一种鸡传染性法氏囊病卵黄抗体耐热冻干保护剂及其制备方法

摘要

本发明公开了一种鸡传染性法氏囊病卵黄抗体耐热冻干保护剂及其制备方法，该耐热冻干保护剂由以下重量百分比的组分组成：低聚木糖8%～10%、羧甲基纤维素钠2%～3%、谷氨酸钠2%～4%、山梨醇3%～5%、亚硒酸钠0.5%～0.8%、甘油2%～8%，余量为注射用水。本发明的鸡传染性法氏囊病卵黄抗体耐热冻干保护剂，使鸡传染性法氏囊病卵黄抗体在2～8℃条件下可保存36个月，在冻干过程及保存过程中会保持卵黄抗体的外形、活性，且抗体效价没有显著变化，冻干前后卵黄抗体损失率低，冻干产品具有良好的耐老化性能，减缓了卵黄抗体活性下降的速度，在较长时间内避免了药物活性成分的实效，从而降低了运输、储存的成本。

说明书

技术领域

本发明属于兽药技术领域，具体涉及一种鸡传染性法氏囊病卵黄抗体耐热冻干保护 剂，同时还涉及一种鸡传染性法氏囊病卵黄抗体耐热冻干保护剂的制备方法。

背景技术

冷冻干燥技术是生物学的一种重要应用技术，常用于生物制品的科研和生产中，以保 持菌、毒种的生物学特性，稳定生物原料和半成品的生物活性，延长成品的有效期。冻干 保护剂是给予药物有效成分在冷冻干燥过程及冻干后储存阶段保护药物药效的成分，是活 疫苗或抗体生产中的关键技术，对于疫苗或抗体的保存、运输和使用具有很大的影响。

兽用生物制品一般要求低温保存，在4℃条件下仅能保存6个月左右，结合我国目前 的养殖业水平，相当一部分养殖户不具备低温保存生物制品的基本条件，因此在常温下如 果不能及时用完，极易造成生物制品的失效，给养殖户带来经济损失。目前，我国兽用生 物制品的冻干保护剂主要成分为5%的脱脂牛奶、5%～10%的蔗糖、1.5%～3%的明胶，组 方简单，保护功能差。市场上现有的冻干保护剂对卵黄抗体的最长保护期为18个月，在 一定程度上影响了卵黄抗体功效的发挥，并且鸡传染性法氏囊病卵黄抗体的冷冻干燥工艺 形成的冰结晶对卵黄抗体造成不同程度的伤害，直接影响干燥后产品中抗体的活性，进而 影响到产品的质量。

发明内容

本发明的目的是提供一种鸡传染性法氏囊病卵黄抗体耐热冻干保护剂，延长卵黄抗体 的保存期限，有效保持卵黄抗体的疗效。

本发明的第二个目的是提供一种鸡传染性法氏囊病卵黄抗体耐热冻干保护剂的制备 方法。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：一种鸡传染性法氏囊病卵黄抗体耐 热冻干保护剂，由以下重量百分比的组分组成：低聚木糖8%～10%、羧甲基纤维素钠2%～ 3%、谷氨酸钠2%～4%、山梨醇3%～5%、亚硒酸钠0.5%～0.8%、甘油2%～8%，余量 为注射用水。

一种上述的鸡传染性法氏囊病卵黄抗体耐热冻干保护剂的制备方法，包括下列步骤：

1）取注射用水总用量的三分之一，加入低聚木糖、山梨醇，混合均匀，得混合物A；

2）取注射用水总用量的三分之一，加入羧甲基纤维素钠，混合均匀，得混合物B；

3）取余下的注射用水，加入谷氨酸钠、亚硒酸钠、甘油，混合均匀，得混合物C；

4）将混合物A、混合物B、混合物C混合并搅拌均匀，即得。

本发明的鸡传染性法氏囊病卵黄抗体耐热冻干保护剂，使用时，将耐热冻干保护剂与 鸡传染性法氏囊病卵黄抗体按照体积比为3～5:1的比例进行混合，经分装后进行冷冻干 燥。

本发明的鸡传染性法氏囊病卵黄抗体耐热冻干保护剂，将低聚木糖、羧甲基纤维素钠、 谷氨酸钠、山梨醇、亚硒酸钠与甘油进行复配，使鸡传染性法氏囊病卵黄抗体在2～8℃条 件下可保存36个月，在冻干过程及保存过程中会保持卵黄抗体的外形、活性，且抗体效 价没有显著变化，冻干前后卵黄抗体损失率低，冻干产品具有良好的耐老化性能，减缓了 卵黄抗体活性下降的速度，在较长时间内避免了药物活性成分的实效，从而降低了运输、 储存的成本。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明。

实施例1

本实施例的鸡传染性法氏囊病卵黄抗体耐热冻干保护剂，由以下重量百分比的组分组 成：低聚木糖8%、羧甲基纤维素钠2%、谷氨酸钠2%、山梨醇3%、亚硒酸钠0.5%、甘 油2%，余量为注射用水。

一种上述的鸡传染性法氏囊病卵黄抗体耐热冻干保护剂的制备方法，包括下列步骤：

1）取注射用水总用量的三分之一，加入低聚木糖、山梨醇，混合均匀，得混合物A；

2）取注射用水总用量的三分之一，加入羧甲基纤维素钠，加热至100℃并保温20min， 使其混合均匀，冷却至室温，得混合物B；

3）取余下的注射用水，加入谷氨酸钠、亚硒酸钠、甘油，混合均匀，得混合物C；

4）将混合物A、混合物B、混合物C混合并搅拌均匀，即得耐热冻干保护剂。

将本实施例所得耐热冻干保护剂与鸡传染性法式囊病卵黄抗体按照体积比为3:1的比 例进行混合，经分装后进行冷冻干燥，后密封、包装所得产品在2～8℃条件下可保存30 个月。

实施例2

本实施例的鸡传染性法氏囊病卵黄抗体耐热冻干保护剂，由以下重量百分比的组分组 成：低聚木糖9%、羧甲基纤维素钠2.5%、谷氨酸钠3%、山梨醇4%、亚硒酸钠0.6%、甘 油8%，余量为注射用水。

一种上述的鸡传染性法氏囊病卵黄抗体耐热冻干保护剂的制备方法，包括下列步骤：

1）取注射用水总用量的三分之一，加入低聚木糖、山梨醇，混合均匀，得混合物A；

2）取注射用水总用量的三分之一，加入羧甲基纤维素钠，加热至100℃并保温20min， 使其混合均匀，冷却至室温，得混合物B；

3）取余下的注射用水，加入谷氨酸钠、亚硒酸钠、甘油，混合均匀，得混合物C；

4）将混合物A、混合物B、混合物C混合并搅拌均匀，即得耐热冻干保护剂。

将本实施例所得耐热冻干保护剂与鸡传染性法式囊病卵黄抗体按照体积比为4:1的比 例进行混合，经分装后进行冷冻干燥，后密封、包装所得产品在2～8℃条件下可保存36 个月。

实施例3

本实施例的鸡传染性法氏囊病卵黄抗体耐热冻干保护剂，由以下重量百分比的组分组 成：低聚木糖10%、羧甲基纤维素钠3%、谷氨酸钠4%、山梨醇5%、亚硒酸钠0.8%、甘 油4%，余量为注射用水。

一种上述的鸡传染性法氏囊病卵黄抗体耐热冻干保护剂的制备方法，包括下列步骤：

1）取注射用水总用量的三分之一，加入低聚木糖、山梨醇，混合均匀，得混合物A；

2）取注射用水总用量的三分之一，加入羧甲基纤维素钠，加热至100℃并保温20min， 使其混合均匀，冷却至室温，得混合物B；

3）取余下的注射用水，加入谷氨酸钠、亚硒酸钠、甘油，混合均匀，得混合物C；

4）将混合物A、混合物B、混合物C混合并搅拌均匀，即得耐热冻干保护剂。

将本实施例所得耐热冻干保护剂与鸡传染性法式囊病卵黄抗体按照体积比为5:1的比 例进行混合，经分装后进行冷冻干燥，后密封、包装所得产品在2～8℃条件下可保存30 个月。

实验例

本实验例采用实施例1～3的冻干保护剂配制鸡传染性法氏囊病卵黄抗体并进行冻干 干燥，分别置于2～8℃、37℃条件下保存，于不同时间检测卵黄抗体效价变化情况。

实验方法：将保存在2～8℃、37℃条件下的鸡传染性法氏囊病卵黄抗体定期取出，按 瓶签注明羽份，将抗体用生理盐水稀释至1羽份∕ml。在8.0%氯化钠溶液100ml中加入 1g优质琼脂粉，加热融化后，加入终浓度为0.01%硫柳汞防腐，浇制凝胶板，在其上按六 角形打孔，孔径为5mm，孔距为3mm。将抗体作2倍系列稀释后进行试验，抗原及抗体 加量以孔满为度（约25ul）；然后将琼脂平板置湿盒中，37℃孵育24～28小时。当阴、阳 性血清对照成立时，与标准抗原形成白色沉淀线的抗体最大稀释倍数即为卵黄抗体的效 价。

本实验中，对照组1为使用常规5%蔗糖脱脂乳配制的普通冻干保护剂配制的鸡传染 性法氏囊病卵黄抗体；对照组2为山东某公司生产的鸡传染性法氏囊病精制蛋黄抗体；实 验组1、2、3为利用本申请实施例1、2、3所得耐热冻干保护剂配制的鸡传染性法氏囊病 卵黄抗体。

实验结果如表1、2所示。

表1卵黄抗体在2～8℃条件下保存6、12、18、24、30、36个月效价测定结果

组别 基础效价 6个月 12个月 18个月 24个月 30个月 36个月 实验组1 1:128 1:128 1:128 1:128 1:128 1:128 1:64 实验组2 1:128 1:128 1:128 1:128 1:128 1:128 1:128 实验组3 1:128 1:128 1:128 1:128 1:128 1:128 1:64 对照组1 1:128 1:128 1:128 1:64 1:32 1:16 1:8 对照组2 1:128 1:128 1:128 1:128 1:64 1:32 1:16

表2卵黄抗体在37℃条件下保存7、14天效价测定结果

组别 基础效价 7天 14天 实验组1 1:128 1:128 1:64 实验组2 1:128 1:128 1:128 实验组3 1:128 1:128 1:64 对照组1 1:128 1:64 1:16 对照组2 1:128 1:32 1:8

从表1、2可以看出，使用本申请实施例1～3所得耐热冻干保护剂配制的鸡传染性法 氏囊病卵黄抗体，在不同温度下比用普通冻干保护剂配制的鸡传染性法氏囊病卵黄抗体以 及市售的鸡传染性法氏囊病精制蛋黄抗体效价的稳定性好，抗体效价的保存时间延长。试 验结果说明，使用本申请的耐热冻干保护剂配制的鸡传染性法氏囊病卵黄抗体具有良好的 耐热性，抗体效价具有更好的稳定性。