使用。可使用的溶剂的例子包括N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜和六甲基磷酰基酰胺及其混合溶剂。反应时间为0.1-24小时，且优选0.5-12小时。反应温度为室温至溶剂沸点，且优选50-100℃。

由此得到的式(XI)的化合物可以在经过或不经通过已知的分离和纯化方式，例如，浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析分离或纯化之后进行后续步骤。

(步骤i)

在该步骤中，在含水溶剂中在三苯基膦的存在下使式(XI)的化合物发生反应，以生成式(XII)的化合物。

三苯基膦可以是通常使用的试剂或固体负载的试剂。使用的三苯基膦的量相对于每摩尔式(XI)的化合物可以是1-10摩尔，且优选1-5摩尔。

任何对反应没有不利影响的溶剂均可以使用。可使用的溶剂的例子包括四氢呋喃/水、1,4-二噁烷/水等。反应时间为0.1-24小时，且优选0.5-12小时。反应温度为室温至溶剂沸点，且优选50℃至溶剂沸点。

由此得到的式(XII)的化合物可以在经过或不经通过已知的分离和纯化方式，例如，浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析分离或纯化之后进行后续步骤。

(步骤j)

在该步骤中，使式(XII)的化合物用α,β-不饱和羧酸或α,β-不饱和酰基氯或酰基溴酰胺化，以生成根据本发明的式(I-a)的化合物。

当使用羧酸作为酰胺化试剂时，在合适的缩合剂的存在下，羧酸相对于每摩尔式(XII)的化合物可以以0.5-10摩尔、且优选1-3摩尔的量使用。羧酸可以是市售的产品，或者可以根据已知方法制造。

任何对反应没有不利影响的反应溶剂均可以使用。可使用的溶剂的例子包括甲苯、苯、二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、1,4-二噁烷、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷-2-酮、二甲亚砜及其混合溶剂。反应温度通常为-78-200℃，且优选0-50℃。反应时间通常为5分钟至3天，且优选5分钟至10小时。

缩合剂的例子包括二苯基磷酰基叠氮化物、N,N’-二环己基碳二亚胺、苯并三唑-1-基氧基-三二甲基氨基鏻盐、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺和1-羟基苯并三唑的组合、2-氯-1,3-二甲基咪唑鎓氯化物、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基六脲鎓六氟磷酸盐等。

如果需要，可以任选地加入碱用于反应。可使用的碱的例子包括有机碱，例如，三乙胺、二异丙基乙基胺、吡啶、二甲基吡啶、三甲基吡啶、4-(N,N-二甲基氨基)吡啶、叔丁酸钾、叔丁酸钠、甲醇钠、乙醇钠、六甲基二硅叠氮化锂、六甲基二硅叠氮化钠、六甲基二硅叠氮化钾和丁基锂；以及无机碱，例如，碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢氧化钠和氢化钠。这样的碱相对于每摩尔式(XII)的化合物可以以1-100摩尔、且优选1-10摩尔的量加入。

当使用酰基氯或酰基溴作为酰胺化试剂时，酰基卤化物相对于每摩尔式(XII)的化合物以0.5-5摩尔、且优选0.9-1.1摩尔的量使用。酰基卤化物可以是市售的产品，或者可以根据已知方法制造。

任何对反应没有不利影响的反应溶剂均可以使用。其例子包括甲苯、苯、二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、1,4-二噁烷、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷-2-酮、乙腈、水及其混合溶剂。反应温度通常为-78-200℃，且优选0-50℃。反应时间通常为5分钟至3天，且优选5分钟至10小时。

如果需要，可以加入碱用于反应。可使用的碱的例子包括有机碱，例如，三乙胺、二异丙基乙基胺、吡啶、二甲基吡啶、三甲基吡啶、4-(N,N-二甲基氨基)吡啶、叔丁酸钾、叔丁酸钠、甲醇钠、乙醇钠、六甲基二硅叠氮化锂、六甲基二硅叠氮化钠、六甲基二硅叠氮化钾和丁基锂；以及无机碱，例如，碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢氧化钠和氢化钠。这样的碱相对于每摩尔式(XII)的化合物可以以1-100摩尔、且优选1-20摩尔的量加入。

由此得到的式(I-a)的化合物可以通过已知的分离和纯化方式，例如，浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析分离和纯化。

[Chem.7]

制造方法2

(其中R₁、R₂、R₃、R₄、m和n如上文所定义)。

(步骤k)

在该步骤中，使烷基胺作用于式(X)的化合物，以生成式(XIV)的化合物。

使用的烷基胺的量相对于每摩尔式(X)的化合物为2摩尔至过量摩尔的量。

任何对反应没有不利影响的溶剂均可以使用。其例子包括烃(例如，苯、甲苯和二甲苯)、卤代烃(例如，氯仿和1,2-二氯乙烷)、腈(例如，乙腈)、醚(例如，1,2-二甲氧基乙烷、四氢呋喃和1,4-二噁烷)、质子惰性极性溶剂(例如，N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜和六甲基磷酰基酰胺)及其混合溶剂。反应时间为0.1-100小时，且优选1-24小时。反应温度通常为室温至溶剂沸点，且优选50℃至溶剂沸点。

由此得到的式(XIV)的化合物可以在经过或不经通过已知的分离和纯化方式，例如，浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析分离或纯化之后进行后续步骤。

(步骤l)

该步骤可以以与步骤j中相同的方式进行。

制造方法3

(其中，P₂是氨基保护基，L₁是离去基团，m1是0或1；且R₁、R₂、R₃、R₄、m和n如上文所定义)。

(步骤m)

在该步骤中，使式(II)和(XV)的化合物进行Mitsunobu反应，以生成式(XVI)的化合物。

在式(II)的化合物中，由L₁表示的离去基团可以是，例如，溴或碘原子。式(II)的化合物可以是市售的产品，或者可以根据已知方法制造。在式(XV)中，由P₂表示的氨基保护基可以是，例如，叔丁氧基羰基或苯甲酰基。式(XV)的化合物可以是市售的产品，或者可以根据已知方法制造。式(XV)的化合物相对于每摩尔式(II)的化合物可以以1-10摩尔、且优选1-5摩尔的量使用。

Mitsunobu反应可以通过通常已知的方法(例如，Synthesis,p.1,1981)或者与其类似的方法进行。

偶氮二羧酸酯的例子包括偶氮二羧酸二乙酯和偶氮二羧酸二异丙酯。这样的偶氮二羧酸酯相对于每摩尔式(II)的化合物可以以1-10摩尔、且优选1-5摩尔的量使用。

作为膦化合物，可以使用三苯基膦、三丁基膦等。膦化合物相对于每摩尔式(II)的化合物可以以1-10摩尔、且优选1-5摩尔的量使用。

作为溶剂，四氢呋喃、1,2-二甲氧基乙烷、1,4-二噁烷、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二甲亚砜、N-甲基吡咯烷-2-酮等可以单独使用，或者作为混合物使用。反应时间为0.1-100小时，且优选0.1-24小时。反应温度为0℃至溶剂沸点，且优选0-100℃。

由此得到的式(XVI)的化合物可以在经过或不经通过已知的分离和纯化方式，例如，浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析分离或纯化之后进行后续步骤。

(步骤n)

在该步骤中，使式(XVI)的化合物与氨或其盐反应，以生成式(XVII)的化合物。

该步骤可以以与步骤b中相同的方式进行。

由此得到的式(XVII)的化合物可以在经过或不经通过已知的分离和纯化方式，例如，浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析分离或纯化之后进行后续步骤。

(步骤o)

在该步骤中，使式(XVII)的化合物与3-喹啉硼酸或3-喹啉硼酸酯进行偶联反应，以生成式(XVIII)的化合物。

该步骤可以以与步骤c中相同的方式进行。

由此得到的式(XVIII)的化合物可以在经过或不经通过已知的分离和纯化方式，例如，浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析分离或纯化之后进行后续步骤。

(步骤p)

在该步骤中，将式(XVIII)的化合物用N-溴琥珀酰亚胺溴化，以生成式(XIX)的化合物。

该步骤可以以与步骤d中相同的方式进行。由此得到的式(XIX)的化合物可以在经过或不经通过已知的分离和纯化方式，例如，浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析分离或纯化之后进行后续步骤。

(步骤q)

在该步骤中，在使有机硼烷试剂作用于式(XIX)的化合物并在体系中生成烷基硼烷中间体之后，在过渡金属催化剂和碱的存在下生成式(XX)的化合物。

该步骤可以根据通常已知的方法(例如，WO2006/102079)进行。

有机硼烷试剂的例子包括9-BBN(9-硼二环[3.3.1]-壬烷)、9-BBN(9-硼二环[3.3.1]-壬烷)二聚体、二异戊基硼烷(双(1,2-二甲基丙基)硼烷)、异己基硼烷((1,1,2-三甲基丙基)硼烷)等。优选使用9-BBN(9-硼二环[3.3.1]-壬烷)或9-BBN(9-硼二环[3.3.1]-壬烷)二聚体。特别优选9-BBN(9-硼二环[3.3.1]-壬烷)。使用的有机硼烷试剂的量不受具体限制，只要生成烷基硼烷中间体即可。有机硼烷试剂相对于每摩尔式(XIX)的化合物可以以1-20摩尔的量使用。就促进反应进程的角度而言，有机硼烷试剂的量相对于每摩尔式(XIX)的化合物优选为6-10摩尔。

过渡金属催化剂的例子包括二价钯催化剂(例如，乙酸钯、氯化钯和1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁-钯(II)二氯化物)。如果需要，可以加入配体(例如，三苯基膦和三叔丁基膦)。使用的过渡金属催化剂的量可以取决于催化剂的类型而变化。过渡金属催化剂相对于每摩尔式(XIX)的化合物通常以0.0001-1摩尔、且优选0.01-0.5摩尔的量使用。使用的配体的量相对于每摩尔式(XIX)的化合物通常为0.0001-4摩尔，且优选0.01-2摩尔。

作为过渡金属催化剂，例如，也可以使用零价钯催化剂。可使用的零价钯催化剂的例子包括四三苯基膦钯(0)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)和钯碳(0)。优选使用四三苯基膦钯(0)或三(二亚苄基丙酮)二钯(0)。特别优选四三苯基膦钯(0)。使用的零价钯催化剂的量不受具体限制，只要可以进行分子内环化反应即可。使用的零价钯催化剂的量可以取决于催化剂的类型而变化。零价钯催化剂相对于每摩尔式(XIX)的化合物可以以0.0001-1摩尔、且优选0.01-0.5摩尔的量使用。

如果需要，可以与零价钯催化剂一起进一步加入配体。这样的配体的例子包括三苯基膦、1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁、三叔丁基膦、三环己基膦、2-二环己基膦基-2’,6’-二甲氧基联苯基、2-二环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯基、2-(二叔丁基膦基)联苯基、2-二环己基膦基-2’-(N,N-二甲基氨基)联苯基、4,5’-双(二苯基膦基)-9,9’-二甲基氧杂蒽等。当使用三(二亚苄基丙酮)二钯(0)作为零价钯催化剂时，可以加入三苯基膦作为配体。使用的配体的量不受具体限制，只要可以进行分子内环化反应即可。配体相对于每摩尔式(XIX)的化合物可以以0.0001-4摩尔、且优选0.01-2摩尔的量使用。

碱的例子包括无机碱，例如碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯和碱金属氢氧化物。优选碱金属氢氧化物。碱金属氢氧化物的例子包括氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铯等。优选使用氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化铯。特别优选氢氧化锂或氢氧化钠。使用的碱的量不受具体限制，只要反应进行即可。碱相对于每摩尔式(XIX)的化合物可以以1-100摩尔、且优选2-20摩尔的量使用。碱金属氢氧化物可以以碱金属氢氧化物水溶液的形式使用。

作为有机硼烷试剂、碱金属氢氧化物和零价钯催化剂的组合，优选的有机硼烷试剂、优选的碱金属氢氧化物和优选的零价钯催化剂的组合是优选的。特别优选的有机硼烷试剂、特别优选的碱金属氢氧化物和特别优选的零价钯催化剂的组合是特别优选的。

任何对反应没有不利影响的溶剂均可以使用。其例子包括烃(例如，苯、甲苯和二甲苯)、醚(例如，1,2-二甲氧基乙烷、四氢呋喃和1,4-二噁烷)、质子惰性极性溶剂(例如，N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜和六甲基磷酰基酰胺)、水及其混合物。优选使用1,2-二甲氧基乙烷或四氢呋喃。就有机硼烷试剂和生成的烷基硼烷中间体的稳定性的角度而言，特别优选四氢呋喃。使用的溶剂的量不受具体限制，只要反应进行即可。溶剂可以以式(XIX)的化合物重量的1-300倍、且优选10-96倍的量使用。

反应时间不受具体限制，只要可以得到式(XX)的化合物即可。反应时间可以为0.1-100小时，且优选0.5-24小时。

反应温度不受具体限制，只要最终可以得到式(XX)的化合物即可。反应温度可以为-20℃至溶剂沸点，且优选0-150℃。在使用零价钯催化剂和碱金属氢氧化物水溶液的烷基硼烷中间体的分子内环化反应中，反应温度低倾向于引起副反应，导致收率低。因此，温度优选为61℃或更高。

由此得到的式(XX)的化合物可以在经过或不经通过已知的分离和纯化方式，例如，浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析分离和纯化之后进行后续步骤。

在该步骤中，可以确认体系中烷基硼烷中间体的生成。例如，可以使用LCMS谱作为确认方法。

(步骤r)

在该步骤中，使式(XX)的化合物的保护的氨基脱保护，以生成式(XXI)的化合物。

脱保护可以通过已知的方法进行，例如，Protective Groups inOrganic Synthesis,T.W.Greene,John Wiley&Sons(1981)中所述的方法；或者与其类似的方法。

当使用叔丁氧基羰基作为保护基时，可以使用盐酸、硫酸、甲磺酸、三氟乙酸等作为脱保护试剂。该试剂相对于每摩尔化合物(XX)优选以1-100摩尔的量使用。

任何对反应没有不利影响的溶剂均可以使用。可用的溶剂的例子包括水、甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿及其混合溶剂。反应时间为0.1-100小时，且优选0.5-24小时。反应温度为0℃至溶剂沸点。

由此得到的式(XXI)的化合物可以在经过或不经通过已知的分离和纯化方式，例如，浓缩、真空浓缩、结晶、溶剂萃取、再沉淀和层析分离和纯化之后进行后续步骤。

(步骤s)

该步骤可以以与步骤j中相同的方式进行。

在上述制造方法1-3中，对于具有活性质子的官能团，例如氨基、亚氨基、羟基、羧基、羰基和酰氨基以及吲哚，可以使用保护的试剂，或者根据常用方法将保护基引入到这类官能团中，然后在各制造方法中在适当的步骤中去除保护基。

“氨基保护基或亚氨基保护基”不受具体限制，只要其具有保护功能即可。这样的保护基的例子包括芳烷基，例如苄基、对甲氧基苄基、3,4-二甲氧基苄基、邻硝基苄基、对硝基苄基、二苯甲基、三苯甲基和枯基；低级烷酰基，例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、新戊酰基、三氟乙酰基和三氯乙酰基；苯甲酰基；芳基烷酰基，例如苯基乙酰基和苯氧基乙酰基；低级烷氧基羰基，例如，甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基和叔丁氧基羰基；芳烷氧基羰基，例如对硝基苄氧基羰基和苯乙氧基羰基；低级烷基甲硅烷基，例如三甲基甲硅烷基和叔丁基二甲基甲硅烷基；四氢吡喃基；三甲基甲硅烷基乙氧基甲基；低级烷基磺酰基，例如甲磺酰基、乙磺酰基和叔丁基磺酰基；低级烷基亚磺酰基，例如叔丁基亚磺酰基；芳基磺酰基，例如苯磺酰基和甲苯磺酰基；和酰亚氨基，例如酞酰亚氨基。具体地，优选三氟乙酰基、乙酰基、叔丁氧基羰基、苄氧基羰基、三甲基甲硅烷基乙氧基甲基、枯基等。

“羟基保护基”不受具体限制，只要其具有保护功能即可。这样的保护基的例子包括低级烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基和叔丁基；低级烷基甲硅烷基，例如三甲基甲硅烷基和叔丁基二甲基甲硅烷基；低级烷氧基甲基，例如甲氧基甲基和2-甲氧基乙氧基甲基；四氢吡喃基；三甲基甲硅烷基乙氧基甲基；芳烷基，例如苄基、对甲氧基苄基、2,3-二甲氧基苄基、邻硝基苄基、对硝基苄基和三苯甲基；以及酰基，例如甲酰基、乙酰基和三氟乙酰基。具体地，优选甲基、甲氧基甲基、四氢吡喃基、三甲基甲硅烷基乙氧基甲基、叔丁基二甲基甲硅烷基和乙酰基。

“羧基保护基”不受具体限制，只要其具有保护功能即可。这样的保护基的例子包括低级烷基，例如，甲基、乙基、丙基、异丙基和叔丁基；卤代低级烷基，例如2,2,2-三氯乙基；低级烯基，例如，烯丙基；三甲基甲硅烷基乙氧基甲基；以及芳烷基，例如苄基、对甲氧基苄基、对硝基苄基、二苯甲基和三苯甲基。具体地，优选甲基、乙基、叔丁基、烯丙基、苄基、对甲氧基苄基、三甲基甲硅烷基乙氧基甲基等。

“羰基保护基”不受具体限制，只要其具有保护功能即可。这样的保护基的例子包括亚乙基缩酮、三亚甲基缩酮、二甲基缩酮和类似缩酮和缩醛。

去除这些保护基的方法可以取决于保护基的类型、所需化合物(I)的稳定性等而变化。例如，可以使用以下方法：使用酸或碱根据出版物(Protective Groups in Organic Synthesis,第三版,T.W.Green,JohnWiley&Sons(1999))中公开的方法进行溶剂分解或者与其类似的方法，即，包括与0.01摩尔或大大过量的酸，优选三氟乙酸、甲酸或盐酸或者等摩尔至摩尔量大大过量的碱，优选氢氧化钾或氢氧化钙反应的方法；使用金属氢化物复合物等进行化学还原；或使用钯碳催化剂、兰尼(Raney)镍催化剂等进行催化还原。

本发明的化合物可以通过常见的分离和纯化方式分离和纯化。这样的方式的例子包括溶剂萃取、重结晶、制备反相高效液相色谱、柱色谱、制备薄层色谱等。

当本发明的化合物具有异构体，例如光学异构体、立体异构体、区域异构体(regioisomers)和旋转异构体时，任何异构体及其混合物均包括在本发明化合物的范围之内。例如，当化合物具有光学异构体时，由外消旋混合物分离出的光学异构体也包括在本发明化合物的范围之内。这些异构体中的每一种均可以作为单独的化合物通过已知的合成和分离方式(例如，浓缩、溶剂萃取、柱色谱、重结晶等)得到。

在本发明中，与式(1)中-NR₁-(C＝O)-CR₂＝C(R₃)R₄表示的取代基结合的碳原子是不对称碳；因此，化合物包括异构体。如上所述，除非另外指出，本发明的化合物包括所有的对映异构体及其混合物。本发明的化合物可以是R和S对映异构体的混合物。这样的混合物可以是包括90％或更多、95％或更多或者99％或更多的R对映异构体的混合物；或者包括90％或更多、95％或更多或者99％或更多的S对映异构体的混合物。

手性拆分方法包括，例如：使手性拆分试剂作用于本发明的化合物以形成盐、并使用得到的盐的溶解性差异等拆分出对映异构体中的一种的非对映异构体法；向外消旋体的过饱和溶液中加入对映异构体中的一种作为种子用于结晶的优先结晶法；和使用手性柱的柱色谱，例如HPLC。非对映异构体法中可以使用的手性拆分试剂可以适当地选自，例如，酸拆分试剂，例如，酒石酸、苹果酸、乳酸、扁桃酸、10-樟脑磺酸及其衍生物；以及碱性拆分试剂，例如，马钱子碱、番木鳖碱、奎宁和类似的生物碱化合物、氨基酸衍生物、金鸡尼丁和α-甲基苄基胺。此外，单独的本发明化合物的对映异构体的一种不仅可以通过获得作为各个对映异构体的混合物的本发明的化合物、然后进行上述手性拆分方法得到，而且可以通过以下方法得到：通过上述方法的手性拆分得到本发明化合物的一种对映异构体，并使用其作为合成原料。而且，获得本发明化合物的对映异构体的一种或其原料化合物的方法包括通过在产生不对称碳的反应步骤中调节催化剂反应条件等而优先获得对映异构体的一种的方法。

本发明的化合物或其盐可以是晶体的形式。单晶和多晶形混合物均包括在本发明的化合物或其盐的范围以内。这样的晶体可以通过根据本领域本身已知的结晶方法进行结晶而产生。本发明的化合物或其盐可以是溶剂化物(例如，水合物)或非溶剂化物。任何这样的形式均包括在本发明的化合物或其盐的范围以内。同位素(例如，3H、14C、35S和125I)标记的化合物也包括在本发明的化合物或其盐的范围以内。

本发明的化合物或其中间体的盐是指有机化学领域使用的常见的盐。当化合物具有羧基时，这些盐的例子包括羧基的碱加成盐，且当化合物具有氨基或碱性杂环基团时，这些盐的例子包括氨基或碱性杂环基团的酸加成盐。

碱加成盐的例子包括碱金属盐，例如，钠盐和钾盐；碱土金属盐，例如，钙盐和镁盐；铵盐；以及有机胺盐，例如，三甲胺盐、三乙胺盐、二环己基胺盐、乙醇胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐、普鲁卡因盐和N,N’-二苄基乙二胺盐。

酸加成盐的例子包括无机酸盐，例如，盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐和高氯酸盐；有机酸盐，例如，乙酸盐、甲酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、抗坏血酸盐和三氟乙酸盐；以及磺酸盐，例如，甲磺酸盐、羟乙基磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐。

本发明的化合物或其盐具有优异的EGFR抑制活性，并且可以用作抗肿瘤药剂。而且，本发明的化合物或其盐具有优异的EGFR选择性，并且有利地其他激酶导致的副作用较少。尽管目标癌症不受具体限制，其例子为头颈癌、食道癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、胆囊癌、胆管癌、胆道癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸肿瘤、骨肉瘤、软组织肉瘤、血癌、多发性骨髓瘤、皮肤癌、脑肿瘤和间皮瘤。优选地，目标癌症是头颈癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、肾癌或前列腺癌。特别优选肺癌。

当本发明的化合物或其盐用作药物制剂时，如果需要，可以加入药物载体，从而根据预防和治疗目的形成适当的剂型。剂型的例子包括口服制剂、注射剂、栓剂、软膏剂、贴剂等。在这些当中，优选口服制剂。这些剂型可以通过本领域技术人员已知的常规方法形成。

作为药物载体，可以将各种用作制剂材料的常规有机或无机载体材料作为赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂或着色剂混合在固体制剂中；或者作为溶剂、增溶剂、助悬剂、等渗剂、缓冲剂或安抚剂(soothingagent)混合在液体制剂中。而且，如果需要，还可以使用药物制剂添加剂，例如，防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂和稳定剂。

口服固体制剂制备如下。在将赋形剂任选地与粘合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、掩味剂或调味剂等加入到本发明的化合物中之后，通过常规方法将所得的混合物配制成片剂、包衣片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊等。

赋形剂的例子包括乳糖、蔗糖、D-甘露醇、葡萄糖、淀粉、碳酸钙、高岭土、微晶纤维素和硅酸酐。粘合剂的例子包括水、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、单糖浆(simple syrup)、液体葡萄糖、液体α-淀粉、液体明胶、D-甘露醇、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基淀粉、甲基纤维素、乙基纤维素、虫胶、磷酸钙、聚乙烯吡咯烷酮等。崩解剂的例子包括干燥淀粉、藻酸钠、粉末琼脂、碳酸氢钠、碳酸钙、月桂基硫酸钠、硬脂酸单甘油酯、乳糖等。润滑剂的例子包括纯化滑石、硬脂酸钠盐、硬脂酸镁、硼砂、聚乙二醇等。着色剂的例子包括二氧化钛、氧化铁等。掩味剂或调味剂的例子包括蔗糖、苦橙皮、柠檬酸、酒石酸等。

当制备用于口服给药的液体制剂时，可以将掩味剂、缓冲剂、稳定剂、调味剂等加入到本发明的化合物中；并且可以根据常规方法将所得的混合物配制成口服液体制剂、糖浆、酏剂等。

在该情况下，可以使用与上文所述相同的掩味剂或调味剂。缓冲剂的例子为柠檬酸钠，稳定剂的例子包括黄芪胶、阿拉伯胶和明胶。如果需要，例如，出于效果持久的目的，这些用于口服给药的制剂可以根据本领域已知的方法用肠溶衣或其他包衣进行包衣。这些包衣剂的例子包括羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚氧乙二醇和Tween 80(注册商标)。

当制备注射剂时，可以将pH调节剂、缓冲剂、稳定剂、等渗剂、局部麻醉剂等加入到本发明的化合物中；并且可以根据常规方法将混合物配制成皮下、肌肉内或静脉内注射剂。

在此使用的pH调节剂和缓冲剂的例子包括柠檬酸钠、乙酸钠和磷酸钠。稳定剂的例子包括焦亚硫酸钠、EDTA、巯基乙酸和巯基乳酸。局部麻醉剂的例子包括盐酸普鲁卡因和盐酸利多卡因。等渗剂的例子包括氯化钠、葡萄糖(dextrose)、D-甘露醇和甘油。

当制备栓剂时，可以将本领域已知的药物可接受载体，例如聚乙二醇、羊毛脂、可可脂和脂肪酸三甘油酯、以及表面活性剂(如果需要)例如Tween 80(注册商标)加入到本发明的化合物中，并且可以根据常规方法将所得的混合物配制成栓剂。

当制备软膏剂时，如果需要，可以将常用的基质(base)、稳定剂、润湿剂、防腐剂等混合到本发明的化合物中；并且可以根据常规方法将得到的混合物混合并配制成软膏剂。

基质的例子包括液状石蜡、白凡士林、白蜂蜡、辛基十二烷基醇和石蜡。

防腐剂的例子包括对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸丙酯。

当制备贴剂时，可以根据常规方法将上述的软膏剂、乳膏、凝胶、糊剂等应用于常规基底。

作为基底，合适的是包括棉、短纤维或化学纤维的织物或无纺织物；软的乙烯基氯、聚乙烯、聚氨酯等的膜或泡沫片材。

每种这样的单位剂型中待引入的本发明化合物的量取决于待施用化合物的患者的症状、其剂型等。通常，在口服药剂的情况下，化合物的量为0.05-1000mg/单位剂型。在注射剂的情况下，化合物的量为0.01-500mg/单位剂型；且在栓剂的情况下，化合物的量为1-1000mg/单位剂型。

这些剂型的药物日剂量取决于患者的症状、体重、年龄、性别等，不能普遍化。例如，成人(体重：50kg)的日剂量通常可以为0.05-5,000mg，优选0.1-1,000mg；优选每天以一剂或分开的两剂或三剂给药。

待施用本发明的化合物的哺乳动物的例子包括人、猴、小鼠、大鼠、兔子、狗、猫、牛、马、猪和绵羊。

实施例

以下参考实施例对本发明进行详细解释；但是，本发明的范围不限于这些实施例。

在实施例中，除非另外指出，使用市售的试剂。使用Moritex Corp.制造的Purif-Pack(注册商标)SI(Shoko Scientific Co.,Ltd.制造)；Biotage制造的KP-Sil(注册商标)硅胶预装柱；或Biotage制造的HP-Sil(注册商标)硅胶预装柱作为硅胶柱色谱。使用Moritex Corp制造的Purif-Pack(注册商标)NH(Shoko Scientific Co.,Ltd.制造)；或Biotage制造的KP-NH(注册商标)预装柱作为基本的硅胶柱色谱。使用Merck制造的Kieselgel TM 60F 254,Art.5744或Wako制造的NH₂硅胶60F254板作为制备薄层色谱。NMR谱使用AL400(400MHz；JEOL制造)、Mercury 400(400MHz；Agilent Technologies,Inc.制造)光谱仪或装有OMNMR探针(Protasis制造)的Inova 400(400MHz；AgilentTechnologies,Inc.制造)型光谱仪测量。当其氘代溶剂含有四甲基硅烷时，使用四甲基硅烷作为内标；且当不含四甲基硅烷时，使用NMR溶剂作为参照。所有δ值均以ppm表示。微波反应使用CEM Corporation制造的Discover S-class进行。

LCMS谱使用Waters Corporation制造的Acquity SQD(四极)在以下条件下测量。

柱：YMC-Triart C18，2.0x 50mm，1.9μm(YMC制造)

MS检测：ESI阳离子

UV检测：254和210nm

柱流速：0.5mL/min

流动相：水/乙腈(0.1％甲酸)

注射体积：1μL

梯度(表1)

反相HPLC纯化使用获自Waters Corporation的制备分离系统进行。

柱：连接的YMC-Actus Triart C18,20x 50mm,5μm(YMC制造)和YMC-Actus Triart C18,20x 10mm,5μm(YMC制造)。

UV检测：254nm

MS检测：ESI阳离子

柱流速：25mL/min

流动相：水/乙腈(0.1％甲酸)

注射体积：0.1-0.5mL

各符号代表如下。

s：单峰

d：双峰

t：叁峰

dd：双双峰

m：多重峰

brs：宽的单峰

DMSO-d₆：氘代二甲亚砜

CDCl₃：氘代氯仿

CD₃OD：氘代甲醇

THF：四氢呋喃

DMF：N,N-二甲基甲酰胺

DME：1,2-二甲氧基乙烷

HATU：O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐

实施例1

(R)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物I-1)和(S)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物I-2)

[Chem.9]

(步骤1)

合成4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶

[Chem.10]

在室温下将N-碘琥珀酰亚胺(11.6g)加入到4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(7.52g)在DMF(49ml)中的溶液中。将混合物在相同温度下搅拌1小时，并向反应混合物中加入水(150ml)。将所得的沉淀物通过过滤收集，用水洗涤，并干燥，以得到题述化合物，其为浅黄色固体(13.57g)。

ESI-MS m/z 280,282(MH⁺)。

(步骤2)

合成1-溴-2-(叔丁基二甲基甲硅氧基)-3-丁烯

[Chem.11]

在室温下将咪唑(2.25g)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(4.75g)加入到1-溴-3-丁烯-2-醇(4.5g)在DMF(30ml)中的溶液中。将混合物在相同温度下搅拌16小时，向其中加水，然后用己烷萃取。将有机层用水洗涤，且经无水硫酸钠干燥。减压蒸馏除去溶剂，得到题述化合物，其为浅黄色油状物质(7.0g)。

(步骤3)

合成7-(2-(叔丁基二甲基甲硅氧基)-3-丁烯基)-4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶

[Chem.12]

在室温下将碳酸钾(2.2g)加入到步骤1中得到的4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(3.7g)和步骤2中得到的1-溴-2-(叔丁基二甲基甲硅氧基)-3-丁烯(3.5g)在DMF(26ml)中的溶液中，并将混合物在80℃下搅拌5小时。在将反应混合物冷却之后，向其中加入水和乙酸乙酯，并滤出生成的不溶物质。将有机层分离，用水和饱和氯化钠溶液洗涤，并经无水硫酸钠干燥。然后减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：己烷/乙酸乙酯)纯化，得到题述化合物，其为浅黄色固体(2.25g)。

ESI-MS m/z 464,466(MH⁺)。

(步骤4)

合成7-(2-(叔丁基二甲基甲硅氧基)-3-丁烯基)-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺

[Chem.13]

将25％氨水(9ml)加入到步骤3中得到的7-(2-(叔丁基二甲基甲硅氧基)-3-丁烯基)-4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1.12g)在THF(7ml)中的溶液中。使用微波反应器将混合物在120℃下搅拌5小时。将反应混合物冷却，然后用水稀释。将所得的沉淀物通过过滤收集，用水洗涤，然后干燥，得到题述化合物，其为白色固体(1.06g)。

ESI-MS m/z 445(MH⁺)。

(步骤5)

合成7-(2-(叔丁基二甲基甲硅氧基)-3-丁烯基)-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺

[Chem.14]

在100℃下在氮气气氛中将步骤4中得到的7-(2-(叔丁基二甲基甲硅氧基)-3-丁烯基)-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(3.62g)、3-喹啉硼酸(1.47g)、碳酸钠(1.72g)、2-二环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯(154mg)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(148mg)、DME(40ml)和水(16ml)的混合物搅拌3小时。冷却之后，将反应混合物倒入水中，然后用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，然后减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：己烷/乙酸乙酯)纯化，得到题述化合物，其为浅黄色固体(2.13g)。

ESI-MS m/z 446(MH⁺)。

(步骤6)

合成6-溴-7-(2-(叔丁基二甲基甲硅氧基)-3-丁烯基)-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺

[Chem.15]

在室温下将N-溴琥珀酰亚胺(894mg)加入到步骤5中得到的7-(2-(叔丁基二甲基甲硅氧基)-3-丁烯基)-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(2.13g)在DMF(25ml)中的溶液中。在相同温度下搅拌30分钟后，将混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，然后用乙酸乙酯萃取。将有机层用水和饱和氯化钠溶液洗涤，并经无水硫酸钠干燥。然后减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：己烷/乙酸乙酯)纯化，得到题述化合物，其为黄色固体(2.26g)。

ESI-MS m/z 524,526(MH⁺)。

(步骤7)

合成8-(叔丁基二甲基甲硅氧基)-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4-胺

[Chem.16]

在冰冷却下将0.5M 9-硼二环[3.3.1]壬烷在THF(50ml)中的溶液加入到步骤6中得到的6-溴-7-(2-(叔丁基二甲基甲硅氧基)-3-丁烯基)-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(2.26g)在THF(30ml)中的溶液中。将混合物在室温下搅拌4小时。在室温下向反应混合物中缓缓加入3N氢氧化钠水溶液(19.5ml)之后，向反应混合物中加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷(676mg)的复合物。将混合物在70℃在氮气气氛下搅拌4小时。冷却之后，将反应混合物倒入水中，然后用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：己烷/乙酸乙酯)纯化，得到题述化合物，其为黄色油状物质(778mg)。

ESI-MS m/z 446(MH⁺)。

(步骤8)

合成4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-醇

[Chem.17]

在室温下将1M四丁基氟化铵在THF(2.09ml)中的溶液加入到步骤7中得到的8-(叔丁基二甲基甲硅氧基)-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4-胺(778mg)在THF(20ml)中的溶液中。将混合物在相同温度下搅拌1小时，并减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物用饱和氯化铵水溶液处理，然后用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，然后减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：氯仿/甲醇)纯化，得到题述化合物，其为浅黄色固体(580mg)。

ESI-MS m/z 332(MH⁺)。

(步骤9)

合成4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基甲磺酸酯

[Chem.18]

在并冷却下将三乙胺(0.157ml)和甲磺酰氯(0.074ml)加入到步骤8中得到的4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-醇(288mg)在THF(5ml)中的溶液中。在相同温度下搅拌15分钟后，将混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，然后用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥。减压蒸馏除去溶剂，得到题述化合物，其为浅褐色固体(615mg)。

ESI-MS m/z 410(MH⁺)。

(步骤10)

合成8-叠氮基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4-胺

[Chem.19]

在室温下将叠氮化钠(361mg)加入到步骤9中得到的4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基甲磺酸酯(758mg)在DMF(9ml)中的溶液中，并将混合物在80℃下搅拌4小时。冷却之后，将反应混合物倒入水中，然后用乙酸乙酯萃取。将有机层用水和饱和氯化钠溶液洗涤，并经无水硫酸钠干燥。减压蒸馏除去溶剂，得到题述化合物，其为黄色固体(508mg)。

ESI-MS m/z 357(MH⁺)。

(步骤11)

合成5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺

[Chem.20]

在室温下将聚合物负载的三苯基膦(～3.0mmol/g，1.42g)加入到步骤10中得到的8-叠氮基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4-胺(508mg)在THF(10ml)和水(1ml)中的溶液中。将反应混合物回流加热1小时。冷却之后，将反应混合物通过硅藻土过滤，用乙醇洗涤，并减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：氯仿/甲醇)纯化，得到题述化合物，其为黄色固体(342mg)。

ESI-MS m/z 331(MH⁺)。

(步骤12)

合成N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺

[Chem.21]

在冰冷却下将N,N-二异丙基乙基胺(0.033ml)和丙烯酰氯(0.0154ml)加入到步骤11中得到的5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺(68mg)在氯仿(2.5ml)中的溶液中。在相同温度下搅拌15分钟后，将混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，然后用氯仿萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，然后减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：氯仿/甲醇)纯化，得到题述化合物，其为黄色固体(35.4mg)。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:2.14(2H,d,J＝5.6Hz),3.04(2H,t,J＝6.2Hz),4.17(1H,dd,J＝12.7,5.8Hz),4.46(1H,dd,J＝12.7,4.5Hz),4.70-4.80(1H,m),4.89(2H,brs),5.71(1H,d,J＝10.2Hz),6.21(1H,dd,J＝16.8,10.2Hz),6.39(1H,d,J＝16.8Hz),6.50(1H,d,J＝7.0Hz),7.62(1H,t,J＝7.4Hz),7.77(1H,t,J＝7.4Hz),7.87(1H,d,J＝8.0Hz),8.15(1H,d,J＝8.0Hz),8.25(1H,s),8.32(1H,s),9.00(1H,s)。

ESI-MS m/z 385(MH⁺)。

(步骤13)

分离N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺对映异构体A和N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺对映异构体B

[Chem.22]

使用用于光学拆分的柱子(CHIRALPAK AD-H 20mm X 250mm，Daicel Chemical Industries,Ltd.制造)，对步骤12中得到的N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(197mg)进行光学拆分，流动相：己烷/乙醇/三乙胺，50:50:0.1，流速：10ml/min，得到72.4mg对映异构体A(保留时间：15.4min，(R)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物I-1))和78.3mg对映异构体B(保留时间：32.5min，(S)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物I-2))，其为浅黄色固体。

对映异构体A

ESI-MS m/z 385(MH⁺)。

对映异构体B

ESI-MS m/z 385(MH⁺)。

当在上述相同条件下对在与后述实施例2相同的方法中得到的(R)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺进行柱处理时，其保留时间与对映异构体A相同。确认对映异构体A是R异构体，即化合物I-1；对映异构体B是S异构体，即化合物I-2。

实施例2

(R)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物I-1)

(步骤1)

合成(S)-2-(叔丁基二甲基甲硅氧基)-3-丁烯基醇4-甲基苯磺酸酯

[Chem.23]

根据实施例1的步骤2，不同之处在于使用(S)-3-丁烯-1,2-二醇-1-(对甲苯磺酸酯)代替1-溴-3-丁烯-2-醇，得到题述化合物，其为无色油状物质(2.74g)。

(步骤2)

合成(R)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)丙烯酰胺

[Chem.24]

根据实施例1的步骤1-12，不同之处在于使用(S)-2-(叔丁基二甲基甲硅氧基)-3-丁烯基醇4-甲基苯磺酸酯代替1-溴-2-(叔丁基二甲基甲硅氧基)-3-丁烯，得到题述化合物，其为黄色固体(13.9mg)。

实施例3

N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-N-甲基丙烯酰胺(化合物I-3)

[Chem.25]

(步骤1)

合成N⁸-甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺

[Chem.26]

将实施例1的步骤9中得到的4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基甲磺酸酯(30mg)溶解在甲基胺在40％甲醇(1ml)中的溶液中。将溶液在60℃下搅拌1小时，且在80℃下搅拌22小时。冷却之后，将反应混合物减压浓缩。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：乙酸乙酯/甲醇)纯化，得到题述化合物，其为浅黄色油状物质(8.1mg)。

ESI-MS m/z 345(MH⁺)。

(步骤2)

合成N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-N-甲基丙烯酰胺

[Chem.27]

根据实施例1的步骤12，不同之处在于使用步骤1中得到的N⁸-甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺代替实施例1的步骤12中使用的5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺，得到题述化合物，其为浅黄色固体(6.2mg)。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.90-2.15(2H,m),3.00-3.15(2H,m),3.06(3H,s),3.90-4.03(1H,m),4.56-4.64(1H,m),5.06(2H,brs),5.15-5.30(1H,m),5.77(1H,d,J＝10.2Hz),6.38(1H,d,J＝16.6Hz),6.54-6.70(1H,m),7.63(1H,t,J＝7.3Hz),7.78(1H,t,J＝7.3Hz),7.88(1H,d,J＝8.0Hz),8.16(1H,s),8.17(1H,d,J＝8.0Hz),8.31(1H,s),9.01(1H,s)。

ESI-MS m/z 399(MH⁺)。

实施例4

(E)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-4-(二甲基氨基)-2-丁烯酰胺(化合物I-4)

[Chem.28]

在室温下将HATU(10.3mg)和在实施例1的步骤11中得到的5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺(8.8mg)加入到反式4-二甲基氨基巴豆酸盐酸盐(4.5mg)在DMF(0.5ml)中的溶液中。在相同温度下搅拌1小时后，将混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，然后用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，然后减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过制备薄层色谱(Wako制造，NH₂硅胶60F254板，展开溶剂：氯仿/甲醇)纯化，得到题述化合物，其为浅黄色固体(6.4mg)。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:2.05-2.20(2H,m),2.27(6H,s),2.49-2.65(4H,m),4.10-4.20(1H,m),4.46-5.02(1H,m),4.68-4.77(1H,m),4.91(2H,brs),6.06(1H,d,J＝15.4Hz),6.39(1H,d,J＝7.0Hz),6.85-6.95(1H,m),7.62(1H,t,J＝7.4Hz),7.77(1H,t,J＝7.4Hz),7.87(1H,d,J＝8.0Hz),8.15(1H,d,J＝8.0Hz),8.17(1H,s),8.25(1H,s),9.00(1H,s)。

ESI-MS m/z 442(MH⁺)。

实施例5

(S,E)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-3-氯丙烯酰胺(化合物I-5)

[Chem.29]

在室温下将反式3-氯丙烯酸(399.5mg)加入到实施例1的步骤11中得到的5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4,8-二胺(498.0mg)在DMF(8ml)中的混悬液中。溶解之后，在冰冷却下向其中加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(350.1mg)，并将混合物在相同温度下搅拌1小时。将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液，然后用乙酸乙酯萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，然后减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：乙酸乙酯/甲醇)纯化，得到题述化合物，其为浅黄色固体(261.2mg)。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:1.84-2.07(2H,m),2.92-3.08(2H,m),3.88-4.02(1H,m),4.27-4.43(2H,m),6.07(2H,brs),6.48(1H,d,J＝13.4Hz),7.31(1H,d,J＝13.2Hz),7.63(1H,t,J＝7.4Hz),7.75(1H,t,J＝7.6Hz),8.03(1H,d,J＝10.7Hz),8.05(1H,d,J＝10.7Hz),8.13(1H,s),8.29(1H,d,J＝2.0Hz),8.53(1H,d,J＝6.6Hz),8.92(1H,d,J＝2.2Hz)。

ESI-MS m/z 419,421(MH⁺)。

实施例6

(S,Z)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)-3-氯丙烯酰胺(化合物I-6)

[Chem.30]

根据实施例5，不同之处在于使用顺式3-氯丙烯酸替代实施例5中使用的反式3-氯丙烯酸，得到题述化合物，其为浅黄色固体(93mg)。¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:1.82-1.96(1H,m),1.96-2.07(1H,m),2.92-3.08(2H,m),3.85-3.97(1H,m),4.27-4.41(2H,m),6.05(2H,brs),6.39(1H,d,J＝8.0Hz),6.77(1H,d,J＝8.0Hz),7.63(1H,t,J＝7.4Hz),7.75(1H,t,J＝7.4Hz),8.02(1H,d,J＝11.4Hz),8.04(1H,d,J＝11.4Hz),8.13(1H,s),8.29(1H,d,J＝2.0Hz),8.50(1H,d,J＝6.3Hz),8.92(1H,d,J＝2.0Hz)。

ESI-MS m/z 419,421(MH⁺)。

实施例7

(S)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-8-基)丙烯酰胺(化合物I-7)

[Chem.31]

(步骤1)合成(R)-(1-羟基-5-(甲基硫代)戊-3-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.32]

在-10℃下将N-甲基吗啉(3.63ml)和氯甲酸乙酯(3.01ml)加入到(R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(甲基硫代)戊酸(7.92g)在THF(79.2ml)中的溶液中。在-10℃下搅拌15分钟后，滤去产生的不溶性物质。在-10℃下将硼氢化钠(1.55g)水溶液(15ml)加入到滤液中，并在-10℃下将混合物搅拌1小时。向其中加入饱和氯化铵水溶液，并将混合物在室温下搅拌30分钟。向其中加入乙酸乙酯，以分离出有机层。将有机层用0.5N硫酸氢钾水溶液、水、0.5N氢氧化钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤，并经无水硫酸钠干燥。然后减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：氯仿/乙酸乙酯)纯化，得到题述化合物，其为浅黄色油状物质(7.18g)。

(步骤2)合成((3R)-1-羟基-5-(甲基亚硫酰基)戊-3-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.33]

在10℃或更低的温度下将高碘酸钠(7.0g)在水(32ml)中的混悬液加入到步骤1中得到的(R)-(1-羟基-5-(甲基硫代)戊-3-基)氨基甲酸叔丁酯(8.16g)在甲醇(98ml)中的溶液中，并将混合物在室温下搅拌2小时。滤去产生的不溶性物质，并减压蒸馏除去滤液。将所得的残余物溶解在饱和氯化钠溶液中，然后用氯仿萃取3次。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压蒸馏除去溶剂，得到题述化合物，其为浅黄色固体(9.38g)。

(步骤3)合成(R)-(5-羟基戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.34]

在室温下将乙酸钠(13.45g)加入到步骤2中得到的((3R)-1-羟基-5-(甲基亚硫酰基)戊-3-基)氨基甲酸叔丁酯(9.38g)在1,2-二氯苯(140ml)中的溶液中。将混合物在166℃的内部温度下搅拌18小时。在将反应混合物冷却之后，滤去不溶性物质，并减压蒸馏除去1,2-二氯苯。将所得的残余物溶解在乙酸乙酯中，用饱和氯化钠水溶液、水和饱和氯化钠水溶液洗涤；并经无水硫酸钠干燥。然后减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：己烷/乙酸乙酯)纯化，得到题述化合物2.50g，其为浅黄色油状物质。

(步骤4)

合成(R)-(5-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.35]

在冰冷却下将三苯基膦(3.25g)加入并溶解在步骤3中得到的(R)-(5-羟基戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯(2.5g)和实施例1的步骤1中得到的4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(2.31g)在DME(23ml)中的溶液中。之后，向其中加入偶氮二羧酸二异丙酯(2.44ml)。将反应混合物在冰冷却下搅拌30分钟，并在室温下搅拌1小时，然后减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物溶解在乙酸乙酯中，用水洗涤，并经无水硫酸钠干燥。然后减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：己烷/乙酸乙酯)纯化，得到题述化合物，其为浅黄色固体(3.49g)。

ESI-MS m/z 463,465(MH⁺)。

(步骤5)合成(R)-(5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.36]

将28％氨水(17.5ml)加入到步骤4中得到的(R)-(5-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯(3.49g)在DME(17.5ml)中的溶液中，并将混合物在高压釜中在105℃的内部温度下搅拌8小时。在将反应混合物冷却之后，向其中加水(70ml)，并将混合物在室温下搅拌4小时。将所得的沉淀物通过过滤收集，用水洗涤，并干燥，得到题述化合物，其为浅黄色固体(3.20g)。

ESI-MS m/z 444(MH⁺)。

(步骤6)合成(R)-(5-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.37]

将步骤5中得到的(R)-(5-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯(3.2g)、3-喹啉硼酸(1.37g)、碳酸钠(843mg)、四(三苯基膦)钯(250mg)、DME(32ml)和水(32ml)的混合物在100℃在氮气气氛下搅拌6小时。在将反应混合物冷却之后，向其中加入饱和碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯。将所得的混合物在室温下搅拌30分钟。在滤去不溶性物质之后，分离出有机层，并将其经无水硫酸钠干燥。然后减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：己烷/乙酸乙酯、乙酸乙酯/甲醇)纯化，得到题述化合物，其为浅橙色固体(3.21g)。

ESI-MS m/z 445(MH⁺)。

(步骤7)合成(R)-(5-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.38]

在冰冷却下用30分钟将N-溴琥珀酰亚胺(1.35g)在THF(23ml)中的溶液加入到步骤6中得到的(R)-(5-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯(3.21g)在THF(26ml)中的溶液中。将混合物在冰冷却下搅拌30分钟。在加入5％硫代硫酸钠水溶液之后，将混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，然后用乙酸乙酯萃取。将有机层用饱和氯化钠溶液洗涤，并经无水硫酸钠干燥。然后减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：己烷/乙酸乙酯、乙酸乙酯/甲醇)纯化，得到题述化合物，其为浅褐色固体(3.15g)。

ESI-MS m/z 523,525(MH⁺)。

(步骤8)合成(S)-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-8-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.39]

在室温下将步骤7中得到的(R)-(5-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯(994mg)加入到9-硼二环[3.3.1]壬烷在0.5M THF(22.8ml)中的溶液中。将混合物在相同温度下搅拌1小时，向其中小心加入4N氢氧化钠水溶液(5.7ml)。用氮气吹扫之后，将混合物加热至内部温度55℃。向其中加入四(三苯基膦)钯(275mg)，并将混合物在66℃的内部温度下搅拌15小时。地将反应混合物冷却之后，分离出有机层，并向其中加入甲苯(7.7ml)和20％氯化铵水溶液(5ml)。分离出有机层，将其用20％盐水溶液洗涤，并向其中加入SH硅胶(Fuji Silysia制造，1g)。将混合物在68℃的内部温度下搅拌1小时，向其中加入SH硅胶(Fuji Silysia制造，1g)。将混合物在68℃的内部温度下搅拌1小时。冷却之后，滤去硅胶，并减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：乙酸乙酯/甲醇)纯化，得到题述化合物，其为黄色固体(439mg)。

ESI-MS m/z 445(MH⁺)。

(步骤9)合成(S)-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-4,8-二胺

[Chem.40]

在室温下将5N盐酸(1ml)加入到步骤8中得到的(S)-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-8-基)氨基甲酸叔丁酯(436mg)在乙醇(4ml)中的溶液中。将混合物在60℃下搅拌3小时。冷却之后，将反应混合物用5N氢氧化钠水溶液碱化，然后用氯仿萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：氯仿/甲醇)纯化，得到题述化合物，其为浅黄色固体(320mg)

ESI-MS m/z 345(MH⁺)。

(步骤10)合成(S)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-8-基)丙烯酰胺

[Chem.41]

在冰冷却下将N,N-二异丙基乙基胺(0.192ml)以及丙烯酰氯(83.3mg)在乙腈(0.83ml)中的溶液加入到步骤9中得到的(S)-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-4,8-二胺(317mg)的乙腈(1.6ml)-水(1.6ml)溶液中。在相同温度下搅拌15分钟之后，将混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液中，然后用氯仿萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，然后减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：乙酸乙酯/甲醇)纯化，得到题述化合物，其为浅黄色固体(226mg)。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:1.37-1.56(2H,m),1.98-2.20(2H,m),2.75-2.83(1H,m),2.88-2.97(1H,m),3.96-4.18(2H,m),4.78-4.90(1H,m),5.58(1H,dd,J＝10.0,2.2Hz),5.93(2H,brs),6.19(1H,dd,J＝17.1,2.2Hz),6.21(1H,dd,J＝17.1,10.0Hz),7.64(1H,t,J＝7.4Hz),7.77(1H,t,J＝7.4Hz),8.01-8.09(2H,m),8.14(1H,s),8.17(1H,d,J＝7.6Hz),8.27(1H,d,J＝2.0Hz),8.85(1H,d,J＝2.0Hz)。

ESI-MS m/z 399(MH⁺)。

实施例8

(S)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-9-基)丙烯酰胺

[Chem.42]

(步骤1)合成(S)-(1-羟基戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.43]

在-15℃下将N-甲基吗啉(15.25ml)和氯甲酸乙酯(12.60ml)加入到(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)戊-4-烯酸(25.0g)在THF(250ml)中的溶液中。在-15℃下将混合物搅拌15分钟后，滤去产生的不溶性物质。在-15℃下将硼氢化钠(3.23g)在水(32ml)中的溶液加入到滤液中，并在-15℃下将混合物搅拌1小时。向其中加入饱和氯化铵水溶液，并将混合物在室温下搅拌30分钟。向其中加入乙酸乙酯，以分离出有机层。将有机层用0.5N硫酸氢钾水溶液、水、0.5N氢氧化钠水溶液和饱和氯化钠溶液洗涤；并经无水硫酸钠干燥。然后减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：己烷/乙酸乙酯)纯化，得到题述化合物，其为浅黄色油状物质(11.93g)。

(步骤2)合成(S)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-9-基)丙烯酰胺

[Chem.44]

根据实施例7的步骤4-10，不同之处在于使用步骤1中得到的(S)-(1-羟基戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯代替实施例7的步骤4中得到的(R)-(5-羟基戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯，得到题述化合物，其为乳白色固体(400.0mg)。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:1.57-1.65(1H,m),1.78-1.86(1H,m),1.93-2.05(2H,m),2.77-2.89(2H,m),3.98-4.04(1H,m),4.21-4.26(1H,m),4.63(1H,d,J＝13.7Hz),5.60(1H,dd,J＝10.0,2.4Hz),5.93(1H,brs),6.12(1H,dd,J＝17.1,2.4Hz),6.25(1H,dd,J＝17.1,10.0Hz),7.63-7.67(1H,m),7.77-7.81(1H,m),8.07(1H,t,J＝8.8Hz),8.12(1H,s),8.15(1H,d,J＝7.6Hz),8.28(1H,d,J＝2.2Hz),8.87(1H,d,J＝2.2Hz)。

ESI-MS m/z 399(MH⁺)。

实施例9

(R)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-9-基)丙烯酰胺(化合物I-9)

[Chem.45]

(步骤1)合成(R)-(1-羟基戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.46]

根据实施例8的步骤1，不同之处在于使用(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)戊-4-烯酸代替实施例8的步骤1中使用的(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)戊-4-烯酸，得到题述化合物，其为浅黄色油状物质。

(步骤2)合成(R)-N-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-9-基)丙烯酰胺

[Chem.47]

根据实施例7的步骤4-10，不同之处在于使用步骤1中得到的(R)-(1-羟基戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯代替实施例7的步骤4中使用的(R)-(5-羟基戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯，得到题述化合物，其为乳白色固体(115.5mg)。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ:1.57-1.65(1H,m),1.78-1.86(1H,m),1.93-2.05(2H,m),2.77-2.89(2H,m),3.98-4.04(1H,m),4.21-4.26(1H,m),4.63(1H,d,J＝13.7Hz),5.60(1H,dd,J＝10.0,2.4Hz),5.93(1H,brs),6.12(1H,dd,J＝17.1,2.4Hz),6.25(1H,dd,J＝17.1,10.0Hz),7.63-7.67(1H,m),7.77-7.81(1H,m),8.07(1H,t,J＝8.8Hz),8.12(1H,s),8.15(1H,d,J＝7.6Hz),8.28(1H,d,J＝2.2Hz),8.87(1H,d,J＝2.2Hz)。

ESI-MS m/z 399(MH⁺)。

比较例1

合成N-(3-(4-氨基-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-5-基)苯基)苯甲酰胺

[Chem.48]

根据WO2006/102079中公开的方法进行合成。

ESI-MS m/z 384(MH+)。

本发明化合物的制造中间体的合成方法解释如下。方法并不限于此。

参考例1

(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.49]

(步骤1)

合成(S)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.50]

在冰冷却下将偶氮二羧酸二异丙酯(2.44ml)缓慢加入到三苯基膦(13.1g)在四氢呋喃(70ml)中的溶液中。将反应混合物在冰冷却下搅拌1小时，然后向其中缓慢加入根据非专利文献Org.Lett.,2005,vol.7,No.5,pp.847-849中公开的方法合成的(S)-(1-羟基丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(7.0g)和4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(6.97g)在四氢呋喃(35ml)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌2小时之后，减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：己烷/乙酸乙酯)纯化，得到题述化合物(20.84g)，其为浅黄色油状物质。

ESI-MS m/z 448,450(MH+)。

(步骤2)

合成(S)-(1-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.51]

将8N氨甲醇溶液(89.4ml)加入到步骤1中得到的(S)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(20.84g)中，并将混合物在120℃下在高压釜中搅拌6小时。将反应混合物用冰冷却，并减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物用少量甲醇稀释之后，将所得的沉淀物通过过滤收集，用冷甲醇(11ml)洗涤，然后减压干燥，得到题述化合物(8.28g)，其为乳白色固体。

ESI-MS m/z 430(MH+)。

(步骤3)

合成(S)-(1-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.52]

将步骤2中得到的(S)-(1-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(8.26g)、3-喹啉硼酸(4.99g)、碳酸铯(12.54g)、1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁-钯(II)二氯化物(785.6mg)、DME(66ml)和水(33ml)的混合物在100℃在氮气气氛下搅拌2小时。将反应混合物冷却之后，向其中加入水和乙酸乙酯，以分离出有机层。然后将水层用乙酸乙酯萃取两次。将所得的有机层经无水硫酸镁干燥，并减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：己烷/乙酸乙酯、乙酸乙酯/甲醇)纯化，得到题述化合物(8.0g)，其为浅橙色固体。

ESI-MS m/z 431(MH+)。

(步骤4)

合成(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.53]

在-15℃下将N-溴琥珀酰亚胺(3.63g)加入到步骤3中得到的(S)-(1-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(7.98g)在DMF(64ml)中的溶液中，并将混合物在-15℃下搅拌1小时。将10％硫代硫酸钠水溶液和乙酸乙酯加入到反应混合物中，并在室温下搅拌10分钟。分离出有机层，并将水层用乙酸乙酯萃取两次。将所得的有机层用饱和氯化钠溶液洗涤两次，并经无水硫酸镁干燥。减压蒸馏除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：乙酸乙酯/甲醇)纯化，得到题述化合物(6.30g)，其为浅褐色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.26(9H,s),4.35-4.39(1H,m),4.50-4.56(1H,m),4.72(1H,brs),4.92(1H,brs),5.26(2H,d,J＝10.5Hz),5.33-5.39(1H,m),5.92(1H,ddd,J＝17.2,10.6,5.4Hz),7.63-7.67(1H,m),7.79-7.83(1H,m),7.90-7.92(1H,m),8.19(1H,d,J＝8.3Hz),8.27(1H,d,J＝1.7Hz),8.35(1H,s),9.07(1H,d,J＝2.2Hz)。

ESI-MS m/z 509,511(MH+)。

参考例2

(R)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.54]

(步骤1)

合成(R)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.55]

根据参考例1的步骤1，不同之处在于使用(R)-(1-羟基丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(8.74g)代替参考例1的步骤1中得到的(S)-(1-羟基丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，得到题述化合物(11.05g)，其为白色固体。

ESI-MS m/z 448,450(MH+)。

(步骤2)

合成(R)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.56]

根据参考例1的步骤2-4，不同之处在于使用步骤1中得到的(R)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(7.88g)代替参考例1的步骤2中得到的(S)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，得到题述化合物(6.80g)，其为黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.26(9H,s),4.35-4.39(1H,m),4.50-4.56(1H,m),4.72(1H,brs),4.92(1H,brs),5.26(2H,d,J＝10.5Hz),5.33-5.39(1H,m),5.92(1H,ddd,J＝17.2,10.6,5.4Hz),7.63-7.67(1H,m),7.79-7.83(1H,m),7.90-7.92(1H,m),8.19(1H,d,J＝8.3Hz),8.27(1H,d,J＝1.7Hz),8.35(1H,s),9.07(1H,d,J＝2.2Hz)。

ESI-MS m/z 509,511(MH+)。

参考例3

(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.57]

(步骤1)

合成(S)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.58]

根据参考例1中的步骤1，不同之处在于使用(S)-(1-羟基戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(11.93g)代替参考例1中的步骤1中得到的(S)-(1-羟基丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，得到题述化合物(4.96g)，其为黄褐色油状物质。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.35(9H,s),2.18-2.35(2H,m),3.97-4.05(1H,m),4.27-4.33(1H,m),4.40-4.45(1H,m),4.63-4.65(1H,m),5.14-5.19(2H,m),5.76-5.86(1H,m),7.42(1H,brs),8.62(1H,s)。

ESI-MS m/z 462,464(MH+)。

(步骤2)

合成(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.59]

根据参考例1的步骤2-4，不同之处在于使用步骤1中得到的(S)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(4.90g)代替参考例1的步骤2中得到的(S)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，得到题述化合物(3.67g)，其为浅黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.23(9H,s),2.39-2.42(2H,m),4.19-4.27(1H,m),4.29-4.34(1H,m),4.43-4.50(1H,m),4.92(2H,brs),5.04(1H,d,J＝8.5Hz),5.18-5.24(2H,m),5.86-5.96(1H,m),7.63-7.67(1H,m),7.79-7.83(1H,m),7.90-7.92(1H,m),8.19(1H,d,J＝8.5Hz),8.27(1H,d,J＝1.5Hz),8.34(1H,s),9.07(1H,d,J＝2.0Hz)。

ESI-MS m/z 523,525(MH+)。

参考例4

(R)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.60]

(步骤1)

合成(R)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.61]

根据参考例1中的步骤1，不同之处在于使用(R)-(1-羟基戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(856.4mg)代替参考例1中的步骤1中得到的(S)-(1-羟基丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，得到题述化合物(1.54g)，其为乳白色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.35(9H,s),2.18-2.35(2H,m),3.97-4.05(1H,m),4.27-4.33(1H,m),4.40-4.45(1H,m),4.63-4.65(1H,m),5.14-5.19(2H,m),5.76-5.86(1H,m),7.42(1H,brs),8.62(1H,s)。

ESI-MS m/z 462,464(MH+)。

(步骤2)

合成(R)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.62]

根据参考例1的步骤2-4，不同之处在于使用步骤1中得到的(R)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(974.9mg)代替参考例1的步骤2中得到的(S)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，得到题述化合物(1.02g)，其为浅褐色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.23(9H,s),2.39-2.42(2H,m),4.19-4.27(1H,m),4.29-4.34(1H,m),4.43-4.50(1H,m),4.92(2H,brs),5.04(1H,d,J＝8.5Hz),5.18-5.24(2H,m),5.86-5.96(1H,m),7.63-7.67(1H,m),7.79-7.83(1H,m),7.90-7.92(1H,m),8.19(1H,d,J＝8.5Hz),8.27(1H,d,J＝1.5Hz),8.34(1H,s),9.07(1H,d,J＝2.0Hz)。

ESI-MS m/z 523,525(MH+)。

参考例5

(R)-(5-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.63]

(步骤1)

合成(R)-(5-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.64]

根据参考例1中的步骤1，不同之处在于使用(S)-(5-羟基戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯(2.5g)代替参考例1的步骤1中得到的(S)-(1-羟基丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，得到题述化合物(3.49g)，其为浅黄色固体。

ESI-MS m/z 463,465(MH+)。

(步骤2)

合成(R)-(5-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.65]

根据参考例1的步骤2-4，不同之处在于使用步骤1中得到的(R)-(5-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯(3.21g)代替参考例1的步骤2中得到的(S)-(1-(4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，得到题述化合物(3.15g)，其为浅褐色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.46(9H,s),2.02-2.21(2H,m),4.26-4.53(3H,m),4.90(2H,brs),5.07(1H,d,J＝12.4Hz),5.15(1H,d,J＝17.2Hz),5.15-5.23(1H,m),5.78(1H,ddd,J＝17.2,12.4,5.2Hz),7.61-7.67(1H,m),7.78-7.83(1H,m),7.88-7.93(1H,m),8.17-8.21(1H,m),8.26(1H,d,J＝2.2Hz),8.35(1H,s),9.06(1H,d,J＝2.2Hz)。

ESI-MS m/z 523,525(MH+)。

参考例6

(R)-6-溴-7-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁-3-烯-1-基)-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺

[Chem.66]

(步骤1)

合成4-氯-5-碘-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶

[Chem.67]

在冰冷却下将4-氯-5-碘-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(20.0g)在DMF(50ml)中的溶液缓慢加入到氢化钠(3.4g)在DMF(190ml)中的溶液中。之后，向其中加入2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯化物(13.3ml)，并在相同温度下搅拌2小时。此外，向反应混合物中加入2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯化物(1.3ml)，并在室温下搅拌1小时。将反应混合物倒入水(600ml)中，并在室温下搅拌15分钟。将所得的沉淀物通过过滤收集，并用水和二异丙基醚洗涤，然后再次用乙酸乙酯溶解。然后通过过滤滤去不溶性物质。减压蒸馏除去滤液中的溶剂。向所得的残余物中加入庚烷，以通过过滤收集沉淀物。将沉淀物用庚烷洗涤，并减压干燥，得到题述化合物(21.2g)，其为白色固体。

ESI-MS m/z 409,411(MH+)。

(步骤2)

合成5-碘-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺

[Chem.68]

将8N氨甲醇溶液(120ml)加入到步骤1中得到的4-氯-5-碘-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(20.0g)中，并将混合物在120℃下在微波反应器中搅拌1小时。冷却之后，将反应混合物用甲醇(65ml)和水(185ml)稀释。将所得的沉淀物通过过滤收集，用水洗涤，并减压干燥，得到题述化合物(15.2g)，其为白色固体。

ESI-MS m/z 391(MH+)。

(步骤3)

合成5-(喹啉-3-基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺

[Chem.69]

将2M碳酸钠水溶液(38ml)加入到步骤2中得到的5-碘-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(15.0g)、3-喹啉硼酸(8.6g)和四三苯基膦钯(0)(2.2g)在DME(270ml)中的溶液中，并在90℃在氮气气氛下搅拌6小时。反应混合物冷却之后，向其中加水(300ml)。将所得的沉淀物通过过滤收集，然后用水和二异丙基醚洗涤，并减压干燥。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：甲醇/氯仿)纯化，得到题述化合物(10.17g)，其为浅黄色固体。

ESI-MS m/z 392(MH+)。

(步骤4)

合成5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺盐酸盐

[Chem.70]

在90℃下将浓盐酸(20ml)加入到步骤3中得到的5-(喹啉-3-基)-7-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(10.0g)在乙醇(200ml)中的溶液中，并将混合物在相同温度下搅拌25分钟。随后，向其中加入浓盐酸(30ml)，并将混合物在相同温度下搅拌75分钟。反应混合物冷却之后，向其中加入乙醇(100ml)，并在95℃下搅拌90分钟。随后，加入乙醇(100ml)和浓盐酸(25ml)，并将混合物在相同温度下搅拌4天。反应混合物冷却之后，向其中加入乙酸乙酯。然后将所得的沉淀物通过过滤收集，用乙酸乙酯洗涤，并减压干燥，得到题述化合物(4.4g)，其为黄色固体。

ESI-MS m/z 335(MH+)。

(步骤5)

合成(R)-7-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁-3-烯-1-基)-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺

[Chem.71]

在室温下将碳酸钾(4.0g)和(R)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁-3-烯-1-基醇4-甲基苯磺酸酯(1.43g)加入到步骤4中得到的5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(1.22g)在DMF(12.2ml)中的溶液中，并将混合物在90℃下搅拌20小时。反应混合物冷却之后，向其中加水(49ml)，并将所得的混合物在室温下搅拌3小时。将所得的沉淀物通过过滤收集，用水洗涤，并减压干燥。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：甲醇/乙酸乙酯)纯化，得到题述化合物(1.31g)，其为浅黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:-0.32(3H,s),-0.11(3H,s),0.80(9H,s),4.06(1H,dd,J＝13.9,8.5Hz),4.46(1H,dd,J＝13.9,3.2Hz),4.59-4.64(1H,m),5.06(2H,brs),5.22(1H,d,J＝10.5Hz),5.40(1H,d,J＝16.8Hz),5.89-5.97(1H,m),7.21(1H,s),7.61-7.65(1H,m),7.74-7.78(1H,m),7.89(1H,d,J＝8.1Hz),8.17(1H,d,J＝8.3Hz),8.23(1H,d,J＝2.2Hz),8.40(1H,s),9.10(1H,d,J＝2.0Hz)。

ESI-MS m/z 446(MH+)。

(步骤6)

合成(R)-6-溴-7-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁-3-烯-1-基)-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺

[Chem.72]

根据参考例1中的步骤4，不同之处在于使用步骤5中得到的(R)-7-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁-3-烯-1-基)-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(1.30g)代替参考例1的步骤4中的(S)-(1-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，得到题述化合物(1.44g)，其为黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:-0.34(3H,s),-0.12(3H,s),0.75(9H,s),4.33-4.40(2H,m),4.74-4.79(1H,dm),4.91(2H,brs),5.21-5.24(1H,m),5.36-5.41(1H,m),5.92-6.01(1H,m),7.63-7.67(1H,m),7.79-7.83(1H,m),7.92(1H,d,J＝7.8Hz),8.20(1H,d,J＝8.5Hz),8.24(1H,d,J＝2.2Hz),8.37(1H,s),9.06(1H,d,J＝2.2Hz)。

ESI-MS m/z 524,526(MH+)。

实施例10

(S)-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.73]

在室温下在氮气气氛中将0.5M 9-硼二环[3.3.1]壬烷在四氢呋喃(141.3ml)中的溶液加入到参考例1中得到的(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(6.0g)在四氢呋喃(42ml)中的溶液中，并在室温下搅拌2小时。将2N氢氧化钠水溶液(84.8ml)在室温下缓慢加入到反应混合物中，并减压脱气。在氮气气氛中，向其中加入(四三苯基膦)钯(0)(1.70g)，并将混合物在66℃下搅拌12小时。反应混合物冷却之后，分离出有机层，并将其用20％氯化铵水溶液(60ml)洗涤。然后向有机层中加入SH硅胶(6.0g)，并将所得物在氮气气氛中在50℃下搅拌14小时，然后过滤。向滤液中再次加入SH硅胶(Fuji Silysia Chemical Ltd.制造)(6.0g)，并将所得物在50℃下在氮气气氛中搅拌14小时，然后过滤。减压蒸馏从滤液中除去溶剂。将所得的残余物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：乙酸乙酯/甲醇)纯化，得到题述化合物(4.46g)(收率：88％)，其为浅黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.48(9H,s),1.91-2.00(1H,m),2.12-2.19(1H,m),2.98-3.11(2H,m),4.00(1H,dd,J＝12.7,7.1Hz),4.32(1H,brs),4.55(1H,dd,J＝12.7,4.6Hz),4.81-4.83(1H,m),4.90(2H,brs),7.61-7.65(1H,m),7.75-7.80(1H,m),7.88(1H,d,J＝8.0Hz),8.16-8.18(2H,m),8.33(1H,s),9.02(1H,d,J＝2.2Hz)。

ESI-MS m/z 431(MH+)。

实施例11

在室温下在氮气气氛中将9-硼二环[3.3.1]壬烷二聚体(0.431g)加入到参考例1中得到的(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.3g)在四氢呋喃(4.5ml)中的溶液中，并将混合物在室温下搅拌2小时。将4N氢氧化钠水溶液(2.12ml)在室温下缓慢加入到反应混合物中，并减压脱气。在氮气气氛中，向所得的混合物中加入(四三苯基膦)钯(0)(0.136g)，并在64℃下搅拌12小时。在将反应混合物冷却并用乙酸乙酯稀释之后，向其中加入饱和氯化铵水溶液。通过过滤除去该阶段中所得的不溶性物质之后，分离出有机层。将所得的有机层经无水硫酸钠干燥，然后过滤，并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：乙酸乙酯/甲醇)纯化，得到(S)-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯(203mg)(收率：80％)，其为浅黄色固体。

实施例12

在室温下在氮气气氛中将9-硼二环[3.3.1]壬烷二聚体(431mg)加入到参考例1中得到的(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(300mg)在1,2-二甲氧基乙烷(4.5ml)中的溶液中，并将混合物在48℃下搅拌40分钟。使混合物冷却至室温后，将4N氢氧化钠水溶液(2.1ml)在室温下缓慢加入到反应混合物中，并减压脱气。在氮气气氛中，向其中加入(四三苯基膦)钯(0)(136mg)，并在79℃下搅拌5小时。在将反应混合物冷却并用乙酸乙酯稀释之后，加入饱和氯化铵水溶液。通过过滤除去该阶段中所得的不溶性物质，并分离出有机层。将所得的有机层经无水硫酸钠干燥并过滤，然后减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱色谱(展开溶剂：乙酸乙酯/甲醇)纯化，得到(S)-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯(0.190g)(收率：74％)，其为浅黄色固体。

实施例13

根据实施例10，不同之处在于使用4N氢氧化锂水溶液(1.8ml)代替实施例10中使用的氢氧化钠水溶液，得到(S)-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯(224mg)(收率：88％)，其为浅黄色固体。

实施例14

根据实施例10，不同之处在于使用4N氢氧化钾水溶液(1.8ml)代替实施例10中使用的氢氧化钠水溶液，得到(S)-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯(198mg)(收率：78％)，其为浅黄色固体。

实施例15

根据实施例10，不同之处在于使用4N氢氧化铯水溶液(1.8ml)代替实施例10中使用的氢氧化钠水溶液，得到(S)-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯(202mg)(收率：80％)，其为浅黄色固体。

实施例16

根据实施例10，不同之处在于使用三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(34mg)和三苯基膦(39mg)代替实施例10中使用的(四三苯基膦)钯(0)，得到(S)-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯(194mg)(收率：76％)，其为浅黄色固体。

实施例17

(R)-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.74]

根据实施例10，不同之处在于使用参考例2中得到的(R)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(6.70g)代替实施例10中得到的(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，得到(R)-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯(4.76g)(收率：84％)，其为浅黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.48(9H,s),1.91-2.00(1H,m),2.12-2.19(1H,m),2.98-3.11(2H,m),4.00(1H,dd,J＝12.7,7.1Hz),4.32(1H,brs),4.55(1H,dd,J＝12.7,4.6Hz),4.81-4.83(1H,m),4.90(2H,brs),7.61-7.65(1H,m),7.75-7.80(1H,m),7.88(1H,d,J＝8.0Hz),8.16-8.18(2H,m),8.33(1H,s),9.02(1H,d,J＝2.2Hz)。

ESI-MS m/z 431(MH+)。

实施例18

(S)-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-9-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.75]

根据实施例10，不同之处在于使用参考例8中得到的(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2.0g)代替实施例10中得到的(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，得到题述化合物(1.56g)(收率：92％)，其为浅黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.43(9H,s),1.77-1.89(2H,m),1.95-2.14(2H,m),2.71-2.84(1H,m),2.86-3.00(1H,m),4.00-4.15(1H,m),4.24-4.40(1H,m),4.40-4.50(1H,m),4.84(3H,brs),7.62-7.66(1H,m),7.77-7.81(1H,m),7.89-7.91(1H,m),8.18-8.20(2H,m),8.33(1H,s),8.98(1H,d,J＝1.5Hz)。

ESI-MS m/z 445(MH+)。

实施例19

(R)-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-9-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.76]

根据实施例10，不同之处在于使用参考例9中得到的(R)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯(690mg)代替实施例10中得到的(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，得到题述化合物(429mg)(收率：73％)，其为黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.43(9H,s),1.77-1.89(2H,m),1.95-2.14(2H,m),2.71-2.84(1H,m),2.86-3.00(1H,m),4.00-4.15(1H,m),4.24-4.40(1H,m),4.40-4.50(1H,m),4.84(3H,brs),7.62-7.66(1H,m),7.77-7.81(1H,m),7.89-7.91(1H,m),8.18-8.20(2H,m),8.33(1H,s),8.98(1H,d,J＝1.5Hz)。

ESI-MS m/z 445(MH+)。

实施例20

(S)-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-7,8,9,10-四氢-6H-嘧啶并[5’,4’:4,5]吡咯并[1,2-a]氮杂-8-基)氨基甲酸叔丁酯

[Chem.77]

根据实施例10，不同之处在于使用参考例10中得到的(R)-(5-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)戊-1-烯-3-基)氨基甲酸叔丁酯(994mg)代替实施例10中得到的(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，得到题述化合物(439mg)(收率：52％)，其为黄色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:1.46(9H,s),2.18-2.28(1H,m),2.32-2.42(1H,m),2.65-2.77(1H,m),2.99-3.08(1H,m),3.80-3.97(2H,m),4.53-4.62(1H,m),4.80(2H,brs),4.97-5.11(1H,m),7.61-7.66(1H,m),7.76-7.81(1H,m),7.88(1H,d,J＝8.0Hz),8.15-8.20(2H,m),8.33(1H,s),8.97(1H,d,J＝2.2Hz)。

ESI-MS m/z 445(MH+)。

实施例21

(R)-8-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4-胺

[Chem.78]

根据实施例10，不同之处在于使用参考例11中得到的(R)-6-溴-7-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁-3-烯-1-基)-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(1.0g)代替实施例10中得到的(S)-(1-(4-氨基-6-溴-5-(喹啉-3-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)丁-3-烯-2-基)氨基甲酸叔丁酯，得到(R)-8-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-4-胺(546mg)(收率：64％)。

¹H-NMR(CDCl₃)δ:0.14(3H,s),0.15(3H,s),0.91(9H,s),1.97-2.02(2H,m),2.85-2.92(2H,m),3.14-3.22(1H,m),4.11-4.18(1H,m),4.28-4.33(1H,m),4.41-4.46(1H,m),4.95(2H,brs),7.61-7.65(1H,m),7.75-7.79(1H,m),7.88-7.90(1H,m),8.16-8.18(2H,m),8.35(1H,s),9.04(1H,d,J＝2.0Hz)。

ESI-MS m/z 446(MH+)。

参考例7

根据实施例10，不同之处在于使用1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁钯(II)二氯化物(32mg)代替实施例10中使用的(四三苯基膦)钯(0)，得到(S)-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯(21mg)(收率：25％)，其为浅黄色固体。

参考例8

根据实施例10，不同之处在于使用碳酸铯(2.3g)和水(1.8ml)代替实施例10中得到的氢氧化钠水溶液，得到(S)-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯(88mg)(收率：35％)，其为浅黄色固体。

测试例

通过以下方法对本发明的化合物进行测试。

测试例1：测量各种EGFR激酶的抑制活性(体外)

1)测量EGFR(T790M/L858R)激酶抑制活性

测量化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8和I-9的EGFR(T790M/L858R)激酶抑制活性。

材料如下。底物肽是参考FL-肽22(LabChip(注册商标)系列试剂；Caliper Life Sciences,Inc.)的氨基酸序列而合成的生物素化肽(生物素-EEPLYWSFPAKKK)。EGFR(T790M/L858R)是购自CarnaBiosciences,Inc.的纯化的重组人EGFR(T790M/L858R)蛋白质。

测量方法如下。将化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8和I-9各自溶解在二甲亚砜(DMSO)中，然后各自用DMSO连续稀释。接下来，将EGFR(T790M/L858R)蛋白质、底物肽(最终浓度：250nM)、氯化镁(最终浓度：10mM)、氯化锰(最终浓度：10mM)、ATP(最终浓度：1μM)和各化合物的稀释DMSO溶液(最终DMSO浓度：2.5％)加入到激酶反应缓冲液(Carna Biosciences,Inc.)中，并将混合物在25℃下孵育120分钟用于激酶反应。向其中加入EDTA，至最终浓度为24mM，从而终止反应。然后，加入含有铕(Eu)标记的抗-磷酸化酪氨酸抗体PT66(PerkinElmer)和SureLight APC-SA(PerkinElmer)的检测溶液，并使所得的混合物在室温下静置2小时或更久。最后，通过PHERAstar FS(BMG LABTECH)在两种波长620nm和665nm下测量在波长337nm的激发光下的荧光强度。每个测试样品的磷酸化水平由DMSO对照中和测试样品中两个波长的荧光强度比计算，并且磷酸化被抑制50％的化合物浓度被确定为每种化合物的IC₅₀值(nM)。

2)测量EGFR(d746-750/T790M)激酶抑制活性

测量化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8和I-9的EGFR(d746-750/T790M)激酶抑制活性。

材料如下。EGFR(d746-750/T790M)是购自Carna Biosciences,Inc.的纯化的重组人EGFR(d746-750/T790M)蛋白质。ATP的最终浓度为1.5μM。至于其他条件，使用与EGFR(T790M/L858R)激酶抑制活性测量中所使用者相同的材料和方法确定各化合物的IC₅₀值(nM)。3)测量EGFR(L858R)激酶抑制活性

测量化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8和I-9的EGFR(L858R)激酶抑制活性。

材料如下。EGFR(L858R)是购自Carna Biosciences,Inc.的纯化的重组人EGFR(L858R)蛋白质。ATP的最终浓度为4μM。至于其他条件，使用与EGFR(T790M/L858R)激酶抑制活性测量中所使用者相同的材料和方法确定各化合物的IC₅₀值(nM)。

4)测量EGFR(d746-750)激酶抑制活性

测量化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8和I-9的EGFR(d746-750)激酶活性抑制活性。

材料如下。EGFR(d746-750)是购自Carna Biosciences,Inc.的纯化的重组人EGFR(d746-750)蛋白质。ATP的最终浓度为5μM。用于激酶反应的孵育时间为90分钟。至于其他条件，使用与EGFR(T790M/L858R)激酶抑制活性测量中所使用者相同的材料和方法确定各化合物的IC₅₀值(nM)。

5)EGFR(WT)

测量化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8和I-9对EGFR(WT)激酶的抑制活性。

材料如下。作为EGFR(WT)，其中N-端融合有FLAG标签的人EGFR(WT)的细胞质结构域使用昆虫Sf9细胞在杆状病毒表达系统中表达，并用抗-FLAG抗体琼脂糖(Sigma-Aldrich)纯化。底物肽的最终浓度为500nM，且ATP的最终浓度为4.7μM。至于其他条件，使用与EGFR(T790M/L858R)激酶抑制活性测量中所使用者相同的材料和方法确定各化合物的IC₅₀值(nM)。

表1显示了结果。

经证实，化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8和I-9不仅对于EGFR(L858R)和EGFR(d746-750)，而且对于EGFR(T790M/L858R)和EGFR(d746-750/T790M)均表现出潜在的抑制活性。还证实了其对于EGFR(WT)的抑制活性低于对于上述突变EGFR蛋白质的抑制活性。

相反地，经证实，结构与本发明化合物类似的N-(3-(4-氨基-6,7,8,9-四氢嘧啶并[5,4-b]吲嗪-5-基)苯基)苯甲酰胺(PTL 1)对这些EGFR激酶几乎没有抑制活性。

表1

测试例2：测量对于野生型和突变EGFR表达细胞系的生长抑制活性

(体外)

将1)表达EGFR(T790M/L858R)的肺腺癌细胞系NCI-H1975、2)表达EGFR(d746-750)的肺腺癌细胞系HCC827和3)表达EGFR(WT)的人表皮样癌细胞系A431各自悬浮在ATCC推荐的介质中。将细胞悬浮液种在384-孔平微板或96-孔平板的各个孔中，并在37℃下在含有5％二氧化碳气体的孵育器中培养1天。将本发明的化合物和参考化合物溶解在DMSO中，然后将各测试化合物的DMSO溶液用DMSO稀释至浓度比最终浓度高200倍。将测试化合物的稀释的DMSO溶液以用于使各细胞系悬浮的介质稀释，并将稀释的溶液加入到细胞培养板的各个孔中，使得DMSO最终浓度为0.5％。然后，将细胞在37℃下在含有5％二氧化碳气体的孵育器中培养3天。使用CellTiter-GloAssay(Promega制造)根据Promega推荐的操作方案在培养开始和结束时测量细胞数。通过下式计算细胞生长抑制率，并确定细胞生长被抑制50％的测试化合物浓度(GI₅₀(nM))。

生长抑制率(％)＝(C-T)/(C-C0)X 100

T：加入有测试化合物的孔的发光强度

C：未加入测试化合物的孔的发光强度

C0：加入测试化合物之前孔的发光强度

表2显示了结果。

经证实，化合物I-2和I-3不仅对于表达EGFR(d746-750)的细胞，而且对于表达EGFR(T790M/L858R)的细胞，均显示出潜在的生长抑制活性。还证实，比起上述表达突变EGFR的细胞，化合物I-2和I-3对于表达EGFR(WT)的细胞表现出较弱的生长抑制活性。

表2